CN104622861B - E-10-羟基-2-癸烯酸在防治化学肝损伤的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了E‑10‑羟基‑2‑癸烯酸的一种新用途，确切地说是E‑10‑羟基‑2‑癸烯酸在防治化学肝损伤的药物或保健品中的应用，属于化学肝损伤防治技术领域，E‑10‑羟基‑2‑癸烯酸具有明确的保肝护肝作用，能够用于防治化学肝损伤的药物或保健品中，具有成本低、效果好、用量少、无毒副作用的优点。

Description

E-10-羟基-2-癸烯酸在防治化学肝损伤的药物中的应用

技术领域

本发明涉及化学肝损伤防治技术领域。

背景技术

由药物引起的肝病占非病毒性肝病中的20％～50％，在我国肝病中，药物性肝损伤的发生率仅次于病毒性肝炎及脂肪性肝病(包括酒精性及非酒精性)的发生率，但由于临床表现不特异或较隐匿，因此常常不能被发现或确诊。目前，我们在日常生活中接触到的药物或保健品中能够明确引起药物性肝损伤的药物超过1000种，因此，药物性肝损伤已经成为一个不容忽视的严重的公共卫生问题。

化学品(药物、乙醇、雾霾、脂多糖、植物凝聚素如刀豆蛋白等)、缺氧后的再氧化(再灌流)和急慢性症反应均能产生氧化性的细胞损伤，并伴有多种细胞结构和功能的改变。缺氧的细胞能够生成反应性氧基团(ROS)，在正常情况下，ROS被抗氧化系统所分解。线粒体是细胞内产生ROS的主要来源。在某些病理状态(如毙症)下，或促氧化性化学毒性物存在时，组织内的ROS产生增加，如ROS产生过高，则可导致肝细胞的坏死或凋亡，对肝脏造成损伤。

E-10-羟基-2-癸烯酸(简称10-HDA，俗称王浆酸、皇浆酸)是从蜂王浆中分离出的一种有机酸，其分子式为C10H18O3，是蜂王浆的重要成分之一，目前可以人工合成，其结构式为

。合格的蜂王浆含有王浆酸不低于1.4％，因此王浆酸属于药食同源的蜂产品。

目前，保肝护肝、治疗肝损伤的中国发明专利约有1551条，其利用的物质大体可分为：1)中药或从中药中提取的黄酮、异黄酮类物质，如CN104000862A、CN104042647A、CN104013899A、CN104083727A、CN104055883A、CN104013856A、CN104001135A、CN103977355A、CN104027458A、CN103989835A、CN103860937A等专利；2)角鲨烯、大豆磷脂或ω-3多不饱和脂肪酸类物质，如CN104068397A、CN104042601A等专利；3)多糖、聚糖或肝糖原类物质，如CN104083393A、CN104013733A、CN103989668A、CN201410183978等专利；4)菌类，如专利CN103937716A；5)新三萜皂苷化合物，如CN103864883A、CN103880913A等专利；6)氨基酸、肽类物质，如CN103750344A、CN103705907A、CN103519164A、CN201310337294、CN103211851A等专利。以上专利均不涉及王浆酸在防治化学肝损伤方面的应用。

非专利文献“10-羧基-2-癸烯酸及蜂王浆防治大鼠肝纤维化的实验研究”(茹清静等，中西医结合肝病杂志，2010，20(3)，168-170)仅报告了王浆酸及蜂王浆在大鼠肝纤维化方面的治疗作用和机制；非专利文献“10-羧基-2-癸烯酸研究进展及展望”(贺春玲等，中国农学通报，2007，23(6)，227-231)综述了2007年以前王浆酸的应用研究结果，介绍了王浆酸在增强免疫、抑癌、抗菌消炎、防辐射、降血脂等方面生理作用的研究成果；非专利文献“王浆酸的研究进展”(张炎斌等，中国农学通报，2013，41(5)，20-22)综述了2013年以前王浆酸的合成与应用，其描述的生理作用与非专利文献“10-羧基-2-癸烯酸研究进展及展望”一致，并未提及王浆酸在治疗或辅助治疗酒精、药物等化学物质引起的肝损伤方面的应用；非专利文献“蜂王浆活性成分与护肝机制研究”(茹清静等，中西医结合肝病杂志，2002，12(6)，381-383)综述了2002年以前有关蜂王浆有效活性成分的保护肝脏机制，其核心是蜂王浆中的蛋白质、糖类、维生素、微量元素及微量物质(如SOD等)对肝脏的保护作用，文中虽然提到10-HDA，但仅仅是从免疫调节、减少化疗药物副作用、抗癌抑癌等方面加以叙述。

发明内容

本发明的目的在于提供E-10-羟基-2-癸烯酸的一种新用途，即E-10-羟基-2-癸烯酸在防治化学肝损伤的药物中的应用。

E-10-羟基-2-癸烯酸作为药物，其形态没有特别限定，可以制成各种剂型，例如可以制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂或口服液等经口制剂。

本应用中的E-10-羟基-2-癸烯酸可以是人工合成或从蜂王浆中提取的E-10-羟基-2-癸烯酸，也可以直接使用蜂王浆或其冻干粉，或者采用加工蜂王浆过程中的含有10-HDA的过滤物。

各种制剂能够通过添加药理上可接受的通常使用的赋形剂、结合剂、润滑剂、崩解剂、表面活性剂、助流剂等而制备。赋形剂包括乳糖、果糖、葡萄糖、玉米淀粉、山梨糖醇、结晶纤维素等等；粘合剂包括甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯树胶、明胶、羟丙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮等等；润滑剂包括滑石粉、硬脂酸镁、聚乙二醇、氢化植物油等等；崩解剂包括淀粉、藻酸钠、明胶、碳酸钙、柠檬酸钙、糊精、碳酸镁等等；表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、大豆软磷脂、蔗糖脂肪酸酯、聚山梨酸酯80等等；助流剂包括轻质无水硅酸、干燥氢氧化铝凝胶、合成硅酸铝、硅酸镁等等；添加剂包括蜂蜜、糖浆、凡士林、甘油、乙醇、丙二醇、柠檬酸、氯化钠、磷酸钠等等；此外，还可以10-HDA为主料，并辅以维生素、氨基酸、微量元素等营养补充剂，从而增强10-HDA的药理和保健作用。

下面通过实验验证E-10-羟基-2-癸烯酸在治疗化学肝损伤方面的效果。

1、E-10-羟基-2-癸烯酸减轻急性肝损伤作用的实验：

选取25～30g的健康成年雌性小鼠(9月龄)数只，将实验鼠随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组，每组中雌性小鼠的个数为10～12个；各组均以14mL/kg 56度白酒灌胃造模，30分钟后，将E-10-羟基-2-癸烯酸溶解于0.1％DMSO(二甲基亚砜)中，并调整为100μg/ml、250μg/ml、500μg/ml的浓度，经口分别给予3个受试样品剂量组，模型对照组则给予同体积的0.1％DMSO溶剂。给药1小时后处死小鼠，取血，测MDA(丙二醛)、SOD(超氧化物歧化酶)和GSH-Px(还原型谷胱甘肽)，数据用SPSS处理，结果如下表1，其中，同行肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。

表1。

在急性酒精中毒期间，氧自由基大量生成，MDA含量升高，SOD、GPH-Px活性及含量明显下降。肝组织成为自由基氧化攻击的底物，因此亦成为氧化损伤的主要器官。

从表1的结果可以看出，受试样品剂量组与模型对照组的MDA、SOD差异极其显著(p＜0.01)，GPH-Px差异显著(p＜0.05)。由此可见，E-10-羟基-2-癸烯酸能够有效保护肝组织免受有害物质的损伤。

2、E-10-羟基-2-癸烯酸减轻慢性肝损伤作用的实验：

取成年雄性SD大鼠40只，适应性饲养3天后，随机分为4组(空白对照组、酒精模型组、低剂量组、高剂量组)，每组10只；空白对照组每天给予蒸馏水灌胃，喂饲基础饲料；其余三组大鼠按12ml/(kg.bw)剂量给予乙醇浓度为50％的水溶液(以无水乙醇用纯净水稀释制得)灌胃，其中酒精模型组大鼠喂饲基础饲料；低剂量组：喂饲基础饲料+E-10-羟基-2-癸烯酸(0.08g/千克饲料)；高剂量组：喂饲基础饲料+E-10-羟基-2-癸烯酸(0.25g每千克饲料)，喂饲3周。实验期末，大鼠空腹12小时，取血及肝脏，制备血清及10％肝匀浆，检测血清和肝组织中的谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等指标，并取肝组织作病理切片检查。数据统计分析见表2，其中，同列肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。

组别	ALT(U/L)	SOD(U/ml)	MDA(nmol/ml)
				对照组	34.62±5.56<sup>B</sup>	246.65±9.52<sup>b</sup>	3.52±0.91<sup>b</sup>
酒精模型组	49.21±6.12<sup>A</sup>	238.15±12.16<sup>A</sup>	4.38±1.45<sup>A</sup>
				低剂量组	39.35±5.06<sup>b</sup>	252.21±8.36<sup>b</sup>	3.25±1.61b<sup>b</sup>
高剂量组	33.72±5.45<sup>B</sup>	265.30±10.64<sup>B</sup>	2.47±1.19<sup>B</sup>

表2。

从表2的结果可以看出，E-10-羟基-2-癸烯酸对酒精性肝损伤大鼠具有明显的保护作用，能提高机体SOD活性，降低MDA的含量，从而减轻自由基引发的肝脂质过氧化损伤，组织病理结果显示，高、低剂量组以及对照组均未发现组织病变。也就是说E-10-羟基-2-癸烯酸能够有效保护肝组织免受有害物质的慢性损伤。

3、E-10-羟基-2-癸烯酸减轻刀豆蛋白引起肝损伤作用的实验：

取成年雄性小鼠(18-22克)40只，适应性饲养3天后，随机分为4组(空白对照组、模型组、低剂量组、高剂量组)，每组10只。将10-HDA溶解于0.1％DMSO(二甲基亚砜)中，并调整为100μg/ml和500μg/ml的浓度。每日经口灌胃给予低剂量组100μg/ml浓度的10-HDA溶液，给予高剂量组500μg/ml浓度的10-HDA溶液，空白对照组和模型组给予纯净水。模型组、低剂量组和高剂量组于实验第30天，一次尾静脉给予剂量为15～20mg/kg的刀豆蛋白A(ConA)10ml/(kg.bw)，禁食8小时后经腹腔注射60mg/(kg.bw)的戊巴比妥钠溶液麻醉，腹主动脉采血，并取肝组织，进行各项指标的检测及病理组织学检查。检验结果见表3，其中，同列肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。

组别	谷丙转氨酶(ALT，U/L)	谷草转氨酶(AST，U/L)
			对照组	35.02±5.24<sup>B</sup>	44.42±7.28<sup>B</sup>
模型组	48.92±6.35<sup>A</sup>	62.13±7.75<sup>A</sup>
			低剂量组	39.35±5.06<sup>b</sup>	43.82±8.08<sup>b</sup>
高剂量组	34.72±5.45<sup>B</sup>	39.75±5.32<sup>B</sup>

表3。

从表3的结果可以看出，E-10-羟基-2-癸烯酸能够抑制因ConA而引起的血清中谷丙转氨酶(ALT)、血清中谷草转氨酶(AST)的升高，且饲喂10-HDA的小鼠其肝脏病理组织学变化及肝细胞坏死程度均少于模型组小鼠。

通过以上实验可见，E-10-羟基-2-癸烯酸有较强的抗氧化、清除自由基等作用显著，具有明显的保肝护肝作用；另外，经过证实，E-10-羟基-2-癸烯酸急性经口LD50＞15.6g/kg，属于无毒物质，因此能够用于制备相关药物。此外，传统中药或中药提取物(如葛根、枸杞等)存在使用剂量大、成分复杂的问题，容易带来毒副作用，缺乏安全性；而E-10-羟基-2-癸烯酸则具有成分单一，效果显著，安全无毒的特性，是一种绿色高效的理想药物。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1：片剂。

将10-HDA(纯度≥99.0％)与蜂王浆冻干粉(10-HDA含量≥5.0％)按照1:3的比例混合，添加适量本技术领域公知的粘结剂和辅料，压制成片剂，每片300mg，王浆酸含量85mg。饮酒前服用2片，可以有效缓解因饮酒造成的肝损伤，也可用于治疗由药物引起的化学肝损伤。

实施例2：胶囊剂。

将10-HDA(纯度≥99.0％)粉碎过筛，采用本技术领域公知的方法灌装成胶囊，每粒200mg，每天服用1粒，可以有效降低血液中代谢产生的有毒物质(如ROS、MDA等)，提高SOD、GSH-Px浓度，起到保健身体防病治病的作用，且能够用于因酒精、药物等引起的化学肝损伤的治疗。

实施例3：保健酒。

将200g 10-HDA(纯度≥99.0％)加入到50升52度的白酒中，搅拌溶解，过滤，灌装成500ml/瓶，每天饮用50ml，可以起到保护肝脏的作用。

以上药剂的给药量可以根据药剂类型以及患者的年龄、性别、症状等等因素设计，通常成人每天能够接受王浆酸1～2000mg，优选为50～1000mg，最优选为150～500mg。

总之，本发明提出了10-HDA的一种新用途，通过实验可见10-HDA具有确实有效的生理活性，能够用于化学肝损伤的防治，具有成本低、效果好、用量少、无毒副作用等等优点，可以安全地应用于药物中。

Claims (2)

1.E-10-羟基-2-癸烯酸在制备防治化学肝损伤的药物中的应用，其特征在于，所述化学肝损伤是酒精引起的急性肝损伤、酒精引起的慢性肝损伤或刀豆蛋白引起的肝损伤；所述药物的有效成分仅为E-10-羟基-2-癸烯酸。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是：所述药物为片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂或口服液。