CN113350453A - 用于升高hdl-c的保健组合物 - Google Patents

Abstract

本申请提供一种用于升高HDL‑C的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲30‑46%；银杏叶提取物10‑28%；叶酸0.0005‑0.056%；维生素B6 0.001‑0.2%；以及辅料40‑50%。通过向红曲与银杏叶提取物的组合物中加入叶酸和维生素B6，发明人意外发现，相比于单纯的红曲与银杏叶提取物的组合物，其不仅能够显著降低血清TG、TC、LDL‑C的水平，而且能够显著提升HDL‑C的水平，从而能够更有效地调节血脂，用于预防因血脂异常而引起的各类心血管疾病。

Description

用于升高HDL-C的保健组合物

技术领域

本申请涉及适用于血脂异常对象的组合物，特别是具有调节血脂特别是升高HDL-C作用的保健组合物、其制备方法以及应用。

背景技术

近30 年来，中国人群的血脂水平逐步升高，血脂异常患病率明显增加。2012 年全国调查结果显示，成人血清总胆固醇（total cholesterol, TC）平均为4.50 mmol/L；高胆固醇血症的患病率4.9%；甘油三酯（triglyceride，TG）平均为1.38 mmol/L；高TG 血症的患病率13.1%；高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）平均为1.19 mmol/L，低HDL-C 血症的患病率33.9%。中国成人血脂异常总体患病率高达40.40%，较2002 年呈大幅度上升。人群血清胆固醇水平的升高将导致2010-2030 年期间我国心血管病事件约增加920 万。

1979年，Endo等首次从红曲霉的培养液中分离出一种名为莫纳可林K（MonacolinK）的活性物质，其具有强力抑制胆固醇合成的作用。而后研究表明莫纳可林K的结构和化学性质与洛伐他汀（lovastatin）完全相同，属同种物质。洛伐他汀在酸性条件下有酸式和内酯式两种形态，其中酸式洛伐他汀为药理活性形态，因其化学结构中开环羟基酸部分与3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A的化学结构十分类似，可竞争性地抑制胆固醇生物合成限速酶——HMG-CoA 还原酶。因此红曲可以减少胆固醇合成，阻碍极低密度脂蛋白（VLDL）的合成和向肝外组织的释放。另一方面，莫纳可林K可通过肝细胞自身调节机制，代偿性增加肝细胞膜上的低密度脂蛋白（LDL）受体的数量、活性以及与LDL的亲和力，使血浆中更多的LDL经LDL受体途径代谢，最终将胆固醇转变为胆汁酸排出体外，进一步降低了血浆低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）和总胆固醇（TC）的水平。

血脂康是北京北大维信生物科技有限公司上市的降脂红曲中成药，据报道，血脂康是由特制红曲精制而成，这种红曲与普通食用红曲主要区别是含有大量Monacolin K及其内脂洛伐他汀。用于血脂康的红曲是用一株高产Monacolin类物质的红曲菌菌株，以粳米为原料，在特殊的工艺条件下发酵而成的，其中洛伐他汀的总含量达到20 mg/g以上。上市产品分胶囊和片剂两种剂型，胶囊每粒装0.3 g，口服，一次2粒，一日2次；片剂每片重0.4g，口服，一次2片，一日2次。

不同于药品，国家规定保健品中使用的红曲中洛伐他汀的日服量须小于10.0 mg/天。由于有效活性成分的剂量减小，保健品的降脂、调脂作用远逊于血脂康等处方药。鉴于此，现有技术提供了红曲与银杏叶提取物（Ginko Biloba Extract，GBE）的组合物（例如银曲胶囊，其中银杏叶提取物:红曲提取物=4:1）作为保健品用于调节血脂。张朝波等研究表明，与模型组比较，银曲胶囊能明显降低高脂血症动物大鼠的TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C的水平，中高剂量组（1.0 g/kg和2.0 g/kg）能提高血清中的HDL-C，而低剂量组（0.5 g/kg）中HDL-C无明显差异（张朝波等, "银曲胶囊调节血脂药效学研究." 安徽医药 15.004(2011):421-423.）。值得注意的是，在该研究中，作为对照药物，血脂康组（0.2 g/kg）虽然在降低TG、TC、LDL-C方面与模型组相比有显著性差异，但并未升高HDL-C水平。

HDL-C主要在肝脏合成，是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白。HDL 将胆固醇从周围组织（包括动脉粥样硬化斑块）转运到肝脏进行再循环或以胆酸的形式排泄，此过程称为胆固醇逆转运。HDL-C的血浆含量的高低与患动脉粥样硬化性心血管疾病（atheroscleroticcardiovascular disease, ASCVD）的风险呈负相关。HDL-C降低常见于脑血管病冠心病、高甘油三酯血症、肝功能损害如急慢性肝炎、肝硬化、肝癌、糖尿病、吸烟、缺少运动等，其减低可作为冠心病的危险指标。

GBE的临床不良反应涉及全身各系统，如出血（严重颅内出血、严重蛛网膜下腔出血、自发性前房出血、严重双侧硬膜下血肿）、过敏反应、高血压、粒细胞减少、血管红肿、癫痫发作、中枢神经性兴奋和急性肠胃炎等。美国国立卫生研究院（NIH）数据库显示，GBE 作为膳食补充剂每人的最小剂量为2.5mg/d，最大剂量为660 mg/d。我国原国家药品食品监督管理局数据库显示，GBE 作为药品的最大剂量为240 mg/d，作为保健食品的最大剂量为200mg/d。鉴于现有法规中关于保健食品中GBE的剂量规定，将GBE与红曲组合得到的保健品无法有效升高HDL-C水平，因而限制了保健品的性能和应用范围。

发明内容

有鉴于此，本申请提供了一种用于调节血脂的保健组合物，其各成分的剂量均符合国家关于保健食品中各成分的剂量规定，同时能够降低TG、TC、LDL-C的水平并提升HDL-C水平，从而能够更有效地调节血脂，用于预防因血脂异常而引起的各类心血管疾病。

本申请的发明人意外发现，在红曲和银杏叶提取物的组合物中加入叶酸和维生素B6可以在银杏叶提取物的低剂量情况下显著提升HDL-C水平，同时显著降低TG、TC、LDL-C的水平。

因此，本申请的一个方面提供一种用于调节血脂的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 30-46%；银杏叶提取物 10-28%；叶酸0.0005-0.056%；维生素B6 0.001-0.2%；以及辅料 40-50%。

在一些实施方式中，所述红曲为红曲粉、红曲提取物、功能性红曲中的一种或多种。在一些实施方式中，所述红曲是功能性红曲。在一些实施方式中，所述红曲中洛伐他汀的重量百分含量为约1-5%，优选为约3%。在一些实施方式中，所述红曲是功能性红曲，其中洛伐他汀的重量百分含量为约1-5%，优选为约3%。

在一些实施方式中，所述银杏叶提取物的总黄酮醇苷的重量百分含量为24-30%，优选为约24%。在一些实施方式中，所述银杏叶提取物的提取方法包括将银杏叶粉碎，加入3-5倍稀乙醇（例如50 vol.%乙醇）在70-80℃回流提取3次，每次2-3小时，用大孔树脂吸附，用水和不同浓度乙醇洗脱。

在一些实施方式中，所述功能性红曲与所示银杏叶提取物的重量比为约2-3:1，例如2:1, 2.1:1, 2.2:1, 2.3:1, 2.4:1, 2.5:1, 2.6:1, 2.7:1, 2.8:1, 2.9:1或3:1。

在一些实施方式中，所述用于调节血脂的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 38.9%；银杏叶提取物 16.7%；叶酸0.00067%；维生素B6 0.0011%；以及辅料 44.3%。

在一些实施方式中，所述辅料包含填充剂和润滑剂。在一些实施方式中，所述填充剂包含麦芽糊精、微晶纤维素和乳糖中的一种或多种。在一些实施方式中，所述润滑剂包含二氧化硅。在一些实施方式中，所述辅料包含麦芽糊精、微晶纤维素、乳糖和二氧化硅。

在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含140 mg功能性红曲粉。在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含60 mg银杏叶提取物。在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含0.24 mg叶酸。在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36g计包含0.4 mg维生素B6。在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含140 mg功能性红曲粉、60 mg银杏叶提取物、0.24 mg叶酸和0.4 mg维生素B6。在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含140 mg功能性红曲粉、60 mg银杏叶提取物、0.24 mg叶酸、0.4mg维生素B6、麦芽糊精73.76 mg、微晶纤维素46 mg、乳糖36 mg和二氧化硅3.6 mg。

在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含4.2 mg洛伐他汀。在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含7.2 mg银杏总黄酮醇苷。在一些实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含4.2 mg洛伐他汀、7.2 mg银杏总黄酮醇苷、0.24 mg叶酸和0.4 mg维生素B6。

在一些实施方式中，所述银杏叶提取物能够被银杏叶替代。如以银杏叶替代银杏叶提取物，则银杏叶的重量应为所使用的银杏叶提取物的重量的50-100倍，优选为60倍，而组合物中红曲、叶酸、维生素B6的含量可保持不变。例如，以3600 mg银杏叶替代60 mg银杏叶提取物，所制得保健组合物的单个剂量相应增加。相应地，例如，该保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 3.6%；银杏叶 92.3%；叶酸0.0007%；维生素B6 0.001%；以及辅料4.01%。相应地，该保健组合物中红曲与银杏叶的重量比例如是约1:20-30，例如1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29或1:30。

在本申请中，通过向红曲与银杏叶提取物的组合物中加入叶酸和维生素B6，发明人意外发现，相比于单纯的红曲与银杏叶提取物的组合物，其不仅能够显著降低血清TG、TC、LDL-C的水平，而且能够显著提升HDL-C的水平，从而能够更有效地调节血脂，用于预防因血脂异常而引起的各类心血管疾病，包括但不限于单纯血清TC升高的高胆固醇血症、单纯血清TG升高的高甘油三酯血症、单纯血清LDL-C水平过高的高LDL-C血症、单纯血清HDL-C水平过低的低HDL-C血症、血清TC、TG、LDL-C三者中的两者或全部升高的混合型高脂血症、血清TC、TG、LDL-C三者中的两者或全部升高合并血清HDL-C偏低的混合型高脂血症、黄色瘤、动脉粥样硬化、冠心病和周围血管病。

附图说明

图1为不同处理组处理后大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平的变化。(A)服药前各组大鼠血清HDL-C的浓度；（B）服药后各组大鼠血清HDL-C的浓度；(C) 各组大鼠血清HDL-C的浓度均值。*，P < 0.05；***，P < 0.001；n.s.，没有显著差异；n=12/组。

图2为不同处理组处理后大鼠血清总胆固醇（TC）水平的变化。(A) 服药前各组大鼠血清TC的浓度；（B）服药后各组大鼠血清TC的浓度；(C) 各组大鼠血清TC的浓度均值。***，P < 0.001；n.s.，没有显著差异；n=12/组。

图3为不同处理组处理后大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平的变化。(A)服药前各组大鼠血清LDL-C的浓度；（B）服药后各组大鼠血清LDL-C的浓度；(C) 各组大鼠血清LDL-C的浓度均值。***，P < 0.001；n.s.，没有显著差异；n=12/组。

图4为不同处理组处理后大鼠血清甘油三酯（TG）水平的变化。(A) 服药前各组大鼠血清TG的浓度；（B）服药后各组大鼠血清TG的浓度；(C) 各组大鼠血清TG的浓度均值。***，P < 0.001；n.s.，没有显著差异；n=12/组。

图5为急性毒性实验小鼠（A图）、大鼠（B图）各脏器HE染色病理检查的代表性图片。

具体实施方式

本申请的发明人发现，在包含红曲和银杏叶的调脂保健品中加入适量的叶酸和维生素B6可以在显著降低血清TG、TC、LDL-C的水平的同时显著提升HDL-C的水平。这种效果是出人意料的，因为一方面现有技术已知银杏叶或其提取物仅能够在非常高的剂量下（对应大鼠剂量1.0 g/kg和2.0 g/kg，换算为成人剂量约为12g/60kg体重或24g/60kg体重）才能有升高HDL-C的作用，而在低剂量下（对应大鼠剂量0.5g/kg，换算为成人剂量约为6g/60kg体重）没有该效果，但是我国保健品中银杏提取物的日服用剂量不得超过200mg，这导致银杏提取物升高HDL-C的作用在保健品规定剂量下无法体现；另一方面，本申请的调脂保健品中所额外加入的叶酸和维生素B6已知并不具有升高HDL-C的作用，在本发明作出之前，预期两者与红曲和银杏叶的组合并不能升高HDL-C。如前所述，在血脂异常特别是HDL-C偏低的对象中升高HDL-C是具有显著健康效益的。

如以下实验例所证实的，本发明的保健组合物在低、中、高三个剂量均能够显著提升HDL-C水平，同时显著降低血清TG、TC、LDL-C的水平。三个剂量分别为0.03g/kg、0.06g/kg、0.18g/kg，换算为成人剂量约为0.36g/60kg、0.72g/60kg和2.16 g/60kg。与现有技术相比，低剂量的本发明组合物低至上述银曲胶囊低剂量组的约6%、上述银曲胶囊中剂量组的约3%，但仍能保持显著降低血清TG、TC、LDL-C的水平的作用，此外显著提升HDL-C水平。当本发明的保健组合物以低得多的剂量使用时，其成分GBE的使用量也会显著降低，从而消除了高剂量GBE带来的可能副作用，但其升高HDL-C水平的作用并未消除。此外，在保健组合物中加入叶酸和维生素B6能够带来额外的保健效益。

保健组合物

本申请提供的保健组合物，可用于调节血脂，包括显著降低血清TG、显著降低TC、显著降低LDL-C和/或显著提升HDL-C。所述保健组合物可用于血脂异常对象，例如单纯血清TC升高的高胆固醇血症、单纯血清TG升高的高甘油三酯血症、单纯血清LDL-C水平过高的高LDL-C血症、单纯血清HDL-C水平过低的低HDL-C血症、血清TC、TG、LDL-C三者中的两者或全部升高的混合型高脂血症、血清TC、TG、LDL-C三者中的两者或全部升高合并血清HDL-C偏低的混合型高脂血症。所述保健组合物还可用于预防由于血脂异常所导致的各类心血管疾病，包括但不限于黄色瘤、动脉粥样硬化、冠心病和周围血管病。所述升高（过高）或降低（过低）是相对于正常值来说的，升高或降低的幅度不做限制。各血脂的参考正常值如下TC：<5.20mmol/l；TG：<1.70mmol/l；HDL-C：>0.91mmol/l；LDL-C：<3.12mmol/l。

在本发明中，所述“显著提升HDL-C”、“显著提高HDL-C”或类似术语是指与HDL-C降低或过低的对象相比本发明的组合物以统计学上显著的差异升高HDL-C的水平。类似地，所述“显著降低”或类似术语是指与TC、TG或LDL-C降低或过低的对象相比本发明的组合物以统计学上显著的差异降低TC、TG或LDL-C的水平。在一些实施方式中，“统计学上显著的差异”是指若数据满足正态分布，采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行数据分析和组间差异比较；若数据不满足正态性或方差齐性，则采用非参数检验（Kruskal-Wallis秩和检验）进行数据分析和组间差异比较；P < 0.05。

在一些实施方式中，本申请提供的一种用于调节血脂的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 30-46%；银杏叶提取物 10-28%；叶酸0.0005-0.056%；维生素B6 0.001-0.2%；以及辅料 40-50%。

在本申请中，所述红曲可为红曲粉、红曲提取物、功能性红曲中的一种或多种，优选是功能性红曲。在优选的实施方式中，红曲中洛伐他汀的重量百分含量为约1-5%，优选为约3%，所述洛伐他汀可以是其酸式和内酯式两种形态的混合。红曲可按常规方法制备或可商购。红曲为曲霉科真菌红曲霉（Monascus purpureus Went.）的菌丝体寄生在大米（如粳米）上而成的。红曲霉中文别名红曲、红糟、红大米，散囊菌目中的一属子囊菌曲霉科真菌，代表种如紫红曲霉、安卡红曲霉、红色红曲霉、巴克红曲霉、烟色红曲霉、锈色红曲莓、变红红曲霉。本申请优选使用以紫红曲霉发酵的红曲，代表性的来源为杭州双马生物科技股份有限公司生产的功能性红曲粉。

在一些实施方式中，所述银杏叶提取物的总黄酮醇苷的重量百分含量为24-30%，优选为约24%。在一些实施方式中，所述银杏叶提取物的提取方法包括将银杏叶粉碎，加入3-5倍稀乙醇（例如50 vol.%乙醇）在70-80℃回流提取3次，每次2-3小时，用大孔树脂吸附，用水和不同浓度乙醇洗脱。本申请预期可使用其他方法提取的或市售的符合药典标准的总黄酮醇苷含量≥24%的银杏叶提取物。

在一些实施方式中，所述用于调节血脂的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 38.9%；银杏叶提取物 16.7%；叶酸0.00067%；维生素B6 0.0011%；以及辅料 44.3%。

在一些实施方式中，所述辅料包含填充剂和润滑剂。在一些实施方式中，所述填充剂包含麦芽糊精、微晶纤维素和乳糖中的一种或多种。在一些实施方式中，所述润滑剂包含二氧化硅。在一些实施方式中，所述辅料包含麦芽糊精、微晶纤维素、乳糖和二氧化硅。

在一个实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含140 mg功能性红曲粉、60 mg银杏叶提取物、0.24 mg叶酸和0.4 mg维生素B6。在一个实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含140 mg功能性红曲粉、60 mg银杏叶提取物、0.24 mg叶酸、0.4 mg维生素B6、麦芽糊精73.76 mg、微晶纤维素46 mg、乳糖36 mg和二氧化硅3.6 mg。

在一个实施方式中，所述保健组合物按0.36 g计包含4.2 mg洛伐他汀、7.2 mg银杏总黄酮醇苷、0.24 mg叶酸和0.4 mg维生素B6。

在一个实施方式中，所述银杏叶提取物能够被银杏叶替代。相应地，例如，该保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 3.6%；银杏叶 92.3%；叶酸0.0007%；维生素B60.001%；以及辅料4.01%。

我国保健品中各成分的含量限额规定如下：洛伐他汀 10 mg/d，GBE 200 mg/d（换算为总黄酮醇苷为48 mg/d），叶酸0.4 mg/d，维生素B6 1.5 mg/d。在一个实施方式中，所述保健组合物制成0.36 g的单位剂量，剂型可为胶囊、片剂、颗粒、粉剂或其他合适剂型。各剂型的制备方法参考制药领域的常规方法操作。在一个实施方式中，所述保健组合物的每日服用剂量为0.72g。

实施例

实施例1. 保健组合物胶囊的制备方法

按1000粒胶囊配方：140 g功能性红曲粉、60 g银杏叶提取物、0.24 g叶酸、0.4 g维生素B6、麦芽糊精73.76 g、微晶纤维素46 g、乳糖36 g和二氧化硅3.6 g，首先将麦芽糊精、叶酸和维生素B6用等量递增的方法混合均匀，再将红曲、银杏叶提取物、乳糖和混合均匀的麦芽糊精、叶酸、维生素B6置于湿法混合制粒机中，混合30分钟后加入适量的纯化水，过60目筛制粒。所得湿颗粒干燥至水分≤5.0%，再过60目筛整粒，加入微晶纤维素、二氧化硅置混合机中混合30分钟，填充胶囊，制得胶囊。

实施例2.保健组合物片剂的制备方法

以实施例1所述配方，将麦芽糊精、叶酸和维生素B6，用等量递增的方法混合均匀，把红曲、银杏叶提取物、乳糖和混合均匀的麦芽糊精、叶酸、维生素B6置于湿法混合制粒机中，混合30分钟后加入适量的纯化水，过60目筛制粒，所得湿颗粒干燥至水分≤5.0%，过60目筛整粒，加入微晶纤维素、二氧化硅置混合机中混合30分钟，压片，制得片剂。

实施例3.保健组合物颗粒的制备方法

以实施例1所述配方，首先将麦芽糊精、叶酸和维生素B6用等量递增的方法混合均匀，再将红曲、银杏叶提取物、乳糖和混合均匀的麦芽糊精、叶酸、维生素B6置于湿法混合制粒机中，混合30分钟后加入适量的纯化水，过60目筛制粒。所得湿颗粒干燥至水分≤5.0%，过60目筛整粒，加入微晶纤维素、二氧化硅置混合机中混合30分钟，装袋，制得颗粒。

实施例4.保健组合物粉剂的制备方法

以实施例1所述配方，将麦芽糊精、叶酸和维生素B6分别过100目筛，按配方量称取麦芽糊精、叶酸和维生素B6，用等量递增的方法混合均匀，红曲、银杏叶提取物、乳糖、微晶纤维素、二氧化硅分别过100目筛，按配方量称取过筛后的红曲、银杏叶提取物、乳糖、微晶纤维素、二氧化硅和混合均匀的麦芽糊精、叶酸、维生素B6放入混合机中混合30分钟，制得粉剂。

实验例

实验方法

高脂血症动物模型的制备和动物分组：12只大鼠给予维持饲料作为空白对照组，60只大鼠给予高脂饲料以制备高脂血症动物模型。喂食高脂饲料14天后，空白对照组大鼠和高脂饲料喂食的大鼠不禁食取血，采血并离心分离出血清后测定血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平，据此结果判定模型是否制作成功。根据总胆固醇水平进一步将高脂饲料喂食的大鼠随机分为五组且每组12只，即模型对照组﹑低剂量组（低剂量ST组）﹑中剂量组（中剂量ST组）、高剂量组（高剂量ST组）和药物对照组（红曲粉和银杏叶提取物粉按重量1：1混合）。各剂量ST组和药物对照组的动物给与高脂饲料喂食的同时，每天灌胃给与对应的ST或药物一次；模型对照组动物给与高脂饲料喂食的同时，每天灌胃给与无菌水一次；空白对照组动物给与维持饲料喂食的同时，每天一次灌胃给与无菌水。灌胃45天后，不禁食取血并分离血清，测定各组大鼠血清总胆固醇﹑高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯。

给药剂量与给药方法：根据胶囊的推荐剂量是人体每日0.72g/60kg，大鼠动物实验使用的ST组低、中、高剂量是换算为人体推荐量的2.5倍、5倍、15倍，即每日0.03g/kg、0.06g/kg、0.18g/kg。各剂量组实验用ST样品的制备方法以及给药方法如下。ST低剂量组取实施例1胶囊内容物0.30g，加无菌水至50.0mL；ST中剂量组取实施例1胶囊内容物0.60g，加无菌水至50.0mL；ST高剂量组取实施例1胶囊内容物1.80g，加无菌水至50.0mL。药物对照组的剂量为0.060g/kg，取红曲粉（60目）0.3g和银杏叶提取物粉（60目）0.3g，加无菌水至50.0mL。按5mL/kg 对大鼠进行灌胃，每日一次，连续灌胃45天后采集并分离血清进行各项指标测定。空白对照组（0g/kg）和模型对照组（0g/kg）按5mL/kg 每日灌胃无菌水。

血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的测定方法：取静脉血，3000r/min离心10min分离出血清，用全自动生化分析仪测定血清总胆固醇﹑高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯。

数据处理：用Graphpad Prism 9.0软件进行数据统计分析和图表制作，数据以均值±标准差（Mean ± SD）表示。若数据满足正态分布和方差齐性，采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行数据分析和组间差异比较；若数据不满足正态性或方差齐性，则采用非参数检验（Kruskal-Wallis秩和检验）进行数据分析和组间差异比较。P < 0.05表示组间差异具有统计学意义。

实验例1. 本发明调脂组合物显著增加血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平，而 对照药物无此效应

如图1 A所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料14天后，与空白对照组比较，喂食高脂饲料的各组大鼠血清的HDL-C水平（均值在0.73至0.76 mmol/L）均显著低于空白对照组（均值为0.92 mmol/L），表明高脂喂养引起大鼠血清HDL-C水平的显著下降。

如图1 B所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料并给予不同药物处理灌胃45天后，模型对照组大鼠血清HDL-C水平（0.47±0.08 mmol/L）显著低于空白对照组（0.90±0.08 mmol/L），而低、中、高剂量ST组大鼠血清HDL-C水平（分别为0.55±0.08、0.54±0.11和0.55±0.10 mmol/L）均显著高于模型对照组（0.47±0.08 mmol/L），表明各剂量ST均显著提高大鼠血清HDL-C水平；而药物对照组大鼠的血清HDL-C水平（0.50±0.07 mmol/L）与模型对照组相比没有显著性差异。以上结果表明，调脂胶囊具有显著提高高密度脂蛋白胆固醇HDL-C的作用，而对照药物没有此效应。

实验例2. 本发明调脂组合物显著降低血清总胆固醇（TC）

如图2 A所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料14天后，与空白对照组比较，喂食高脂饲料的各组大鼠的TC水平（均值在3.31至3.43 mmol/L）均显著高于空白对照组（均值为2.35 mmol/L），表明成功建立高脂血症动物模型。

如图2 B所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料并并给予不同药物处理灌胃45天后，模型对照组大鼠血清TC水平（4.24±0.45 mmol/L）显著高于空白对照组（1.76±0.27 mmol/L），而与模型对照组相比，低、中、高剂量ST组和药物对照组大鼠血清TC水平（分别为2.33±0.40、2.33±0.48、2.38±0.49和2.19±0.33 mmol/L）均显著低于模型对照组（4.24±0.45 mmol/L）。以上结果表明，各剂量ST和对照药物均显著降低大鼠血清总胆固醇TC的水平。

实验例3. 本发明调脂组合物显著降低血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）

如图3 A所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料14天后，与空白对照组比较，喂食高脂饲料的各组大鼠血清LDL-C水平（均值在1.67至1.71 mmol/L）均显著高于空白对照组（均值为0.20 mmol/L），表明成功建立高脂血症动物模型。

如图3 B所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料并给予不同药物处理灌胃45天后，模型对照组大鼠血清LDL-C水平（1.62±0.25 mmol/L）显著高于空白对照组（0.17±0.03 mmol/L），而与模型对照组相比，低、中、高剂量ST组和药物对照组大鼠血清LDL-C水平（分别为0.54±0.14、0.53±0.12、0.54±0.15和0.55±0.13 mmol/L）均显著低于模型对照组（1.62±0.25 mmol/L）。以上结果表明，各剂量ST和对照药物均可显著降低大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇LDL-C的水平。

实验例4. 本发明调脂组合物显著降低血清甘油三酯（TG）

如图4 A所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料14天后，与空白对照组比较，喂食高脂饲料的各组大鼠血清TG水平（均值在5.37至5.84 mmol/L）均显著高于空白对照组（均值为2.70 mmol/L），表明成功建立高脂血症动物模型。

如图4 B所示，在空白对照组喂食维持饲料而其他实验动物喂食高脂饲料并给予不同药物处理灌胃45天后，模型对照组大鼠血清TG水平（3.20±0.47 mmol/L）显著高于空白对照组（1.50±0.36 mmol/L），而与模型对照组相比，低、中、高剂量ST组和药物对照组大鼠血清TG水平（分别为2.26±0.55、2.26±0.65、2.24±0.78和1.61±0.39 mmol/L）均显著低于模型对照组（3.20±0.47 mmol/L）。以上结果表明，各剂量ST和对照药物均显著降低大鼠血清甘油三酯TG的水平。

以上结果显示，本发明调脂组合物可以降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平，具有明显的降血脂作用。本发明调脂组合物还提高高密度脂蛋白胆固醇水平，而药物对照对高密度脂蛋白胆固醇没有影响，表明在改善高密度脂蛋白胆固醇方面，本发明调脂组合物优于对照药物。

实验例5. 急性毒性实验未发现ST引起心脏、肝脏、肾脏损伤性病变

分组与给药：参照《保健食品检验与技术规范实施手册》的急性毒性试验方法，采用其中的最大耐受剂量法评价实施例4的粉末组合物（“ST”）的安全性。将40只BALB/c小鼠和10只SD大鼠随机分成4组，雌雄各半。小鼠正常对照组20只，ST组20只；大鼠正常对照组4只，ST组6只。给药前动物隔夜禁食，ST溶液浓度为0.58 g/mL，灌胃给药体积为20 mL/kg体重，一天给药2次，间隔4 h，总给药剂量为23.2 g/kg/d。由于ST人的剂量为0.012 g/kg/d，该大小鼠给药剂量是人剂量的1933倍。给药前后动物称重，72 h内观察记录动物死亡情况及中毒表现等；72 h时各组动物取心脏、肝脏和肾脏进行病理检测。

HE染色方法：将组织从固定液中取出，依次浸泡50%乙醇（30 min）－70%乙醇（过夜）－80%乙醇（30 min）－90%乙醇（30 min）－95%乙醇（30 min）－无水乙醇（2次，每次30min）－二甲苯（2次，每次5~10 min，直至样品完全透明）－62 ℃石蜡（3次，每次1 h），然后进行组织包埋。组织石蜡切片厚度为3 μm，切片在烘片机上烘干水分后放37 ℃烘箱烘烤干燥过夜，然后取出室温保存的石蜡切片，置于65 ℃烘箱中烘烤30 min，然后立刻将切片浸于二甲苯中进行脱蜡三次，每次5 min；复水过程为第三次浸泡二甲苯后，将切片依次浸泡于100%乙醇－100%乙醇－95%乙醇－90%乙醇－80%乙醇－70%乙醇－50%乙醇-蒸馏水进行复水，每次1 min；取出切片稍稍晾干，然后将切片置于湿盒，将苏木素染液滴加在组织上，确保染液将组织完全覆盖，室温孵育5 min；用蒸馏水轻轻冲洗切片，将多余的苏木素洗去，然后将把切片放回湿盒，将伊红染色液滴加在组织上，室温孵育2 min；用蒸馏水轻轻冲洗切片；将切片依次浸泡90%乙醇（1 min）-95%乙醇（1 min）－100%乙醇（1 min）－100%乙醇（1min）－二甲苯（5 min）－二甲苯（5 min）进行脱水透明，然后用中性树脂（用适量二甲苯稀释，约50%二甲苯）封片。使用ECLIPSE Ci-S正置显微镜进行明场拍照，每个个体随机选取视野拍照，进行病理分析。

数据统计：数据以均值±标准差（Mean ± SD）表示。应用Graphpad Prism 7.0软件对数据进行统计和作图，若数据满足正态性和方差齐性，采用单因素方差分析（One-WayANOVA），组间比较采用Fisher's LSD test法。若数据不满足正态性或方差齐性，则采用非参数检验（Kruskal-Wallis秩和检验）。

一般临床观察及体重

急性毒性实验在2次灌胃后的72 h内给药组无动物死亡，小、大鼠行为活动均正常，无明显中毒反应。72 h解剖肉眼观察心、肝、肾等主要器官未见颜色形态异常，亦没有出血点或其他病理改变。给药前后各组动物体重及各脏器系数变化与对照组相比均无显著性差（P>0.05）（数据未示出）。

急性毒性试验结果表明本发明组合物大、小鼠的最大耐受量（Maximal TolerableDose, MTD）为23.2 g/kg，相当于人口服剂量的1933倍，未能测出LD₅₀。按照急性毒性剂量分级，属无毒级。

组织病理观察

对小鼠与大鼠的心脏、肝脏、肾脏等主要器官肉眼观查未见颜色形态异常，亦没有出血点或其他病理改变，无异常。与正常组比，HE染色结果显示本发明组合物急性给药未见小鼠和大鼠心脏、肝脏、肾脏主要脏器发生病理性损伤，各脏器结构清晰、细胞形态正常（见图5）；数据表明本发明组合物在高出人推荐量剂量1933倍的基础上是安全的。

本实验采用最大耐受剂量法评价本发明组合物对BALB/c小鼠与SD大鼠两种啮齿类动物的急性毒性。急性毒性试验结果表明本发明的组合物对大、小鼠的最大耐受剂量（Maximal Tolerable Dose, MTD）为23.2 g/kg/d，相当于人口服剂量的1933倍，在该剂量下观察小鼠与大鼠各脏器的病理切片结果未发现心脏、肝脏、肾脏损伤性病变。按照急性毒性剂量分级，属无毒级，说明按推荐量食用是安全的。

Claims (13)

1.一种用于升高HDL-C的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 30-46%；银杏叶提取物 10-28%；叶酸0.0005-0.056%；维生素B6 0.001-0.2%；以及辅料 40-50%，其中所述保健组合物显著降低血清TG、TC、LDL-C的水平，同时显著提升HDL-C的水平。

2.根据权利要求1所述的保健组合物，其中所述红曲为红曲粉、红曲提取物、功能性红曲中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的保健组合物，其中所述红曲为功能性红曲，所述功能性红曲中洛伐他汀的重量百分含量为1-5%。

4.根据权利要求3所述的保健组合物，其中所述功能性红曲中洛伐他汀的重量百分含量为3%。

5.根据权利要求1所述的保健组合物，其中所述银杏叶提取物的总黄酮醇苷的重量百分含量为24-30%。

6.根据权利要求5所述的保健组合物，其中所述银杏叶提取物的总黄酮醇苷的重量百分含量为24%。

7.根据权利要求1所述的保健组合物，其中所述用于调节血脂的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 38.9%；银杏叶提取物 16.7%；叶酸0.00067%；维生素B6 0.0011%；以及辅料 44.3%。

8.根据权利要求1所述的保健组合物，其中所述保健组合物按0.36 g计包含140 mg功能性红曲粉、60 mg银杏叶提取物、0.24 mg叶酸和0.4 mg维生素B6。

9.根据权利要求1所述的保健组合物，其中所述辅料包含填充剂和润滑剂。

10.根据权利要求9所述的保健组合物，其中所述填充剂包含麦芽糊精、微晶纤维素和乳糖中的一种或多种，所述润滑剂包含二氧化硅。

11.根据权利要求10所述的保健组合物，其中所述保健组合物按0.36 g计包含140 mg功能性红曲粉、60 mg银杏叶提取物、0.24 mg叶酸、0.4 mg维生素B6、麦芽糊精73.76 mg、微晶纤维素46 mg、乳糖36 mg和二氧化硅3.6 mg。

12.根据权利要求1所述的保健组合物，其中所述保健组合物按0.36 g计包含4.2 mg洛伐他汀、7.2 mg银杏总黄酮醇苷、0.24 mg叶酸和0.4 mg维生素B6。

13.一种用于升高HDL-C的保健组合物，按重量百分数计，包含：红曲 3.6%；银杏叶92.3%；叶酸0.0007%；维生素B6 0.001%；以及辅料4.01%；，其中所述保健组合物显著降低血清TG、TC、LDL-C的水平，同时显著提升HDL-C的水平。

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