CN107201382A - 一种清洁剂及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种清洁剂的制备方法，含有清洁剂提取物和水，其中，清洁剂提取物的制备包括以下步骤：取海藻提取液，添加其质量0.3～1.0％的复合酶P，得到海藻‑复合酶P混合液；调节上述混合液pH 5～8，温度至25～50℃，酶解反应24～72h，即得。本发明采用生物发酵过程生产清洁抑菌成分，大大提高了提取物中活性成分的提取效率，且使用天然物质，避免制备成化学清洁剂污染环境，方法简便，用途广泛。
Description
技术领域
本发明涉及清洁剂领域，尤其涉及一种采用微生物发酵制备清洗剂及其制备方法和用途。
背景技术
目前市场上销售的清洁剂多种多样，主要为化学清洁剂。化学清洁剂的去污清洁能力主要来自表面活性剂。但是众所周知，含表面活性剂类的化学清洁剂会对人体和环境造成双重危害。一方面，表面活性剂也可以渗入人体。沾在皮肤上的清洁剂大约有0.5％渗入血液，皮肤上若有伤口则渗透力提高10倍以上。进入人体内的化学清洁剂毒素可使血液中钙离子浓度下降，血液酸化，人容易疲倦。这些毒素还使肝脏的排毒功能降低。使原本该排出体外的毒素淤积在体内积少成多，使人们免疫力下降，肝细胞病变加剧，容易诱发癌症。另一方面，其在使用过程中废水的排放是造成环境污染与破坏的根本，例如，多数化学洗涤剂中含有表面活性剂，其中对环境影响和危害最大的是含有磷元素，大量的磷元素排放到水中很容易造成水体的富营养化，这样不仅会对水中的动植物造成影响，同时还会导致生态系统和食物链的破坏。
因此，亟需生产一种纯天然的、对人体无害的、且无污染的清洁剂，
以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的旨在克服现有技术中清洁剂清洁能力不足，且易造成对人体危害以及环境污染问题，为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种清洁剂提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：取海藻提取液，添加其质量0.3～1.0％的复合酶P，得到海藻-复合酶P混合液；
S2：调节上述混合液pH 5～8，温度至25～50℃，酶解反应24～72h，即得。
优选的，所述步骤S1中，海藻提取液的制备方法，包括以下步骤：
1)制备海藻匀浆：将海藻：水按照质量比1:(0.1～0.5)研磨，制成匀浆，2～8℃冷藏备用；优选的，所述的海藻选自泡叶藻、马尾藻、褐藻、墨角藻、掌状红皮藻、海囊藻中的一种或多种；优选的，所述的水是去离子水；优选的，所述的海藻：水质量比为1:(0.2～0.3)；优选的，所述的冷藏温度为3～6℃；
2)酶解①：按照上述海藻匀浆质量0.2～0.5％添加复合酶I，调节pH 6～7，温度25～50℃，酶解反应24～72h，得酶解海藻匀浆I；所述复合酶I为果胶水解酶、蛋白水解酶、纤维素酶三者混合物，三者用量之比为1：1： (2～3)；
3)发酵①
3.1菌剂I的培养：取斜面菌种一环，分别将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为15～24小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂I；所述的液体培养基a含： 1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液体培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖；
3.2发酵：取上述步骤2)中的酶解海藻匀浆I，按其质量的0.1～0.2％添加菌剂I，调节pH 6～7，调整温度30～40℃，发酵24～72h，即得海藻匀浆发酵液I；
4)酶解②
按照上述步骤3.2所得海藻匀浆发酵液I的质量0.3～0.4％添加复合酶 II，调节pH 6～7，温度30～40℃，酶解反应24～72h，即得酶解海藻匀浆II；所述的复合酶II为β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶组成的混合物，上述三者之比为1:1:(3～5):(3～8)；
5)发酵②
5.1菌剂II的培养：取斜面菌种一环，分别将地衣芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为15～24小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂II；所述的液体培养基a含： 1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液体培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖；
5.2发酵
取酶解②所得的酶解海藻匀浆II，按质量0.1～0.2％添加菌剂II，调节 pH 6～7，温度30～40℃，发酵24～72h后，即得海藻提取液。
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中，复合酶P为β-半乳糖苷酶、巯基蛋白酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、紫菜聚糖酶、卡拉胶酶和丝氨酸蛋白酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为1:(3～10):(1～3):(1～5):(1～5): (2～8):(1～3):(1～3):(1～4):(2～8)；优选的，混合物中各种酶质量之比为1:(5～6):1:3:3:(3～5):1:1:2:(3～4)。
优选的，所述S1步骤中，复合酶P为磷酸酯酶、β-半乳糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、羧酸酯酶、β-葡萄糖苷酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、紫菜聚糖酶和固醇酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(1～6): (1～3):(1～3):(1～3):(2～10):(1～3):(2～5):(1～3):(4～10): (1～3)；优选的，混合物中各种酶质量之比为 (3～5):1:1:1:(4～7):1:2:1:(5～8):1。
优选的，所述S1步骤中，复合酶P为α-淀粉酶、γ-淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、卡拉胶酶和β-淀粉酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(3～10): (2～10):(1～3):(2～5):(1～3):(1～5):(1～3):(1～3):(1～3): (4～8)；进一步优选的，混合物中各种酶质量之比为(4～7):(3～8):1:2:1:(1～3):1:1:1:(5～6)。
优选的，所述S1步骤中，复合酶P为巯基蛋白酶、β-淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、卡拉胶酶和固醇酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(2～10): (3～10):(1～3):(1～3):(2～5):(1～3):(1～3):(1～4):(1～3): (4～10)；进一步优选的，混合物中各种酶质量之比为 (3～7):(4～8):1:1:2:1:1:(1～2):2:(5～9)。
优选的，所述S1步骤中，复合酶P的用量为海藻提取液质量的 0.3～0.4％、0.3～0.6％、0.5～0.8％、0.8～1.0％中的任意一种。
优选的，所述S1步骤中，制备海藻提取液的酶解时间为72小时，发酵时间为48小时。
优选的，所述S2步骤中，调节混合液pH 6～7，酶解反应时间为72h。
优选的，所述S2步骤中，温度为30～45℃；进一步优选的，所述S2 步骤中，温度为35～40℃；进一步优选的，所述S2步骤中，温度为35～45℃。
一种发酵罐清洁剂组合物，含有0.5～5％的由上述方法制备得到的清洁剂提取物，其余为水；优选的，所述的水为去离子水。
一种果蔬去农残清洁剂组合物，含有0.2～1％的由上述方法制备得到的清洁剂提取物，其余为水；优选的，所述的水为去离子水。
一种除菌洗手液组合物，含有0.2～2％的由上述方法制备得到的清洁剂提取物，其余为水；优选的，所述的水为去离子水。
一种饮用水管道清洁剂组合物，含有2～6％的由上述方法制备得到的清洁剂提取物，其余为水；优选的，所述的水为去离子水。
含有由上述方法制备得到的清洁剂提取物用在制备发酵罐清洁剂、果蔬去农残清洁剂、除菌洗手液或饮用水管道清洁剂中的应用。
有益效果
与现有技术相比，本发明体现的技术优点体现在以下几个方面：
(1)本发明采用生物发酵过程生产清洁抑菌成分，大大提高了提取物中活性成分的提取效率；
(2)本发明酶解过程采用微生物活化酶配方，使用天然物质，避免制备成化学清洁剂污染环境；
(3)发酵过程中，产生了许多活性物质，具有很好的清洁去污能力：
a.海藻提取物中的活性成分：为主要的清洁抑菌组分，该组分中的碳糖的多聚体，分子量在100万以上，能溶于酸性溶液而形成带正电的阳离子基团-葡萄糖胺多聚体，具有很高的活性，对微生物有很强的亲和性，故很容易被通常呈负电性的各类细菌、真菌、病毒所吸附，从而抑制了它们的分裂繁殖功能；加之聚合体形成的薄膜，堵塞了微生物的呼吸通道，使微生物窒息死亡。
b.海藻酸：海藻提取物中的海藻酸作为天然的海洋生物活性成分，有助于去污、增稠、乳化、粘合等作用。能促进脂肪分子的降解；加速自然微生物体分解活动(催化生物自然反应)大颗粒油脂被分解成小颗粒的，最后被分解为基础分子。
c.微生物活性酶：微生物中的活性酶类使得微生物消化吸收足够的油污分子后迅速的繁殖，成熟的微生物又会产生新的具有很强活性的生物酶，从而实现长期且持续的对工业油脂的分散和分解作用。微生物中具有很强活性的生物酶，在常温、常压状态下将长链、复杂的油污分子，分解成为短链、简单的分子，实现对油脂的分解和消化。酶所释放的细胞调节物质是亲油性分子，因此，即使这种活性物量很少，它们也会聚集在油脂层帮助细菌分解油脂。
d.提取物中的微量元素：微量元素是促进海藻活性素比一般酶产品清洁反应速度快的重要因素。微量元素作为一种补充催化剂，使海藻活性素的作用范围更广，并能减少污染物中的有害化学物质。这些金属酶能产生带有负电荷的负氧离子及氧自由基，自由基参与的系列反应能帮助降解污染物中的有害化学物质。
(4)本发明提供的清洁剂组合物具有广泛用途，可以用在工业管道、发酵罐清洁领域，也可以用在制备洗衣液、洗手液领域，也可以用在饮用水清洁消毒领域。
附图说明
图1为清洁剂提取物的制备流程图。
具体实施方式
实施例1:啤酒发酵罐清洁剂
一、清洁剂提取物生产工艺
1.制备海藻提取液
1.1制备海藻匀浆：将新鲜海藻(泡叶藻、马尾藻、褐藻、墨角藻、掌状红皮藻、海囊藻等质量混合)：水按照质量比1:(0.2～0.3)研磨，制成匀浆，3～6℃冷藏备用。
1.2酶解①：按照上述所得海藻匀浆质量0.2～0.5％添加复合酶I(复合酶I 为果胶水解酶、蛋白水解酶、纤维素酶三者混合物，用量之比为1：1： (2～3))，调节pH 6～7，温度30～50℃，酶解反应48～72h，得酶解海藻匀浆I。
1.3发酵①
1.3.1菌剂I的培养：取斜面菌种一环，分别将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为18～24小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂I；所述的液体培养基a含： 1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.3.2发酵：取上述步骤1.2中的酶解海藻匀浆I，按其质量的0.1～0.2％添加菌剂I，调节pH 6～7，调整温度30～40℃，发酵24～48h，，即得海藻匀浆发酵液I。
1.4酶解②
按照上述步骤1.3.2所得海藻匀浆发酵液I的质量0.3～0.4％添加复合酶II，调节pH 6～7，温度30～40℃，酶解反应72h，即得酶解海藻匀浆II；所述的复合酶II为β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶组成的混合物，上述三者之比为1:1:(3～5):(3～8)。
1.5发酵②
1.5.1菌剂II的培养：取斜面菌种一环，分别将地衣芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为35～40℃，时间为16～20 小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂II；所述的液体培养基a含：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.5.2发酵
取酶解②所得的酶解海藻匀浆II，按质量0.1～0.2％添加菌剂II，调节 pH 6～7，温度30～40℃，发酵24～48h，即得海藻提取液。
1.6制备清洁剂提取物：
1.6.1：取1.5.2步骤所得的海藻提取液，添加其质量0.5～0.8％的复合酶P，得到海藻-复合酶P混合液，所述的复合酶P为β-半乳糖苷酶、巯基蛋白酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、紫菜聚糖酶、卡拉胶酶和丝氨酸蛋白酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为1:(5～6):1:3:3:(3～5):1:1:2:(3～4)；
1.6.2：调节上述混合液pH 6～7，温度至30～40℃，酶解反应48h～72h，即得啤酒发酵罐清洁剂提取物。
二、检测过程
A.华润雪花啤酒(齐齐哈尔)有限公司酿造车间发酵罐的清洁
2.1检测方法：利用步骤一制备的清洁剂代替酸性清洗剂对发酵罐进行刷洗
2.2检测地点：华润雪花啤酒(齐齐哈尔)有限公司酿造车间
2.3检测方法：发酵罐刷洗的全过程为：清水冲洗10分钟——温水循环 20分钟——清水冲洗5分钟——清洁剂(由步骤一制备)循环40分钟——清水冲洗10分钟——消毒剂消毒30分钟——无菌水冲洗10分钟(此程序执行《清洗消毒操作手册》)。
2.4清洁剂的制备：
清洁剂①：37℃时，于酸罐内，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为5％(150公斤提取物加水稀释至3吨)，即得，然后刷洗 36#和29#发酵罐，两罐连续刷洗未进行补加。
清洁剂②：8℃时，于酸罐内，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为2.5％(50公斤提取物加水稀释至2吨)，即得，然后刷洗18# 和24#发酵罐，两罐连续刷洗未进行补加。
三、检测结果
| 罐号 | 残水(个/100ml) | 发酵液杂菌(个/ml) | 发酵液厌氧菌(个/ml) |
| 36# | 0 | 0 | 0 |
| 29# | 0 | 0 | 0 |
| 18# | 0 | 0 | 0 |
| 24# | 0 | 0 | 0 |
结论：由上述方法制备得到的啤酒发酵罐清洁剂，在常温条件下(传统方法需要高温条件)对发酵罐进行清洗，微生物检测结果全部合格。
B.山东银麦啤酒股份有限公司酿造部发酵罐的清洁
2.1检测方法：利用步骤一制备的清洁剂对发酵罐进行刷洗
2.2检测地点：山东银麦啤酒股份有限公司酿造部
2.3检测方法：发酵罐刷洗的全过程为(此程序执行《清洗消毒操作手册》)：
1)常温条件下，工艺用水在系统中循环10±1分钟后排净；
2)实施例1清洁剂在常温条件下，先在系统中循环40分钟进行清洗，常温水冲洗10分钟至pH＝7；
3)7.5±2.5‰酸性消毒剂循环30±1分钟；
4)常温条件下，反渗透水(无菌水)在系统中循环15分钟进行清洗后排净。
5)清洗结束后进行感官检验，对清洗残留水进行品级及微生物检测，满灌后追踪冷贮酒微生物
2.4清洁剂的制备：
清洁剂③：37℃时，于酸罐内，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为3％(240公斤提取物加水稀释至8吨)，即得，然后刷洗100# 发酵罐(为速冷后贮酒用罐)，清洗压力0.5MPa。
三、检测结果
结论：由上述方法制备得到的啤酒发酵罐清洁剂，在常温条件下(传统方法需要高温条件)对发酵罐进行清洗，对100#后熟罐进行刷洗，微生物指标检测结合格，冷贮酒各项指标合格。
C.山东省菏泽市鄄城亘古啤酒厂酿造车间发酵罐的清洁
2.1检测方法：利用步骤一制备的清洁剂代替酸性清洗剂对发酵罐进行刷洗
2.2检测地点：山东省菏泽市鄄城亘古啤酒厂酿造车间
2.3检测方法：发酵罐刷洗的全过程为(此程序执行《清洗消毒操作手册》)：清水冲洗60分钟——实施例1清洗剂循环50分钟——清水冲洗20分钟——消毒剂30分钟——无菌水20分钟
2.4清洁剂的制备：
清洁剂④：37℃时，于清洗剂储存罐内，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为1％(100公斤提取物加水稀释至10吨)，即得，然后刷洗10#、27#、35#、36#发酵罐，四罐连续刷洗未进行补加。
清洁剂⑤：37℃时，于清洗剂储存罐内，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为0.5％(25公斤提取物加水稀释至5吨)，即得，然后刷洗5#发酵罐，未进行补加。
实施例2:果蔬去农残清洁剂
一、清洁剂生产工艺
1.制备海藻提取液
1.1制备海藻匀浆：将新鲜海藻(泡叶藻、马尾藻、褐藻、墨角藻、掌状红皮藻、海囊藻等质量混合)：水按照质量比1:(0.2～0.3)研磨，制成匀浆，3～6℃冷藏备用。
1.2酶解①：按照上述所得海藻匀浆质量0.2～0.5％添加复合酶I(复合酶I 为果胶水解酶、蛋白水解酶、纤维素酶三者混合物，用量之比为1：1： (2～3))，调节pH 6～7，温度30～50℃，酶解反应72h，得酶解海藻匀浆I。
1.3发酵①
1.3.1菌剂I的培养：取斜面菌种一环，分别将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至液体培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为18小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂I；所述的液体培养基a含： 1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.3.2发酵：取上述步骤1.2中的酶解海藻匀浆I，按其质量的0.1～0.2％添加菌剂I，调节pH 6～7，调整温度30～40℃，发酵48h，即得海藻匀浆发酵液I。
1.4酶解②
按照上述步骤1.3.2所得海藻匀浆发酵液I的质量0.3～0.4％添加复合酶II，调节pH 6～7，温度30～40℃，酶解反应72h，即得酶解海藻匀浆II；所述的复合酶II为β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶组成的混合物，上述三者之比为1:1:(3～5):(3～8)。
1.5发酵②
1.5.1菌剂II的培养：取斜面菌种一环，分别将地衣芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min，温度为35～40℃，时间为16～20小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂II；所述的液体培养基 a含：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含： 1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.5.2发酵
取酶解②所得的酶解海藻匀浆II，按质量0.1～0.2％添加菌剂II，调节 pH 6～7，温度30～40℃，发酵48h后，即得海藻提取液。
1.6制备清洁剂提取物：
1.6.1：取1.5.2步骤所得的海藻提取液，添加其质量0.3～0.4％的复合酶P，得到海藻-复合酶P混合液，所述的复合酶P为磷酸酯酶、β-半乳糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、羧酸酯酶、β-葡萄糖苷酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、紫菜聚糖酶和固醇酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为 (3～5):1:1:1:(4～7):1:2:1:(5～8):1；
1.6.2：调节上述混合液pH 6～7，温度至35～45℃，酶解反应72h，即得果蔬清洁剂提取物。
二、检测方法
2.1检测地址：在中国日用化学工业研究院分析测试中心国家洗涤用品质量监督检验中心(太原)
2.2检测方法：采用《GB/T 24691-2009果蔬清洗剂》中A.8农药去除率试验方法进行农残检测。
2.3清洁剂⑥：25℃时，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为 0.2％(10g提取物加水稀释至500g)，即得。
三、检测结果
a)氯氰菊酯和残杀威两种农药合计的去除率比值。
b)0.2％果蔬清洗剂溶液对残留农药的洗除率与水对残留农药的洗除率之比值为大于等于4。
结论：“果蔬清洁剂”去除农药残留效果显著高于常规清洁剂。
实施例3:除菌洗手液
一、清洁剂提取物生产工艺
1.制备海藻提取液
1.1制备海藻匀浆：将新鲜海藻(泡叶藻、马尾藻、褐藻、墨角藻、掌状红皮藻、海囊藻等质量混合)：水按照质量比1:(0.2～0.3)研磨，制成匀浆，3～6℃冷藏备用。
1.2酶解①：按照上述所得海藻匀浆质量0.2～0.5％添加复合酶I(复合酶I 为果胶水解酶、蛋白水解酶、纤维素酶三者混合物，用量之比为1：1： (2～3))，调节pH 6～7，温度30～50℃，酶解反应72h，得酶解海藻匀浆I。
1.3发酵①
1.3.1菌剂I的培养：取斜面菌种一环，分别将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至液体培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为18小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂I；所述的液体培养基a含： 1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.3.2发酵：取上述步骤1.2中的酶解海藻匀浆I，按其质量的0.1～0.2％添加菌剂I，调节pH 6～7，调整温度30～40℃，发酵48h，即得海藻匀浆发酵液I。
1.4酶解②
按照上述步骤1.3.2所得海藻匀浆发酵液I的质量0.3～0.4％添加复合酶II，调节pH 6～7，温度30～40℃，酶解反应72h，即得酶解海藻匀浆II；所述的复合酶II为β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶组成的混合物，上述三者之比为1:1:(3～5):(3～8)。
1.5发酵②
1.5.1菌剂II的培养：取斜面菌种一环，分别将地衣芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min，温度为35～40℃，时间为16～20小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂II；所述的液体培养基 a含：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含： 1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.5.2发酵
取酶解②所得的酶解海藻匀浆II，按质量0.1～0.2％添加菌剂II，调节 pH 6～7，温度30～40℃，发酵48h后，即得海藻提取液。
1.6制备清洁剂提取物：
1.6.1：取1.5.2步骤所得的海藻提取液，添加其质量0.8～1.0％的复合酶P，得到α-淀粉酶、γ-淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、卡拉胶酶和β-淀粉酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(4～7):(3～8):1:2:1:(1～3):1:1:1:(5～6)；
1.6.2：调节上述混合液pH 6～7，温度至30～40℃，酶解反应72h，即得除菌洗手液清洁剂提取物。
三、检测方法
2.1检测地址：在文登海府水产食品有限公司
2.2检测方法：以除菌洗手液清洁剂代替普通清洁剂和消毒剂进行清洁检测，检测标准：GB4789.2-2010、GB4789.3-2010、GB4789.10-2010、 GB4789.38-2012、GB4789.4-2010
2.3清洁剂⑦：25℃时，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为 0.2％(10g提取物加水稀释至500g)，即得。
三、检测结果
结论：“除菌洗手液清洁剂”显著降低群落总数，清洁效果突出。
实施例4:饮用水管道清洁剂
一、清洁剂提取物生产工艺
1.制备海藻提取液
1.1制备海藻匀浆：将新鲜海藻(泡叶藻、马尾藻、褐藻、墨角藻、掌状红皮藻、海囊藻等质量混合)：水按照质量比1:(0.2～0.3)研磨，制成匀浆，3～6℃冷藏备用。
1.2酶解①：按照上述所得海藻匀浆质量0.2～0.5％添加复合酶I(复合酶I 为果胶水解酶、蛋白水解酶、纤维素酶三者混合物，用量之比为1：1： (2～3))，调节pH 6～7，温度30～50℃，酶解反应72h，得酶解海藻匀浆I。
1.3发酵①
1.3.1菌剂I的培养：取斜面菌种一环，分别将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为18小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂I；所述的液体培养基a含： 1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.3.2发酵：取上述步骤1.2中的酶解海藻匀浆I，按其质量的0.1～0.2％添加菌剂I，调节pH 6～7，调整温度30～40℃，发酵48h，即得海藻匀浆发酵液I。
1.4酶解②
按照上述步骤1.3.2所得海藻匀浆发酵液I的质量0.3～0.4％添加复合酶II，调节pH 6～7，温度30～40℃，酶解反应72h，即得酶解海藻匀浆II；所述的复合酶II为β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶组成的混合物，上述三者之比为1:1:(3～5):(3～8)。
1.5发酵②
1.5.1菌剂II的培养：取斜面菌种一环，分别将地衣芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min，温度为35～40℃，时间为16～20小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂II；所述的液体培养基 a含：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含： 1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖。
1.5.2发酵
取酶解②所得的酶解海藻匀浆II，按质量0.1～0.2％添加菌剂II，调节 pH 6～7，温度30～40℃，发酵48h后，即得海藻提取液。
1.6制备清洁剂提取物：
1.6.1：取1.5.2步骤所得的海藻提取液，添加其质量0.3～0.6％的复合酶P，得到巯基蛋白酶、β-淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、卡拉胶酶和固醇酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(3～7):(4～8):1:1:2:1:1:(1～2):2:(5～9)；
1.6.2：调节上述混合液pH 6～7，温度至35～45℃，酶解反应72h，即得管道清洁剂提取物。
二、检测方法
2.1检测地址：威海市文登区城北工业有限公司
2.2检测方法：以上述清洁剂代替普通消毒剂，对投放清洁剂的生活饮用水进行检测。检测标准：采用《生活饮用水卫生标准GB 5749-2006》《生活饮用水标准检验方法微生物指标GB/T5750.12-2006》。
2.3清洁剂⑧：25℃时，将1.6.2所得的清洁剂提取物，加水稀释至浓度为0.05％(50mg提取物加水稀释至1000g)，即得。
三、检测结果
结论：根据生活饮用水卫生标准GB 5749-2006要求，采用“矿泉水厂管道工业清洁剂”清洁后总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌符合生活饮用水卫生标准。
尽管已经阐述和描述了本发明特定实施方式，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是能够进行各种其他变化和变更而不背离本发明的精神和范围。因此，意图覆盖所附权利要求书中的所有此类变化和变更，其均落于本发明的范围之内。
Claims (15)
1.一种清洁剂提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：取海藻提取液，添加其质量0.3～1.0％的复合酶P，得到海藻-复合酶P混合液；
S2：调节上述混合液pH 5～8，温度至25～50℃，酶解反应24～72h，即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，海藻提取液的制备方法，包括以下步骤：
1)制备海藻匀浆：将海藻和水按照质量比1:(0.1～0.5)进行研磨，制成匀浆，2～8℃冷藏备用，其中，所述的海藻选自泡叶藻、马尾藻、褐藻、墨角藻、掌状红皮藻、海囊藻中的一种或多种；
2)酶解①：按照上述海藻匀浆质量0.2～0.5％添加复合酶I，调节pH6～7，温度25～50℃，酶解反应24～72h，得酶解海藻匀浆I；所述复合酶I为果胶水解酶、蛋白水解酶、纤维素酶三者混合物，三者用量之比为1：1：(2～3)；
3)发酵①
3.1菌剂I的培养：取斜面菌种一环，分别将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为15～24小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂I；所述的液体培养基a含：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液体培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖；
3.2发酵：取上述步骤2)中的酶解海藻匀浆I，按其质量的0.1～0.2％添加菌剂I，调节pH 6～7，调整温度30～40℃，发酵24～72h，即得海藻匀浆发酵液I；
4)酶解②
按照上述步骤3.2所得海藻匀浆发酵液I的质量0.3～0.4％添加复合酶II，调节pH 6～7，温度30～40℃，酶解反应24～72h，即得酶解海藻匀浆II；所述的复合酶II为β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶组成的混合物，上述四者之比为1:1:(3～5):(3～8)；
5)发酵②
5.1菌剂II的培养：取斜面菌种一环，分别将地衣芽孢杆菌接种于液体培养基a，将乳酸菌接种至培养基b，将酵母菌接种至液体培养基c，进行摇培，摇培转速为200～300r/min、温度为25～40℃、时间为15～24小时，然后将所得的三种菌液等体积混合，即得菌剂II；所述的液体培养基a含：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠；所述的培养基b含：1％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％酵母膏，2％葡萄糖，0.5％醋酸钠，0.2％磷酸氢二钾，0.2％柠檬酸三铵，0.01％吐温-80，0.058％七水硫酸镁，0.025％四水硫酸锰，所述的液体培养基c含：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖；
5.2发酵
取酶解②所得的酶解海藻匀浆II，按质量0.1～0.2％添加菌剂II，调节pH 6～7，温度30～40℃，发酵24～72h后，即得海藻提取液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中，复合酶P为β-半乳糖苷酶、巯基蛋白酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、紫菜聚糖酶、卡拉胶酶和丝氨酸蛋白酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为1:(3～10):(1～3):(1～5):(1～5):(2～8):(1～3):(1～3):(1～4):(2～8)。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中，复合酶P为磷酸酯酶、β-半乳糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、羧酸酯酶、β-葡萄糖苷酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、紫菜聚糖酶和固醇酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(1～6):(1～3):(1～3):(1～3):(2～10):(1～3):(2～5):(1～3):(4～10):(1～3)。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中，复合酶P为α-淀粉酶、γ-淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、卡拉胶酶和β-淀粉酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(3～10):(2～10):(1～3):(2～5):(1～3):(1～5):(1～3):(1～3):(1～3):(4～8)。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中，复合酶P为巯基蛋白酶、β-淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、壳多糖酶、琼胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、卡拉胶酶和固醇酶组成的混合物，且混合物中各种酶质量之比为(2～10):(3～10):(1～3):(1～3):(2～5):(1～3):(1～3):(1～4):(1～3):(4～10)。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中，复合酶P的用量为海藻提取液质量的0.3～0.4％、0.3～0.6％、0.5～0.8％、0.8～1.0％中的任意一种。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中，制备海藻提取液的酶解时间为72小时，发酵时间为48小时。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S2步骤中，调节混合液pH 6～7，酶解反应时间为72h。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S2步骤中，温度为30～45℃。
11.一种发酵罐清洁剂组合物，含0.5～5％的权利要求1-10所述制备得到的清洁剂提取物，其余为水。
12.一种果蔬去农残清洁剂组合物，含有0.2～1％的权利要求1-10所述制备得到的清洁剂提取物，其余为水。
13.一种除菌洗手液组合物，含有0.2～2％的权利要求1-10所述制备得到的清洁剂提取物，其余为水。
14.一种管道清洁剂组合物，含有2～6％的权利要求1-10所述制备得到的清洁剂提取物，其余为水。
15.含有权利要求1-10所述制备得到的清洁剂提取物在制备发酵罐清洁剂、果蔬去农残清洁剂、除菌洗手液或饮用水管道清洁剂的中的应用。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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