CN107189945A - 一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法 - Google Patents

一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107189945A
CN107189945A CN201710462893.5A CN201710462893A CN107189945A CN 107189945 A CN107189945 A CN 107189945A CN 201710462893 A CN201710462893 A CN 201710462893A CN 107189945 A CN107189945 A CN 107189945A
Authority
CN
China
Prior art keywords
grape
saccharomycete
sterile
epidermis
quick separating
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710462893.5A
Other languages
English (en)
Inventor
张俊杰
白艳红
张文叶
何培新
杨旭
郭晨
尚益民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhengzhou University of Light Industry
Original Assignee
Zhengzhou University of Light Industry
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhengzhou University of Light Industry filed Critical Zhengzhou University of Light Industry
Priority to CN201710462893.5A priority Critical patent/CN107189945A/zh
Publication of CN107189945A publication Critical patent/CN107189945A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，包括如下步骤：在无菌条件下采集原料样品并获得葡萄表皮，选用YEPD液体培养基，加入若干颗葡萄表皮，在28℃恒温摇床震荡培养48小时，得到葡萄表皮酵母菌富集液；制备分离鉴别培养基WL，直接梯度稀释葡萄表皮酵母菌富集液，分别吸取100μL稀释液，涂布在WL培养基上，在37℃倒置培养5天后观察结果，直接根据菌落形态对酵母菌进行计数和形态学记录。本发明充分考虑人为或者使用物品、运输过程对原料样品产生的不利影响，并直接在WL培养基上进行分离和鉴别，一步到位，节约时间的同时也有效减少了被漏掉菌群的弊端，增加了酵母菌类型。

Description

一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法
技术领域
本发明属于酵母菌分离技术领域，具体涉及一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法。
背景技术
酵母菌是一种单细胞真核微生物，也是人类实践活动中应用较早的一类微生物。酵母菌在自然界中的分布很广，主要是生长在偏酸性的高糖环境中，在水果，蔬菜的表面和果园的土壤中较为常见，
葡萄成熟时，葡萄皮上会粘附多种类型的天然酿酒酵母，酿酒师有时就用它来发酵。现在随着技术的不断成熟，酿酒师越来越多地利用从天然酵母中精挑细选出来的酵母菌株进行发酵，因为不同的酿酒酵母品种有其独特的发酵特点，所产生的味道也各不相同。但是，传统的分离方法只能分离出较少类型的酵母菌，这对于以葡萄皮为原料充分分离得到多种类型酵母菌来说，是远远不够的。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，能够分离并鉴别得到多种酵母菌类型，大大扩展了产品种类。
具体的，本发明提供的从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，具体包括如下步骤：
S1：葡萄的采摘与运输
准备无菌口罩、无菌手套、无菌塑料盒子、无菌剪刀和低温冷冻盒，操作人员佩戴无菌口罩和无菌手套，选择新鲜健康的枝条，用无菌剪刀剪去果穗的柄部，然后用无菌手套轻拿轻放入无菌塑料盒子内，快速转入低温冷冻盒，运输回实验室；
S2：葡萄皮的获得
准备无菌手套、无菌手术刀、无菌镊子和无菌离心管，在超净工作台内，戴上无菌手套，逐个摘下葡萄粒，用无菌手术刀在葡萄果实中部拉开一道1cm长的口子，用无菌镊子夹住开口的两端均匀用力撕下葡萄表皮，装入无菌离心管中，备用；
S3：葡萄表皮酵母菌的富集
选用YEPD液体培养基，加入若干颗葡萄表皮，在28℃恒温摇床中，转速为180rpm，震荡培养48小时，得到葡萄表皮酵母菌富集液；
S4：快速分离鉴别酵母菌
制备分离鉴别培养基WL，直接梯度稀释葡萄表皮酵母菌富集液，选择10-3、10-4、10-5三个稀释度，分别吸取100μL稀释液，涂布在WL培养基上，在37℃倒置培养5天后观察结果，直接根据菌落形态对酵母菌进行计数和形态学记录。
优选地，S3中，每20mL YEPD液体培养基中加入8～10颗葡萄表皮。
更优选地，所述葡萄表皮是在众多葡萄表皮中随机选择得到的。
优选地，每升YEPD液体培养基包括以下组分：葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母粉10g，余量为蒸馏水，且YEPD液体培养基的的pH为6.1。
与现有技术相比，本发明的方法具有以下有益效果：
(1)充分考虑人为或者使用物品、运输过程对原料样品产生的不利影响；
(2)考虑到原料样品的代表性和完整性，本申请使用的是从所有样品中随机挑选一定数量的颗葡萄表皮，较好代表了所有采集样品的特点；
(3)由于传统的分离方法是先经过YEDP培养基分离，然后再随机挑选菌落做WL鉴别，这种方法因为挑选的随机性，导致部分浓度低的菌群容易被漏掉，影响了结果的全面性，而本发明提供的方法，直接在WL培养基上进行分离和鉴别，一步到位，节约时间的同时也有效减少了被漏掉菌群的弊端。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。
下面实施例中未注明具体条件的实验方法，均按照本领域的常规方法和条件进行。
实施例1
本实施例一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，具体包括如下步骤：
S1：葡萄的采摘与运输，准备无菌口罩、无菌手套、无菌塑料盒子、无菌剪刀和低温冷冻盒，操作人员佩戴无菌口罩和无菌手套，选择新鲜健康的枝条，用无菌剪刀剪去果穗的柄部，然后用无菌手套轻拿轻放入无菌塑料盒子内，快速转入低温冷冻盒，运输回实验室；这么做可以有效地避免外援引入的污染，减少由此带来的误差。
S2：葡萄皮的获得，准备无菌手套、无菌手术刀、无菌镊子和无菌离心管，在超净工作台内，戴上无菌手套，逐个摘下葡萄粒，用无菌手术刀在葡萄果实中部拉开一道1cm长的口子，用无菌镊子夹住开口的两端均匀用力撕下葡萄表皮，备用；S3：葡萄表皮酵母菌的富集，选用YEPD液体培养基，每升YEPD液体培养基包括以下组分：葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母粉10g，余量为蒸馏水，且YEPD液体培养基的的pH为6.1。量取20mL的YEPD液体培养基，向其中加入从S2中随机选取的10颗葡萄表皮，在28℃恒温摇床中，转速为180rpm，震荡培养48小时，离心分离，得到葡萄表皮酵母菌富集液；
S4：快速分离鉴别酵母菌，制备分离鉴别培养基WL(每升WL液体培养基含有如下成分：酵母浸粉4g，胰蛋白胨5g，葡萄糖50g，磷酸二氢钾0.55g，氯化钾0.425g，氯化钙0.125g，硫酸镁0.125g，氯化铁0.0025g，硫酸锰0.0025g，溴甲酚绿0.022g)，直接梯度稀释葡萄表皮酵母菌富集液，选择10-3、10-4、10-5三个稀释度，分别吸取100μL稀释液，涂布在WL培养基上，在37℃下倒置培养5天后观察结果，直接根据菌落形态对酵母菌进行计数和形态学记录。
对比例1
本对比例从葡萄皮表皮分离酵母菌的传统分离方法，具体方法为：采用从葡萄粉碎汁液取样后梯度稀释或葡萄完整果实无菌水震荡培养48小时，洗脱液梯度稀释涂布YEPD平板，然后随机挑选单菌落再在WL培养基平板进行鉴别。
实施例1提供的从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法与传统分离方法相比，综合考虑了人为或者使用物品、运输过程对样品产生的影响，在采样过程中操作人员佩戴无菌口罩和无菌手套，选择新鲜健康的枝条，用无菌剪刀剪去果穗的柄部，然后用无菌手套轻拿轻放入无菌塑料盒子内，快速转入低温冷冻盒，运输回实验室，避免了样品污染和人为引入其他杂菌。同时在分离过程中，考虑到样品的代表性和完整性，以新鲜的葡萄表皮为原料，在众多原料中随机挑选一定数量的葡萄表皮，较好代表了所有采集样品的特点。并通过直接在WL培养基上进行分离和鉴别，一步到位，节约时间的同时也有效减少了被漏掉菌群的弊端。经检测，实施例1和对比例1分离获得的酵母菌的类型具体如下表1所示：
表1实施例1和对比例1分离获得的酵母菌的类型数量
鉴别得到酵母菌类型
对比例1 2
实施例1 5
由表1可以看出，采用实施例1提供的方法，能够快速分离获得酵母菌，且酵母菌类型的数量较传统方法显著增加。其中，对比例1中得到了两种酵母分别为路德酵母和毕赤酵母，而实施例1中除了以上两种酵母，还得到了红酵母、酿酒酵母和伊萨酵母。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，其保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内，本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (4)

1.一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
S1：葡萄的采摘与运输
准备无菌口罩、无菌手套、无菌塑料盒子、无菌剪刀和低温冷冻盒，操作人员佩戴无菌口罩和无菌手套，选择新鲜健康的枝条，用无菌剪刀剪去果穗的柄部，然后用无菌手套轻拿轻放入无菌塑料盒子内，快速转入低温冷冻盒，运输回实验室；
S2：葡萄皮的获得
准备无菌手套、无菌手术刀、无菌镊子和无菌离心管，在超净工作台内，戴上无菌手套，逐个摘下葡萄粒，用无菌手术刀在葡萄果实中部拉开一道1cm长的口子，用无菌镊子夹住开口的两端均匀用力撕下葡萄表皮，装入无菌离心管中，备用；
S3：葡萄表皮酵母菌的富集
选用YEPD液体培养基，加入若干颗葡萄表皮，在28℃恒温摇床中，转速为180rpm，震荡培养48小时，得到葡萄表皮酵母菌富集液；
S4：快速分离鉴别酵母菌
制备分离鉴别培养基WL，直接梯度稀释葡萄表皮酵母菌富集液，选择10-3、10-4、10-5三个稀释度，分别吸取100μL稀释液，涂布在WL培养基上，在37℃倒置培养5天后观察结果，直接根据菌落形态对酵母菌进行计数和形态学记录。
2.根据权利要求1所述的从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，其特征在于，S3中，每20mL YEPD液体培养基中加入8～10颗葡萄表皮。
3.根据权利要求2所述的从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，其特征在于，所述葡萄表皮是在众多葡萄表皮中随机选择得到的。
4.根据权利要求1所述的从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法，其特征在于，每升YEPD液体培养基包括以下组分：
葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母粉10g，余量为蒸馏水，且YEPD液体培养基的的pH为6.1。
CN201710462893.5A 2017-06-19 2017-06-19 一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法 Pending CN107189945A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710462893.5A CN107189945A (zh) 2017-06-19 2017-06-19 一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710462893.5A CN107189945A (zh) 2017-06-19 2017-06-19 一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107189945A true CN107189945A (zh) 2017-09-22

Family

ID=59879228

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710462893.5A Pending CN107189945A (zh) 2017-06-19 2017-06-19 一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107189945A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113174340A (zh) * 2021-04-25 2021-07-27 重庆文理学院 一种水果表皮酵母菌分离方法、酵母菌及应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101550400B (zh) * 2009-01-22 2013-06-05 山东海瑞特生物工程有限公司 一种酿酒酵母及其筛选方法和应用
CN103396956A (zh) * 2013-08-17 2013-11-20 湖北邦之德牧业科技有限公司 一种酿酒酵母及其筛选培养方法和用于豆粕发酵的方法
CN103740807A (zh) * 2013-11-06 2014-04-23 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一种酵母菌分离、筛选的方法及生防菌剂的制备方法
CN105886414A (zh) * 2016-03-27 2016-08-24 中国食品发酵工业研究院 一株高产有机酸酿酒酵母菌的筛选与利用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101550400B (zh) * 2009-01-22 2013-06-05 山东海瑞特生物工程有限公司 一种酿酒酵母及其筛选方法和应用
CN103396956A (zh) * 2013-08-17 2013-11-20 湖北邦之德牧业科技有限公司 一种酿酒酵母及其筛选培养方法和用于豆粕发酵的方法
CN103740807A (zh) * 2013-11-06 2014-04-23 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一种酵母菌分离、筛选的方法及生防菌剂的制备方法
CN105886414A (zh) * 2016-03-27 2016-08-24 中国食品发酵工业研究院 一株高产有机酸酿酒酵母菌的筛选与利用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张俊杰 等: "不同株系梅鹿辄葡萄果皮酵母菌的分离鉴定与差异分析", 《酿酒科技》 *
徐孝华 主编: "《普通微生物学》", 31 May 1992 *
福杰森 著: "《葡萄酒酿造微生物学-实验技术与规程（第二版）》", 30 June 2010, 中国轻工业出版社 *
薛军侠 等: "WL培养基在酿酒酵母筛选中的应用", 《中国酿造》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113174340A (zh) * 2021-04-25 2021-07-27 重庆文理学院 一种水果表皮酵母菌分离方法、酵母菌及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Martini et al. Direct enumeration and isolation of wine yeasts from grape surfaces
CN108239608B (zh) 一株戴尔凯氏有孢圆酵母菌株及其在葡萄酒酿造中的应用
CN113881571B (zh) 一种快速分离、定量检测香蕉枯萎病菌的方法及应用
CN105112318A (zh) 一种苹果酸—乳酸细菌及其应用
CN112175845B (zh) 一株适用于茶酒酿造的酿酒酵母及其应用
Clark et al. Yeasts occurring on apples and in apple cider
CN110343625B (zh) 一种酿酒酵母菌株及其应用
CN111304112A (zh) 一种甘蔗尾叶青贮用复合菌剂
CN104498372B (zh) 尖孢镰刀菌bm201、其产生的复合果胶酶及复合果胶酶的制备方法和应用
CN107189945A (zh) 一种从葡萄皮表皮快速分离酵母菌的方法
CN102093965A (zh) 一株乳酸菌及其应用
CN116218683B (zh) 一种高山被孢霉及其在三七生物防治以及促生中的应用
CN104557315B (zh) 秀珍菇液化专用菌种培养基及相应的培养法
CN111378595A (zh) 一种伯克氏农业生防菌株Ba1及其用途
PASSMORE et al. The ecology of the acetic acid bacteria with particular reference to cider manufacture
CN114958629B (zh) 一株非酿酒酵母rm12及其在蓝莓酒中的应用
CN114874917A (zh) 深绿木霉t3、由其制备的菌剂、菌剂制备方法和菌剂的应用
CN110669703B (zh) 一种恶臭假单胞菌s9及其在促进鸡腿菇生长中的应用
CN113151014A (zh) 一种简便快速的红曲霉分离保存方法
Pederson et al. Variations in bacterial flora of low salt cucumber brines
Rankine et al. Quantitative assessment of dominance of added yeast in wine fermentations
CN113439791B (zh) 茯砖茶制作工艺
Ojo-Omoniyi et al. Evaluation of the microbial flora and shelf-life stability of two indigenous palm wine products (Elaies guineensis and Raphia hookeri) obtained from Southwest Nigeria
CN113980824B (zh) 一种哈茨木霉菌剂稳定剂及其应用
CN109761697A (zh) 一种有利于夏黑葡萄花芽生长的液体肥料及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170922

RJ01 Rejection of invention patent application after publication