CN107164313A - 一种干细胞培养基及培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种干细胞培养基及培养方法，包括培养皿本体、MEF培养基，在培养皿本体上设有器皿槽，在器皿槽的上方设有上盖，在器皿槽的内部装有进行干细胞培养的MEF培养基，培养干细胞需要一个无菌的环境，在本实验中采用MEF培养基，MEF培养基中含有10％的FBS，含有1000μ/ml青霉素，1000g/ml链霉素，在MEF细胞冻存液中包含90％的MEF培养基与10％的DMSO，在进行干细胞培养的时候需要一个较为稳定的温度环境，本发明能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，培养基成分明确，品质稳定，使得培养的干细胞在移植后不容易产生人体排斥反应。

Description

一种干细胞培养基及培养方法
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域，具体为一种干细胞培养基及培养方法。
背景技术
体外扩增人全能干细胞的方法主要有两种：滋养层培养和无滋养层培养。一般在培养基中加入胎牛血清，用于支持细胞生长，执行细胞的功能(主要是物质传送，比如脂肪酸，金属离子转运等)。但血清非常昂贵，而且化学成分不确定，批次质量也存在很大的不稳定性，如果将全能干细胞用于人体再生医学中，培养MEFs的培养基中补加的胎牛血清会使hESC和hiPSC暴露于动物源细胞的风险之中，且死亡的MEFs的DNA
会进入上层全能干细胞中，造成基因污染。业界一直期望能够有一种无动物源性成分、化学成分确定的干细胞培养基。本发明旨在提供一种化学成分确定的干细胞培养基
以往、干细胞的培养使用含有血清的培养基进行。例如，胎牛血清(FBS)等作为对于细胞增殖重要的添加物在细胞培养中广泛使用。但是将培养后的干细胞以医疗目的使用时，异种来源成分有成为血液媒介病原菌的感染源或异种抗原的可能性。另外由血清的批间差而也有培养结果发生偏差的可能性。因此，近年，使用化学组成明了的培养基培养干细胞成为主流，进行无血清培养基的开发。
本发明与生物细菌培养技术有关，特别是关于一种干细胞培养基及培养方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，培养基成分明确，品质稳定，使得培养的干细胞在移植后不容易产生人体排斥反应的一种干细胞培养基及培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种干细胞培养基,包括培养皿本体和MEF培养基，所述培养皿本体上设有器皿槽，所述器皿槽的上方设有上盖，所述器皿槽的内部设有MEF培养基。
优选的，所述MEF培养基内包含10％的FBS、1000μ/ml青霉素1000g/ml链霉素，所述MEF培养基内还包含维生素和营养元素、含有脂肪酸负载量降低的白蛋白以及各种氨基酸。
优选的，所述维生素包括维生素B70.000005-0.000025g/L，维生素C0.002-0.004g/L，维生素B50.002-0.006g/L。
优选的，所述MEF培养基中的氨基酸包括非必须氨基酸0.1ml、谷氨酰胺2ml、丙酮酸钠1mL。
优选的，一种干细胞培养基的培养方法，包括以下步骤：
A、在37℃的水浴锅里快速融化一管氮冻存的胚胎成纤维细胞；
B、把融化好的细胞悬浮液加到装有几毫升预热好的MEF培养基的无菌离心管中，轻轻混匀后，1000g，5min离心收集细胞；
C、洗掉上清液中的DMSO，用10ml预热的MEF培养基重悬细胞后，把融加到一个10cm的细胞培养皿中，放入37℃，含有CO2的加湿培养箱中培养；
D、大约每4天进行一次的培养液的更换，细胞就可以基本长满整个培养皿。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，培养基成分明确，品质稳定，使得培养的干细胞在移植后不容易产生人体排斥反应。
附图说明
图1为本发明的培养皿本体整体结构示意图。
图中：1、培养皿本体；2、上盖；3、器皿槽；4、MEF培养基。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种干细胞培养基及培养方法,包括培养皿本体1、MEF培养基4，培养皿本体1上设有器皿槽3，器皿槽3的上方设有上盖2，器皿槽3的内部设有MEF培养基4。
MEF培养基4内包含10％的FBS、1000μ/ml青霉素1000g/ml链霉素，MEF培养基4内还包含维生素和营养元素、含有脂肪酸负载量降低的白蛋白以及各种氨基酸。
维生素包括维生素B70.000005-0.000025g/L，维生素C 0.002-0.004g/L，维生素B50.002-0.006g/L。
MEF培养基4在进行干细胞培养的时候温度控制在37℃,5％和95％湿度的培养条件，MEF培养基4中的氨基酸包括非必须氨基酸0.1ml、谷氨酰胺2ml、丙酮酸钠1mL。
一种干细胞培养基的培养方法，包括以下步骤：
A、在37℃的水浴锅里快速融化一管氮冻存的胚胎成纤维细胞；
B、把融化好的细胞悬浮液加到装有几毫升预热好的MEF培养基的无菌离心管中，轻轻混匀后，1000g，5min离心收集细胞；
C、洗掉上清液中的DMSO，用10ml预热的MEF培养基重悬细胞后，把融加到一个10cm的细胞培养皿中，放入37℃，含有CO2的加湿培养箱中培养；
D、大约每4天进行一次的培养液的更换，细胞就可以基本长满整个培养皿。
本发明能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，培养基成分明确，品质稳定，使得培养的干细胞在移植后不容易产生人体排斥反应。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (5)

1.一种干细胞培养基,包括培养皿本体(1)和MEF培养基(4)，其特征在于：所述培养皿本体(1)上设有器皿槽(3)，所述器皿槽(3)的上方设有上盖(2)，所述器皿槽(3)的内部设有MEF培养基(4)。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞培养基及培养方法，其特征在于：所述MEF培养基(4)内包含10％的FBS、1000μ/ml青霉素1000g/ml链霉素，所述MEF培养基(4)内还包含维生素和营养元素、含有脂肪酸负载量降低的白蛋白以及各种氨基酸。
3.根据权利要求2所述的一种干细胞培养基及培养方法，其特征在于：所述维生素包括维生素B7 0.000005-0.000025g/L，维生素C 0.002-0.004g/L，维生素B5 0.002-0.006g/L。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞培养基及培养方法，其特征在于：所述MEF培养基(4)中的氨基酸包括非必须氨基酸0.1ml、谷氨酰胺2ml、丙酮酸钠1mL。
5.实现权利要求1所述的一种干细胞培养基的培养方法，其特征在于：其培养方法包括以下步骤：
A、在37℃的水浴锅里快速融化一管氮冻存的胚胎成纤维细胞；
B、把融化好的细胞悬浮液加到装有几毫升预热好的MEF培养基的无菌离心管中，轻轻混匀后，1000g，5min离心收集细胞；
C、洗掉上清液中的DMSO，用10ml预热的MEF培养基重悬细胞后，把融加到一个10cm的细胞培养皿中，放入37℃，含有CO2的加湿培养箱中培养；
D、大约每4天进行一次的培养液的更换，细胞就可以基本长满整个培养皿。
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