CN107184588B - 甾醇在降低他汀类药物肌肉和胚胎毒性方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了甾醇在降低他汀类药物肌肉和胚胎毒性方面的应用，具体地，本发明提供了一种化学结构特定的甾醇在降低他汀类药物肌肉和胚胎毒性方面的应用，该甾醇的22、23位碳原子之间为双键连接，22、23位碳原子之间为单键的甾醇对他汀类药物肌肉和胚胎毒性无减毒作用；而且，该甾醇的7、8位碳原子之间若也为双键连接，其对他汀类药物肌肉和胚胎毒性的减毒作用进一步提高。本发明提供的甾醇可以从实质意义上降低他汀类药物的肌肉毒性以及申请人前期实验发现的胚胎毒性。

Description

甾醇在降低他汀类药物肌肉和胚胎毒性方面的应用
技术领域
本发明属于医药领域，涉及已知药物的新用途，具体涉及甾醇在降低他汀类药物肌肉和胚胎毒性方面的应用。
背景技术
他汀类药物是羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，此类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶(HMG-CoA)还原酶，阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径，使细胞内胆固醇合成减少，从而反馈性刺激细胞膜表面(主要为肝细胞)低密度脂蛋白(low densitylipoprotein，LDL)受体数量和活性增加、使血清胆固醇清除增加、水平降低。他汀类药物已成为降低LDL胆固醇的标准治疗剂。
他汀类药物最常见的副作用包括消化不良、腹痛和胃气胀，最严重的不良反应是血清转氨酶水平升高和引起肌炎。肌毒性是所有的他汀类药物在高剂量时常见的作用(Preclinical safety evaluation of cerivastatin,a novel HMG-CoA reductaseinhibitor；Am J Cardiol.1998 Aug27；82)，机理似乎是对于线粒体的氧化损伤。他汀类药物引起乳酸盐/丙酮酸盐水平下降。乳酸盐/丙酮酸盐比例是线粒体功能障碍和氧化状态的一项灵敏指标。临床研究表明他汀类药物消耗了能量产生所需的必要辅因子辅酶Q。辅酶Q的消耗具有剂量依赖性。辅酶Q是线粒体电子转移过程中的必要部分，其提供了氧化过程所产生的能量。他汀类药物通过在HMG CoA还原酶催化步骤中阻断胆固醇合成而发挥作用。HMG CoA经还原产生甲羟戊酸。甲羟戊酸经过一系列酶步骤用于合成胆固醇。甲羟戊酸也是辅酶Q的前体。胆固醇合成抑制作用因此也抑制了辅酶Q的合成。对能量有高需求的肌细胞对于他汀类药物引起的损伤最为敏感。当肌细胞内含物释放入体循环中时，会产生最严重的肌损伤形式(横纹肌溶解症)。主要的并发症包括急性肾衰竭和心脏异常。心脏毒性可能是他汀类药物对于心肌辅酶Q水平的直接作用结果。当他汀类药物和其他抑制细胞色素p450系统的药物如唑类抗真菌剂、西咪替丁和氨甲喋呤联合使用时，发生这些不良反应的几率更大。使用吉非贝齐、烟酸或大环内酯类药物的患者发生他汀类相关性肌炎的危险性会有所增加。即便没有药物相互作用的可能性，他汀类药物对于肌肉的主要副作用也大大地阻碍了患者继续使用这些药物。任何安全性高、不影响他汀类药物的疗效且可以有效降低其肌肉毒性的药物都让人极为期待。
CN200480022866.7公开了一种包含甾醇和/或甾烷醇及胆固醇生物合成抑制剂(他汀类药物)的药物组合物，该专利申请公开了甾醇和/或甾烷醇具有降血脂的作用，与他汀类药物合用后可以降低他汀类药物的给药剂量，而由于他汀类药物的肌肉毒性是剂量依赖性的，所以该组合物可以在发挥降脂作用的同时克服他汀类药物的肌肉毒性。
但是，这种组合物并没有从实质上克服他汀类药物的肌肉毒性，只是用其他降脂药物替代了部分他汀类药物，降低了他汀类药物的服用剂量，使得肌肉毒性不明显而已。而他汀类药物对肌肉仍然是有损伤的，这个问题不容忽视。
发明内容
本发明的目的在于从实质意义上降低他汀类药物的肌肉毒性以及申请人前期实验发现的胚胎毒性，目的是在不降低他汀类药物给药剂量的前提下降低他汀类药物造成的肌肉毒性和胚胎毒性，这就显然可以提高他汀类药物的服用安全性。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
如下结构的甾醇或其醇酯在制备降低他汀类药物肌肉和/或胚胎毒性的药物中的应用，
Figure BDA0001332015760000021
其中，R为-CH3或-CH2CH3；C22-C23之间为双键，C7-C8之间或为双键。
优选地，所述甾醇为麦角甾醇、豆甾醇或菜籽甾醇，或其醇酯。
麦角甾醇、豆甾醇或菜籽甾醇的化学结构式如下：
Figure BDA0001332015760000022
所述他汀类药物为洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿伐他汀或西伐他汀。
一种用于降低他汀类药物肌肉和/或胚胎毒性的辅助用药，含有上述甾醇或其醇酯。
一种降血脂的他汀类药物组合物，含有他汀类成分，还含有上述甾醇或其醇酯。
一种降血脂的药物制剂，包括上述药物组合物，还包括药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。
优选地，所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。
优选地，所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。
本发明的优点：
本发明提供了一种化学结构特定的甾醇在降低他汀类药物肌肉和胚胎毒性方面的应用，该甾醇的22、23位碳原子之间为双键连接，22、23位碳原子之间为单键的甾醇对他汀类药物肌肉和胚胎毒性无减毒作用；而且，该甾醇的7、8位碳原子之间若也为双键连接，其对他汀类药物肌肉和胚胎毒性的减毒作用进一步提高。本发明提供的甾醇可以从实质意义上降低他汀类药物的肌肉毒性以及申请人前期实验发现的胚胎毒性。
附图说明
图1为对照组斑马鱼正常心包与他汀干预组斑马鱼水肿心包对比；
图2为对照组斑马鱼与他汀干预组斑马鱼的脊柱和肌肉发育对比。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。实验中未详述的试验操作均为本领域技术人员所熟知的常规试验操作。
下述实施例中以菜油甾醇和β-谷甾醇作为对比，这两个甾醇的化学结构式如下：
Figure BDA0001332015760000031
从上述结构可见，菜籽甾醇比菜油甾醇多C22-C23双键，豆甾醇比β-谷甾醇多C22-C23双键，麦角甾醇比菜籽甾醇多C7-C8双键。
实施例1 麦角甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇对洛伐他汀和辛伐他汀的减毒作用
一、实验材料
实验动物：
野生型AB品系繁殖用斑马鱼(Danio rerio)，购自国家斑马鱼资源中心(中国科学院水生生物研究所，武汉)。
仪器和试剂：
Figure BDA0001332015760000041
Figure BDA0001332015760000042
试剂配制：
养鱼水：以约0.06g海盐加入1L的蒸馏水中(终浓度约60μg/ml)，充分溶解。
麻醉剂：称取0.016Tricaine，加入100mL的纯水中，超声溶解。
他汀和甾醇用乙醇溶解后加入到养鱼水中，使斑马鱼在他汀和甾醇中暴露养殖。
二、实验方法
1、斑马鱼的培养
野生型AB品系繁殖用斑马鱼，参照Westerfield的养殖方法，在28℃条件下，维持14小时光照/10小时黑暗饲养于斑马鱼循环养殖系统(北京爱生科技发展有限公司，北京)中，系统自动调节：pH 7.0-7.4；电导率500-550μS/cm。斑马鱼胚胎的繁殖以自然成对交配的方式进行，胚胎用含有亚甲基蓝的养鱼水，培养于智能光照培养箱中，控制温度28.5℃。
2、实验分组
洛伐他汀组：向养鱼水中投入洛伐他汀的乙醇溶液，洛伐他汀终浓度为1.0μM；
洛伐他汀+麦角甾醇组：向养鱼水中投入洛伐他汀和麦角甾醇的乙醇溶液，洛伐他汀终浓度为1.0μM，麦角甾醇终浓度为1.0μM；
洛伐他汀+菜籽甾醇组：向养鱼水中投入洛伐他汀和菜籽甾醇的乙醇溶液，洛伐他汀终浓度为1.0μM，菜籽甾醇终浓度为1.0μM；
洛伐他汀+菜油甾醇组：向养鱼水中投入洛伐他汀和菜油甾醇的乙醇溶液，洛伐他汀终浓度为1.0μM，菜油甾醇终浓度为1.0μM；
辛伐他汀组：向养鱼水中投入辛伐他汀的乙醇溶液，辛伐他汀终浓度为1.0μM；
辛伐他汀+麦角甾醇组：向养鱼水中投入辛伐他汀和麦角甾醇的乙醇溶液，辛伐他汀终浓度为1.0μM，麦角甾醇终浓度为1.0μM；
辛伐他汀+菜籽甾醇组：向养鱼水中投入辛伐他汀和菜籽甾醇的乙醇溶液，辛伐他汀终浓度为1.0μM，菜籽甾醇终浓度为1.0μM；
辛伐他汀+菜油甾醇组：向养鱼水中投入辛伐他汀和菜油甾醇的乙醇溶液，辛伐他汀终浓度为1.0μM，菜油甾醇终浓度为1.0μM；
空白对照组：仅加入等体积乙醇溶剂；
每组4个平行，每个平行50尾斑马鱼。
给药处理：取正常发育至48小时(48hpf)胚胎应用于本实验，按照上述分组方法添加药物，使斑马鱼暴露在药物中培养，观察胚胎发育状态。每天观察统计斑马鱼死亡率、胚胎出膜率、畸形率，观察幼鱼发育状态。在实验结束阶段(72hpf)，每组收集50条斑马鱼幼鱼用高浓度5*Tricain溶液进行深度麻醉处死，10分钟后收集斑马鱼置于1.5ml管中，加入100μl裂解液(冰上操作)，组织研磨仪破碎组织后，高速离心取上清，按照肌酸激酶(CK)测定试剂盒说明书测定上清液中CK浓度。
三、实验结果
1、麦角甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇对洛伐他汀和辛伐他汀胚胎毒性的干预作用
从表1和表2可见，48hpf胚胎药物干预24h后，与空白对照组比，洛伐他汀组和辛伐他汀组斑马鱼死亡率显著升高(P＜0.05)，出膜孵化率显著降低(P＜0.05)，可以观察到有些斑马鱼在出膜前就已经死亡，有些斑马鱼出膜后死亡。这表明，洛伐他汀和辛伐他汀严重干扰斑马鱼胚胎孵化，具有明显的胚胎毒性。当与麦角甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇联合给药时，与洛伐他汀组相比，洛伐他汀+麦角甾醇组、洛伐他汀+菜籽甾醇组斑马鱼死亡率显著降低(P＜0.05)，出膜孵化率显著升高(P＜0.05)，洛伐他汀+菜油甾醇组斑马鱼死亡率和出膜孵化率无显著变化(P＞0.05)；与辛伐他汀组相比，辛伐他汀+麦角甾醇组、辛伐他汀+菜籽甾醇组斑马鱼死亡率显著降低(P＜0.05)，出膜孵化率显著升高(P＜0.05)，辛伐他汀+菜油甾醇组斑马鱼死亡率和出膜孵化率无显著变化(P＞0.05)。这表明，麦角甾醇和菜籽甾醇可以显著降低洛伐他汀和辛伐他汀对斑马鱼的胚胎毒性，而菜油甾醇对这两种他汀的胚胎毒性无明显缓解作用。死亡的斑马鱼中有一部分是因为出现心包水肿导致心脏破裂死亡(正常心包与水肿心包对比如图1所示，各组心包水肿发生率如表3所示)。
表1 药物干预对斑马鱼72小时胚胎死亡率的影响
Figure BDA0001332015760000061
表2 药物干预对斑马鱼72小时胚胎孵化率的影响
Figure BDA0001332015760000062
表3 药物干预对斑马鱼心包水肿发生率的影响
Figure BDA0001332015760000071
2、麦角甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇对洛伐他汀和辛伐他汀肌肉毒性的干预作用
患者服用他汀类药物后出现的肌病不良反应主要表现为肌痛、乏力、肌无力并伴随着血液中与肌肉有关的酶如肌酸激酶(CK)含量的升高，严重者肌肉纤维坏死其内容物肌红蛋白大量释放到血中，引起横纹肌溶解症。因此，研究者在动物模型上研究他汀类药物的肌肉毒性时，CK含量是一个重要指标。从表4可见，48hpf胚胎药物干预24h后，与空白对照组比，洛伐他汀组和辛伐他汀组斑马鱼组织中的CK含量显著升高(P＜0.05)，培养过程中可见洛伐他汀和辛伐他汀可导致斑马鱼脊柱弯曲、肌肉萎缩，脊柱和肌肉与空白对照组的比较如图2所示，这表明洛伐他汀和辛伐他汀可导致明显的肌肉毒性。当与麦角甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇联合给药时，与洛伐他汀组相比，洛伐他汀+麦角甾醇组、洛伐他汀+菜籽甾醇组斑马鱼组织中的CK含量显著降低(P＜0.05)，洛伐他汀+菜油甾醇组斑马鱼组织中的CK含量无显著变化(P＞0.05)；与辛伐他汀组相比，辛伐他汀+麦角甾醇组、辛伐他汀+菜籽甾醇组斑马鱼组织中的CK含量显著降低(P＜0.05)，辛伐他汀+菜油甾醇组斑马鱼组织中的CK含量无显著变化(P＞0.05)。这表明，麦角甾醇和菜籽甾醇可以显著降低洛伐他汀和辛伐他汀对斑马鱼的肌肉，而菜油甾醇对这两种他汀的肌肉毒性无明显缓解作用。
表4 药物干预对斑马鱼CK值的影响
Figure BDA0001332015760000072
Figure BDA0001332015760000081
实施例2 豆甾醇和β-谷甾醇对洛伐他汀和辛伐他汀的减毒作用
一、实验材料
实验动物：
野生型AB品系繁殖用斑马鱼(Danio rerio)，购自国家斑马鱼资源中心(中国科学院水生生物研究所，武汉)。
仪器和试剂：
Figure BDA0001332015760000082
Figure BDA0001332015760000083
Figure BDA0001332015760000091
试剂配制：
养鱼水：以约0.06g海盐加入1L的蒸馏水中(终浓度约60μg/ml)，充分溶解。
麻醉剂：称取0.016Tricaine，加入100mL的纯水中，超声溶解。
他汀和甾醇用乙醇溶解后加入到养鱼水中，使斑马鱼在他汀和甾醇中暴露养殖。
二、实验方法
1、斑马鱼的培养
野生型AB品系繁殖用斑马鱼，参照Westerfield的养殖方法，在28℃条件下，维持14小时光照/10小时黑暗饲养于斑马鱼循环养殖系统(北京爱生科技发展有限公司，北京)中，系统自动调节：pH 7.0-7.4；电导率500-550μS/cm。斑马鱼胚胎的繁殖以自然成对交配的方式进行，胚胎用含有亚甲基蓝的养鱼水，培养于智能光照培养箱中，控制温度28.5℃。
2、实验分组
洛伐他汀组：向养鱼水中投入洛伐他汀的乙醇溶液，洛伐他汀终浓度为1.0μM；
洛伐他汀+豆甾醇组：向养鱼水中投入洛伐他汀和豆甾醇的乙醇溶液，洛伐他汀终浓度为1.0μM，豆甾醇终浓度为1.0μM；
洛伐他汀+β-谷甾醇组：向养鱼水中投入洛伐他汀和β-谷甾醇的乙醇溶液，洛伐他汀终浓度为1.0μM，β-谷甾醇终浓度为1.0μM；
辛伐他汀组：向养鱼水中投入辛伐他汀的乙醇溶液，辛伐他汀终浓度为1.0μM；
辛伐他汀+豆甾醇组：向养鱼水中投入辛伐他汀和豆甾醇的乙醇溶液，辛伐他汀终浓度为1.0μM，豆甾醇终浓度为1.0μM；
辛伐他汀+β-谷甾醇组：向养鱼水中投入辛伐他汀和β-谷甾醇的乙醇溶液，辛伐他汀终浓度为1.0μM，β-谷甾醇终浓度为1.0μM；
空白对照组：仅加入等体积乙醇溶剂；
每组4个平行，每个平行50尾斑马鱼。
给药处理：取正常发育至48小时(48hpf)胚胎应用于本实验，按照上述分组方法添加药物，使斑马鱼暴露在药物中培养，观察胚胎发育状态。每天观察统计斑马鱼死亡率、胚胎出膜率、畸形率，观察幼鱼发育状态。在实验结束阶段(72hpf)，每组收集50条斑马鱼幼鱼用高浓度5*Tricain溶液进行深度麻醉处死，10分钟后收集斑马鱼置于1.5ml管中，加入100μl裂解液(冰上操作)，组织研磨仪破碎组织后，高速离心取上清，按照肌酸激酶(CK)测定试剂盒说明书测定上清液中CK浓度。
三、实验结果
1、豆甾醇和β-谷甾醇对洛伐他汀和辛伐他汀胚胎毒性的干预作用
从表5和表6可见，48hpf胚胎药物干预24h后，与空白对照组比，洛伐他汀组和辛伐他汀组斑马鱼死亡率显著升高(P＜0.05)，出膜孵化率显著降低(P＜0.05)，可以观察到有些斑马鱼在出膜前就已经死亡，有些斑马鱼出膜后死亡。这表明，洛伐他汀和辛伐他汀严重干扰斑马鱼胚胎孵化，具有明显的胚胎毒性。当与豆甾醇联合给药时，与洛伐他汀组相比，洛伐他汀+豆甾醇组斑马鱼死亡率显著降低(P＜0.05)，出膜孵化率显著升高(P＜0.05)，洛伐他汀+β-谷甾醇组斑马鱼死亡率和出膜孵化率无显著变化(P＞0.05)；与辛伐他汀组相比，辛伐他汀+豆甾醇组斑马鱼死亡率显著降低(P＜0.05)，出膜孵化率显著升高(P＜0.05)，辛伐他汀+β-谷甾醇组斑马鱼死亡率和出膜孵化率无显著变化(P＞0.05)。这表明，豆甾醇可以显著降低洛伐他汀和辛伐他汀对斑马鱼的胚胎毒性，而β-谷甾醇对这两种他汀的胚胎毒性无明显缓解作用。死亡的斑马鱼中有一部分是因为出现心包水肿导致心脏破裂死亡，各组心包水肿发生率如表7所示。
表5 药物干预对斑马鱼72小时胚胎死亡率的影响
Figure BDA0001332015760000101
表6 药物干预对斑马鱼72小时胚胎孵化率的影响
Figure BDA0001332015760000102
Figure BDA0001332015760000111
表7 药物干预对斑马鱼心脏发育的影响
Figure BDA0001332015760000112
2、豆甾醇和β-谷甾醇对洛伐他汀和辛伐他汀肌肉毒性的干预作用
患者服用他汀类药物后出现的肌病不良反应主要表现为肌痛、乏力、肌无力并伴随着血液中与肌肉有关的酶如肌酸激酶(CK)含量的升高。因此，研究者在动物模型上研究他汀类药物的肌肉毒性时，CK含量是一个重要指标。从表8可见，48hpf胚胎药物干预24h后，与空白对照组比，洛伐他汀组和辛伐他汀组斑马鱼组织中的CK含量显著升高(P＜0.05)，培养过程中可见洛伐他汀和辛伐他汀可导致斑马鱼脊柱弯曲、肌肉萎缩，这表明洛伐他汀和辛伐他汀可导致明显的肌肉毒性。当与豆甾醇联合给药时，与洛伐他汀组相比，洛伐他汀+豆甾醇组斑马鱼组织中的CK含量显著降低(P＜0.05)，洛伐他汀+β-谷甾醇组斑马鱼组织中的CK含量无显著变化(P＞0.05)；与辛伐他汀组相比，辛伐他汀+豆甾醇组斑马鱼组织中的CK含量显著降低(P＜0.05)，辛伐他汀+β-谷甾醇组斑马鱼组织中的CK含量无显著变化(P＞0.05)。这表明，豆甾醇可以显著降低洛伐他汀和辛伐他汀对斑马鱼的肌肉，而β-谷甾醇对这两种他汀的肌肉毒性无明显缓解作用。
表8 药物干预对斑马鱼CK值的影响
Figure BDA0001332015760000113
实施例3 麦角甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇与洛伐他汀联合降脂
一、实验材料
实验动物：野生型AB品系繁殖用斑马鱼(Danio rerio)，购自国家斑马鱼资源中心(中国科学院水生生物研究所，武汉)。
仪器和试剂：
Figure BDA0001332015760000121
Figure BDA0001332015760000122
试剂配制：
养鱼水：以约0.06g海盐加入1L的蒸馏水中(终浓度约60μg/ml)，充分溶解。
麻醉剂：称取0.016Tricaine，加入100mL的纯水中，超声溶解。
高胆固醇饲料：取0.4克胆固醇，乙醚溶解后，与10克普通饲料一起搅拌均匀，烘干至乙醚完全挥发，充分研磨。
药物配制：将药物和胆固醇一起加入乙醚中溶解，配制方法同高胆固醇饲料配方。
二、实验方法
1、斑马鱼的培养
野生型AB品系繁殖用斑马鱼，参照Westerfield的养殖方法，在28℃条件下，维持14小时光照/10小时黑暗饲养于斑马鱼循环养殖系统(北京爱生科技发展有限公司，北京)中，系统自动调节：pH 7.0-7.4；电导率500-550μS/cm。斑马鱼胚胎的繁殖以自然成对交配的方式进行，胚胎用含有亚甲基蓝的养鱼水，培养于智能光照培养箱中，控制温度28.5℃。
2、实验分组
对照组、高胆固醇组(模型组)、洛伐他汀组、洛伐他汀+麦角甾醇组、洛伐他汀+菜籽甾醇组、洛伐他汀+豆甾醇组，每组4个平行，每个平行100尾斑马鱼。
给药处理：野生型AB品系斑马鱼孵化至4dpf时，转移至2L烧杯中。将发育正常、具备游动能力的幼鱼按完全随机的方法分为六组，分别为：对照组、高胆固醇组、洛伐他汀组、洛伐他汀+麦角甾醇组、洛伐他汀+菜籽甾醇、洛伐他汀+豆甾醇。从斑马鱼发育至5dpf时，对照组给予标准饲料AP100，高胆固醇组给与不含药的高胆固醇饲料，各给药组给予含药的高胆固醇饲料，每天喂食两次，喂食后幼鱼自由进食，及时清理食物残渣。给药14天后，每组收集30条斑马鱼幼鱼用高浓度5*Tricain溶液进行深度麻醉处死，10分钟后收集斑马鱼置于1.5ml管中，加入100μl裂解液(冰上操作)，组织研磨仪破碎组织后，高速离心取上清，用于生化指标测定。
三、实验结果
从表9-11可见，与空白组相比，高胆固醇组斑马鱼体内总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平明显升高(P＜0.05)；与高胆固醇组相比，洛伐他汀组、洛伐他汀+麦角甾醇组、洛伐他汀+菜籽甾醇组、洛伐他汀+豆甾醇组斑马鱼体内总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平明显降低(P＜0.05)，且含有甾醇的洛伐他汀组降低更为明显。这些结果表明，麦角甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇可以增强洛伐他汀的降脂作用，与洛伐他汀存在协同降脂作用。
表9 药物干预对斑马鱼幼鱼总胆固醇(TC)水平的影响
Figure BDA0001332015760000141
表10 药物干预对斑马鱼幼鱼甘油三酯(TG)水平的影响
Figure BDA0001332015760000142
表11 药物干预对斑马鱼幼鱼低密度脂蛋白(LDL-C)水平的影响
Figure BDA0001332015760000143
麦角甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇也可以增强辛伐他汀等他汀药物的降脂作用，这已被现有技术报道，具体药理数据就不一一赘述。
甾醇醇酯由甾醇醇羟基成酯而成，甾醇醇酯进入机体后会水解成甾醇发挥作用，这已被现有技术报道，因此，本领域技术人员可以预料到本发明提供的甾醇的醇酯也具有上述减毒和协同降脂作用，因此也属于本发明要求保护的范围。
实施例4 甾醇及其醇酯用于制备降低他汀肌肉和胚胎毒性的辅助用药
肌毒性是所有的他汀类药物在高剂量时常见的作用。他汀类药物引起乳酸盐/丙酮酸盐水平下降。乳酸盐/丙酮酸盐比例是线粒体功能障碍和氧化状态的一项灵敏指标。临床研究表明他汀类药物消耗了能量产生所需的必要辅因子辅酶Q。辅酶Q的消耗具有剂量依赖性。辅酶Q是线粒体电子转移过程中的必要部分，其提供了氧化过程所产生的能量。他汀类药物通过在HMG CoA还原酶催化步骤中阻断胆固醇合成而发挥作用。HMG CoA经还原产生甲羟戊酸。甲羟戊酸经过一系列酶步骤用于合成胆固醇。甲羟戊酸也是辅酶Q的前体。胆固醇合成抑制作用因此也抑制了辅酶Q的合成。对能量有高需求的肌细胞对于他汀类药物引起的损伤最为敏感。当肌细胞内含物释放入体循环中时，会产生最严重的肌损伤形式(横纹肌溶解症)。主要的并发症包括急性肾衰竭和心脏异常。心脏毒性可能是他汀类药物对于心肌辅酶Q水平的直接作用结果。当他汀类药物和其他抑制细胞色素p450系统的药物如唑类抗真菌剂、西咪替丁和氨甲喋呤联合使用时，发生这些不良反应的几率更大。使用吉非贝齐、烟酸或大环内酯类药物的患者发生他汀类相关性肌炎的危险性会有所增加。即便没有药物相互作用的可能性，他汀类药物对于肌肉的主要副作用也大大地阻碍了患者继续使用这些药物。
从实施例1-3可见，本发明提供的甾醇及其醇酯可以明显降低他汀类药物的肌肉和胚胎毒性，因此，可以将本发明提供的甾醇及其醇酯制成降低他汀肌肉和胚胎毒性的辅助用药，以减少他汀对那些必须服用高剂量他汀的患者或必须使用他汀与吉非贝齐、烟酸、大环内酯类药物联用的患者或对他汀毒性耐受性低的患者的肌肉毒性，并减少他汀对孕妇患者的胚胎毒性。其对他汀的减毒作用并不以牺牲他汀药物的用量和使用方式为代价。
已知甾醇的水溶性和油溶性均很差，现有技术中，为了改善其溶解性，一般用物理和化学方法对其进行改性。物理改性主要是改善其分散性，利用包合、微乳、喷雾干燥等技术；化学改性就是在植物甾醇分子上接上亲油/亲水基团(即制备成醇酯)以改善其溶解性。但这两种方式均增加了工艺复杂性和成本。发明人在一个具体实验中发现，当麦角甾醇与一定比例的麦芽糖醇(麦芽糖醇质量为麦角甾醇质量的15-25％)混合后，其水溶性和油溶性均显著提高，在水和大豆油中的溶解性均由几乎不溶或不溶变为略溶(溶解性参考2015版中国药典)。这可以大大降低麦角甾醇的制药工艺，可以方便地制成用于降低他汀肌肉和胚胎毒性的水性或油性辅助用药，与他汀类药物配合使用。
实施例5 制备他汀与甾醇或其醇酯的药物组合物、药物制剂
从实施例1-3可见，本发明提供的甾醇及其醇酯可以明显降低他汀类药物的肌肉和胚胎毒性，因此，可以将本发明提供的甾醇及其醇酯与他汀类药物制成药物组合物、药物制剂，比他汀的降脂作用更优，且肌肉毒性和胚胎毒性显著降低。服用这种药物组合物、药物制剂时，不需要降低他汀类药物的剂量。因此，可以制备一种降血脂的药物制剂，含有他汀和上述甾醇或其醇酯，还包括药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。这对于本领域技术人员而言是容易实现的。
综上，本发明提供了一种化学结构特定的甾醇在降低他汀类药物肌肉和胚胎毒性方面的应用，该甾醇的22、23位碳原子之间为双键连接，22、23位碳原子之间为单键的甾醇对他汀类药物肌肉和胚胎毒性无减毒作用；而且，该甾醇的7、8位碳原子之间若也为双键连接，其对他汀类药物肌肉和胚胎毒性的减毒作用进一步提高。本发明提供的甾醇可以从实质意义上降低他汀类药物的肌肉毒性以及申请人前期实验发现的胚胎毒性。

Claims (1)

1.1.0μM甾醇在制备降低1.0μM他汀类药物造成的肌肉或胚胎毒性的药物中的应用，所述甾醇为麦角甾醇、豆甾醇或菜籽甾醇，所述他汀类药物为洛伐他汀或辛伐他汀。
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Non-Patent Citations (5)

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植物甾醇联合他汀对高胆固醇血症患者血脂谱的影响;韩嘉宁等;《广东医学》;20150930;第36卷(第17期);第2731-2733页 *
韩嘉宁等.植物甾醇联合他汀对高胆固醇血症患者血脂谱的影响.《广东医学》.2015,第36卷(第17期),第2731-2733页. *

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