CN107177529A - 一株高效降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株高效降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌及其应用。所述植物内生菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Enb‑N菌株，该菌株于2017年5月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：60173。该菌株能利用邻苯二甲酸酯作为唯一碳源和能源进行生长繁殖，对DBP的降解率可达95%以上，可用于邻苯二甲酸酯污染物的治理，而且该菌株还具有分泌吲哚乙酸、解钾解磷的能力，对常见的几种抗生素具有一定的抗性，该菌株的生长对Cd、Hg离子的抗性较强，对环境的适应能力较强，具有较大的应用前景。

Description

一株高效降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域。更具体地，涉及一株高效降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌及其应用。
背景技术
邻苯二甲酸酯（Phthalic Acid Esters，PAEs）别名酞酸酯，在日常及工业上被广泛使用，有机化学上将邻苯二甲酸酯定义为一类化学物质，含有多种异构体，其中的邻苯二甲酸二丁酯（Dibutylphthalate，DBP）被广泛应用。PAEs一般为油状，微溶于水，易溶于有机溶剂，其对环境的危害主要为对于人和其他动物的致畸、致癌、致突变“三致”上，另外对藻类等低等生物亦有毒理作用，而DBP在水生环境中具有急性或者慢性毒性。PAEs作为增塑剂，在日常及工业上被广泛使用与塑料制品等产品，随着人类的使用，时间的推移，迁移至环境，进入水、大气、土壤等介质中，研究调查发现，我国各地土壤均受到了不同程度PAEs污染，尤其是工农业地区。在我国各流域中，部分源水都有检测出含有PAEs，而在长江流域多个采样点地点检出率为100%，且浓度较大，说明我国水域水体受PAEs污染较为严重，且污染面广。PAEs在环境中的水解、光解的速率非常缓慢，属于难降解物质，容易在环境和生物机体中富集，对环境和生物机体产生慢性毒害作用。目前，通过微生物降解环境中污染物质是环境工程中的一大方向，而且收效颇丰，研究证明微生物降解是廉价且高效的。
植物内生菌是指能够在植物细胞间隙或细胞内生存，且不对寄主植物产生生理毒害的微生物。在植物内生菌生物功能的研究中，除了其促进植物生长等功能外，还发现能将其应用于环境污染治理中。冯仁军等采用多种处理手段，从植物组织中均能提取出植物内生菌，一般称为可培养内生菌。有研究发现部分水生植物对污染水体的净化作用与植物内生菌有一定的关系。而刘劲松等研究植物内生菌修复重金属污染的功能发现，植物内生菌对植物吸收的重金属离子起生物毒性钝化等作用，这些都说明了将植物内生菌应用于环境污染修复的研究的可操作性与可实现性。在污染的环境中，植物中内生菌能够存活，很大程度说明其对污染物质有一定抵抗作用。这种抵抗作用是如何进行的，抵抗作用的大小尚待研究。
目前，国内外已有部分学者针对PAEs中的DBP筛选出具有良好降解性能的菌株，如乙酸钙不动杆菌（Calcium acetate Acinetobacter）、乳杆菌（Lactobacillus）、深红红球菌（Rhodococcusruber）、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、Elizabethkingiasp等。已有研究发现，植物内生菌有降解环境污染物的功能，但其对环境污染物的清除功能的大小，或者说其环保意义尚待深入研究。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一株可以高效降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌-枯草芽孢杆菌Enb-N菌株。该菌株具有分泌吲哚乙酸能力，具有解钾，解磷能力，对常见的几种抗生素和重金属均具有一定的抗性，能利用邻苯二甲酸酯作为唯一碳源和能源进行生长繁殖，其对DBP的降解率能达到95%以上。
本发明的目的是提供一株高效降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌。
本发明的另一目的是提供上述植物内生菌的应用。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
一株高效降解邻苯二甲酸酯的枯草芽孢杆菌Enb-N菌株，所述菌株于2017年5月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC NO：60173，分类命名号为Bacillus subtilis；保藏地址为中国广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
本发明所述菌株由韶关市一处污染水渠边的植物样品中分离、驯化并筛选得到。该菌株能在邻苯二甲酸酯作为唯一碳源和能源的培养基上生长繁殖。菌落呈规则圆形，在长成菌落初期，菌落呈半透明，光滑表面，培养24h后，表面变粗糙，呈白色，不透明状。接种后5～17小时为该菌的对数生长期。
而且该菌株具有分泌吲哚乙酸能力，具有解钾，解磷能力；对常见的几种抗生素具有一定的抗性，其中对利福平抗性较强，对庆大霉素抗性较弱；当氯霉素达到8ppm时，庆大霉素达到0.5ppm时可完全抑制生长；而盐酸四环素在16ppm时对菌株影响较明显，利福平在16ppm时开始对菌株出现影响；其24h生长量受重金属影响，Cu离子浓度达到75ppm时出现抑制生长状况，100ppm时完全抑制生长；Zn离子浓度达到30ppm时，其生长量受到明显抑制，达到75ppm时，几乎停止生长；Cd离子浓度达到16ppm时，抑制生长现象逐渐明显；Hg离子浓度达到20ppm时，抑制生长现象逐渐明显。根据重金属土壤环境质量标准判断，该菌株生长对Cd、Hg离子的抗性较强，而对Cu、Zn离子同样具有一定抗性。
进一步地，所述枯草芽孢杆菌Enb-N菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。
本发明的枯草芽孢杆菌Enb-N菌株悬浊液在含有PAEs的培养液中生长时，其对PAEs的最高降解效率可以达到95%以上。
因此，所述枯草芽孢杆菌Enb-N菌株在降解邻苯二甲酸酯中的应用，，以及在制备邻苯二甲酸酯降解制剂中的应用，均应在本发明保护范围内。
本发明还提供一种降解邻苯二甲酸酯的菌株悬浊液，包含所述枯草芽孢杆菌Enb-N菌株。
一种邻苯二甲酸酯的降解制剂，包含有枯草芽孢杆菌Enb-N菌株或其发酵液。
所述菌株悬浊液或降解制剂能够高效降解邻苯二甲酸酯，因此可将该菌株悬浊液或降解制剂应用于邻苯二甲酸酯污染物的治理。
优选地，所述应用的方法为：向邻苯二甲酸酯污染的待处理样本中加入上述菌株悬浊液或降解制剂进行处理。
优选地，待处理样本的pH调节为5.0～9.0（最优选6.0）。
优选地，应用的适宜温度为25～35℃（最优选30℃）。
优选地，应用的处理时间为5～7天（最优选5天）。
优选地，所述邻苯二甲酸酯污染的待处理样本与菌株悬浊液或降解制剂的体积比为40～60：1（最优选50：1）。
另外，优选地，由于本发明的枯草芽孢杆菌Enb-N菌株对重金属有一定的耐受性，因而适用于重金属和邻苯二甲酸酯双重污染的水体或土壤的治理。
进一步优选地，由于本发明的枯草芽孢杆菌Enb-N菌株对抗生素也有一定的抗性，因而适用于抗生素、重金属和邻苯二甲酸酯三重污染的水体或土壤的治理。
优选地，所述重金属为Cd、Hg、Cu、Zn离子，所述抗生素为利福平。
另外，优选地，上述述邻苯二甲酸酯为邻苯二甲酸二丁酯。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明所述枯草芽孢杆菌Enb-N菌株可高效降解邻苯二甲酸酯，能利用邻苯二甲酸酯作为唯一碳源和能源进行生长繁殖，其对DBP的降解率能达到95%以上；将该菌株用于邻苯二甲酸酯污染物的治理，具有较大的应用前景。
本发明筛选出能降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌，分析内生菌对邻苯二甲酸酯的降解效能，对污染物生物防治研究具有示范意义，为内生菌投入污染物生物治理工程中提供科学依据。
附图说明
图1为本发明枯草芽孢杆菌Enb-N菌株的电镜扫描图。
图2为本发明枯草芽孢杆菌Enb-N菌株的生长曲线图。
图3为培养时间对DBP的降解率的影响曲线图。
图4为培养温度对DBP的降解率的影响曲线图。
图5为培养液pH对DBP的降解率的影响曲线图。
图6为DBP起始浓度对DBP的降解率的影响曲线图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
下列实施例中用到的培养基配方如下所示：
LB培养基：胰蛋白胨10 g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L，蒸馏水1L；pH 7.2～7.4。
无机盐基础培养基：NaCl 1g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，NH4Cl 0.5g/L，MgSO4·7H2O0.4g/L，蒸馏水1L；pH7.2～7.4。
实施例1 枯草芽孢杆菌Enb-N菌株的分离鉴定
1、菌株的分离筛选
所述菌株由韶关一处污染水渠边的植物样品中分离、驯化并筛选得到，具体方法包括如下步骤：
（1）从污染水渠周边采集若干类植物样品，用于可培养植物内生菌的提取。
（2）将植物样品带回后洗净，并用蒸馏水冲洗之后沥干水滴，将植物样品地上地下部分剪断分开，并分别剪成细段，用浓度体积分数为75%的酒精浸泡1 min后移入无菌操作台，继续进行植物表面消毒，将浸泡后的样品转入新的灭菌的培养皿，倒入质量浓度为5%次氯酸钠溶液和30%的双氧水浸泡15分钟左右，最后用灭菌的蒸馏水冲洗植物样品若干次；收集最后一次冲洗后的蒸馏水，将其涂布在LB固体培养基上，培养24h后若没有长出菌落，表明植物表面消毒达到要求。
（3）将冲洗后的植物样品在无菌操作台上沥干水分后在灭菌的的研磨钵上研磨，加入适量灭菌的生理盐水搅拌后静置，将研磨液用生理盐水梯度稀释后，分别涂布于LB固体培养基，培养24h，将明显分辨的单株菌落分别进行提纯，进一步纯化培养。
（4）将纯化培养的菌株在培养后期分别转到以PAEs为唯一碳源的基础培养基（浓度为200，400，800ppm）中进行培养，从而筛选和驯化得到目标菌株；具体为：
S1.配置无机盐基础培养基，50 mL分装于150 mL锥形瓶中，封口后灭菌，待冷却至约40℃时，准确加入以丙酮为溶剂配成的DBP母液，使降解培养液中DBP浓度为50 ppm。
S2.待培养液冷却至室温，接种预先培养的菌株悬浊液1 mL，用透气隔菌封口膜封口，120 r/min，30℃条件下振荡培养培养5天。
S3.将培养后降解培养液倒入分液漏斗，用少量二氯甲烷冲洗三次，用50mL二氯甲烷分3次（20+15+15 mL）萃取降解液，萃取在250 mL分液漏斗中进行。（第一次为酸性萃取，加硫酸调pH至5.0左右，第二次加入适量NaCl去乳化后萃取，第三次只加入二氯甲烷做萃取），来回颠倒振荡数次，静置10 min后，待分层明显，收集下层有机相溶液。
S4.合并萃取液，采用旋转蒸发仪，50℃水温蒸发二氯甲烷至干，加25 mL二氯甲烷封口后于超声清洗锅中溶解，然后准确吸取1mL于10mL容量瓶中，用二氯甲烷定容。最后吸取1mL于进样瓶，盖盖子，并用封口膜封口，采用液相色谱-质谱联用仪测试DBP剩余量。初次实验得到一单株菌体，该菌株能在邻苯二甲酸酯作为唯一碳源和能源的培养基上生长繁殖，在本实施方式下其对DBP最高降解率达到99%，于是将该菌体保存于甘油管中，即为本发明菌体，其综合属性采用该保存菌体传代培养后进行。
2、菌株的形态学鉴定
上述菌株的菌落呈规则圆形，在长成菌落初期，菌落呈半透明，光滑表面，培养24h后，表面变粗糙，呈白色，不透明状。该菌株的电镜扫描图如图1所示。
3、菌株的分子鉴定
将上述筛选和驯化得到的菌株提取细菌基因组DNA，通过如下引物扩增其16S rDNA序列：
16SrDNA-F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3；
16SrDNA-R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'
取扩增产物进行电泳检测并将扩增产物送测序，其16SrDNA序列如SEQ ID NO：1所示；通过NCBI数据库进行BLAST比对，与数据库中已知的枯草芽孢杆菌的16S rDNA相似度在99%，因此推测分离得到的细菌为枯草芽孢杆菌；将该菌株并命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Enb-N菌株，并于2017年5月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），菌种保藏号为GDMCC NO：60173，分类命名号为Bacillus subtilis；保藏地址为中国广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
实施例2 枯草芽孢杆菌Enb-N菌株的生长曲线测定
由于细菌悬液的浓度与光密度（OD600值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，即采用比浊法测定，并将所测的OD600值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
（1）选用25mLLB液体培养基，接种本发明菌体培养的菌液，于30℃，120r/min条件下，在摇床上分别培养0、1、3、5、7、9、11、13、15、17、20、24、26、32h，用分光光度计在波长600nm下测量光度值，即为OD600值，绘制生长曲线图。
（2）该菌株的生长曲线如图2所示，可以看出，从接种到培养5小时内，该菌生长量基本不变，培养5小时后，菌体开始指数生长，约到17小时时生长趋势减缓，可推测5～17小时为该菌的对数生长期。
实施例3 枯草芽孢杆菌Enb-N菌株的生物特性
1、实验研究显示，Enb-N菌株具有分泌吲哚乙酸能力，可以促进植物内生菌所寄生的植物的生长发育等。
同时该菌株还具有解钾，解磷能力；因此可以把土壤中一些矿物态的P和K转化为游离态P和K，有利于微生物的生长繁殖。
2、实验研究显示，Enb-N菌株对常见的几种抗生素具有一定的抗性，其中对利福平抗性较强，对庆大霉素抗性较弱；当氯霉素达到8ppm时，庆大霉素达到0.5ppm时可完全抑制生长；而盐酸四环素在16ppm时对菌株影响较明显，利福平在16ppm时开始对菌株出现影响。
3、实验研究显示，Enb-N菌株的24h生长量受重金属影响，Cu离子浓度达到75ppm时出现抑制生长状况，100ppm时完全抑制生长；Zn离子浓度达到30ppm时，其生长量受到明显抑制，达到75ppm时，几乎停止生长；Cd离子浓度达到16ppm时，抑制生长现象逐渐明显；Hg离子浓度达到20ppm时，抑制生长现象逐渐明显。根据重金属土壤环境质量标准判断，该菌株生长对Cd、Hg离子的抗性较强，而对Cu、Zn离子也具有一定抗性。
实施例4时间、温度、培养液pH、降解液PAEs起始浓度对菌株降解效能的影响
1、培养时间对菌株降解效能的影响
（1）改变培养时间，分别以6 h、12 h、24 h、36 h、3天、5天作为梯度培养时间，PAEs起始浓度为50 ppm，培养液pH为7.0，120 r/min，30℃下振荡培养探究培养时间对降解效能的影响。
（2）结果如图3所示，降解培养12h后，降解率能达到80%；可见该菌株在较短时间内能达到较高的降解率，体现出其在工程应用上的高效性。降解培养5天后，与降解培养7天降解率相近，达到95%，基本完全降解。
2、培养温度对菌株降解效能的影响
（1）降解培养液pH7.0，PAEs起始浓度为50 ppm，120 r/min，温度分别为25℃，30℃、，35℃条件下振荡培养5天，探究培养温度对降解效能的影响。
（2）结果如图4所示，结果表明在25～35℃可视为其适应温度范围，其降解率均能达到94%以上；其最适温度为30℃，降解率达到95%以上。
3、培养液pH对菌株降解效能的影响
（1）降解培养液改变pH分别为5.0，6.0，7.0，8.0，9.0作为梯度，PAEs起始浓度为50ppm，120 r/min，30℃条件下振荡培养5天，探究pH对降解效能的影响。
（2）结果如图5所示，本发明菌体降解适应pH范围较广，在5.00～9.00范围内能达到或接近90%，最适pH为6.00。
4、降解液PAEs起始浓度对菌株降解效能的影响
（1）改变降解培养液PAEs的起始浓度，分别为25 ppm，50 ppm，100 ppm，200 ppm作为梯度，培养液pH为7.0，120 r/min，30 ℃条件振荡培养5天，探究PAEs起始浓度对降解效能的影响。
（2）结果如图6所示，当初始浓度为25ppm时也具有显著的降解率，仍高达85%以上；当初始浓度达到200ppm时，降解率仍高达90%以上。
综合考虑上述因素对菌株降解效率的影响，在降解液pH为5.5～9，25～35℃条件下培养5天左右，降解率能稳定地达到90%以上。
而在最适条件为：降解液pH为6.00，PAEs初始浓度为100ppm左右时，在28～33℃条件下培养5天左右，降解率能稳定地达到95%以上。
SEQUENCE LISTING
<110> 华南农业大学
<120> 一株高效降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌及其应用
<130> 2017
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1449
<212> DNA
<213> Bacillus subtilis Enb-N
<400> 1
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cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 960
cttgacatcc tctgacaatc ctagagatag gacgtcccct tcgggggcag agtgacaggt 1020
ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 1080
aacccttgat cttagttgcc agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa 1140
accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac 1200
gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg aaaccgcgag gttaagccaa tcccacaaat 1260
ctgttctcag ttcggatcgc agtctgcaac tcgactgcgt gaagctggaa tcgctagtaa 1320
tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 1380
ccacgagagt ttgtaacacc cgaagtcggt gaggtaacct tttaggagcc agccgccgaa 1440
ggggaacgt 1449

Claims (10)

1.一株高效降解邻苯二甲酸酯的枯草芽孢杆菌Enb-N菌株，其特征在于，所述菌株于2017年5月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号为GDMCC NO：60173。
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌Enb-N菌株，其特征在于，所述菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。
3.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌Enb-N菌株在降解邻苯二甲酸酯或制备邻苯二甲酸酯降解制剂中的应用。
4.一种降解邻苯二甲酸酯的菌株悬浊液，其特征在于，包含权利要求1所述枯草芽孢杆菌Enb-N菌株。
5.一种邻苯二甲酸酯的降解制剂，其特征在于，包含有权利要求1所述枯草芽孢杆菌Enb-N菌株或该菌株的发酵液。
6.权利要求4所述的菌株悬浊液或权利要求5所述降解制剂在治理邻苯二甲酸酯污染物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用的方法为：向邻苯二甲酸酯污染的待处理样本中加入权利要求4所述菌株悬浊液或权利要求5所述降解制剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述邻苯二甲酸酯污染的待处理样本与菌株悬浊液或降解制剂的体积比为40～60：1。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述待处理样本为重金属和邻苯二甲酸酯双重污染的水体或土壤，或抗生素、重金属和邻苯二甲酸酯三重污染的水体或土壤。
10.根据权利要求6～9任一项所述的应用，其特征在于，所述邻苯二甲酸酯为邻苯二甲酸二丁酯。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107523514A (zh) * 2017-07-17 2017-12-29 四川农业大学 一株有效吸附邻苯二甲酸单酯的产胞外多糖植物乳杆菌
CN109136134A (zh) * 2018-08-27 2019-01-04 华南农业大学 一种枯草芽孢杆菌中降解/利用邻苯二甲酸酯的相关基因蛋白的研究样本的制备方法
CN109666612A (zh) * 2019-01-28 2019-04-23 江苏省农业科学院 一株枯草芽孢杆菌及其在降解邻苯二甲酸二丁酯中的应用
CN112358038A (zh) * 2020-11-11 2021-02-12 四川农业大学 一种在mbr系统中包埋微生物强化降解dehp的方法
CN113617829A (zh) * 2021-08-01 2021-11-09 重庆工商大学 一种含重金属与废机油土壤的生物除油方法
CN114107092A (zh) * 2021-11-02 2022-03-01 暨南大学 一株降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌戈登氏菌l191及其应用
CN115058252A (zh) * 2022-01-17 2022-09-16 江苏省农业科学院 用于酞酸酯污染土壤修复的微生物土壤调理剂及其应用
CN115181700A (zh) * 2022-06-30 2022-10-14 广东药科大学 植物内菌生木糖氧化无色杆菌l451在降解有机污染物中的应用
CN117363664A (zh) * 2023-08-03 2024-01-09 长春师范大学 一种从牛筋草内生菌Bipolaris sp.提取邻苯二甲酸二丁酯的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103571771A (zh) * 2013-09-12 2014-02-12 四川农业大学 一株邻苯二甲酸酯高效降解芽孢杆菌的筛选鉴定及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103571771A (zh) * 2013-09-12 2014-02-12 四川农业大学 一株邻苯二甲酸酯高效降解芽孢杆菌的筛选鉴定及其应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YU-HONG HUANG ET AL.: "Biodegradation of di-butyl phthalate(DBP) by a novel endophytic bacterium Bacillus subtilis and its bioaugmentation for removing DBP from vegetation slurry", 《JOURNAL OF ENVIRONMENTAL MANAGEMENT》 *
刁治民等: "《农业微生物工程学》", 31 December 2007 *
包红旭主编: "《环境工程专业综合设计、研究性实验教程》", 30 November 2016 *
周骏等: "《应用生物技术降低烟草中特有N-亚硝胺》", 31 December 2016 *
杨青云主编: "《农药安全使用技术》", 30 September 2011, 中原农民出版社 *

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107523514A (zh) * 2017-07-17 2017-12-29 四川农业大学 一株有效吸附邻苯二甲酸单酯的产胞外多糖植物乳杆菌
CN107523514B (zh) * 2017-07-17 2022-10-14 四川农业大学 一株有效吸附邻苯二甲酸单酯的产胞外多糖植物乳杆菌
CN109136134A (zh) * 2018-08-27 2019-01-04 华南农业大学 一种枯草芽孢杆菌中降解/利用邻苯二甲酸酯的相关基因蛋白的研究样本的制备方法
CN109666612B (zh) * 2019-01-28 2022-06-21 江苏省农业科学院 一株枯草芽孢杆菌及其在降解邻苯二甲酸二丁酯中的应用
CN109666612A (zh) * 2019-01-28 2019-04-23 江苏省农业科学院 一株枯草芽孢杆菌及其在降解邻苯二甲酸二丁酯中的应用
CN112358038A (zh) * 2020-11-11 2021-02-12 四川农业大学 一种在mbr系统中包埋微生物强化降解dehp的方法
CN113617829A (zh) * 2021-08-01 2021-11-09 重庆工商大学 一种含重金属与废机油土壤的生物除油方法
CN114107092A (zh) * 2021-11-02 2022-03-01 暨南大学 一株降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌戈登氏菌l191及其应用
CN114107092B (zh) * 2021-11-02 2023-11-24 暨南大学 一株降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌戈登氏菌l191及其应用
CN115058252A (zh) * 2022-01-17 2022-09-16 江苏省农业科学院 用于酞酸酯污染土壤修复的微生物土壤调理剂及其应用
CN115058252B (zh) * 2022-01-17 2023-08-08 江苏省农业科学院 用于酞酸酯污染土壤修复的微生物土壤调理剂及其应用
CN115181700A (zh) * 2022-06-30 2022-10-14 广东药科大学 植物内菌生木糖氧化无色杆菌l451在降解有机污染物中的应用
CN115181700B (zh) * 2022-06-30 2024-04-02 广东药科大学 植物内菌生木糖氧化无色杆菌l451在降解有机污染物中的应用
CN117363664A (zh) * 2023-08-03 2024-01-09 长春师范大学 一种从牛筋草内生菌Bipolaris sp.提取邻苯二甲酸二丁酯的方法

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