CN107231788A - 含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物、微胶囊及利用其的柑橘黑点病防治方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有零陵香(Lysimachiae Foenum‑Graeci Herba)提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物、微胶囊及利用所述组合物的柑橘黑点病防治方法，本发明的含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物，不仅对于柑橘黑点病的防治效果显著，而且作为植物提取物起源的无公害成分开发为生命农药的可能性极高。

Description

含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组 合物、微胶囊及利用其的柑橘黑点病防治方法
技术领域
本发明涉及一种含有零陵香(Lysimachiae Foenum-Graeci Herba)提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物、微胶囊(microcapsule)及利用所述组合物的柑橘黑点病的防治方法。
背景技术
黑点病(Melanose)作为给济州岛柑橘栽培农户造成最大损害的病，在严重的地区，喷洒农药总回数的一半以上是为防治黑点病而进行的。
尤其，与其他地区相比，包括西归浦的济州岛的东南部地区是受黑点病的损害严重的地区。此外，黑点病菌也成为茎或整棵树木突然死亡的流胶病或主要贮藏病的蒂腐病的原因。
寄主范围是柑橘内植物，发病于柑橘类全体，但根据种类的不同发病稍有差异。虽然广泛分布于柑橘地带，但是在柑橘的生育期间降雨较少的地区，发病算是比较少的，而在降雨多的济州岛东南部地区发病算是比较多的。
黑点病原菌作为属于子囊菌的霉菌，子囊孢子世代是间座壳菌(Diaporthe citriF.A.Wolf)，分生孢子世代是拟茎点霉(Phomopsis citri Fawcett)。分生孢子器(pycnidium)形成作为分生孢子的性孢子(pycnospore)，主要萌发于枯死树枝，尤其，主要萌发于最近枯死的树枝，并且，为黑色的椭圆形或圆形，其大小为200～450μm。性孢子有两种形态，即形成阿尔法(alpha，α)孢子、贝塔(beta，β)孢子，阿尔法孢子为无色、单胞，大小为5～9×2～4μm，由此，直接侵入寄主植物，但是贝塔孢子为无色、单胞的线状，大小为20～30×0.7～1.5μm，因而，不发芽，无法直接侵入寄主植物。
众所周知，性孢子在湿度大的条件下，以粘性的黄色粘液质团形态从分生孢子器喷出，而在相对干燥的条件下，以卷须(tendril)状喷出，由此出来的孢子相当抗干燥。子囊壳形成于分生孢子器形成几乎结束的枝，为黑色、鸟的长喙状，末端渐细，长为200～800μm。子囊为长棍棒状，内含8个子囊孢子，每个子囊孢子为无色、双胞，含有2个滴状斑点(guttulae)，其大小为ll～15.5×3～5μm。菌丝的发育最适温度为24℃，若在20～28℃中经过4小时，则开始发芽，但在15℃中需要10小时。
观察黑点病菌的产生状态，病原菌以分生孢子器或子囊壳形态越冬，传染源是在所述分生孢子器或子囊壳中生成的性孢子和子囊孢子。子囊孢子飞散在空气中并通过风使得病原菌传播至很远的距离，但与性孢子相比，作为传染源的比重相对地算是比较轻的。性孢子生成于分生孢子器，并与雨滴一起飞散，所述分生孢子器从树上的枯萎的树枝或放置于果园枯死的树枝长出。果实的情况，一般从落花期开始到落花后5个月会发病，根据留在树上的枯死树枝的数量、果实的大小(生育阶段)、由降雨或露珠导致的湿润期间，发病程度不一。
病原菌在枯死树枝或剪枝丢掉的树枝落户，2～3个月后形成孢子成为传染源，约1年持续生成孢子。侵入绿地的病原菌没死去存活的情况很多，绿地枯死后(并不确定是否由病原菌导致枯死)，形成分生孢子器并成为传染源。众所周知，若孢子侵入果实或叶子，则寄主植物因相对于病原菌的防御作用而分泌抗菌物质，从而杀死入侵的病原菌，由于所述反应而形成黑点。
孢子为了侵入植物组织，需要在24～28℃中经过8小时以上、在20℃中需要经过12小时以上的湿润条件，潜伏期在25℃中为1～2日、10℃中为7日。据此，即使上午不多雨而下午下雨不干的状态下，夜间温度高于某种程度的情况成为发病的充分条件。若发病条件得到满足，则直到10月初也发病，但是特别的情况除外，因为果实的膨大期以后具有抵抗性，所以并不常发病。
黑点病的病征在病原菌侵入后约1周内就出现，发病于叶子、枝干、果实，并且根据感染时期或果实的状态、感染时气候条件等而表现为多种多样，尤其，果实上的病斑状有黑点型、泥块型、流斑型三种。病原菌侵入的植物的表皮细胞从其侵入部位到6个细胞层会坏死，并且如黑红色硬胶质一样的物质嵌入其内，所述物质成为代表性的黑点型斑点。在落花期之前感染的部位稍微凹陷，并且根据不同的情况，所述凹陷一直保持至收获期，所述部位即使被染色也保留为绿色，然后缓缓地进行染色。黑点的大小非常多样，落花期时被感染的病斑其大小相对较大，在果实更成熟的状态形成相对较小的病斑，从而黑点的形状也成为明显的小凸起状，在果实的膨大期几乎要结束的阶段，就感染的组织而言，病斑呈红色，黑点状相对不明显。此外，病原菌浓度高的情况，则成为如黑红色的痂或疮一样的形状，此为泥块型病斑，并且，沿着水流动方向形成的病斑为流斑型。
叶子的情况，5月初、中旬左右，在叶子成形之前开始感染，虽然嵌入典型的黑点，但严重时，使得叶子黄化并严重卷曲，并且成为落叶。茎的情况，5月初、中旬左右以后，嫩草或绿地开始感染，与其他部位不同，菌在侵入部位存活的情况很多。
作为所述黑点病的防治方法，首先是清除枯死树枝及修剪的树枝。因为黑点病因形成于枯死树枝的孢子而导致传染，所以传染源，即若留下大量枯死树枝，则即使喷洒再多农药，也经常无法防治。收获或剪枝时，彻底清除留在树木上的枯死树枝，并且修剪的树枝也不要围在果园周围，而要烧掉或粉碎从而清除传染源，由此，可以减少发病。
药物防治根据地区不同而有差异，但是从5月中旬、末左右到8月下旬之间，每当约间隔15～20日、或200～250mm的累计降雨时，喷洒4～5回药剂。作为公布的药剂，有代森锰锌(Mancozeb(大生M-45，Dithane M-45))和二噻农、代森联、甲基代森锌(propineb)(安泰生可湿性粉剂)等(新果树病害虫图鉴，农村振兴厅园艺研究所，pp297～301)。但是，实情为无农药柑橘农户可以使用的绿色环保药剂现在完全没有。
最近，正在大量研究利用微生物及各种提取物等的生物学的防治方法，因为所述方法不会引起环境污染、抗药性诱发、残留毒性等的问题，所以被认为是无农药柑橘栽培农户也可以使用、非常优选的防治方法。
作为可以防治植物病原菌的生物材料，有有益微生物、植物提取物、抗菌性油等。作为有益微生物，有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)、白粉寄生孢(Ampelomyces quisqualis)、链霉菌(Streptomyce)属等，并且国内外范围内正在进行大量研究，此外，实情为虽然登记多样种类的微生物农药，但没有公开柑橘黑点病的微生物农药。众所周知，作为植物提取物，皱叶酸模、马齿苋、银线草、姜黄等对植物病原菌具有杀菌效果，但是，还未能作为有效的产品实现常用化。此外，抗菌性油有百里香精油(thyme oil)、丁香花蕾油(clove bud oil)、玫瑰天竺葵精油(rose geraniumoil)、黄樟油(sassafras oil)、蓖麻油(castor oil)等，虽然以有杀菌效果而广为人知，但其单独使用也不能表现令人满意的防治价值。
就利用所述植物的成分开发的生物农药而言，实情为杀虫剂被广泛商业化，但杀菌剂相对地比较弱，种类也不多样。此外，在植物提取物和植物提取物之外的其它混合的成分的制剂化中，缺乏可以充分发挥效果的制剂化技术，与化学农药或合成杀菌剂相比，其效果算是较弱的。不仅如此，为了使得农户的收入得到提高，并且确保稳定的效益，应该开发绿色环保地生产农作物的技术。
黑点病、疮痂病、溃疡病等的病害和螨、蚜虫、介壳虫、桑蓟马等的害虫给柑橘造成巨大损害。其中，众所周知，在韩国国内7～8个公司已开发用于害虫防治的绿色环保防治剂并正在销售，其效果非常显著。众所周知，就柑橘病害的损害程度而言，黑点病约为80％、疮痂病约为5％、溃疡病约为10％、其他病害约为5％，所以，为了无农药柑橘生产，急需开发用于防治黑点病的生物农药。
据此，在本发明中，想要开发在果树的病害中，尤其在无农药柑橘栽培中可以防治损害最严重的黑点病的绿色环保的杀菌剂，从而减轻想要栽培无农药柑橘的农户的困难。
另外，众所周知，零陵香为报春花科(Primulaceae)的两年生草本植物，茎高为70cm左右，叶错位，为复叶，在夏季花径从叶腋长出，开出小蝴蝶状的花，原产地为欧洲，也分布在韩国，在韩医学中有镇痛作用、抗炎症作用及美白效果。
如上所述，众所周知零陵香的作为药用植物的效果，但对于抗菌效果，到目前为止，无论在任何文献或专利也完全没有提出或暗示过。
作为用于开发对于柑橘黑点病的天然杀菌剂的研究的部分，本发明人对利用多个天然药材的提取物的对于柑橘黑点病的防治活性进行研究，结果发现零陵香提取物有对于柑橘黑点病的防治活性并至完成本发明。
发明内容
在本发明中想要解决的技术课题为，想要提供一种含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物，其为针对柑橘黑点病的杀菌效果优秀的植物源物质。
此外，在本发明中想要解决的其他技术课题为，想要提供一种将所述组合物进行微胶囊化而制造的用于防治柑橘黑点病的微胶囊。
此外，在本发明中想要解决的又另外的技术课题为，想要提供一种利用本发明的所述用于防治柑橘黑点病的组合物来防治柑橘黑点病的方法。
为了解决所述技术课题，本发明提供一种含有零陵香(Lysimachiae Foenum-Graeci Herba)提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物。
根据本发明的优选的一个实施样态，特征在于，所述零陵香提取物是零陵香的甲醇提取物，并且，优选地，所述零陵香提取物为将零陵香在40～60℃中在12～36小时期间用甲醇提取后，进行过滤的。
为了解决所述的其他技术课题，本发明提供一种包含所述零陵香提取物的用于防治柑橘黑点病的微胶囊。
为了解决所述的又另外的技术课题，本发明提供一种利用用于防治柑橘黑点病的组合物的柑橘黑点病防治方法，所述用于防治柑橘黑点病的组合物含有所述零陵香提取物作为有效成分。
本发明的含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物不仅对于柑橘黑点病的防治效果优秀，而且作为植物提取物起源的无公害成分开发为生命农药的可能性极高。
附图说明
图1是根据本发明的零陵香提取物的微胶囊剂型的扫描电子显微镜照片。
图2是表示测定对于零陵香提取物的黑点病原菌(Diapothe citri)的抗菌活性的结果。
图3是表示柑橘黑点病防治试验地及药剂处理现状照片。
图4是表示对于根据本发明的零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊的柑橘黑点病的药效试验的照片。
具体实施方式
本发明想要提供含有零陵香(Lysimachiae Foenum-Graeci Herba)提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物。
本发明中的下面的附图是例示本发明的优选的实施例的，并且发挥使得更加理解所述的本发明的内容和本发明的技术思想的作用，所以，本发明不可以仅限定于所述附图中记载的事项进行解释。
本发明提供含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物，所述零陵香提取物表现对于柑橘黑点病的防治活性。
所述零陵香提取物是零陵香的甲醇提取物。零陵香的甲醇提取物可通过如下方式获得：通过粉碎机将完全干燥的零陵香粉碎，将所述粉末试样和95％甲醇按照适当比率进行混合并搅拌提取。例如，优选地，零陵香试样和甲醇的配合比率为1:6(w/v)。提取方法并无特别限制，优选地，在40～60℃中经过12～36小时，更为优选地，在50℃提取24小时并过滤后，可浓缩使用。
本发明的用于防治柑橘黑点病的组合物被确认为：将零陵香提取物作为有效成分包含1至80重量％的含量对柑橘黑点病防治有效。但是，所述可以考虑柑橘的生育程度、耕作地环境、黑点病的发病程度等进行适当地调节。
此外，本发明的以零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物通常可追加包括一般使用于杀虫剂或杀菌剂的赋形剂或佐剂，例如，农药剂型化所需要的载体、稀释剂、乳化剂、分散剂或界面活性剂等。
同时，根据所属领域常用的剂型化法进行剂型化，可制造为适合于多种防治方法，例如，向作物直接喷洒等的防治方法的形态，例如，液剂或粉末剂。
如上所述，含有制造的零陵香提取物的用于防治柑橘黑点病的组合物通过柑橘黑点病防治活性测试效能。通常，可以通过测试对于柑橘黑点病的公示菌株的抗菌活性能进行评价后，通过盆栽(pot)测试进行确认。
在本发明的实施例中，作为柑橘黑点病的原因菌株，使用黑点病原菌(Diapothecitri)。
就零陵香的抗菌活性能测试而言，通常可以全部使用纸片法(Disk PaperMethod)和倾注培养法(Pour Plate Method)来进行。简略说明，正如所属领域所公知的一样，纸片法测试方式如下：将微生物预培养物涂布于固体培养基，使得要测试的含有抗菌剂的圆片紧贴放置于所述涂布了微生物的平板培养基上后，进行培养，测定圆片周边的无菌区(clear zone)从而可以测试抗菌活性。倾注培养法测试方式如下：将要测试的抗菌剂试样按照浓度向液体培养基注入一定量，使其固化后，对抗菌对象菌株进行接种并培养，计算增殖菌株数并比较抗菌效果，由此，可以分析抗菌剂试样的抗菌效能。
通过如上所述的分析确认效能的本发明的含有零陵香提取物的组合物，特征在于，表现对于黑点病原菌(Diapothe citri)的抗菌活性，所述黑点病原菌是所述柑橘黑点病的原因菌株。
如通过以下实施例所证实的一样，就根据本发明的零陵香甲醇提取物而言，其对于黑点病原菌(Diapothe citri)的活性抑制率从纸片法(Disk Paper Method)表现出显著的抗菌效果。对于所述零陵香提取物的制造方法和抗菌活性测试，将在以下实施例进行更加详细地说明。
此外，本发明可以通过如下所述的工艺使得本发明的零陵香提取物微胶囊化。
本发明的微胶囊化工艺大致可分为如下步骤：(1)准备淀粉水溶液；(2)天然植物提取物添加及乳化；(3)聚合反应及微胶囊浆液(microcapsule slurry)化；(4)喷雾(spray)干燥。
以下，按照各个步骤进行详细地说明。
(1)准备淀粉水溶液的步骤
作为壁物质使用的淀粉为生物分解性，所以在常温下实施，并且就所述性质而言，胶囊化的粒子通过完全的水溶性溶解度成为特征。对于作为膜物质使用的淀粉水溶液的含有药物的质量比保持为10～50:1。根据淀粉水溶液的浓度的不同，在胶囊化中膜物质的密度表现出不同，在本发明中使用10～90％的浓度。
所使用的淀粉置换为n-辛烯基琥珀酸酯(n-octenyl succinate)，食品淀粉中特别突出的乳剂(emulsion)特性和膜(film)性质相结合，因此，通常在香的胶囊化上是有效的。通常，淀粉用环二羧酸(cyclo dicarboxylic acid)无水物进行处理，在此，R表示乙烯(dimethylene)或丙基(trimethylene radical)，R＇作为置换基，以烷基(alkyl)、烯基(alkaenyl)、乙酰基(araltyl)或烯基(arakenyl)包含5个至18个的碳原子数。在所有的情况中，就亲水基而言，从加水分解留下的羧基(COOH)存在于碳数基中的一个。成为n-辛烯基琥珀酸酯(n-octenyl succinate)至少为0.1～10％的淀粉衍生物，使用为用于制造具有乳化、涂布(coating)、云雾状(clouding)特征的产物。所述衍生物依存于分子量，将无水物添加于约0.1～30％淀粉。所述的通过环二酸酐(cyclic dicaboxylic acid anhydride)反应置换的淀粉的pH具有约5～11程度的值。如上所述的淀粉的特征，为了制造高流动性，利用酸处理和稍微断开的性质进行改造，作为用于制造胶囊剂的物质，作为用于形成在水中容易分散和具有适当的HLB值的膜的物质，因胶囊剂而内部物质提供为被限制的放出和干燥的粉末。
淀粉是进行n-辛烯基琥珀酸酯(n-octenyl succinate)化的物质，分子量约为50,000～150,000，对于油的乳化稳定性好，即使在为了微胶囊的粉末化而进行的喷雾工艺中也显示出稳定的结果。这样得到的粉末，添加了水时，被干燥的膜物质膨胀的同时内部的油流出，淀粉自然而然地得到分解。10～90％的淀粉水溶液pH显示出3～7的值，最终微胶囊的粘度具有50～500cp的值。
(2)零陵香提取物添加及乳化的步骤
向淀粉水溶液10～90％100g加入零陵香提取物0.1～100g，并使用乳化装置使其在1000～15000rpm中进行几分钟乳化。此时，淀粉的作用带有乳化的性质和分散的特性。因为是淀粉、零陵香提取物的工艺，所以在常温下实施，并且从所述的乳化来看时，可以看到不充分地产生热。此时，具有杀菌、杀虫效果的零陵香提取物的比重大于水，所以淀粉水溶液的粘度比较重要，并且在本发明中，制造所述(1)步骤的淀粉水溶液时，添加0.1～20g的NaCI，从而使得淀粉水溶液的密度增大。
(3)聚合反应及微胶囊浆液化的步骤
通过所述的步骤得到乳化后，为了淀粉的交联目的，从而添加0.1～30g戊二醛(glutaraldehyde)溶液，保持为1000～15000rpm并使其进行几分钟搅拌。为了制造出的微胶囊的形态及大小的保持，从而通过均质器(homogenizer)实施聚合反应。
(4)喷雾干燥步骤
在所述(3)的步骤制造出的微胶囊在浆液上多少缺乏稳定性，从而零陵香提取物向外泄露，所以避免长时间的放置并引入了连续的喷雾干燥工艺。
就使用现有的进行了喷雾干燥的食品淀粉的情况而言，虽然有不添加额外的交联剂进行实验的情况，但有根据内部物质的特性而变化的问题。在食品淀粉的使用中，因使用于食品的限制性而进行n-辛烯基琥珀酸(n-octenyl succinate)化的置换率是0.001～0.01。
在本发明中,就喷雾干燥实施而言，热风机的温度设定(setting)为150～250℃，喷嘴(nozzle)部分的温度保持100～150℃。旋风器(cyclone)部分为40～100℃。喷嘴的大小为1～5mm的大小，从而使得微胶囊的浆液喷射，并且粘附于腔室(chamber)内部的微胶囊很多，但是小的胶囊相互结成团出现，因而可以回收使用。
此外，本发明提供含有所述零陵香提取物的用于防治柑橘黑点病的组合物，或利用包含零陵香提取物的微胶囊的柑橘黑点病的防治方法。
在所述防治方法中，正如使用于一般的防治作业中的一样，本发明的用于防治柑橘黑点病的组合物可以通过向作物的叶面直接喷洒、空中喷射等的适用方法而使用于防治。作为一个样态，防治用组合物可以以0.005％至0.01％的浓度向作物喷雾喷洒，但是可以根据作物的病害、发病率而加减防治浓度。
以如上所证实的柑橘黑点病的抗菌效果为基础，判断为，零陵香提取物作为柑橘黑点病的天然杀菌剂及进一步来说，作为农药的有效成分，农业利用可能性高。
以下，根据下述实施例对本发明进行详细地说明。所述实施例仅仅是例示本发明的，并非据此限制本发明的范围。
＜实施例1＞零陵香提取物的制造
使用于本实验的零陵香是在京东市场中药材商店购买的韩国国产特等品。利用粉碎机(HMF-340,Hanil,Korea)将完全干燥的零陵香粉碎，并使用为用于提取的试样。提取溶媒使用甲醇(HPLC级,Burdick&Jackson,USA)，并且将零陵香粉末试样和甲醇按照1:6(w/v)的比率混合，在50℃中经过24小时反复3次搅拌提取。利用过滤纸(Whatm an,No.2)过滤所述提取液后，利用旋转真空蒸发器(Rotary evaporator N-1000,Eyela,Japan)在45℃水槽上进行减压浓缩。使得浓缩的零陵香溶解于二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)，并使用于抗菌实验。此时，DMSO的最终浓度不超过悬浮液的1％(v/v)。
＜实施例2＞零陵香提取物的微胶囊化
根据下面的步骤，将零陵香提取物进行微胶囊化，从而制造包含零陵香提取物的微胶囊。
步骤一：将43g用n-辛烯基(n-octenyl)置换的食品淀粉(置换率0.005)放入55g水中进行溶解。为了使得淀粉的密度增大，向所述溶液添加4g的NaCI。准备单一相地充分溶解的淀粉水溶液。
步骤二：向所述步骤一的45％淀粉水溶液添加15g零陵香提取物，并用均质器使其以5000rpm进行3分钟高速搅拌。为了获得均一且小尺寸的粒子而实施乳液状态的乳化。
步骤三：向所述步骤二的混合液(在100g水中，使得10g零陵香提取物在45％淀粉水溶液中乳化的溶液)放入4g起交联剂作用的戊二醛，并使其在7000rpm中进行20分钟交联。
步骤四：将上述的得到的微胶囊溶液引入喷雾干燥工艺，从而得到粉末状态的微胶囊。微胶囊浆液利用泵(pump)以/分钟以下进行输送，同时利用空气压缩机以7～9bar吹入空气，从而制造微胶囊形土壤处理用杀菌·杀虫剂。
图1是根据本发明的零陵香提取物的微胶囊剂型的扫描电子显微镜照片。
＜试验例1＞零陵香的抗菌活性能测试
在本实验中使用的菌株是黑点病原菌(Diapothe citri)，在马铃薯葡萄糖琼脂(Potato Dextrose agarose，PDA)培养基中培养，在25℃条件下，在振荡培养器中培养7天，并稀释为0.85％食盐水，从而将菌株的最终浓度调节为106～107CFU/ml。
利用涂布粘贴(st ick)将预培养的黑点病原菌(Diapothe citri)分别1ml、1ml地涂布于PDA(Difco)平板培养基并准备，分别按照浓度用灭菌的小镊子(pincette)使得零陵香试样吸收于8mm纸片并使其完全干燥。使得干燥的圆片完全紧贴于涂布有黑点病原菌(Diapothe citri)的平板培养基上，以所述状态，在25℃恒温培养器中培养24小时后，测定生成于圆片周边的无菌区，并按照浓度比较抗菌活性。所述比较结果显示于图2。图2是表示测定对于零陵香提取物的黑点病原菌(Diapothe citri)的抗菌活性的结果。
如图2所示，从通过确认圆片无菌区的零陵香提取物的抗菌活性测试可以确认，比非处理区(N.T)具有明显高的抗菌活性。
＜试验例2＞用于防治柑橘黑点病的试验
2015年度将本发明的零陵香提取物委托给(株式会社)韩国植物环境研究所试验柑橘黑点病防治效果。对试验过程及结果进行概括如下。本试验为了测试对于零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊的柑橘黑点病的药剂防治效果，依据“农药品种登记试验标准和方法”进行了试验，并且评价标准将最终药剂处理后患病果树与无处理相比较从而评价效果。
为了进行本试验，试验区配置通过完全任意配置法进行了3次反复试验，试验的药效试验评价在最终药剂处理10天后调查了对于每块样地100棵的患病比率，并且药害试验评价在对柑橘标准量、倍量处理后着重调查了药害有无。药剂间的显著性检验利用邓肯多差距试验(Duncan's multiple range test，DMRT)在95％水平上测试了显著性。
试验过程
甲.对象病害：黑点病(Diapothe citri)
乙.试验作物(品种)：柑橘(宫川早生)
丙.处理内容
【表1】
丁.药物处理现状
【表2】
处理方法/工具 丸山MS0735W
使用量 3l/株
戊.耕种概要
栽培模式：露地栽培、覆盖栽培(mulching cultivation)
作物树龄：35年生
种植间距：3×3m
试验期间内其他药剂处理现状：无混用及其他药剂处理。
己.试验方法及面积：完全任意配置法3反复
【表3】
庚.药物喷洒前后气象状况
【表4】
月/日 降雨量(mm) 最高/最低气温(℃) 平均气温(℃)
8/21 0.0 28.0/23.1 25.6
8/22* - 28.4/21.8 25.2
8/23 0.0 29.0/23.0 26.1
8/31 0.0 27.9/22.8 24.5
9/1* 0.5 27.6/22.2 24.8
9/2 2.0 27.5/23.8 25.4
9/10 - 27.9/22.7 25.4
9/11* - 29.0/21.5 25.3
9/12 4.0 26.6/20.7 24.0
二次处理时，因试验地无降雨而进行药剂处理。
辛.试验地及药剂处理现状照片
图3表示柑橘防治试验地及药剂处理现状照片。
壬.调查方法及判定标准
【表5】
试验成绩
甲.药效试验
对于柑橘黑点病的药剂防治效果(最终药剂处理后10日次)
【表6】
乙.药害试验(药物处理后3、5、7日)
【表7】
实验结果
甲.药效
根据本发明的零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊表现出了良好的防治效果，并且与对照药剂相比，表现出了类似的防治效果。图4是表示对于根据本发明的零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊的柑橘黑点病的药效试验的照片。
乙.药害
标准量及倍量处理后调查药害的结果为，根据本发明的零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊没有药害。
综合上述的试验结果为，柑橘黑点病的无处理平均患病比率为29.3％，这是评价药剂的充分条件，根据本发明的零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊的防治值在最终药剂处理10日后分别为80.5％及82.9％，与对照药剂相比，表现出了类似的防治效果。此外，对根据本发明的零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊的标准量和倍量进行茎叶处理，并调查药害有无，结果为无药害。
结论为，通过本试验，与无处理相比防治值为80％以上且与无处理区相比具有统计显著性，并且标准量和倍量全部都没有药害，所以判断根据本发明的零陵香提取物及零陵香提取物的微胶囊对柑橘黑点病有显著的防治效果。
产业利用可能性
本发明的含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物，不仅对于柑橘黑点病的防治效果优秀，而且作为植物提取物起源的无公害成分开发为生命农药的可能性极高。此外，我们期待，含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物对绿色环保柑橘生产做出巨大贡献，由此，诱导绿色环保柑橘的消费扩大及大量生产，从而可以寻求占有国内市场和海外输出。

Claims (6)

1.一种含有零陵香提取物作为有效成分的用于防治柑橘黑点病的组合物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，
所述零陵香提取物为零陵香甲醇提取物。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，
所述零陵香提取物为将零陵香在40～60℃中在12～36小时期间用甲醇提取后进行过滤而制造的。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，
所述零陵香提取物表现出对于黑点病原菌的杀菌活性。
5.一种包含零陵香提取物的用于防止柑橘黑点病的微胶囊。
6.一种利用根据权利要求1至4中任意一项所述的用于防治柑橘黑点病的组合物来防治柑橘黑点病的方法。
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