CN107164553A - Reps1在制备儿童i型糖尿病诊断产品中的用途 - Google Patents

Reps1在制备儿童i型糖尿病诊断产品中的用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了REPS1基因可作为儿童I型糖尿病的诊断工具。本发明通过测序平台和QPCR研究获知，REPS1基因在儿童I型糖尿病患者的血液中含量比正常人显著降低，通过western blot实验证明REPS1蛋白在儿童I型糖尿病患者的血液中含量比正常人显著降低。因此REPS1基因和REPS1蛋白可以作为诊断儿童I型糖尿病的分子标志物。用血液中基因或蛋白的含量来表征儿童I型糖尿病具有以下优势：避免了组织取样检测，减轻了受试者的痛苦，同时该表征方法可用于健康人群的筛查，有效预防儿童I型糖尿病的发生。

Description

REPS1在制备儿童I型糖尿病诊断产品中的用途
技术领域
本发明涉及儿童I型糖尿病诊断、预测预后领域，更具体地，本发明涉及以检测REPS1异常为手段的儿童I型糖尿病诊断、预测预后方法。
背景技术
I型糖尿病(T1DM)为在遗传基础上由环境因素激发的、自身免疫介导的以胰腺β细胞受损为特征的自身免疫性疾病，是一种由于胰岛素缺乏或作用不足引起的能量代谢疾病。通常在儿童、少年、青年时期被诊断，发病风险最高的年龄段是10-14岁，青少年以后，发病率下降。儿童I型糖尿病以往多指小于15岁发生的糖尿病，由于WHO(世界卫生组织)已经儿童定义为0-18岁，因此儿童糖尿病应指小于18岁发生的糖尿病。儿童1型糖尿病的临床表现为多尿、多饮、多食及消瘦。儿童1型糖尿病比成人糖尿病重，起病较急，不易早期发现，胰岛β细胞的功能可出现明显下降甚至发展为衰竭，早期并发症即可出现，如糖尿病酮症甚至酸中毒，如处理不及时或不当，可能危及生命。I型糖尿病确切发病机制尚未完全阐明，目前认为是遗传、免疫和环境因素共同作用所致。
高通量测序技术(High-throughput sequencing)是指能够一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，每一次序列测定的读长一般较短的测序技术。高通量测序技术是对传统测序一次革命性变革，随着2005年罗氏的454测序仪及2006年Solexa测序仪出现后飞速发展，2009年左右高通量测序技术在国内兴起。高通量测序类型分为多种，基因芯片、基因深度测序(genomere-sequencing)、转录组深度测序(transcriptome re-sequencing又称RNA-Seq)等。
细胞的功能是从基因的表达开始的，转录组是指某一时间细胞内所有基因转录而来的RNA总称。通过高通量测序技术可获得基因表达的RNA水平有关信息，可以揭示基因表达与一些生命现象之间的内在联系。
高通量测序技术的快速发展和应用，为儿童I型糖尿病发病机理的研究提供了更加全面和快速的分析手段，也为儿童I型糖尿病的进一步治疗方案提供崭新思路。深入研究儿童I型糖尿病相关基因的调控机制，有助于了解儿童I型糖尿病的遗传分子机制，为寻找新的药物提供理论依据。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种通过检测REPS1基因或蛋白表达差异来诊断儿童I型糖尿病的方法。
本发明的目的之二在于提供一种通过检测REPS1基因或蛋白表达差异来预测儿童I型糖尿病预后的方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明提供了检测REPS1基因或REPS1蛋白的产品在制备儿童I型糖尿病诊断工具中的用途。
本发明还提供了检测REPS1基因或REPS1蛋白的产品在制备预测儿童I型糖尿病预后工具中的用途。
进一步，所述检测REPS1基因或REPS1蛋白的产品包括检测REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平的产品。所述产品包括能够结合REPS1基因的核酸或者能够结合REPS1蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测REPS1基因的表达水平；所述物质能够检测REPS1蛋白的表达水平。
本发明的检测REPS1基因的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。
包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。
进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(Amplification RefractoryMutation System，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。
上面所述的核酸包括扩增REPS1基因的引物，产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。
在本发明的具体实施方案中，所述核酸为QPCR实验中使用的扩增引物，所述引物的序列如SEQ ID NO.1(正向序列)和SEQ ID NO.2(反向序列)所示。
上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。
本发明的检测REPS1蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。
本发明的检测REPS1蛋白的产品包括特异性结合REPS1蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本发明的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本发明的检测REPS1蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。
抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的REPS1蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对REPS1蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。
标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(Dojindo Laboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)647标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；及DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗体标记试剂盒、Qdot(TM)抗体标记试剂盒(Invitrogen Corporation)和EZ-标记物蛋白质标记试剂盒(Funakoshi Corporation)。为了正确标记，可以使用适宜的仪器来检测经过标记的抗体或其片段。
预测预后是指预测患者状况的过程或结果，并不意味着能以100％的准确度预测患者状况的过程或结果。预测预后是指确定某些过程或结果的可能性是否增加，而并不意味着通过与某些过程或结果不发生的情况比较来确定发生某些过程或结果的可能性。如本发明而言，本发明中REPS1基因或REPS1蛋白的水平降低的患者中，与不显示该特征的患者相比，更有可能观察到特定过程或结果。
进一步，所述检测REPS1基因或REPS1蛋白的产品可以是检测REPS1基因或REPS1蛋白的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。
利用前面所述的检测产品检测儿童受试者样本中的REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平，与正常儿童相比，儿童受试者样本中的REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平降低，则诊断该儿童受试者为儿童I型糖尿病患者或该患有儿童I型糖尿病的儿童受试者的预后差。
作为依照本发明的检测产品的样本，可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样本不受特别限制，只要它适于本发明的测定；例如，它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。
在本发明的具体实施方案中，所述样本来自儿童受试者的血液。
本发明还提供了一种诊断儿童I型糖尿病的工具，所述工具能够检测儿童受试者样本中REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平。所述工具包括能够结合REPS1基因的核酸或者能够结合REPS1蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测REPS1基因的表达水平；所述物质能够检测REPS1蛋白的表达水平。
进一步，所述核酸和所述物质的性质同前面所述。
进一步，所述诊断儿童I型糖尿病的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断儿童I型糖尿病的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知REPS1基因的异常与儿童I型糖尿病相关也属于REPS1基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
本发明还提供了一种预测儿童I型糖尿病预后的工具，所述工具能够检测儿童受试者样本中REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平，所述预测儿童I型糖尿病预后工具包括能够结合REPS1基因的核酸或者能够结合REPS1蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测REPS1基因的mRNA水平；所述物质能够检测REPS1蛋白的表达水平。
进一步，所述核酸和所述物质的性质同前面所述。
进一步，所述预测儿童I型糖尿病预后的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知REPS1基因的异常与儿童I型糖尿病相关也属于REPS1基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
本发明的检测产品、诊断工具中使用的抗REPS1抗体或其片段所识别的氨基酸的数目没有特别限制，只要抗体能够结合REPS1即可。当抗体作为治疗药物时，优选的是它能够识别尽可能多的氨基酸，只要它能抑制REPS1功能。抗体或其片段识别的氨基酸的数目是至少一个，更优选至少三个。抗体的免疫球蛋白类别不受限制，可以是IgG、IgM、IgA、IgE、IgD或IgY。
本发明的检测产品、诊断工具中使用的抗REPS1抗体的其他性质同前面所述。
进一步，所述受试者样本可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样本不受特别限制，只要它适于本发明的测定；例如，它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。在本发明的具体实施方案中，所述样本来自受试者的血液。
本发明还提供了一种诊断儿童I型糖尿病或预测儿童I型糖尿病预后的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)获取儿童受试者的样品；
(2)检测儿童受试者样品中REPS1基因或蛋白的表达水平；
(3)将测得的REPS1基因或蛋白的表达水平与儿童受试者的患病与否关联起来。
(4)与正常儿童相比，REPS1基因或蛋白的表达水平降低，则该儿童受试者被诊断为儿童I型糖尿病，或判断患有儿童I型糖尿病的儿童受试者预后差。
在本发明的上下文中，“诊断儿童I型糖尿病”既包括判断儿童受试者是否已经患有儿童I型糖尿病、也包括判断儿童受试者是否存在患有儿童I型糖尿病的风险。
本发明的优点和有益效果：
本发明发现了一种诊断儿童I型糖尿病以及预测儿童I型糖尿病患者预后的分子标志物，使用该分子标志物可以在儿童I型糖尿病发生的早期即可作为判断，提高了患者的生存率。另外，通过预测患者的预后，本发明能够提供有意义的信息来为患者决定治疗方案策略。
附图说明
图1显示利用QPCR检测REPS1基因在儿童I型糖尿病患者和正常儿童中的表达差异；
图2显示利用免疫印迹检测REPS1基因在儿童I型糖尿病患者和正常儿童中的表达差异。
具体的实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1筛选儿童I型糖尿病患者和正常儿童中差异表达的基因
1、临床对象：内分泌科初次就诊的儿童I型糖尿病(按WHO 1999年糖尿病诊断标准)住院患者10例，其中男5例，女5例，年龄5-16岁；正常对照组8例，其中男3例，女5例皆为健康体检者，无糖尿病家族史，并排除内分泌疾患及其他慢性疾病，年龄5-16岁，与糖尿病患儿性别、年龄无统计学差异。本研究经医学伦理委员会备案并批准，入选患儿及健康对照儿童合法监护人均签署临床研究同意书。
2、血液总RNA提取
使用博凌科为TRIpure LS Reagent血液(血液样本)RNA抽提试剂进行血液总RNA的提取。
基本步骤：
(1)按照3:1的体积比例加入TRIpure LS reagent和血液振荡混匀；
(2)加入氯仿帮助有机相和水相分层；
(3)异丙醇沉淀RNA；
(4)漂洗RNA沉淀；
(5)RNase-free H2O重新溶解RNA沉淀。
3、RNA样品的质量分析
利用Nanodrop2000对所提RNA的浓度和纯度进行检测，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，Agilent2100测定RIN值。单次建库要求RNA总量5μg，浓度≥200ng/μL，OD260/280介于1.8～2.2之间。
3、高通量转录组测序
(1)RNA-seq读段定位
首先将低质量的读段去除得到清洁读段，然后利用TopHat v1.3.1将清洁片段与UCSC H.sapiens参考基因组(hg19)进行匹配，H.sapiens UCSC hg19版的预先构建的索引从TopHat主页下载，并作为参考基因组，利用TopHat与基因组匹配时，允许每个读段(默认到20)有多个匹配位点，最多2次错配。TopHat根据外显子区域和GT-AG剪切信号建立可能的剪切位点库，根据这些剪切位点库将没有定位到基因组的读段定位到基因组上。我们使用TopHat方法的系统默认参数。
(2)转录丰度评估
匹配上的读段文件通过Cufflinks v1.0.3处理，Cufflinks v1.0.3将RNA-seq片段数目进行标准化计算转录本的相对丰度。FPKM值指的是每一百万测序片段中匹配到特定基因1kb长的外显子区域的片段数目。通过贝叶斯推理方法计算FPKM估计值的置信区间。Cufflinks使用的参考的GTF注释文件从Ensembl数据库下载(Homo_sapiens.GRCh37.63.gtf)。
(3)差异表达基因的检测
将下载的Ensembl GTF文件和通过TopHat匹配的原始文件传输到Cuffdiff，Cuffdiff使用原始的匹配文件重新估算GTF文件中列出的转录本的表达丰度，检测差异表达。在Cuffidff输出中只有q值＜0.01，测试显示成功的比较才被认为是差异表达。
6、结果
RNA-seq结果显示，与正常儿童与儿童I型糖尿病患者血液中存在差异表达基因共443个，其中，在儿童I型糖尿病患者血液中表达上调的基因有251个，表达下调的基因是192个。
实施例2 QPCR实验验证儿童I型糖尿病患者和正常儿童中差异表达的基因
选择实施例1筛选出的REPS1基因进行大样本验证。
1、临床对象：内分泌科初次就诊的儿童I型糖尿病(按WHO 1999年糖尿病诊断标准)住院患者10例，其中男5例，女5例，年龄5-16岁；正常对照组8例，其中男3例，女5例皆为健康体检者，无糖尿病家族史，并排除内分泌疾患及其他慢性疾病，年龄5-16岁，与糖尿病患儿性别、年龄无统计学差异。本研究经医学伦理委员会备案并批准，入选患儿及健康对照儿童合法监护人均签署临床研究同意书。
2、血液总RNA提取
使用博凌科为TRIpure LS Reagent血液(血液样本)RNA抽提试剂进行血液总RNA的提取。
基本步骤：
(1)按照3:1的体积比例加入TRIpure LS reagent和血液振荡混匀；
(2)加入氯仿帮助有机相和水相分层；
(3)异丙醇沉淀RNA；
(4)漂洗RNA沉淀；
(5)RNase-free H2O重新溶解RNA沉淀。
3、逆转录
用逆转录缓冲液对lμg总RNA进行逆转录合成cDNA。采用25μl反应体系，每个样品取1μg总RNA作为模板RNA，在PCR管中分别加入以下组分：DEPC水，5×逆转录缓冲液，10mmol/L dNTP，0.1mmol/l DTT，30μmmol/l Oligo dT,200U/μl M-MLV，模板RNA。42℃孵育1h，72℃10min，短暂离心。
4、QPCR
采用25μl反应体系，每个样本设置3个平行管，所有扩增反应均重复三次以上以保证结果的可靠性。
配制以下反应体系：SYBR Green聚合酶链式反应体系 12.5μl，正向引物(5μM/μl)1μl，反向引物(5μM/μl)1μl，模板cDNA 2.0μl，无酶水8.5μl。
引物序列如下：
扩增REPS1基因的正向引物序列为5’-GCATCACAACCTTCTATT-3’(SEQ ID NO.1)，反向引物序列为5’-GCAATTCGCTATTCAATC-3’(SEQ ID NO.2)；
扩增GAPDH基因的正向引物序列为5’-TTTAACTCTGGTAAAGTGGATAT-3’(SEQ IDNO.3)，反向引物序列为5’-GGTGGAATCATATTGGAACA-3’(SEQ ID NO.4)。
扩增程序：95℃10min，(95℃5s，60℃60s)*45个循环。以SYBR
Green作为荧光标记物，在Light Cycler荧光实时定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。
5、结果
结果如图1所示，与正常儿童相比，儿童I型糖尿病患者血液中REPS1基因的mRNA水平显著下降，差异具有统计学意义(P<0.05)。
实施例3免疫印迹实验验证儿童I型糖尿病患者和正常儿童中差异表达基因的表达产物
1、临床对象：同实施例2。
2、单核细胞分离
儿童I型糖尿病患者和正常儿童取静脉血10ml，注入盛肝素的无菌小瓶中，加盖后立即轻轻摇匀。用无菌吸管加入等体积的HBSS(NaCl 8.0g，Na2HPO4 0.132g，KH2PO4 0.06g，KCl 0.4g，酚红1ml，NaHCO3 0.35g，D-葡萄糖1.0g，溶于1000ml双蒸水)，以降低红细胞的凝聚。吸取8ml淋巴细胞分层液置50ml离心管中，将稀释血液沿管壁缓慢加入，保持界面清楚，勿使两者相混，在20℃2 000r/min离心30min，小心吸取分层液与血浆交接部位混浊的灰白色层，即淋巴细胞层，加入另一支离心管中，用5倍体积的HBSS洗涤2次，依次以2 000r/min、1 500r/min在室温下离心10min，以便去除大部分混杂的血小板，用10ml双蒸水与细胞团块混合1min，使残余红细胞裂解，然后迅速加入等量1.8％NaCl溶液，2000r/min离心，去上清，经细胞计数后用HBSS溶液调整细胞至1×106个/ml备用。
3、单核细胞总蛋白质提取
将上述实验所得细胞悬液(浓度为1×106个/ml)室温1 000r/min离心10min，弃上清后加入100μl裂解缓冲液，4℃震荡1h，用超声波仪破碎细胞，每次10s，共10次，于4℃12000r/min离心1h；取上清用Brandford法定量蛋白，分装成2.5μg/μl，-80℃冰箱保存备用。
4、Western blot检测
细胞总蛋白用Brandford法定量，取适量与样品缓冲液混合煮沸5min，冷却5min；取30pg蛋白上样到制备好的15％聚丙烯酰胺凝胶，进行电泳，开始设为80V恒压，看见Marker后增加至120V；将电泳后的胶取出，使用Bio.Rad半干转印系统于100V转移50min；转膜完毕后，用1xPBS洗一次，浸入封闭液，40C过夜；倒掉封闭液，加入Western洗涤液洗涤5-10min，加入一抗摇床室温杂交2h；按照适当比例用Western二抗稀释液稀释于封闭缓冲液中，孵育60min；洗膜液洗3次，每次10min；使用ECL试剂显影、定影检测蛋白表达。
5、统计学处理
将蛋白条带的灰度值使用Image J软件进行分析，以β-actin为内参，将目的白条带的灰度值进行归一化处理。结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。
6、结果
结果如图2所示，与正常儿童相比，儿童I型糖尿病患者血液中REPS1蛋白含量降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 北京泱深生物信息技术有限公司
<120> REPS1在制备儿童I型糖尿病诊断产品中的用途
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gcatcacaac cttctatt 18
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gcaattcgct attcaatc 18
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
tttaactctg gtaaagtgga tat 23
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ggtggaatca tattggaaca 20

Claims (10)

1.检测REPS1基因或REPS1蛋白的产品在制备诊断儿童I型糖尿病预后的工具中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测REPS1基因或REPS1蛋白的产品包括检测REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平的产品。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用所述产品检测儿童受试者样本中的REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平，与正常儿童相比，儿童受试者样本中的REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平降低，则诊断该儿童受试者为儿童I型糖尿病或判断患有儿童I型糖尿病的儿童受试者的预后差。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述儿童受试者样本的来源是血液。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括能够结合REPS1基因的核酸或者能够结合REPS1蛋白的物质；所述核酸能够检测REPS1基因的表达水平；所述物质能够检测REPS1蛋白的表达水平。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述核酸是实时定量PCR中使用的特异扩增REPS1基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
7.一种诊断儿童I型糖尿病或预测儿童I型糖尿病预后的工具，其特征在于，所述工具包括能够检测儿童受试者样本中的REPS1基因或REPS1蛋白的表达水平的工具。
8.根据权利要求7所述的工具，其特征在于，所述工具包括能够结合REPS1基因的核酸或者能够结合REPS1蛋白的物质；所述核酸能够检测REPS1基因的表达水平；所述物质能够检测REPS1蛋白的表达水平。
9.根据权利要求8所述的工具，其特征在于，所述核酸是实时定量PCR中使用的特异扩增REPS1基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
10.根据权利要求7-9中任一项所述的工具，其特征在于，所述儿童受试者样本的来源是血液。
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