CN107151659A - 一种流感病毒株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种流感病毒株，其保藏号为CGMCC No.13784。所述流感病毒株在野生型流感病毒株的M2基因编码区的第78nt后面插入了15nt的序列，如SEQ ID No.2所示。所述流感病毒株的M基因序列，如SEQ ID No.1所示。本发明还涉及上述流感病毒株在制备用于预防和/或治疗流感的疫苗中的应用。本发明的目的在于得到一种流感病毒株，并将其应用于疫苗的生产。

Description

一种流感病毒株及其应用

技术领域

本发明涉及病毒领域，具体涉及一种流感病毒株及其应用。

背景技术

流感病毒（influenza virus）的基因组由8个单链RNA片断组成，编码11种蛋白，属于正粘病毒科流感病毒属。流感病毒分为A、B、C 三型，A、B 两型为人群中流行的常见类型，并能引起世界性大流行，但 A 型流感病毒感染范围更广，危害更大。流感病毒的8个基因组片断按分子量由大到小顺序依次为PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS基因，这些基因片段编码的11种病毒蛋白中有8个是病毒结构蛋白（HA、NA、NP、M1、M2、PB1、PB2和 PA）； NS 基因编码的 NS1和 NS2为两个非结构蛋白；两种主要表面糖蛋白：血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）为流感病毒主要表面抗原。根据HA 和NA 的不同，A 型流感病毒又分为不同亚型，目前己鉴定出9种 NA 亚型和16种 HA 亚型。

流感病毒能够引起严重的呼吸道疾病，传染性很强，容易诱发其他严重并发症。已发生多次世界性大流行，给人类生命健康带来了极大危害。由于病毒表面蛋白HA和 NA 易发生变异，能够产生抗原漂移（antigenic drift）和抗原转换（antigenic shift）两种突变形式，尤其近年来在世界及中国出现的H1N1和H7N9等流感病毒突变株的爆发和流行在全球一体化背景下给疾病的防控带来了更多困难，随着交流越来越频繁，病毒发生重组或重配的频率也随之增加，对于新型突变株的预测也会更加困难，不仅给各国、各地区造成巨大经济损失，给人们健康和生命安全带来了极大威胁，更是加大了对疾病的防控难度。

接种疫苗是当前预防流感病毒大流行的最有效手段。现在广泛使用的流感疫苗设计主要针对病毒的HA和NA蛋白，以HA和NA作为靶抗原诱导机体产生免疫保护，目前已批准应用于人体的灭活病毒疫苗是由对人类危害较大的两种甲型流感病毒（H1N1和H3N2）和一种乙型流感病毒组成的三价灭活疫苗。虽然针对HA和NA设计的灭活全病毒疫苗安全性较高、抗原组分齐全、免疫原性强，能够抵抗同亚型流感病毒的攻击，提供良好的免疫保护。但当前疫苗在流感病毒流行和爆发期间的防治效果并不非常理想，一方面和病毒本身的特点具有重要的关系，同时疫苗设计方法、研发策略和保护效果等也有着直接的影响。首先流感病毒的HA和NA蛋白易发生抗原漂移或转变，新疫苗的生产要随着流行毒株的变异而及时更新，病毒疫苗株的选育费时费力，生产周期长、成本高，难以适应防控流感大流行的需要。其次灭活疫苗难以对病毒的感染产生完全充分的免疫保护，无法有效的刺激细胞免疫反应，因此选择疫苗设计的合适靶抗原、加快候选疫苗株的高效筛选及充分提高疫苗的免疫保护效果是当前流感疫苗研究中非常关键和急需解决的问题。

流感病毒疫苗靶抗原选择中，除了病毒表面HA和NA蛋白外，基质蛋白M也被众多学者广泛报道，M蛋白由病毒RNA节段7编码，含1027个核苷酸，包括非糖基化结构蛋白M1和M2。M1和M2编码区部分重叠，但具有不同的开放读码框架，M1蛋白由252个氨基酸编码，M2蛋白编码区包括核苷酸26～51和740～1007，编码97个氨基酸。M1形成二聚体，结合病毒RNA和囊膜，在病毒核衣壳组装时发挥作用。M1变异率低、具有型特异性，抗原的差异是病毒分型的依据之一。M2蛋白是流感病毒膜蛋白之一，甲型流感病毒包膜上低密度表达，在感染细胞胞膜上分布广泛。M2蛋白以同源四聚体形式存在内脂膜上，具有质子泵作用，通过控制质子通道活性调节病毒内的pH 值，影响流感病毒的复制。由于M2 蛋白是除HA、NA外的第三种跨膜蛋白，在人类A 型流感病毒中高度保守。M2蛋白作为具有交叉保护能力的“通用流感疫苗”（universal influenza vaccine）候选靶抗原，已成为目前流感病毒通用疫苗研究的热点。

疫苗保护效果的提高上，减毒活疫苗（live attenuated influenza vaccine，LAIV）能够刺激体液免疫和细胞免疫，是目前流感疫苗研究的热点和开发的主要方向之一。流感病毒减毒活疫苗与灭活疫苗相比有较多优势。减毒活疫苗的免疫途径与病毒自然感染相似，呼吸道复制能够诱导有效的黏膜免疫应答，产生大量分泌型lgA，诱导较强的细胞和体液免疫应答，有效控制病毒在呼吸道繁殖；可以通过滴鼻或喷鼻途径给药，非常方便，避免了注射途径带来的问题；经鼻免疫减毒疫苗所诱导细胞免疫及slgA抗体对不同亚型流感病毒具有一定的交叉保护作用。

减毒活疫苗传统的设计方法是在非生理条件下多次选择性突变的正向遗传学方法进行候选活疫苗筛选，仅能产生少量候选疫苗株。流感病毒冷适应减毒疫苗制备过程复杂耗时费力，技术要求高。当前利用反向遗传技术将6个来自冷适应病毒株的基因和2个来源于当年流行病毒株的HA和NA基因分别克隆到8个质粒中，共转染哺乳动物细胞，能够简化冷适应减毒活疫苗制备过程，加快疫苗开发。然而反向遗传技术仍不能进行减毒活疫苗候选株的大规模快速筛选，难以适应当前流感流行的防控需要。如果使用新的技术方法结合反向遗传操作加快并大规模进行候选疫苗株筛选，能够为当前流感病毒减毒活疫苗的设计提供新的研究方向，也能够为其他具有反向遗传操作平台的病毒的疫苗设计和开发提供参考。

发明内容

本发明的目的在于得到一种流感病毒株，并将其应用于疫苗的生产。

本发明采用如下技术方案：

一种流感病毒株，其保藏号为CGMCC No.13784。保藏日期为2017年2月21日。分类命名为：A型流感病毒。保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

其中，所述流感病毒株的M基因序列，如SEQ ID No.1所示。

其中，所述流感病毒株在野生型流感病毒株的M2基因编码区的第78nt后面插入了15nt的序列，如SEQ ID No.2所示。

上述流感病毒株在制备用于预防和/或治疗流感的药物中的应用。

特别的，所述的药物选自流感弱毒活疫苗、流感灭活疫苗、 流感多肽疫苗或流感基因工程疫苗。

一种流感疫苗，所述的疫苗中含有上述流感病毒株。

进一步的，所述疫苗为流感病毒弱毒活疫苗。

一种用于制备抗体、杂交瘤细胞或抗血清的方法，根据上述的流感病毒株、所述病毒株的裂解成份、所述病毒株的基因工程蛋白或所述病毒株的多肽为免疫原进行制备。

由上述制备方法得到的制备抗体、杂交瘤细胞或抗血清。

上述流感病毒株在制备流感诊断制剂中的应用。

进一步的，所述的诊断制剂包括抗原检测试剂盒、抗体检测试剂盒和核酸检测试剂盒。

进一步的，所述的抗原检测试剂盒中的抗原选自上述流感病毒株、上述流感病毒株的裂解成份、上述流感病毒株的基因工程蛋白或上述流感病毒株的多肽；所述抗体检测试剂盒中的抗体选自所述流感病毒株、所述流感病毒株的裂解成份、所述流感病毒株的基因工程蛋白或流感病毒株的多肽制备的单抗或多抗。

本发明的有益效果在于：所述流感病毒株安全稳定，能够给机体提供高效广谱的免疫保护。流感病毒株的进一步开发使用，不但能够克服传统流感灭活疫苗所面临的各种问题，而且其很多方面都优于目前市售的常规弱毒活疫苗。此外，流感病毒株的开发利用，也能为其他病毒弱毒活疫苗研制提供参考。

附图说明

图 1 野生型WSN病毒和W7-791突变型病毒M2蛋白核酸和蛋白序列比较。

图1中，(A) 核酸比较； (B) 蛋白质序列比较。

图2在M2蛋白晶体结构上标记W7-791插入位置。

图3病毒滴度测定。（用0.25 MOI的野生型 WSN病毒和W7-791病毒感染MDCK细胞来检测不同时间点的病毒滴度）。

图4 W7-791感染对MDCK细胞存活的影响。

图5 W7-791病毒免疫效果评价。

图5中，(A，C) 接种10⁶、10⁷或者10⁸ TCID50的W7-791或野生型WSN病毒后小鼠体重检测；(B，D) 接种后第四和第六天病毒滴度测定；(E) W7-791、WSN或PBS接种新生BALB/c小鼠后小鼠体重监测。

图6 W7-791单次免疫能够激活对致死剂量流感病毒感染的保护。

图6中，(A)小鼠免疫和病毒感染流程示意图；(B-C) 每组5只小鼠滴鼻免疫10⁵PFU的 W7-791或者同体积PBS，免疫一个月后接种4倍MLD50的 WSN病毒，在病毒感染后定时检测小鼠体重和存活状况；(D-E) 每组5只小鼠滴鼻免疫10⁵ PFU的 W7-791或者PBS，免疫一个月后接种4倍MLD50的PR8病毒，病毒感染后定时检测小鼠体重和存活状况。 *** 代表P-值< 0.001。

图7 W7-791单次免疫能够激活针对致死剂量异型流感感染的强大交叉保护作用。

图7中，(A-B) 6只小鼠被滴鼻免疫了 10⁶ pfu W7-791 或 PBS. 三个星期免疫以后，小鼠被接种2MLD50 Cam/H5。在标明的时间点检测小鼠体重和存活情况。 (C-D) 小鼠被滴鼻免疫 10⁵ pfu W7-791 (n=9) 或 PBS (n=6)免疫一个月以后，小鼠被接种2MLD50Vic/H3。在标明的时间点检测小鼠体重和存活情况。(E-F)新生小鼠被W7-791免疫三周以后接种WSN (10⁵ or 10⁶ TCID50) 和 HK68/H3 (10⁶ or 10⁷ TCID50)，观察小鼠体重变化。*** 代表P-值< 0.001。

图8 W7-791能够更好的保护小鼠被异型H3病毒感染。

图8中，C57BL/6小鼠被免疫了 10⁶ TCID50 FluMist (2016年) 或者 W7-791。 一个月以后，这些小鼠被感染2MLD50 HK68 H3N1。两图分别显示感染以后小鼠体重变化和存活情况。

图9 W7-791能够激活体液和细胞介导的免疫应答。

图9中，(A) 小鼠肺匀浆液中病毒滴度检测；(B) 免疫小鼠血清HAI活性检测；(C)免疫小鼠血清抗流感病毒抗体检测；(D) 微量中和实验测定W7-791免疫小鼠血清中的中和抗体滴度；(E-F)过继W7-791免疫小鼠的血清到未免疫小鼠体内，24小时后接种致死量的WSN和HK68/H3病毒，观察并记录各时间点小鼠存活率；(G-H)过继W7-791免疫小鼠的T细胞到未免疫小鼠体内，24小时后接种致死量的WSN 和 HK68/H3病毒，观察并记录各时间点小鼠的存活率。

图10 单次W7-791免疫能够在雪貂体内激抗活异型病毒保护作用。

图10中，(A) 滴鼻接种10⁶, 10⁷或 10⁸ TCID50 W7-791 或 PBS后观察雪貂体温变化。 (B) 雪貂感染W7-791 或 10⁶ TCID50 WSN后进行临床打分。 (C) HAI分析显示W7-791免疫过的雪貂提高了血清中抗W7-791抗体滴度。 (D) HAI分析 显示感染21天以后，血清中抗H1HA 或者 H3HA 抗体升高.免疫或者没有免疫过的雪貂接种10⁶ TCID50 WSN 或 HK68/H后，评价(E-F)病毒滴度和(G-H)临床打分。

具体实施方式

为了更加清楚明了的叙述，下文中，本发明的流感病毒株采用W7-791指代。

实施例1 W7-791的制备方法

Mu噬菌体转座子介导（transposon-mediated mutagenesis）的随机插入高密度突变技术是一种能够在DNA中随机性插入一段15bp（5’-NNNNNTGCGGCCGCA-3’，N代表靶序列DNA上5个重复碱基）的短核苷酸序列，从而产生高库容的基因插入突变体文库的方法。将其与病毒方向遗传学操作技术结合就能获得相应的病毒突变体文库，再结合PCR扩增、毛细管电泳、荧光标记DNA测序技术和片段长度多态性分析（AFLP）等技术就能够准确鉴定突变数量和插入位点。这一技术已被广泛用于各种病毒基因组功能及病毒与宿主相互作用的研究。

本发明以流感病毒（A/WSN/1933(H1N1)）基质蛋白M为靶基因通过Mu噬菌体转座子介导的随机插入技术建立了含M基因的高密度突变库（突变效率大于10⁵），并通过反向遗传操作技术获得了M基因高密度突变的流感病毒库。在此基础上综合应用体内筛选的方法和第二代测序技术从病毒突变体库中筛选到一株致弱性突变流感病毒株W7-791。在对W7-791的致病力及免疫保护性进行全面检测和评价后，发现W7-791是一株非常理想的流感病毒弱毒活疫苗毒株，具有能够用于流感病毒防治的候选疫苗毒株。

实施例2 W7-791的基本信息

W7-791是通过结合新兴第二代高通量测序技术和疫苗体内筛选技术，从病毒M基因被高频突变的流感病毒突变体库中筛选得到的流感弱毒活疫苗毒株。对病毒具体遗传物质（病毒基因组RNA）的分析显示，W7-791在其M2基因编码区的第78nt（指病毒基因组对应的cDNA）后面插入了GTCATTGCGGCCGCA这一15nt的序列（SEQ ID No.2）。对应到蛋白质水平，W7-791病毒M2蛋白的第26个氨基酸的后面插入了RHCGRI的肽段。从M2蛋白的整体结构来看，这段插入肽段是位于M2蛋白离子通道的胞浆段（如图1和图2所示）。

实施例3 W7-791在体外细胞培养中和小鼠体内的复制动力学

（1）W7-791在细胞培养中的复制

当我们用野生型WSN（WT-WSN）和W7-791以MOI为0.25感染MDCK细胞，然后在不同的时间点检测感染细胞上清中病毒的滴度，结果显示，W7-791的复制虽然要比WT-WSN要慢，但其在MDCK细胞中也表现出良好的复制能力，在复制的高峰点，W7-791能够达到与WT-WSN基本一致的病毒滴度（如图3所示）。

（2）W7-791在小鼠体内的复制

W7-791病毒虽然在感染小鼠后前六天能够在小鼠体内有效地复制，在肺脏能够检测到较高滴度的病毒，但是在感染后6-8天时则被机体清除，此时几乎检测不到这些病毒的存在。但在整个感染过程中小鼠不会出现任何流感相关症状。

实施例4 W7-791的安全性和遗传稳定性

良好的弱毒活疫苗需要具有绝对的安全性，而且其表型和基因型需要能够在代际之间稳定遗传。所以，我们对弱毒疫苗候选毒株W7-791进行了系统全面的安全性和遗传稳定性评价。（1）W7-791感染对细胞的毒性检测：我们检测了W7-791感染MDCK细胞在不同时间点的细胞活力，我们发现W7-791对细胞的毒性明显小于WT-WSN病毒（图4）；（2）弱毒疫苗遗传稳定性检测：为了确保疫苗不会发生回复突变，发生弱毒疫苗返祖的现象，我们将W7-791病毒在MDCK细胞和小鼠体内进行了一系列的传代，对从细胞或小鼠肺脏匀浆中获得病毒的基因序列特别是M基因的序列进行了测定，我们发现W7-791病毒M基因的突变能够被稳定地遗传下去，并不会发生插入突变的删除或回复突变的现象。而且随着传代次数的增多，W7-791病毒的滴度也逐渐降低。这说明W7-791病毒所具有的突变和表型能够稳定的遗传下去。（3）疫苗的安全性评估：用不同滴度的W7-791病毒免疫6-8周龄小鼠，甚至是当每只小鼠病毒接种量高达107TCID50，我们也没发现小鼠产生体重下降及流感症状。 与相比，10³ TCID50的野生型WSN病毒感染的小鼠则出现明显的流感症状并出现体重下降。W7-791感染小鼠6天病毒载量要比野生型WSN病毒及H3亚型病毒感染小鼠肺内病毒滴度低100倍（图5A，B，C，D）。如果观察感染后4天小鼠的肺脏，我们发现PBS组和W7-791感染小鼠的肺脏没有发生明显病变，而野生型WSN病毒感染的小鼠则呈现严重的肺组织损伤。为了进一步确认W7-791的安全性，我们给15日龄的新生BALB/c小鼠滴鼻接种不同量(10⁶, 10⁷ or 10⁸ TCID50)的W7-791或10⁴ TCID50 的野生型WSN病毒，小鼠体重和肺脏病变检测结果表明，W7-791接种小鼠上未观察到像野生型WSN病毒感染小鼠那样的体重下降和肺部病变（图5E）。这些结果都表明，我们筛选获得的流感病毒突变株W7-791 是只能在体外和体内呈限制性复制，对成年和新生小鼠都具有较高安全新的弱毒株。

实施例5 W7-791的免疫保护能力

（1）一次免疫能够有效保护小鼠抵御致死剂量同亚型流感病毒的感染

用W7-791免疫小鼠，在免疫后一月，用4倍MLD50的亲本野生型WSN病毒或同亚型的PR8病毒对小鼠进行感染。我们发现未免疫组小鼠在实验过程中体重严重下降并死亡，而W7-791免疫小鼠一直保持了正常的体重，而且也未表现出任何流感症状（如图6A-E）。这就说明一次免疫W7-791就能够有效保护小鼠抵抗致死剂量同亚型流感病毒的感染。

（2）一次免疫能够为小鼠提供交叉保护抵御不同亚型流感病毒的感染

由于流感病毒可以分为不同的亚型，各亚型病毒的之间缺乏交叉保护，传统的灭活疫苗需要根据不同时间段流行的不同亚型病毒进行不断的更新。所以我们进一步研究了W7-791能否为机体提供抗不同亚型流感病毒感染的交叉保护能力。为此，我们用先用10⁶ pfu剂量的 W7-791免疫BALB/c小鼠，在免疫后3周，用2 MLD50量的H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/Cambodia/P0322095/05(Cam/H5)对免疫组和对照组小鼠进行攻毒。结果显示，未免疫的小鼠表型出各种流感症状，体重严重下降并死亡；而免疫组小鼠未出现显著的体重下降，表现出对Cam/H5良好的抵御能力（图7A，B）。另外，我们也检测了W7-791对一株不同遗传谱系流感病毒A/Victoria/3/75 H3N2 (Vic/H3)的免疫保护作用，小鼠用10⁵ pfu 的W7-791免疫后4周用2 MLD50的Vic/H3进行感染。结果显示，W7-791免疫小鼠在攻毒后3-5天的时间段内体重只下降了约10%后逐渐恢复，而免疫对照组的小鼠都死亡（图7C，D）。另外，我们也检测了W7-791能否为新生小鼠提供交叉保护，从而抵御致死剂量的亲本WSN病毒或其他不同亚型致死剂量流感病毒的感染。用10⁶ TCID50 的W7-791病毒免疫15日龄的BALB/c小鼠，然后用致死剂量的WSN病毒(10⁵ or 10⁶ TCID50/mice)或A/Hong Kong/68 H3N1 (HK68/H3)(10⁶ or 10⁷ TCID50/mice)病毒对小鼠进行攻毒。与成年小鼠类似，所有被免疫的小鼠都得到了保护，并从体内清除了病毒（图7E，F）。

最后，我们比较了W7-791与商品化的在2015-2016期间推荐使用的流感病毒弱毒活疫苗FluMist®的免疫效果。FluMist®是由四种流感弱毒株组成，包括两个B型流感病毒弱毒株、一个H3N2(Switzerland/9715293/2013)和一个H1N1 (California/7/2009pandemic virus)弱毒株。用同样量的两种弱毒疫苗免疫小鼠并用同样量的HK68/H3病毒攻毒，结果显示，W7-791的免疫保护效果要优于FluMist®的免疫效果（图8）。从上述研究可以看出，W7-791的一次接种免疫，能够为机体提供非常有效的交叉免疫保护。

实施例6 W7-791能够同时激发有效的体液免疫和细胞免疫应答

通过流感病毒血凝抑制实验或病毒中和实验可以测定免疫小鼠血清中流感特异性抗体或病毒中和抗体。免疫小鼠抗体检测结果表明，W7-791免疫的小鼠只产生了WSN病毒特异性的抗体，而没有针对PR8病毒、HK68(H3N1)、Wis(H3N2)病毒的抗体（如图9A-C）。而将W7-791免疫小鼠的血清过继转移给未免疫小鼠，在用各种病毒对这些小鼠感染时，免疫小鼠血清除能提供部分针对WSN本身的保护了外，并不能保护其他病毒对小鼠的感染（图9D-F）。这就说明体液免疫并不是W7-791病毒株所提供免疫力的唯一来源。

将W7-791免疫小鼠的T淋巴细胞过继转移给未免疫小鼠，然后用不同的野生型流感病毒感染小鼠，观察所过继T淋巴细胞可能为小鼠所能提供的免疫力，从而确定T细胞免疫在疫苗保护中所发挥的作用。我们发现，当W7-791免疫小鼠的T细胞过继转移给未免疫小鼠后，能够使小鼠获得部分广谱的保护力，从而在一定程度上降低小鼠在受到各种流感病毒感染时的发病程度和疾病症状（图9D-F）。由此说明W7-791能有效诱导机体产生保护性T细胞免疫应答，这也符合流感病毒弱毒活疫苗免疫的特点。

实施例7 W7-791一次免疫能够有效保护雪貂免受不同流感病毒的感染

雪貂目前认为是更好的流感病毒感染模型。为了进一步研究和确认W7-791作为流感病毒弱毒活疫苗的有效性，我们测试了W7-791对雪貂的免疫保护作用。首先，为了评估W7-791对雪貂的感染和致病力，我们分别用10⁶, 10⁷ and 10⁸ TCID50的W7-791疫苗株病毒感染雪貂，然后观察病毒所引起的流感症状。我们发现，10⁸ TCID50剂量的W7-791并未导致雪貂出现体温升高和其他流感症状，这就说明W7-791对于雪貂有着与小鼠相同的安全性（图10A，B）。然后，我们检测了W7-791免疫雪貂体内的抗体水平，发现雪貂体内疫苗特异性抗体明显增加（图10C），但是血凝抑制实验结果表明，这些抗体只能结合WSN的HA，而不能结合HK68/H3 或 H5N1病毒的HA（图10D）。在雪貂用W7-791免疫后4周，我们分别用10⁶ TCID50的WSN、10⁶ TCID50的HK68/H3病毒进行攻毒，结果显示，与未免疫动物相比，用10³和104.7 TCID50的W7-791免疫的雪貂，攻毒后两天雪貂体内基本检测不到病毒(图10E-F)。而且免疫雪貂在攻毒后所表现出的流感相关症状也明显较轻(图 10 G-H)。

根据上述的实施例对本发明作了详细描述。需说明的是，以上的实施例仅为了举例说明发明而已。在不偏离本发明的精神和实质的前提下，本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 苏州系统医学研究所

<120> 一种流感病毒株及其应用

<130> 2017

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1027

<212> DNA

<213> A/WSN/1933

<400> 1

ctgcagccct agatattgga aagatgagtc ttctaaccga ggtcgaaacg tacgttctct 60

ctatcgtccc gtcaggcccc ctcaaagccg agatcgcaca gagacttgaa gatgtctttg 120

cagggaagaa caccgatctt gaggttctca tggaatggct aaagacaaga ccaatcctgt 180

cacctctgac taaggggatt ttaggatttg tgttcacgct caccgtgccc agtgagcggg 240

gactgcagcg tagacgcttt gtccaaaatg ctcttaatgg gaacggagat ccaaataaca 300

tggacaaagc agttaaactg tataggaagc ttaagaggga gataacattc catggggcca 360

aagaaatagc actcagttat tctgctggtg cacttgcctg ttgtatgggc ctcatataca 420

acaggatggg ggctgtgacc actgaagtgg catttggcct ggtatgcgca acctgtgaac 480

agattgctga ctcccagcat cggtctcata ggcaaatggt gacaacaacc aatccactaa 540

tcagacatga gaacagaatg gttctagcca gcactacagc taaggctatg gagcaaatgg 600

ctggatcgag tgagcaagca gcagaggcca tggatattgc tagtcaggcc aggcaaatgg 660

tgcaggcgat gagaaccgtt gggactcatc ctagctccag tgctggtcta aaagatgatc 720

ttcttgaaaa tttacaggcc tatcagaaac gaatgggggt gcagatgcaa cgattcaagt 780

gatcctctcg tcattgcggc cgcagtcatt gcagcaaata tcattggaat cttgcacttg 840

atattgtgga ttcttgatcg tctttttttc aaatgcattt atcgtcgctt taaatacggt 900

ttgaaaagag ggccttctac cgaaggagtg ccagagtcta tgagggaaga atatcgaaag 960

gaacagcaga gtgctgtgga tgttgacgat ggtcattttg tcaacataga gctggagtaa 1020

aaaacta 1027

<210> 2

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gtcattgcgg ccgca 15

Claims (10)

1.一种流感病毒株，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.13784。

2.根据权利要求1所述的一种流感病毒株，其特征在于，所述流感病毒株的M基因序列，如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的一种流感病毒株，其特征在于，所述流感病毒株在野生型流感病毒株的M2基因编码区的第78nt后面插入了15nt的序列，所述15nt的序列如SEQ ID No.2所示。

4.如权利要求1所述的流感病毒株在制备用于预防和/或治疗流感的疫苗中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的疫苗选自流感弱毒活疫苗、流感灭活疫苗、 流感多肽疫苗或流感基因工程疫苗。

6.一种流感疫苗，其特征在于，所述的疫苗中含有如权利要求1所述的流感病毒株。

7.根据权利要求6所述的一种流感疫苗，其特征在于，所述疫苗为流感病毒弱毒活疫苗。

8.一种用于制备抗体、杂交瘤细胞或抗血清的方法，其特征在于，根据权利要求1所述的流感病毒株、所述病毒株的裂解成份、所述病毒株的基因工程蛋白或所述病毒株的多肽为免疫原进行制备。

9.根据权利要求8所述的方法得到的制备抗体、杂交瘤细胞或抗血清。

10.如权利要求1所述的流感病毒株在制备流感诊断制剂中的应用。