CN107109313A - 用于麦芽制造的酶 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用于制备发芽的谷物的方法和组合物，提供了改进的发芽的谷物以及其用途，例如在食品和饮料生产中的用途。
Description
背景技术
麦芽制造是将大麦和其他谷物转化为麦芽的过程，该麦芽通常用于酿造、蒸馏或用于食品中。麦芽制造过程允许谷物部分发芽，使种子的资源可用。例如，对谷粒进行麦芽制造产生将谷粒淀粉改性成糖类所需的酶，以及将谷物中的蛋白质分解成可以被发酵宿主利用的形式的其他酶，例如蛋白酶。
在传统的麦芽制造过程中，麦芽制造过程在将谷粒干燥至水分含量低于14％时开始，然后储存约六周以克服种子休眠。当准备好时，通过在一段时间内(通常几天)在水中浸泡几次来提高谷物的水分含量，以便允许谷粒吸收水分并开始萌芽或发芽。当谷粒的水分含量为约46％时，将谷粒转移到允许谷粒发芽的发芽基底。此时的谷粒被称为“绿麦芽”。然后，将绿麦芽烘干成所希望的规格。
浸泡过程非常耗水。通常，为了生产1升麦芽，麦芽制造过程消耗5至10升的水。近年来，已经存在由于粮食需求增加、全球水资源短缺、改变多变因素等引起的能源和原材料价格急剧变化。因此，需要改进食品生产、酿造和蒸馏过程，这将降低成本，提高生产效率并减少所需的水量。
发明概述
本披露提供了用于制备发芽的谷物的组合物和过程。
在以下分别编号的段落中阐述了组合物和方法的多个方面和实施例。
1.一种生产发芽的谷物的方法，该方法包括：
a)提供包含一种或多种β-葡聚糖的谷物颗粒，
b)在麦芽制造期间向谷物中添加有效量的β-葡聚糖酶；并且
c)获得发芽的谷物。
2.如段落1所述的方法，其中谷物颗粒进一步包含一种或多种阿拉伯糖基木聚糖。
3.在如段落2所述的方法的一些实施例中，该方法进一步包括向谷物中添加有效量的木聚糖酶。
4.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，该方法包括浸泡步骤，该浸泡步骤包含一个或多个润湿阶段，其中在一个或多个润湿阶段期间，一次或多次添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
5.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的第一次润湿开始时添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
6.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的第一次润湿期间添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
7.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的第二次润湿开始时添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
8.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的第二次润湿期间添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
9.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的第三次润湿开始时添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
10.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的第三次润湿期间添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
11.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的所有润湿阶段开始时添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
12.在如段落4所述的方法的一些实施例中，在谷物的所有润湿阶段期间添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
13.在如段落4所述的方法的一些实施例中，一个或多个润湿阶段包括喷洒谷物，并且其中在喷洒期间，一次或多次添加或不断添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
14.在如段落4-13所述的方法的一些实施例中，在已经达到所希望的温度后添加β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶。
15.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，谷物达到在约40％至约50％W/W之间的水分含量。
16.在如段落15所述的方法的一些实施例中，在小于12小时内达到该水分含量。
17.在如段落15或16所述的方法的一些实施例中，用比不用β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶制备的发芽的谷物所用的水至少少10％的水达到该水分含量。
18.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，谷物具有1％-10％W/W的β-葡聚糖。
19.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，谷物具有1％-10％W/W的阿拉伯糖基木聚糖。
20.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，谷物中高分子量β-葡聚糖的量降低了至少50％。
21.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，谷物中高分子量β-葡聚糖的量降低了至少80％。
22.在如段落3-20所述的方法的一些实施例中，谷物中高分子量阿拉伯糖基木聚糖的量降低了至少50％。
23.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，谷物选自下组，该组由以下各项组成：大麦、小麦、黑麦、玉米、燕麦、水稻、粟、黑小麦、木薯、高粱及其组合。
24.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，以0.01mg-100mg酶蛋白质/千克谷物给予β-葡聚糖酶。
25.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，以1mg-15mg酶蛋白质/千克谷物给予β-葡聚糖酶。
26.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，以0.01mg-100mg酶蛋白质/千克谷物给予木聚糖酶。
27.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，以1mg-15mg酶蛋白质/千克谷物给予木聚糖酶。
28.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，β-葡聚糖酶是内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶。
29.在如段落28的方法所述的一些实施例中，内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶包含与选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、和SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16中的任一者具有至少80％同一性的氨基酸序列或其任何功能片段。
30.在如段落3-29所述的方法的一些实施例中，木聚糖酶是内切-1,4-β-木聚糖酶。
31.在如段落30所述的方法的一些实施例中，内切-1,4-β-木聚糖酶包含与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:17和SEQ ID NO:18中的任一者具有至少80％同一性的氨基酸序列或其任何功能片段。
32.在如段落3-31所述的方法的一些实施例中，β-葡聚糖酶和木聚糖酶具有与选自以下列表的各SEQ ID具有至少80％序列同一性的氨基酸序列或其任何功能片段，该列表由以下各项组成：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:10；SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:11；SEQ IDNO:4和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:11；SEQ IDNO:17和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:12；SEQID NO:2和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:12；SEQID NO:5和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:13；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:18和SEQID NO:13；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:3和SEQID NO:14；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:6和SEQID NO:14；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:16；SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:16；SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:16；以及SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:16。
33.在如段落3-31所述的方法的一些实施例中，β-葡聚糖酶和木聚糖酶具有与选自以下列表的各SEQ ID具有至少80％序列同一性的氨基酸序列或其任何功能片段，该列表由以下各项组成：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:8；以及SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:8。
34.在如段落3-33所述的方法的一些实施例中，将木聚糖酶和β-葡聚糖酶以1:1的重量比组合。
35.在如段落3-34所述的方法的一些实施例中，β-葡聚糖酶具有至少9000U/g的β-葡聚糖酶活性，并且木聚糖酶具有至少13000U/g的木聚糖酶活性。
36.在如段落3-31所述的方法的一些实施例中，β-葡聚糖酶和木聚糖酶包含具有木聚糖酶活性和/或β-葡聚糖酶活性的可商购的酶，该可商购的酶选自下组，该组由以下各项组成：UltraFlo L(可获得自诺维信公司(Novozymes)-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo XL(可获得自诺维信公司-具有木聚糖酶和α淀粉酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo Max(可获得自诺维信公司-β葡聚糖酶和木聚糖酶)、Finizyme 250L(可获得自诺维信公司-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)和Filtrase系列(可获得自DSM-β葡聚糖酶和木聚糖酶)。
37.在根据任何前述段落所述的方法的一些实施例中，进一步包括添加一种或多种选自下组的酶：淀粉酶、蛋白酶、在谷物中天然存在的酶及其组合。
38.在根据任何前述段落所述的方法的一些实施例中，总浸泡时间比不用β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶制备的发芽的谷物的时间少至少10％。
39.在根据任何前述段落所述的方法的一些实施例中，总浸泡时间不超过25小时。
40.在根据任何前述段落所述的方法的一些实施例中，总浸泡时间不超过12小时。
41.在根据任何前述段落所述的方法的一些实施例中，在浸泡过程期间使用的水的总量比不用β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶制备的发芽的谷物所用的水少至少10％。
42.在根据任何前述段落所述的方法的一些实施例中，发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量比不用β-葡聚糖酶制备的发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量少至少10％。
43.在如段落3-42所述的方法的一些实施例中，高分子量阿拉伯糖基木聚糖的量比不用木聚糖酶制备的发芽的谷物中的阿拉伯糖基木聚糖的量少至少10％。
44.在如段落3-42所述的方法的一些实施例中，高分子量β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖的量比不用β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶制备的发芽的谷物中的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖的量少至少50％。
45.在如段落2-43所述的方法的一些实施例中，在发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量为50mg/l或更小，并且发芽的谷物中的阿拉伯糖基木聚糖的量为2000mg/l或更小。
46.在如任何前述段落所述的方法的一些实施例中，从发芽的谷物制备的提取物比从不用β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶制备的发芽的谷物制备的提取物具有更低的粘度。
47.在根据任何前述段落所述的方法的一些实施例中，发芽的谷物具有增加的酶活性。
48.在如段落47所述的方法的一些实施例中，与不用β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶制备的发芽的谷物相比，酶活性增加了至少约2倍。
49.在如段落47或48所述的方法的一些实施例中，酶活性选自下组，该组由以下各项组成：β-葡聚糖酶活性、木聚糖酶活性、淀粉酶活性、蛋白酶活性、在谷物中天然存在的酶活性及其组合。
50.如段落47或48所述的方法，其中该酶活性是β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶活性。
附图简要说明
通过参考对说明性实施例进行阐述的以下详细说明，将获得对本发明的特征和优点的更好理解，在这些实施例中利用了本发明的原理，并且在这些附图中：
图1显示了麦芽制造过程的示意图。可以在该过程的一个或多个步骤期间一次或多次添加或不断添加本文描述的酶。
发明详细说明
本披露提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，例如在生产食品和饮料中使用。在一些实施例中，本发明提供了用于改进制备发芽的谷物(例如降低的水消耗和/或发芽时间)的方法和组合物。在一些实施例中，本发明提供了用于改进制备具有更高酶活性的发芽的谷物的方法和组合物。在一些实施例中，本发明提供了用于改进制备改善食品和饮料生产的过程的发芽的谷物以及可以改善所述获得的食品和饮料的性质的发芽的谷物的方法和组合物。
在一个方面中，本发明涉及用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括向麦芽制造过程中添加一种或多种酶。在一些实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中的某一点添加单独的或与其他酶组合的细胞壁降解酶。在一些实施例中，细胞壁降解酶是木聚糖酶或β-葡聚糖酶。在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中的某一点添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶。在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中的某一点添加单独的或与其他酶组合的木聚糖酶。在一些实施例中，其他酶是其他细胞壁降解酶。在一些实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶和木聚糖酶。可以用于本文所述的方法中的谷物的实例包括但不限于大麦、小麦、黑麦、玉米、燕麦、水稻、粟、黑小麦、木薯、高粱等。
用于生产食品和饮料(例如啤酒)的谷物(例如大麦、小麦、黑麦、玉米、燕麦、水稻、粟、黑小麦、木薯和高粱)含有不同水平的β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖。(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖由无支链和未经取代的(1,3)-β-葡糖基残基和(1,4)-β-葡糖基残基的链组成。(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖在谷物的细胞壁中最为丰富，特别是在谷粒的淀粉胚乳中，在胚乳中它们可以在大麦、黑麦和燕麦中的细胞壁占高达70％的重量。阿拉伯糖基木聚糖是在谷物颗粒的初生细胞壁和次生细胞壁两者中发现的半纤维素，由两种戊糖-阿拉伯糖和木糖的共聚物组成。阿拉伯糖部分可以进一步被取代。
研究表明，β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖在细胞壁中的含量可能与谷物(例如大麦)的谷粒硬度以及水分吸收有关。籽粒硬度是影响谷粒加工和产品质量的主要因素之一。谷物中的高β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖含量可能导致细胞壁的降解不充分，这反过来阻碍了发芽酶的扩散和籽粒储备的调动，从而减少麦芽提取物。进一步的研究已经表明，残留的β-葡聚糖可能导致高度粘稠的麦芽汁，从而引起过滤问题，并且它可能参与引起冷藏混浊。
不意图受任何理论的束缚，在一些实施例中，本发明提供了在麦芽制造过程中分解谷粒中的β葡聚糖和其他细胞壁组分(例如阿拉伯糖基木聚糖)的组合物和方法。通过在麦芽制造过程中分解谷粒中的β葡聚糖和其他细胞壁组分(例如阿拉伯糖基木聚糖)，本发明允许在麦芽制造过程中通过降低细胞中β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖的水结合能力来使用较少的水，并且同时允许谷粒更好更快地吸收水分。而且，通过分解谷粒中的β-葡聚糖和其他细胞壁组分(例如阿拉伯糖基木聚糖)，本发明允许一种或多种酶在谷物中更好地扩散，并且允许所述酶更好地接近底物。因此，在一些实施例中，本发明提供了减少麦芽制造期间(例如用于浸泡)所需的水量的组合物和方法。在一些实施例中，本发明提供了改善谷粒的水分吸水的组合物和方法。而且，在一些实施例中，本发明提供了减少浸泡所需的时间和使谷粒发芽所需的时间的组合物和方法。在一些实施例中，本发明提供了用于改进制备具有更高酶活性的发芽的谷物的方法和组合物。
在一些实施例中，发芽的谷物的制备过程包括以下步骤：包含一个或多个润湿阶段的浸泡步骤、发芽步骤、包含一种或多种温度的干燥步骤(例如烘干)、以及在该过程中一次或多次添加如本文所述的一种或多种酶。在一些实施例中，在浸泡过程的一个或多个润湿阶段中添加相同或不同的一种或多种酶。
本发明进一步提供了用于改进制备具有更高酶活性(例如β-葡聚糖酶和木聚糖酶活性)的发芽的谷物的组合物和方法，该发芽的谷物然后可以改善用于食品和饮料生产的下游过程(例如在麦芽汁和啤酒生产中更容易和更有效地处理麦芽)。因此，在一些实施例中，本发明提供了适用于生产食品和饮料产品的酶，例如在酒精或非酒精饮料，如基于麦芽的饮料像啤酒或威士忌酒、麦芽奶昔、麦芽醋、风味饮料(例如Malta、Horlicks、Ovaltine和Milo)的生产中，以及在糖果例如麦提莎(Maltesers)和Whoppers、和一些烘焙食品例如麦芽面包、百吉饼和丰富的茶饼干的生产中。发芽的谷物的改进的性质包括例如改善的最适温度、对可溶性(WE-AX)至不溶性(WU-AX)阿拉伯糖基木聚糖底物的改善的活性比例、在酿造过程的麦芽浆分离和/或过滤步骤期间建立的总压力降低、以及经酶处理的材料的可过滤性增加。
如本文所使用的，术语“饮料”和“饮料产品”包括诸如以下的形成泡沫的发酵饮料：用100％麦芽酿造的啤酒、在不同类型的条规下酿造的啤酒、浓啤酒、干啤酒、薄啤酒、低度啤酒、低醇啤酒、低卡路里啤酒、波特啤酒、博克啤酒、烈性黑啤酒、麦芽酒、无醇啤酒、无醇麦芽酒等。术语“饮料”或“饮料产品”还包括不起泡啤酒和替代性的麦芽饮料，例如水果风味的麦芽饮料，例如柑橘风味的(例如柠檬风味的、橙子风味的、酸橙风味的或浆果风味的)麦芽饮料，酒风味的麦芽饮料(例如伏特加酒风味的、朗姆酒风味的或龙舌兰酒风味的麦芽酒)，或咖啡风味的麦芽饮料(例如咖啡因风味的麦芽酒)等等。
啤酒传统上被称为来源于麦芽(例如来源于大麦谷粒的麦芽)和任选地辅料(例如含淀粉的植物材料(例如谷物颗粒))和任选地调味的(例如用啤酒花调味的)的酒精饮料。在本发明的上下文中，术语“啤酒”包括通过发酵/酿造含淀粉的植物材料生产的任何发酵麦芽汁，因此特别是从麦芽生产的啤酒和从麦芽和辅料的任何组合生产的啤酒。可以通过基本上相同的方法从各种含淀粉的植物材料制成啤酒，其中淀粉主要由葡萄糖均聚物组成，其中葡萄糖残基通过α-1,4-键或α-1,6-键连接，前者占主导地位。
如本文所使用的，术语“发芽(germination或germinate)”或任何其他等价物意指种子生长的开始或恢复。依照本文所述的方法，发芽在谷物浸泡期间和/或之后开始发生。谷物的发芽通常被理解为表示种子的水合、谷物的膨胀和胚胎的诱导生长。影响发芽的环境因素包括水分、温度和氧气水平。根茎细胞的迅速增加导致根发育，而相应的生长发出芽。
如本文所使用的，术语“浸泡”是指谷物的润湿。润湿可以包括经有效提供麦芽制造过程所需的水分含量(例如在约20％和约60％(以重量计)之间、或在40％至约50％之间)的一段时间和温度下的一个或多个阶段。润湿还可以包括在麦芽制造过程中(例如，在发芽步骤期间)对谷物持续喷洒或在一个或多个阶段喷洒。
除非另外限定，否则在此使用的所有技术术语和科学术语均具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。本文中所引用的所有专利和公开物均通过引用并入。
酶
在一个方面中，本发明涉及用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括向麦芽制造过程中添加一种或多种酶。在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶和木聚糖酶。
在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶。
在一些实施例中，用于本文所述的方法和组合物的酶可以具有纤维素分解活性。纤维素的系统名称是(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖。将4-葡聚糖水解酶和纤维素分解酶或纤维素酶分类在EC 3.2.1.4中。纤维素酶内切水解(1 4)-β-D-糖苷键(在例如纤维素和地衣多糖中)、β-D-葡聚糖，并且还能水解β-D-葡聚糖中的1,4-键(也含有1,3-键)。纤维素酶还具有其他名称，例如内切-1,4-β-D-葡聚糖酶、β-1,4-葡聚糖酶、β-1,4-内切葡聚糖水解酶、纤维素酶A、纤维素酶(cellulosin)AP、内切葡聚糖酶D、碱性纤维素、纤维素酶A 3、纤维素糊精酶、9.5纤维素酶、微晶纤维素酶、pancellase SS和1,4-(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶。
在本发明的一个方面中，根据本发明的酶组合物的纤维素酶活性可以通过如本文所述的纤维素酶活性测定法或通过本领域已知的任何可行方法进行测量。
在另外的方面中，本发明涉及具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶，其可以通过本文所述的测定法或通过本领域已知的任何可行方法来确定。
如本文所使用的，“β-葡聚糖酶”或“β-葡聚糖酶”是指EC 3.2.1.6的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶。β-葡聚糖酶催化β-D-葡聚糖中的(l→3)-或(l→4)-键的内切水解。单独使用的或与根据本发明的一种或多种细胞壁降解酶(例如，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶)组合使用的合适的β-葡聚糖酶包括在WO 2004087889、WO 2005059084、W0 9414953、WO2007056321、W0 9531533、WO 08023060、WO 2005100582、WO 9828410、WO 9742301、WO2006066582、WO 05118769、WO 2005003319和WO 10059424中披露的任何一种β葡聚糖酶。
通常，标准测定法在pH 5.0下进行，然而，对于另外的特征和规格的酶测定法可以在不同pH值下进行。
将一个单位的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性定义为在测定条件(例如，pH 5.0(或按照说明)和50℃)下产生1μmol葡萄糖当量/分钟的酶的量。
在一些实施例中，用于本文所述的方法和组合物的酶包括至少约10000U/g、例如至少约12000U/g、例如至少约14000U/g、例如至少约15000U/g、例如至少约18000U/g的β-葡聚糖酶活性，如通过本文所述的测定法或通过本领域已知的任何可行方法测量的。在一些实施例中，取决于谷物中的β-葡聚糖含量和/或麦芽制造条件和/或发芽的谷物要求，使用不同的β-葡聚糖酶活性。
在另外的方面中，用于本文所述的方法和组合物的酶具有昆布多糖酶活性或包含任何一种或多种具有昆布多糖酶活性的另外的酶。昆布多糖酶活性可以如在本文昆布多糖酶(laminarase)测定法中所述或通过本领域已知的任何可行方法来确定。
昆布多糖酶可以是在E.C.3.2.1.6中分类的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶或在E.C.3.2.1.39中分类的内切-1,3-β-D-葡糖苷酶。内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶具有替代性名称昆布多糖酶、内切-1,3-β-葡聚糖酶。内切-1,4-β-葡聚糖酶分类为E.C.3.2.1.6。底物包括昆布多糖、地衣多糖和谷物D-葡聚糖。当还原基团参与待水解的键的葡萄糖残基本身在C-3处被取代时，该酶催化β-D-葡聚糖中的(l→3)-键或(l→4)-键的内切水解。将具有替代性名称(l→3)-β-葡聚糖内切水解酶、内切-1,3-β-葡聚糖酶和昆布多糖酶的葡聚糖内切-1,3-β-D-葡糖苷酶分类于E.C.3.2.1.39中。葡聚糖内切-1,3-β-D-葡糖苷酶在底物(像例如昆布多糖、裸藻淀粉和茯苓聚糖)中的(l→3)-β-D-葡聚糖中水解(l→3)-β-D-糖苷键。
在一些方面中，用于本文所述的方法和组合物的酶具有木葡聚糖特异性外切-β-1,4-葡聚糖酶活性，或包含具有木葡聚糖特异性外切-β-1,4-葡聚糖酶活性的另外的酶，“木葡聚糖特异性外切-β-1,4-葡聚糖酶”是指E.C 3.2.1.155的酶。木葡聚糖特异性外切-β-1,4-葡聚糖酶催化木葡聚糖中的(l→4)-β-D-糖苷键的外切水解。
在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶。在一些实施例中，其他酶是细胞壁降解酶。在一些实施例中，细胞壁降解酶是木聚糖酶。因此，在一些实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶和木聚糖酶。
在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中添加单独的或与其他酶组合的木聚糖酶。在一些实施例中，其他酶是细胞壁降解酶。
木聚糖酶分类在EC 3.2.1.8、EC 3.2.1.32、EC 3.2.1.136和EC 3.2.1.156中；它们的活性可以例如如本文中所述或通过本领域已知的任何合适的方法进行测量。待与根据本发明的展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶组合使用的合适木聚糖酶包括分类于EC3.2.1.8、EC 3.2.1.32、EC 3.2.1.136和EC 3.2.1.156中的任何木聚糖酶，例如在WO2010072226、WO 2010072225、WO 2010072224、WO 2005059084、WO 2007056321、WO2008023060A、W0 9421785、WO 2006114095、WO 2006066582、US 2008233175和WO 10059424中披露的任何一种。
内切-1,4-β木聚糖酶被分类为EC 3.2.1.8。该酶引起木聚糖中1,4-β-D-木糖苷键的内切水解。
如本文所使用的，术语“家族11木聚糖酶”、“糖苷水解酶(GH)家族11”或简单地“GH11木聚糖酶”是指分类为EC 3.2.1.8的内切-1,4-β木聚糖酶，其引起木聚糖中的1,4-β-D-木糖苷键的内切水解，并且其根据以下文献被分类为家族11木聚糖酶：B.Henrissat，Aclassification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequencesimilarities[基于氨基酸序列相似性对糖基水解酶进行分类]，Biochem.J.[生物化学杂志]，280(1991)，第309-316页。
术语“家族10木聚糖酶”、“糖苷水解酶(GH)家族10”或简单地“GH 10木聚糖酶”包括具有许多已知活性的酶，例如木聚糖酶(EC:3.2.1.8)；内切-1,3-β-木聚糖酶(EC:3.2.1.32)；纤维二糖水解酶(EC:3.2.1.91)。这些酶以前称为纤维素酶家族F。
在一些实施例中，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶是家族11木聚糖酶。在一些实施例中，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶是家族10木聚糖酶。
在一些实施例中，展示木聚糖酶活性的酶是家族5木聚糖酶。术语“家族5木聚糖酶”(以前的家族A)包括具有不同活性的糖苷水解酶，包括：内切糖基神经酰胺酶(EC3.2.1.123)、纤维素酶(EC 3.2.1.4)、地衣多糖酶(licheninase)(EC 3.2.1.73)、β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.25)、葡聚糖1,3-b葡糖苷酶(EC 3.2.1.58)、葡聚糖内切-1,6-β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.75)、甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.58)、纤维素1,4-β-纤维二糖糖苷酶(EC 3.2.1.91)、内切-1,6-β-半乳聚糖酶(EC 3.2.1.-)、1,3-甘露聚糖酶(EC3.2.1.-)和内切-1,4-β-木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。
在一个方面中，根据本发明的酶组合物具有内切-1,4-β-木聚糖酶活性，如通过本文所述的测定法或本领域已知的任何合适的测定法测量的。
用于测量木聚糖酶活性的测定法可以在pH 3.5或pH 5以及50℃下使用木聚糖作为底物进行，或对于另外的特征和规格的酶可以在不同的pH和温度下进行。可以从每单位时间由木糖引起的在540nm处吸光度增加来计算酶活性。
在一些实施例中，根据本发明的酶组合物包括至少约5000U/g、例如至少约6000U/g、例如至少约7000U/g、例如至少约8000U/g、例如至少约8500U/g的木聚糖酶活性，如通过本文所述的测定法或本领域已知的任何合适的测定法测量的。在一些实施例中，例如取决于谷物中的阿拉伯糖基木聚糖含量和/或麦芽制造条件和/或发芽的谷物的要求，使用不同的β-木聚糖酶活性。
在一些方面，根据本发明的酶组合物具有阿拉伯聚糖酶活性或者包含另一具有阿拉伯聚糖酶活性的酶。将阿拉伯聚糖酶分类为EC 3.2.1.99。系统名称是5-α-L-阿拉伯聚糖5-α-L-阿拉伯聚糖水解酶，但是它具有其他几个名称，例如阿拉伯聚糖内切-1,5-α-L-阿拉伯糖苷酶、以及内切-1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶、内切-α-1,5-阿拉伯糖酶、内切-阿拉伯糖酶、1,5-α-L-阿拉伯聚糖和1,5-α-L-阿拉伯聚糖水解酶。阿拉伯糖酶内切水解(l→5)-阿拉伯聚糖中的(l→5)-α-阿拉伯呋喃糖苷键。阿拉伯聚糖酶也作用于阿拉伯聚糖。
在本发明的一个方面中，根据本发明的酶组合物的阿拉伯糖酶活性通过本文的阿拉伯糖酶测定法或本领域已知的任何合适的方法进行测量。测定法可以在pH 3.5以及50℃下使用甜菜阿拉伯聚糖作为底物进行，并且对于另外的特征和规格的酶可以在不同的pH和温度下进行。可以从每单位时间在540nm处吸光度增加来计算酶活性。
将一个单位的阿拉伯糖酶活性定义为在使用的测定法的条件下(例如，pH 3.5和50℃)给出吸光度增加的酶量(相对于总测定体积进行归一化)。
在一些方面中，根据本发明的酶组合物具有β-D-葡糖苷葡糖水解酶活性或者包含另外的具有β-D-葡糖苷葡糖水解酶活性的酶。β-D-葡糖苷葡糖水解酶指Ε.C 3.2.1.21的酶。
在一些方面中，根据本发明的酶组合物具有β-木糖苷酶活性或包含另外的具有β-木糖苷酶活性的酶。“β-木糖苷酶”或“木聚糖1,4-β-木糖苷酶”是指E.C 3.2.1.37的酶。β-木糖苷酶催化(l→4)-β-D-木聚糖的水解，以便从非还原末端除去连续的D-木糖残基。
在本发明的一些方面，根据本发明的酶组合物具有纤维二糖水解酶活性或者包含另外的具有纤维二糖水解酶活性的酶。“纤维二糖水解酶”或“纤维素1,4-β-纤维二糖糖苷酶”是指EC 3.2.1.91的酶。纤维素1,4-β-纤维二糖糖苷酶催化纤维素和纤维四糖中的1,4-β-D-糖苷键的水解，从链的非还原末端释放纤维二糖。
根据本发明的酶组合物的纤维二糖水解酶活性通过如本文所述的纤维二糖水解酶测定法或本领域已知的任何合适的测定法来测量。通常，标准测定法在pH 5.0下进行，并且对于另外的特征和规格的酶测定法可以在不同pH值下进行。
将一个单位的纤维二糖水解酶活性定义为在测定条件(例如，pH 5.0(或按照说明)和50℃)下每分钟从对硝基苯基b-D-纤维二糖吡喃糖苷产生1μmol对硝基苯酚的酶量。
在一些方面中，根据本发明的酶组合物具有α-N-阿拉伯呋喃糖苷酶活性或包含另外的具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的酶。“α-N-阿拉伯呋喃糖苷酶”或“α-N-阿拉伯呋喃糖苷酶”是指EC 3.2.1.55的酶。α-N-阿拉伯呋喃糖苷酶催化α-L-阿拉伯糖苷中的末端非还原性α-L-阿拉伯呋喃糖苷残基的水解。
在本发明的一个方面中，根据本发明的酶组合物的阿拉伯呋喃糖苷酶活性通过如本文所述的阿拉伯呋喃糖苷酶测定法或通过本领域已知的任何合适的测定法进行测量。标准测定可以在pH 5.0和50℃下进行，并且对于另外特征和规格的酶其可以在不同的pH值和温度下进行。
将一个单位的α-N-阿拉伯呋喃糖苷酶活性定义为在测定条件(例如，pH 5.0和50℃(或按照说明))下每分钟从对硝基苯基α-L-阿拉伯呋喃糖苷产生1μmol对硝基苯酚的酶量。
在一些方面中，根据本发明的酶组合物具有葡聚糖1,4-β葡糖苷酶活性或包含另外的具有葡聚糖1,4-β-葡糖苷酶活性的酶。“葡聚糖1,4-β-葡糖苷酶”或“葡聚糖1,4-β-葡糖苷酶”是指E.C 3.2.1.74的酶。葡聚糖1,4-β-葡糖苷酶催化(1→4)-β-D-葡聚糖中的(1→4)-键的水解，以除去连续的葡萄糖单元。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供改进的麦芽制造过程。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合在浸泡过程期间提供水消耗的降低。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合在浸泡过程期间提供改善的和/或更快的谷粒的水吸收。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合在浸泡过程期间提供浸泡所需时间的减少。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供引起谷粒发芽所需时间的减少。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供具有增加酶活性(例如木聚糖酶活性和/或β-葡聚糖酶活性)的发芽的谷物。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供一种或多种谷物酶的更好的扩散和所述酶的更好的底物接近性。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供具有降低量的高分子量β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖的发芽的谷物。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供具有更低粘度的发芽的谷物。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供具有较低的异味形成(例如与阿拉伯糖基木聚糖分解有关的异味形成)潜力的发芽的谷物。
在一些实施例中，一种或多种展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶和/或一种或多种展示β-葡聚糖酶活性的酶单独或组合提供具有更好过滤性(例如麦芽汁分离和啤酒过滤)的发芽的谷物。
本发明的一个方面涉及展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶，该酶包含与选自SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:17和SEQ ID NO:18中的任一者具有至少80％同一性的氨基酸序列或其任何功能片段。
本文所用的“功能片段”指酶的截短形式，其与非截短的参比酶具有实质上相同的酶活性或至少显著程度的酶活性。
本发明的另一个方面涉及展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶，该酶包含与选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、和SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16中的任一者具有至少80％同一性的氨基酸序列或其任何功能片段。
在一些实施例中，酶具有在5℃-80℃范围内的最适温度，例如在5℃-40℃或15℃-80℃的范围内、例如在20℃-80℃的范围内，例如在5℃-15℃、15℃-20℃、45℃-65℃、50℃-65℃、55℃-65℃或60℃-80℃的范围内。
在一些实施例中，该酶与选自SEQ ID NO:1-18的任何一个氨基酸序列或其任何功能片段具有至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在一些实施例中，该酶的氨基酸总数小于350、例如小于340、例如小于330、例如小于320、例如小于310、例如小于300个氨基酸，例如在200至350个氨基酸的范围内，例如在220至345个氨基酸的范围内。
在一些实施例中，该酶的氨基酸序列与选自SEQ ID NO:1-18的任一个氨基酸序列或其任何功能片段相比具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸取代。
在一些实施例中，该酶的氨基酸序列与选自SEQ ID NO:1-18的任一个氨基酸序列或其任何功能片段相比具有最多一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸取代。
在一些实施例中，该酶包含通过SEQ ID NO:1-18中任一个所鉴定的氨基酸序列或其任何功能片段。
在一些实施例中，该酶由通过SEQ ID NO:1-18中任一个所鉴定的氨基酸序列或其任何功能片段组成。
本发明的另外的重要方面涉及包含与本文所述的任何一种或多种β-葡聚糖酶组合的展示内切-1,4-对-木聚糖酶活性的酶的组合物和方法。
本发明的另外的重要方面涉及包含与本文所述的任何一种或多种木聚糖酶组合的展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶的组合物和方法。在一些实施例中，该一种或多种木聚糖酶是根据SEQ ID NO:17和/或SEQ ID NO:18的酶或其任何功能片段。
在一些实施例中，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶与展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶的组合根据下表进行：
应当理解的是，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶与展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶的上述组合中的任一种可能以这两种酶之间的1:10、2:10、3:10、4:10、5:10、6:10、7:10、8:10、9:10、10:10、10:9、10:8、10:7、10:6、10:5、10:4、10:3、10:2、或10:1，例如在1:10-10:1的范围内，例如2:10-10:2、例如3:10-10:3、例如4:10-10:4、例如5:10-10:5、例如6:10-10:6、例如7:10-10:7、例如8:10-10:8，或在9:10-10:9内的比例进行组合。应当理解的是，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶与展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶的上述组合中的任一种可能以这两种酶之间的1:1的比例进行组合。
在一些实施例中，根据本发明的组合物包含至少两种酶的组合，所述两种酶或与选自以下列表的各SEQ ID具有至少80％序列同一性的氨基酸序列或其任何功能片段的两种酶，该列表由以下各项组成：SEQ ID NO 1和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 2和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 3和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 4和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 5和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 6和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 17和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 18和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO 1和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 2和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 3和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 4和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 5和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 6和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 17和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 18和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO 1和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 2和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 3和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 4和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 17和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 18和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO 1和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO 2和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO 3和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO 4和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO 5和SEQ IDNO:10；SEQ ID NO 6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO 17和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO 18和SEQID NO:10；SEQ ID NO 1和SEQ ID NO:ll；SEQ ID NO 2和SEQ ID NO:ll；SEQ ID NO:3和SEQID N0:11；SEQ ID N0:4和SEQ ID N0:11；SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:11；SEQ ID N0:6和SEQID N0:11；SEQ ID N0:17和SEQ ID N0:11；SEQ ID N0:18和SEQ ID N0:11；SEQ ID N0:1和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:2和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:3和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:4和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:6和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:17和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:18和SEQ ID N0:12；SEQ ID N0:1和SEQ ID N0:13；SEQ IDN0:2和SEQ ID N0:13；SEQ ID N0:3和SEQ ID N0:13；SEQ ID N0:4和SEQ ID N0:13；SEQ IDNO:和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:13；SEQ IDNO:18和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:l和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:14；SEQID NO:3和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:14；SEQID NO:6和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:l和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:15；SEQ ID N0:3和SEQ ID NO:15；SEQ ID N0:4和SEQ ID N0:15；SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:15；SEQ ID N0:6和SEQ IDN0:15；SEQ ID N0:17和SEQ ID N0:15；SEQ ID N0:18和SEQ ID N0:15；SEQ ID N0:1和SEQID N0:16；SEQ ID NO:2和SEQ ID N0:16；SEQ ID N0:3和SEQ ID N0:16；SEQ ID N0:4和SEQID N0:16；SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:16；SEQ ID N0:6和SEQ ID N0:16；SEQ ID N0:17和SEQ ID N0:16；以及SEQ ID N0:18和SEQ ID N0:16。
在一些实施例中，该方法包括具有SEQ ID NO:1的木聚糖酶活性的酶和展示SEQID NO:7的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶。在一些实施例中，该方法包括具有SEQ IDNO:2的木聚糖酶活性的酶和展示SEQ ID NO:8的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶。在一些实施例中，该方法包括具有SEQ ID NO:2的木聚糖酶活性的酶和展示SEQ ID NO:8的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶。在一些实施例中，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶与展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶的上述组合中的任一种可能以这两种酶之间的1:1(以重量计)的比例进行组合。在一些实施例中，上述组合中的任一种包含展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性具有最低活性为9000U/g的的酶和展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性具有最低活性为13000U/g的酶。
在一些实施例中，根据本发明的组合物和方法包括使用具有木聚糖酶活性和/或β-葡聚糖酶活性的任何合适的可商购的酶，例如：UltraFlo L(可获得自诺维信公司(Novozymes)-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo XL(可获得自诺维信公司-具有木聚糖酶和α淀粉酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo Max(可获得自诺维信公司-β葡聚糖酶和木聚糖酶)、Finizyme 250L(可获得自诺维信公司-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)、Filtrase系列(可获得自DSM-β葡聚糖酶和木聚糖酶)。
在一些实施例中，内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性和内切-1,4-β-木聚糖酶活性来源于至少两种不同的酶。在一些实施例中，两种不同的酶来自两种不同的物种。
在一些实施方案中，根据本发明的组合物包含任何一种或者多种另外的酶。在一些实施例中，该一种或多种另外的酶选自以下列表，该列表由以下各项组成：分类于EC3.2.1.32、EC 3.2.1.136或EC 3.2.1.156中的木聚糖酶、纤维素酶、昆布多糖酶、内切-1,5-a-L-阿拉伯聚糖酶、β-D-葡萄糖苷葡糖水解酶、β-木糖苷酶、纤维二糖水解酶、葡聚糖1,4-β-葡糖苷酶、木葡聚糖特异性外切β-1,4-葡聚糖酶和α-阿拉伯呋喃糖苷酶。
由本文所述的序列所示并且根据本发明单独使用或者与其他酶或化合物组合使用的序列和酶，可以有或者没有信号肽。
方法
在一个方面中，本发明涉及用于制备发芽的谷物的方法，该方法包括向麦芽制造过程中添加一种或多种酶。在一些实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的方法，该方法包括在麦芽制造过程中的某一点添加单独的或与其他酶组合的细胞壁降解酶。在一些实施例中，细胞壁降解酶是木聚糖酶或β-葡聚糖酶。在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的方法，该方法包括在麦芽制造过程中的某一点添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶。在一个实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中的某一点添加单独的或与其他酶组合的木聚糖酶。在一些实施例中，其他酶是其他细胞壁降解酶。在一些实施例中，本发明提供了用于制备发芽的谷物的组合物和方法，包括在麦芽制造过程中添加单独的或与其他酶组合的β-葡聚糖酶和木聚糖酶。
在一些实施例中，本发明提供用于发芽的谷物的制备过程的方法，该方法包括以下步骤：包含一个或多个润湿阶段的浸泡步骤、发芽步骤、包含一种或多种温度的干燥步骤(例如烘干)、以及在该过程中一次或多次添加如本文所述的一种或多种酶。在一些实施例中，在浸泡过程的一个或多个润湿阶段添加相同或不同的一种或多种酶。在一些实施例中，浸泡步骤和/或发芽步骤涉及喷洒谷物，并且在该过程期间一次或多次添加如本文所述的一种或多种酶。在一些实施例中，在喷洒谷物期间不断添加如本文所述的一种或多种酶。
在一些实施例中，根据本文所述的方法有待发芽的谷物选自下组，该组由以下各项组成：大麦、小麦、黑麦、玉米、燕麦、水稻、粟、黑小麦、木薯、高粱及其组合。
可以在麦芽制造过程之前或期间引入本文所述的一种或多种酶(例如β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶)。例如，可以在谷物的浸泡之前或之后的各个麦芽制造阶段期间引入本文所述的一种或多种酶(例如β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶)。在一些实施例中，本文所述的一种或多种酶在麦芽制造过程的最后阶段或麦芽制造过程完成之后添加，以进一步增加麦芽的酶活性。
在一些实施例中，发芽的谷物的制备过程包括浸泡步骤，该浸泡步骤包含一个或多个润湿阶段，其中在一个或多个润湿阶段期间一次或多次添加如本文所述的一种或多种酶。在一些实施例中，在浸泡过程的一个或多个润湿阶段期间一次或多次添加相同或不同的酶。在一些实施例中，一个或多个润湿阶段涉及喷洒谷物，其中在喷雾期间一次或多次添加或不断添加如本文所述的一种或多种酶。
取决于麦芽制造过程的条件、谷物的类型(例如，谷粒中的β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖含量)、最终发芽的产品的所希望的规格(例如粘度、β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖含量以及最终麦芽产品中的最终酶活性等)和正在使用的一种或多种酶的类型，一种或多种本文所述的酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)的浓度可以变化。通常使用约0.01mg-100mg酶蛋白质/千克谷物/克空气干燥谷物。在一些实施例中，使用约0.1mg/kg-50mg/kg、或约1mg/kg-15mg/kg或约10mg/kg-100mg/kg。在一些实施例中，使用约3.75mg/kg、或约5mg/kg、或约6.25mg/kg；或约7.5mg/kg；或约10mg/kg或约12.5mg/kg。在一些实施例中，使用约10U/kg-1000U/kg。在一些实施例中，使用约10U/kg-100U/kg、或约30U/kg-100U/kg、或约50U/kg-100U/kg。在一些实施例中，使用约100U/kg-1000U/kg。
在一些实施例中，该方法包括选自下组的具有木聚糖酶活性的酶或其任何功能片段，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18。在一些实施例中，该方法包括选自下组的展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶或其任何功能片段，该组由以下各项组成：SEQID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、和SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16。在一些实施例中，该方法包括展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶与展示木聚糖酶活性的酶组合，各自独立地选自上述的组。在一些实施例中，该方法包括具有SEQ ID NO:1的木聚糖酶活性的酶和展示SEQ ID NO:7的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶。在一些实施例中，该方法包括具有SEQ ID NO:2的木聚糖酶活性的酶和展示SEQ ID NO:8的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶。在一些实施例中，该方法包括具有SEQ ID NO:2的木聚糖酶活性的酶和展示SEQ ID NO:8的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶。在一些实施例中，展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性的酶与展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的酶的上述组合中的任一种可能以这两种酶之间的1:1(以重量计)的比例进行组合。在一些实施例中，上述组合中的任一种包含展示内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性具有最低活性为9000U/g的的酶和展示内切-1,4-β-木聚糖酶活性具有最低活性为13000U/g的酶。
在一些实施例中，根据本发明的组合物和方法包括使用具有木聚糖酶活性和/或β-葡聚糖酶活性的任何合适的可商购的酶，例如：UltraFlo L(可获得自诺维信公司(Novozymes)-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo XL(可获得自诺维信公司-具有木聚糖酶和α淀粉酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo Max(可获得自诺维信公司-β葡聚糖酶和木聚糖酶)、Finizyme 250L(可获得自诺维信公司-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)、Filtrase系列(可获得自DSM-β葡聚糖酶和木聚糖酶)。
在一些实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间将本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶)以有效浓度进行组合，并且在一定温度(例如至少约5℃且不超过约30℃，优选在约10℃至约20℃之间的温度)下将该组合保持一段时间以水解谷粒中至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖。在一些实施例中，将本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)组合以水解谷物中至少50％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖。在一些实施例中，将本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)组合以水解谷物中至少60％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖。在一些实施例中，将本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)组合以水解谷物中至少70％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖。在一些实施例中，将本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)组合以水解谷物中至少80％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖。
在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少10％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少50％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少60％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少70％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少80％的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖被分解。
在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％的β-葡聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少10％的β-葡聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少50％的β-葡聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少60％的β-葡聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少80％的β-葡聚糖被分解。
在一些实施例中，谷粒中的β-葡聚糖被分解，这样使得发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的浓度小于150mg/l、或小于100mg/l或小于90mg/l、或小于80mg/l、或小于70mg/l、或小于60mg/l、或小于50mg/l。在一些实施例中，谷粒中的β-葡聚糖被分解，这样使得发芽的谷物中高分子量β-葡聚糖的浓度为50mg/l或更小。
在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％的阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少10％的阿拉伯糖基木聚糖被分解。
在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少50％的β-葡聚糖被分解并且至少50％的阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少60％的β-葡聚糖被分解并且至少50％的阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少70％的β-葡聚糖被分解并且至少50％的阿拉伯糖基木聚糖被分解。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒中至少80％的β-葡聚糖被分解并且至少50％的阿拉伯糖基木聚糖被分解。
在一些实施例中，谷粒中的阿拉伯糖基木聚糖被分解，这样使得在发芽的谷物中的高分子量阿拉伯糖基木聚糖的浓度小于2400mg/l、或小于2200mg/l、或小于1900mg/l、或小于1500mg/l、或小于1000mg/l、或小于800mg/l、或小于700mg/l或小于600mg/l、或小于500mg/l、或小于100mg/l、或小于60mg/l、或小于50mg/l。在一些实施例中，谷粒中的阿拉伯糖基木聚糖被分解，这样使得发芽的谷物中高分子量阿拉伯糖基木聚糖的浓度为2000mg/l或更小。
在一些实施例中，在谷物的一个或多个润湿期间在指定的一种或多种温度下将本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)以有效浓度组合持续一个时间段直到谷物具有至少约20重量百分比的水分含量。然而在其他实施例中，润湿的谷物已经达到增加的水分含量并已经开始发芽。仍然在其他实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间在一个时间段和温度下将湿润的谷物和一种或多种酶以有效浓度组合，直到谷物具有在约20至约60重量百分比之间、或在约40至50重量百分比之间的水分含量。在一些实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间在一个时间段和温度下将湿润的谷物和一种或多种酶以有效浓度组合，直到谷物具有在约40至约47重量百分比之间的水分含量并且已经发芽。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物的时间相比，浸泡过程的总时间更少。
仍然在其他实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间在一个时间段和温度下将湿润的谷物和一种或多种酶以有效浓度组合，直到谷物具有在约20至约60重量百分比之间、或在约40至50重量百分比之间的水分含量，并且谷粒中的β-葡聚糖被分解，这样使得在发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的浓度为50mg/l或更小。在一些实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间在一个时间段和温度下将湿润的谷物和一种或多种酶以有效浓度组合，直到谷物具有在约40至约47重量百分比之间的水分含量或已经发芽，并且谷粒中的β-葡聚糖被分解，这样使得在发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的浓度为50mg/l或更小。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物的时间相比，浸泡过程的总时间更少。
仍然在其他实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间在一个时间段和温度下将湿润的谷物和一种或多种酶以有效浓度组合，直到谷物具有在约20至约60重量百分比之间、或在约40至50重量百分比之间的水分含量，并且谷粒中的阿拉伯糖基木聚糖被分解，这样使得在发芽的谷物中的高分子量阿拉伯糖基木聚糖的浓度为2000mg/l或更小。在一些实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间在一个时间段和温度下将湿润的谷物和一种或多种酶以有效浓度组合，直到谷物具有在约40至约47重量百分比之间的水分含量或已经发芽，并且谷粒中的阿拉伯糖基木聚糖被分解，这样使得在发芽的谷物中的高分子量阿拉伯糖基木聚糖的浓度为2000mg/l或更小。在一些实施例中，在谷物的一种或多种润湿期间在一个时间段和温度下将湿润的谷物和一种或多种酶以有效浓度组合，直到谷物具有在约40至约47重量百分比之间的水分含量或已经发芽，并且谷粒中的阿拉伯糖基木聚糖被分解，这样使得在发芽的谷物中的高分子量阿拉伯糖基木聚糖的浓度为1000mg/l或更小。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物的时间相比，浸泡过程的总时间更少。
在一些实施例中，浸泡过程的总时间比根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物的时间少至少5％、7％、9％、10％、11％、13％、15％、17％、19％、20％、21％、23％、25％、27％、29％、30％、31％、33％、35％、37％、39％、40％、41％、43％、45％、47％、49％、50％、51％、53％、55％、57％、59％、60％、61％、63％、65％、67％、69％、70％、71％、73％、75％、77％、79％、80％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。
在一些实施例中，浸泡过程的总时间不超过30小时。在一些实施例中，浸泡过程的总时间不超过25小时。在一些实施例中，浸泡过程的总时间为约10小时至约25小时。在一些实施例中，浸泡过程的总时间小于25小时、20小时、15小时或甚至小于10小时。
在一些实施例中，在浸泡过程中使用的水的总量比根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物所使用的水少至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。在一些实施例中，在浸泡过程中使用的水的总量比根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物所使用的水少至少10％。在一些实施例中，在浸泡过程中使用的水的总量比根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物所使用的水少至少20％。在一些实施例中，在浸泡过程中使用的水的总量比根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物所使用的水少至少30％。
在一些实施例中，本发明提供了改善的谷粒的水吸收。在一些实施例中，与根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，谷粒的水吸收改善了至少10％、15％、20％、50％、70％、90％或95％。在一些实施例中，谷粒的水吸收改善了至少10％、或至少20％。
在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第一次润湿开始时以有效浓度组合。在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第一次润湿期间以有效浓度组合。在一些实施例中，在已经达到所希望的温度之后，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第一次润湿期间以有效浓度组合。在一些实施例中，润湿阶段涉及喷洒谷物，其中在喷雾期间一次或多次添加或不断添加如本文所述的一种或多种酶。
在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第一次润湿开始后1小时、2小时、3小时或4小时以有效浓度组合。在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第一次润湿的最后一小时期间组合。
在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第二次润湿开始时以有效浓度组合。在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第二次润湿期间以有效浓度组合。在一些实施例中，在已经达到所希望的温度之后，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第二次润湿期间以有效浓度组合。在一些实施例中，润湿阶段涉及喷洒谷物，其中在喷雾期间一次或多次添加或不断添加如本文所述的一种或多种酶。
在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第二次润湿开始后1小时、2小时、3小时或4小时以有效浓度组合。在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第二次润湿的最后一小时期间组合。
在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第三次润湿开始时以有效浓度组合。在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第三次润湿期间以有效浓度组合。在一些实施例中，在已经达到所希望的温度之后，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第三次润湿期间以有效浓度组合。在一些实施例中，润湿阶段涉及喷洒谷物，其中在喷雾期间一次或多次添加或不断添加如本文所述的一种或多种酶。
在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第三次润湿开始后1小时、2小时、3小时或4小时以有效浓度组合。在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的第三次润湿的最后一小时期间组合。
在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的每一个润湿阶段开始时以有效浓度组合。在一些实施例中，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的所有润湿阶段期间以有效浓度组合。在一些实施例中，在已经达到所希望的温度之后，本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)在谷物的所有润湿阶段期间以有效浓度组合。在一些实施例中，一个或多个润湿阶段涉及喷洒谷物，其中在喷雾期间一次或多次添加或不断添加一种或多种如本文所述的酶。
在一些实施例中，本发明提供了根据本发明过程获得的发芽的谷物，该发芽的谷物呈现改进的性质。例如，通过本文所述的方法生产的发芽的谷物比根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物具有更低的高分子量级分的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖含量，和/或更高的酶活性，例如像β-葡聚糖酶或木聚糖酶活性。例如在麦芽汁和啤酒生产中通过潜在地具有增加的麦芽汁分离速率和啤酒过滤速率，这允许麦芽具有更好的加工性。在一些实施例中，通过本文所述方法生产的发芽的谷物具有100mg/l、90mg/l、80mg/l、70mg/l、60mg/l、50mg/l或更低的高分子量β-葡聚糖的浓度。在一些实施例中，通过本文所述方法生产的发芽的谷物具有2500mg/l、2200mg/l、2100mg/l、1900mg/l、1500mg/l、1000mg/l、800mg/l、700mg/l、600mg/l、500mg/l、100mg/l、50mg/l或更低的高分子量阿拉伯糖基木聚糖的浓度。在一些实施例中，通过本文所述方法生产的发芽的谷物具有约10U/kg-100U/kg、或约30U/kg-100U/kg、或约50U/kg-100U/kg的β-葡聚糖酶活性和/或木聚糖酶活性。在一些实施例中，约100U/kg-1000U/kg。
在一些实施例中，本发明的目的涉及根据本发明的发芽的谷物用于制备食品和饮料的用途。本发明还涉及这些改进的饮料。根据本发明的改进的发芽的谷物也可以用于本领域普通技术人员熟知的其他生物技术过程中，其中在大多数情况下，优点在于其改进的质量。
在一些实施例中，本文所述的方法提供具有降低量的高分子量级分的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖的发芽的谷物。在一些实施例中，高分子量β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖的量少至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。
在一些实施例中，高分子量β-葡聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的β-葡聚糖的量少至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。在一些实施例中，高分子量β-葡聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量少至少50％。在一些实施例中，高分子量β-葡聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量少至少60％。在一些实施例中，高分子量β-葡聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量少至少70％。在一些实施例中，高分子量β-葡聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量少至少80％。
在一些实施例中，阿拉伯糖基木聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的阿拉伯糖基木聚糖的量少至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。在一些实施例中，高分子量阿拉伯糖基木聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的高分子量阿拉伯糖基木聚糖的量少至少50％。
在一些实施例中，高分子量阿拉伯糖基木聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中的高分子量阿拉伯糖基木聚糖的量少至少50％，并且高分子量β-葡聚糖的总量比在根据本文所述的方法不用一种或多种酶制备的对照发芽的谷物中少至少80％。
在一些实施例中，当提取时本文所述的方法提供了具有较低粘度的发芽的谷物。在一些实施例中，发芽的谷物的粘度比不用根据本发明的一种或多种酶制备的发芽的谷物的粘度低至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。
在一些实施例中，本文所述的发芽的谷物提供了具有较低粘度的提取物的生产。在一些实施例中，提取物的粘度比使用不用根据本发明的一种或多种酶制备的对照发芽的谷物制备的提取物的粘度低至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。
在一些实施例中，本发明的过程可以增加发芽的谷物的酶活性。在一些实施例中，酶活性选自下组，该组由以下各项组成：β-葡聚糖酶活性、木聚糖酶活性、淀粉酶活性、蛋白酶活性、在谷物中天然存在的酶活性及其组合。
在一些实施例中，与不用根据本发明的一种或多种酶制备的对照发芽的谷物相比，本发明的过程可以将发芽的谷物的β-葡聚糖酶活性和/或木聚糖酶活性增加至少约2倍。在一些实施例中，发芽的谷物的β-葡聚糖酶活性和/或木聚糖酶活性比不用根据本发明的一种或多种酶制备的对照发芽的谷物高至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。在一些实施例中，通过本文所述方法生产的发芽的谷物具有约10U/kg-100U/kg、或约30U/kg-100U/kg、或约50U/kg-100U/kg的β-葡聚糖酶活性和/或木聚糖酶活性。在一些实施例中，100U/kg-1000U/kg。
因此，在一些实施例中，在谷物的至少一次润湿期间在一段时间内且在一定温度下将本文所述的谷物和一种或多种酶(例如，β葡聚糖酶和/或木聚糖酶)以有效浓度组合以便获得发芽的谷物的酶活性的增加。在一些实施例中，酶活性选自下组，该组由以下各项组成：β-葡聚糖酶活性、木聚糖酶活性、淀粉酶活性、蛋白酶活性、在谷物中天然存在的酶活性及其组合。
在一些实施例中，在麦芽制造过程的最后阶段或麦芽制造过程完成之后添加本文所述的一种或多种酶以进一步增加麦芽的酶活性。
在一些实施例中，本文所述的方法提供具有较低的异味形成(例如与阿拉伯糖基木聚糖分解相关的异味形成)潜力的发芽的谷物。
在一些实施例中，本文所述的方法提供例如在过滤时具有降低的过滤床倒塌风险的发芽的谷物。
在一些实施例中，当在酿造应用中进行麦芽汁分离之前使用根据本发明的发芽的谷物时，建立的总压力被降低到小于470mm WC，例如小于450mm WC、例如小于430mm WC、例如小于410mm WC、例如小于390mm WC、例如小于370mm WC、例如小于350mm WC、例如小于330mm WC、例如小于310mm WC、例如小于300mm WC、例如小于290mm WC的值。
在一些实施例中，当在酿造应用中进行麦芽汁分离之前使用时，与使用没有所述发芽的谷物的阴性对照相比，建立的总压力被降低了至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％或95％。
在一些实施例中，当在酿造应用中进行麦芽汁分离之前使用根据本发明的组合物时，相对于对照发芽的谷物，如通过分离5min之后收集的麦芽汁体积测量的麦芽汁分离增加至超过1.5，例如超过1.6、例如超过1.7、例如超过1.8、例如超过1.9、例如超过2.0、例如超过2.1、例如超过2.2、例如超过2.3、例如超过2.4、例如超过2.5。
在一些实施例中，与使用对照发芽的谷物相比，如通过过滤5min之后收集的麦芽汁体积测量的麦芽汁分离增加至少5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、41％、43％、45％、47％、49％、51％、53％、55％、57％、59％、61％、63％、65％、67％、69％、71％、73％、75％、77％、79％、81％、83％、85％、87％、89％、91％、93％、95％、97％、99％、110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％或300％。
麦芽制造的过程是本领域熟知的，并且具体的条件取决于所用的谷物类型、发芽的谷物所需的最终规格和具体的麦芽制造设备而变化。本文所述的方法可以应用于本领域已知的任何麦芽制造过程，并且可以用于任何麦芽制造设备中。应当理解的是，本文所述的组合物和方法的某些参数可以依据麦芽所需的性质和/或具体的麦芽制造设备进行调整，以便获得发芽的谷物的这样的最佳性质，例如，取决于谷物品种和下游用途。
实例
本披露在以下实例中进一步详细描述，其不意欲以任何方式限制本披露所要求保护的范围。提供下列实例以说明但不限制所要求保护的披露内容。
实例1-测量酶活性的测定法
DNS纤维素酶活件方法(DNS CMC方法)
系统名称：1,4-(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶
IUB编号：EC 3.2.1.4
原理
纤维素酶的测定法是基于羧甲基纤维素(CMC)(一种β-1,4-葡聚糖)中1,4-β-D-糖苷键的酶促内切水解。该反应的产物(β-1,4葡聚糖寡糖)通过使用3,5-二硝基水杨酸试剂测量还原性基团的相应增加而进行比色测定。通过还原性基团的浓度(以葡萄糖当量计)与在540nm处的吸光度之间的关系计算酶活性。
该测定法在pH 5.0下进行，但是对于另外的特征和规格的酶其可以在不同pH值下进行。
单位定义
将一个单位的纤维素酶活性定义为在测定条件(pH 5.0(或按照说明)和50℃)下产生1μmol葡萄糖当量/分钟的酶的量。
材料
羧甲基纤维素。供应商：梅格泽姆有限责任公司(Megazyme Ltd)。产品编号：CM-纤维素4M；D-葡萄糖‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10117。M.W.：180.16；无水乙酸钠‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10236。M.W.：82.03；乙酸(“冰”)‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(MerckLtd)(BDH)。产品编号：10001。M.W.：60.05；3,5-二硝基水杨酸GPR(3,5-二硝基-2-羟基苯甲酸)。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：28235；氢氧化钠颗粒‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10252。M.W.：40.00；酒石酸钾钠(+)‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10219。M.W.：282.22；在0.1M乙酸钠缓冲液中的1.5％(w/v溶液)羧甲基纤维素(CMC)溶液，pH 5.0(底物溶液)；3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液。在包含32g/L氢氧化钠颗粒、和600g/L酒石酸钾钠(+)的缓冲液中的20g/L的DNS；葡萄糖标准溶液(0.50mg/ml)
程序
将酶组合物稀释在样品中，并且可以使用0、0.125、0.25、0.375和0.5mg/ml的葡萄糖浓度制得葡萄糖标准曲线。
在50℃下将0.25ml酶溶液与1.75ml的底物溶液(1.5％w/v)混合，并且在10min后通过添加DNS溶液停止反应。这接着是加热至95℃持续5分钟。
在不同样品的540nm(OD 540nm)处测量光密度。
计算
从标准曲线确定酶活性。
如在PCT公开号WO 2013/037933中所述计算活性。
昆布多糖酶(DNS昆布多糖方法)
原理
由昆布多糖酶催化的反应涉及在1,3-β-D-葡聚糖中的1,3-糖苷键的内切水解。底物包括昆布多糖、裸藻淀粉和茯苓聚糖。该反应的产物(β-1,3-葡聚糖寡糖)通过使用3,5-二硝基水杨酸试剂测量还原性基团的相应增加而进行比色测定。从还原性基团的浓度(以葡萄糖当量计)与在540nm处的吸光度之间的关系计算酶活性。
该测定法可以在pH 5.0和50℃下进行，对于另外特征和规格的酶其还可以在不同的pH值和温度下进行。
单位定义
将一个单位的昆布多糖酶活性定义为在测定条件(pH 5.0和50℃(或按照说明))下产生1μmol葡萄糖当量/分钟的酶的量。
材料
参见上文给出的用于纤维素酶活性测定法的材料。
昆布多糖(来自掌状海带(Laminaria digitata))。供应商：西格玛-奥德里奇有限责任公司(Sigma-Aldrich Co.Ltd)。产品编号：L 9634；1.00％(w/v溶液)昆布多糖溶液(底物溶液0.1M乙酸钠缓冲液，pH 5.0)；在50℃下将1.75ml的昆布多糖溶液与0.25ml稀释的酶溶液混合10分钟，并且通过添加2ml DNS溶液停止反应。
可以使用0、0.125、0.25、0.5和0.75mg/ml葡萄糖溶液制得标准曲线。
测量在540nm(OD 540nm)处的光密度。
计算
如在PCT公开号WO 2013/037933中所述计算活性。
阿拉伯糖酶测定法
原理
阿拉伯糖酶活性的测定法是基于通过使用3,5-二硝基水杨酸试剂测量还原性基团的相应增加的比色测定。从还原性基团的浓度(以阿拉伯糖当量计)与在540nm处的吸光度之间的关系计算酶活性。
该测定法可以在pH 3.5下进行，对于另外的特征和规格的酶其可以在不同pH值下进行。
单位定义
将一个单位的阿拉伯糖酶(阿拉伯聚糖酶(内切-1,5-α-L-阿拉伯聚糖酶))活性定义为在测定条件(pH 3.5(或按照说明)和50℃)下产生1μmol阿拉伯糖当量/分钟的酶的量。
材料
梅格泽姆公司(Megazyme)甜菜阿拉伯聚糖；阿拉伯糖Sigma A3131M.W.：150.1；无水乙酸钠‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10236。M.W.：82.03；乙酸(“冰”)‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10001。M.W.：60.05；3,5-二硝基水杨酸GPR(3,5-二硝基-2-羟基苯甲酸)。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：28235；氢氧化钠颗粒‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10252。M.W.：40.00；酒石酸钾钠(+)‘AnalaR’。供应商：默克有限责任公司(Merck Ltd)(BDH)。产品编号：10219。M.W.：282.22；在0.1M乙酸钠缓冲液中的1.5％(w/v溶液)阿拉伯聚糖溶液，pH 3.5(底物溶液)；3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液。在包含32g/L氢氧化钠颗粒、和600g/L酒石酸钾钠(+)的缓冲液中的20g/L的DNS；阿拉伯糖酶标准溶液(0.50mg/ml)
程序
将酶组合物稀释在样品中，并且使用0、0.125、0.25、0.375和0.5mg/ml的阿拉伯糖酶浓度制得阿拉伯糖酶标准曲线。
在50℃下将0.25ml酶溶液与1.75ml的底物溶液(1.5％w/v)混合，并且在10min后通过添加DNS溶液停止反应。然后这接着是加热至95℃持续5分钟。
在不同样品的540nm(OD 540nm)处测量光密度。
计算
从标准曲线确定酶活性。
如在PCT公开号WO 2013/037933中所述计算活性。
木聚糖酶活性测定
在蒸馏水中制备样品(在该测定法中获得大约OD 540＝0.25-0.30)和木糖标准品(0、0.125、0.250、0.375和0.500mg/ml蒸馏水)。在时间t＝0分钟时，在50℃下将在0.1M乙酸钠/乙酸(pH 5)中的1.75ml可溶性小麦阿拉伯糖基木聚糖(0.5％小麦阿拉伯糖基木聚糖(PWAXYH，梅格泽姆公司(Megazyme)，布雷市(Bray)，爱尔兰))置于试管中。在时间t＝5分钟时，在50℃下将250μl酶溶液添加到底物中，接着进行混合。将蒸馏水用作空白。在时间t＝15分钟时，将2ml DNS溶液(1％3,5-二硝基水杨酸(DNS)、1.6％氢氧化钠、30％酒石酸钾钠在蒸馏水中)添加到酶底物溶液和2.0ml标准溶液中。将添加DNS的样品、空白和标准品置于沸水浴(95℃)中持续5分钟。此后，通过将样品、空白和标准品置于25℃水浴中20分钟来使它们冷却。使用分光光度计在OD 540处读取所有样品的光密度。基于样品的稀释度、使用的样品的量和标准品，可以计算样品的木聚糖酶活性。
将一个单位的内切-1,4-β-木聚糖酶活性定义为在上述条件下产生1μmol木糖当量/分钟的酶的量。
葡聚糖酶活性测定
在蒸馏水中制备样品(在该测定法中的标准曲线内获得OD 540)和葡萄糖标准品(0；0.125；0.250；0.500；和0.750mg/ml蒸馏水)。在时间t＝0分钟时，在50℃下将在1M乙酸钠/乙酸(pH 5)中的1,75ml大麦β-葡聚糖(1.5％大麦β-葡聚糖(BETA-BGBM，梅格泽姆公司(Megazyme)，布雷市(Bray)，爱尔兰))置于试管中。在时间t＝5分钟时，在50℃下将250μl酶溶液添加到底物中，接着进行混合。将蒸馏水用作空白。在时间t＝15分钟时，将2ml DNS溶液(1％3,5-二硝基水杨酸(DNS)、1,6％氢氧化钠、30％酒石酸钾钠在蒸馏水中)添加到酶底物溶液和2.0ml标准溶液中。将添加DNS的样品、空白和标准品置于沸水浴(95℃)中持续15分钟。此后，通过将样品、空白和标准品置于25℃水浴中20分钟来使它们冷却。使用分光光度计在OD 540处读取所有样品的光密度。基于样品的稀释度、使用的样品的量和标准品，可以计算样品的葡聚糖酶活性。
将一个单位的内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性定义为在测定条件(pH 5.0(或按照说明)和50℃)下产生1μmol葡萄糖当量/分钟的酶的量。
阿拉伯呋喃糖苷酶测定法
由α-N-阿拉伯呋喃糖苷酶催化的反应涉及α-L-阿拉伯糖苷的非还原性α-L-阿拉伯呋喃糖苷残基处的末端键的水解。该酶作用于α-L-阿拉伯呋喃糖苷、含有(1,3)-和/或(1,5)-键的α-L-阿拉伯聚糖、阿拉伯糖基木聚糖和阿拉伯半乳聚糖。
α-N-阿拉伯呋喃糖苷酶的测定法基于对硝基苯基α-L-阿拉伯呋喃糖苷的酶促水解。该测定法是“两点”而不是“连续监测”方法。酶活性的计算是基于仅在孵育期开始和结束时进行的测量。对反应的产物对硝基苯酚进行比色测定(在pH调节之后)。从对硝基苯酚的浓度与在400nm处的吸光度之间的关系计算酶活性。
稀释的酶溶液的制备及程序
如在PCT公开号WO 2013/037933中所述制备酶溶液和进行测定。
计算
如在PCT公开号WO 2013/037933中所述计算活性。
纤维二糖水解酶测定法
原理
由纤维二糖水解酶催化的反应涉及纤维素和纤维四糖中的1,4-β-D-糖苷键的水解，从链的非还原末端释放纤维二糖。
纤维二糖水解酶的测定法基于对硝基苯基β-D-纤维二糖吡喃糖苷的酶促水解。对反应的产物对硝基苯酚进行比色测定(在pH调节之后)。从对硝基苯酚的浓度与在400nm处的吸光度之间的关系计算酶活性。
在ΔOD 540nm TEST(T)＝0.400-0.800的线性限定范围内操作该测定法。
程序
如在PCT公开号WO 2013/037933中所述进行测定。
计算
如在PCT公开号WO 2013/037933中所述计算活性。
实例2
可以使用Joe White微量麦芽制造系统在不同时间点使用不同的酶浓度来测试来自不同品种(例如，大麦：Sebastian、Tipple、Prestige和Bellini)的不同谷物的多个样品。该微量麦芽制造系统允许在一个单元中浸泡、发芽和烘干样品，同时为每一批次提供一致的麦芽制造条件。将每个样品置于微量麦芽制造系统的一个隔室中。向在用于麦芽制造的微量麦芽制造单元中的每个隔室添加0.5千克的大麦样品。在浸泡过程期间不同时间以0.01mg-100mg酶蛋白质/kg的不同浓度添加含有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶和内切-1,4-β-木聚糖酶的酶的混合物。下表描述了实验条件。
| 隔室/样品 | 大麦品种 | 实验条件 |
| 1 | Sebastian | 无酶 |
| 2 | Sebastian | 在第一个润湿阶段期间添加酶 |
| 3 | Sebastian | 在第一和第二个润湿阶段期间添加酶 |
| 4 | Sebastian | 在所有润湿阶段期间添加酶 |
| 5 | Tipple | 无酶 |
| 6 | Tipple | 在第一个润湿阶段期间添加酶 |
| 7 | Tipple | 在第一和第二个润湿阶段期间添加酶 |
| 8 | Tipple | 在所有润湿阶段期间添加酶 |
| 9 | Prestige | 无酶 |
| 10 | Prestige | 在第一个润湿阶段期间添加酶 |
| 11 | Prestige | 在第一和第二个润湿阶段期间添加酶 |
| 12 | Prestige | 在所有润湿阶段期间添加酶 |
| 13 | Bellini | 无酶 |
| 14 | Bellini | 在第一个润湿阶段期间添加酶 |
| 15 | Bellini | 在第一个和第二个润湿阶段期间添加酶 |
| 16 | Bellini | 在所有润湿阶段期间添加酶 |
所有大麦样品都使用三个浸泡循环。
大麦可以使用不同的实验条件进行浸泡：
(a)在15℃的温度下，用第一次水浸法浸泡大麦，持续谷粒达到40％-45％的水分所需的时间。在水浸法之后，使大麦在15℃的温度下进行空气通风12小时。第二次浸入持续谷物达到40％-45％水分所需的时间，然后接着是在15℃下空气通风10小时。第三次浸泡是在15℃下持续2小时。在浸泡完成之后，发芽开始并且允许谷粒发芽5天。记录每个品种达到水分所希望的水平所需的时间。
(b)在15℃的温度下，用第一次水浸法浸泡大麦6小时，其中对于没有酶的样品总水量与空气干燥的大麦比例为3:1，对于在第一个润湿阶段期间添加酶的样品为2:1，对于在第一个和第二个润湿阶段期间添加酶的样品为1:1；以及对于在所有润湿阶段期间添加酶的样品为0.8:1。在水浸法之后，使大麦在15℃的温度下进行空气通风12小时。第二次浸入持续5小时，接着是在15℃下空气通风0小时。第三次浸入是在15℃下持续2小时。在浸泡完成之后，各品种可以发芽5天。
可以使用不同的酶浓度重复条件(a)和(b)，以确定耗水量和/或发芽时间的差异。
将发芽的大麦在15℃的温度下经过加湿的空气。
在发芽5天后，将每个隔室的大麦用标准的烘干程序进行烘干。对于来自16个隔室中的每一个的每个样品，将麦芽产量以1,000个核重量来测量。
存在于发芽的大麦和最终麦芽中的β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖的量可以通过本领域已知的任何合适的方法来测量。例如，存在于发芽的大麦和最终麦芽中的β-葡聚糖的量可以通过在Journal of the Institute of Brewing[酿造研究学会杂志]，第91卷，第5期，第285-295页，1985年9月至10月中所述的方法来测量。
存在于发芽的谷物中的葡聚糖酶和/或木聚糖酶活性可以如上所述进行测量。
在每个麦芽样品上测量六个质量参数，即提取物产量(％)、总麦芽蛋白(％)、可溶性麦芽蛋白(％)、Kolbach指数、表观最终衰减(％)和粘度(cp)。根据欧洲啤酒公约(European Brewery Convention)推荐的那些使用分析的程序。
实例3
微量麦芽制造和麦芽制造质量分析
可以使用来自不同地点的两排春季大麦Troubadour进行微量麦芽制造和随后的分析。在荷兰繁殖和1983年在西班牙发布的Troubadour在地中海环境下非常高产。然而，其麦芽制造质量相当差，产生很低的提取物产量。据报道，低产量可能与谷粒中β-葡聚糖的含量相关。
可以使用允许每批次处理200g的32个样品的微量麦芽制造车间。微量麦芽制造程序如下：
-浸泡时间：57h(水下41以及无水16h)
-浸泡温度：15℃
-发芽时间：5天
-发芽温度：15℃
-发芽的大麦的空气供应：50ml/min
-干燥时间：17小时
-干燥温度：50℃
-烘干时间：2.5小时
-烘干温度：70℃
在浸泡过程期间的不同时间和在从0.01mg-100mg酶蛋白质/千克范围内的不同浓度下，在含有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶和内切-1,4-β-木聚糖酶的酶的混合物的存在或不存在下进行浸泡。
在每个麦芽样品上测量六个质量参数，即提取物产量(％)、总麦芽蛋白(％)、可溶性麦芽蛋白(％)、Kolbach指数、表观最终衰减(％)和粘度(cp)。根据欧洲啤酒公约(European Brewery Convention)推荐的那些使用分析的程序。
另外，如上所述确定总蛋白质含量、大麦的β-葡聚糖和阿拉伯糖基木聚糖含量以及麦芽的β-葡聚糖酶和木聚糖酶活性。
虽然已经显示并在本文描述了本发明的优选实施例，仅通过举例的方式来提供这样的实施例对本领域技术人员将是显而易见的。在不偏离本发明的情况下，许多变化、改变和替换将是本领域的技术人员能想到的。应该理解的是，在此说明的本发明的实施例的不同替代方案可以用于实施本发明。预期的是以下权利要求书限定了本发明的范围以及由此覆盖在这些权利要求和它们的等效物的范围内的方法和结构。
序列：
AtuXyn3，塔宾曲霉(Aspergillus tubigensis)(SEQ ID NO:1)，302aa：
QASVSIDTKFKAHGKKYLGNIGDQYTLTKNSKTPAIIKADFGALTPENSMKWDATEPSRGQFSFSGSDYLVNFAQSNNKLIRGHTLVWHSQLPSWVQAITDKNTLIEVMKNHITTVMQHYKGKIYAWDVVNEIFNEDGSLRDSVFYQVIGEDYVRIAFETARAADPNAKLYINDYNLDSASYPKLTGMVSHVKKWIEAGIPIDGIGSQTHLSAGGGAGISGALNALAGAGTKEIAVTELDIAGASSTDYVEVVEACLDQPKCIGITVWGVADPDSWRSSSTPLLFDSNYNPKPAYTAIANAL
TerXyn1，Geosmithia emersonii(埃默森篮状菌(Taleromyces emersonii))(SEQID NO:2)：
AGLNTAAKAIGLKYFGTATDNPELSDTAYETQLNNTQDFGQLTPANSMKWDATEPEQNVFTFSAGDQIANLAKANGQMLRCHNLVWYNQLPSWVTSGSWTNETLLAAMKNHITNVVTHYKGQCYAWDVVNEALNDDGTYRSNVFYQYIGEAYIPIAFATAAAADPNAKLYYNDYNIEYPGAKATAAQNLVKLVQSYGARIDGVGLQSHFIVGETPSTSSQQQNMAAFTALGVEVAITELDIRMQLPETEALLTQQATDYQSTVQACANTKGCVGITVWDWTDKYSWVPSTFSGYGDACPWDANYQKKPAYEGILTGLGQTVTSTTYIISPTTSVGTGTTTSSGGSGGTTGVAQHWEQCGGLGWTGPTVCASGYTCTVINEYYSQCL
AtuXyn4，塔宾曲霉(Aspergillus tubigensis)(SEQ ID NO:3)：
EPIEPRQASVSIDTKFKAHGKKYLGNIGDQYTLTKNSKTPAIIKADFGALTPENSMKWDATEPSRGQFSFSGSDYLVNFAQSNNKLIRGHTLVWHSQLPSWVQSITDKNTLIEVMKNHITTVMQHYKGKIYAWDVVNEIFNEDGSLRDSVFYKVIGEDYVRIAFETARAADPNAKLYINDYNLDSASYPKLTGMVSHVKKWIAAGIPIDGIGSQTHLSAGGGAGISGALNALAGAGTKEIAVTELDIAGASSTDYVEVVEACLNQPKCIGITVWGVADPDSWRSSSTPLLFDSNYNPKPAYTAIANAL
AacXyn2，棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)(SEQ ID NO:4)：
MVGLLSITAALAATVLPNIVSAVGLDQAAVAKGLQYFGTATDNPELTDIPYVTQLNNTADFGQITPGNSMKWDATEPSQGTFTFTKGDVIADLAEGNGQYLRCHTLVWYNQLPSWVTSGTWTNATLTAALKNHITNVVSHYKGKCLHWDVVNEALNDDGTYRTNIFYTTIGEAYIPIAFAAAAAADPDAKLFYNDYNLEYGGAKAASARAIVQLVKNAGAKIDGVGLQAHFSVGTVPSTSSLVSVLQSFTALGVEVAYTEADVRILLPTTATTLAQQSSDFQALVQSCVQTTGCVGFTIWDWTDKYSWVPSTFSGYGAALPWDENLVKKPAYNGLLAGMGVTVTTTTTTTTATATGKTTTTTTGATSTGTTAAHWGQCGGLNWSGPTACATGYTCTYVNDYYSQCL
TreXyn3，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:5)：
MKANVILCLLAPLVAALPTETIHLDPELAALRANLTERTADLWDRQASQSIDQLIKRKGKLYFGTATDRGLLQREKNAAIIQADLGQVTPENSMKWQSLENNQGQLNWGDADYLVNFAQQNGKSIRGHTLIWHSQLPAWVNNINNADTLRQVIRTHVSTVVGRYKGKIRAWDVVNEIFNEDGTLRSSVFSRLLGEEFVSIAFRAARDADPSARLYINDYNLDRANYGKVNGLKTYVSKWISQGVPIDGIGSQSHLSGGGGSGTLGALQQLATVPVTELAITELDIQGAPTTDYTQVVQACLSVSKCVGITVWGISDKDSWRASTNPLLFDANFNPKPAYNSIVGILQ
TreXyn5，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:6)：
QCIQPGTGYNNGYFYSYWNDGHGGVTYCNGPGGQFSVNWSNSGNFVGGKGWQPGTKNRVINFSGSYNPNGNSYLSVYGWSRNPLIEYYIVENFGTYNPSTGATKLGEVTSDGSVYDIYRTQRVNQPSIIGTATFYQYWSVRRNHRSSGSVNTANHFNAWAQQGLTLGTMDYQIVAVEGYFSSGSASITVSD
BsuGluS，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(SEQ ID NO:7)，214aa：
QTGGSFFDPFNGYNSGFWQKADGYSNGNMFNCTWRANNVSMTSLGEMRLALTSPAYNKFDCGENRSVQTYGYGLYEVRMKPAKNTGIVSSFFTYTGPTDGTPWDEIDIEFLGKDTTKVQFNYYTNGAGNHEKIVDLGFDAANAYHTYAFDWQPNSIKWYVDGQLKHTATNQIPTTPGKIMMNLWNGTGVDEWLGSYNGVNPLYAHYDWVRYTKK
TerGlu1，Geosmithia emersonii(埃默森篮状菌(Taleromyces emersonii))(SEQID NO:8)：
APVKEKGIKKRASPFQWFGSNESGAEFGNNNIPGVEGTDYTFPNTSAIQILIDQGMNIFRVPFLMERMVPNQMTGPVDSAYFQGYSQVINYITSHGASAVIDPHNFGRYYNNIISSPSDFQTFWHTIASNFADNDNVIFDTNNEYHDMDESLVVQLNQAAIDGIRAAGATSQYIFVEGNSWTGAWTWTQVNDAMANLTDPQNKIVYEMHQYLDSDGSGTSDQCVNSTIGQDRVESATAWLKQNGKKAILGEYAGGANSVCETAVTGMLDYLANNTDVWTGAIWWAAGPWWGDYIFSMEPPSGIAYEQVLPLLQPYL
BsuGlu103FULL，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(SEQ ID NO:9)：
DDYSVVEEHGQLSISNGELVNERGEQVQLKGMSSHGLQWYGQFVNYESMKWLRDDWGITVFRAAMYTSSGGYIDDPSVKEKVKETVEAAIDLGIYVIIDWHILSDNDPNIYKEEAKDFFDEMSELYGDYPNVIYEIANEPNGSDVTWDNQIKPYAEEVIPVIRDNDPNNIVIVGTGTWSQDVHHAADNQLADPNVMYAFHFYAGTHGQNLRDQVDYALDQGAAIFVSEWGTSAATGDGGVFLDEAQVWIDFMDERNLSWANWSLTHKDESSAALMPGANPTGGWTEAELSPSGTFVREKIRESASIPPSDPTPPSDPGEPDPGEPDPTPPSDPGEYPAWDSNQIYTNEIVYHNGQLWQAKWWTQNQEPGDPYGPWEPLKSDPDSGEPDPTPPSDPGEYPAWDSNQIYTNEIVYHNGQLWQAKWWTQNQEPGDPYGPWEPLN
TreGlu2，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:10)：
QQTVWGQCGGIGWSGPTNCAPGSACSTLNPYYAQCIPGATTITTSTRPPSGPTTTTRATSTSSSTPPTSSGVRFAGVNIAGFDFGCTTDGTCVTSKVYPPLKNFTGSNNYPDGIGQMQHFVNDDGMTIFRLPVGWQYLVNNNLGGNLDSTSISKYDQLVQGCLSLGAYCIVDIHNYARWNGGIIGQGGPTNAQFTSLWSQLASKYASQSRVWFGIMNEPHDVNINTWAATVQEVVTAIRNAGATSQFISLPGNDWQSAGAFISDGSAAALSQVTNPDGSTTNLIFDVHKYLDSDNSGTHAECTTNNIDGAFSPLATWLRQNNRQAILTETGGGNVQSCIQDMCQQIQYLNQNSDVYLGYVGWGAGSFDSTYVLTETPTGSGNSWTDTSLVSSCLARK
TreGlu3，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:11)：
QTSCDQWATFTGNGYTVSNNLWGASAGSGFGCVTAVSLSGGASWHADWQWSGGQNNVKSYQNSQIAIPQKRTVNSISSMPTTASWSYSGSNIRANVAYDLFTAANPNHVTYSGDYELMIWLGKYGDIGPIGSSQGTVNVGGQSWTLYYGYNGAMQVYSFVAQTNTTNYSGDVKNFFNYLRDNKGYNAAGQYVLSYQFGTEPFTGSGTLNVASWTASIN
TreGlu4，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:12)：
HGHINDIVINGVWYQAYDPTTFPYESNPPIVVGWTAADLDNGFVSPDAYQNPDIICHKNATNAKGHASVKAGDTILFQWVPVPWPHPGPIVDYLANCNGDCETVDKTTLEFFKIDGVGLLSGGDPGTWASDVLISNNNTWVVKIPDNLAPGNYVLRHEIIALHSAGQANGAQNYPQCFNIAVSGSGSLQPSGVLGTDLYHATDPGVLINIYTSPLNYIIPGPTVVSGLPTSVAQGSSAATATASATVPGGGSGPTSRTTTTARTTQASSRPSSTPPATTSAPAGGPTQTLYGQCGGSGYSGPTRCAPPATCSTNPYYAQCLN
TreGlu6，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:13)：
AFSWKNVKLGGGGGFVPGIIFHPKTKGVAYARTDIGGLYRLNADDSWTAVTDGIADNAGWHNWGIDAVALDPQDDQKVYAAVGMYTNSWDPSNGAIIRSSDRGATWSFTNLPFKVGGNMPGRGAGERLAVDPANSNIIYFGARSGNGLWKSTDGGVTFSKVSSFTATGTYIPDPSDSNGYNSDKQGLMWVTFDSTSSTTGGATSRIFVGTADNITASVYVSTNAGSTWSAVPGQPGKYFPHKAKLQPAEKALYLTYSWWPDAQLFRSTDSGTTWSPIWAWASYPTETYYYSISTPKAPWIKNNFIDVTSESPSDGLIKRLGWMIESLEIDPTDSNHWLYGTGMTIFGGHDLTNWDTRHNVSIQSLADGIEEFSVQDLASAPGGSELLAAVGDDNGFTFASRNDLGTSPQTVWATPTWATSTSVDYAGNSVKSVVRVGNTAGTQQVAISSDGGATWSIDYAADTSMNGGTVAYSADGDTILWSTASSGVQRSQFQGSFASVSSLPAGAVIASDKKTNSVFYAGSGSTFYVSKDTGSSFTRGPKLGSAGTIRDIAAHPTTAGTLYVSTDVGIFRSTDSGTTFGQVSTALTNTYQIALGVGSGSNWNLYAFGTGPSGARLYASGDSGASWTDIQGSQGFGSIDSTKVAGSGSTAGQVYVGTNGRGVFYAQGTVGGGTGGTSSSTKQSSSSTSSASSSTTLRSSVVSTTRASTVTSSRTSSAAGPTGSGVAGHYAQCGGIGWTGPTQCVAPYVCQKQNDYYYQCV
TreGlu7，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:14)：
HGQVQNFTINGQYNQGFILDYYYQKQNTGHFPNVAGWYAEDLDLGFISPDQYTTPDIVCHKNAAPGAISATAAAGSNIVFQWGPGVWPHPYGPIVTYVVECSGSCTTVNKNNLRWVKIQEAGINYNTQVWAQQDLINQGNKWTVKIPSSLRPGNYVFRHELLAAHGASSANGMQNYPQCVNIAVTGSGTKALPAGTPATQLYKPTDPGILFNPYTTITSYTIPGPALWQG
TreGlu8，里氏木霉(Trichoderma reesei)(SEQ ID NO:15)：
GKIKYLGVAIPGIDFGCDIDGSCPTDTSSVPLLSYKGGDGAGQMKHFAEDDGLNVFRISATWQFVLNNTVDGKLDELNWGSYNKVVNACLETGAYCMIDMHNFARYNGGIIGQGGVSDDIFVDLWVQIAKYYEDNDKIIFGLMNEPHDLDIEIWAQTCQKVVTAIRKAGATSQMILLPGTNFASVETYVSTGSAEALGKITNPDGSTDLLYFDVHKYLDINNSGSHAECTTDNVDAFNDFADWLRQNKRQAIISETGASMEPSCMTAFCAQNKAISENSDVYIGFVGWGAGSFDTSYILTLTPLGKPGNYTDNKLMNECILDQFTLDEKYRPTPTSISTAAEETATATATSDGDAPSTTKPIFREETASPTPNAVTKPSPDTSDSSDDDKDSAASMSAQGLTGTVLFTVAALGYMLVAF
BsuGluC CBD，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(SEQ ID NO:16)：
MKRSISIFITCLLITLLTMGGMIASPASAAGTKTPVAKNGQLSIKGTQLVNRDGKAVQLKGISSHGLQWYGEYVNKDSLKWLRDDWGITVFRAAMYTADGGYIDNPSVKNKVKEAVEAAKELGIYVIIDWHILNDGNPNQNKEKAKEFFKEMSSLYGNTPNVIYEIANEPNGDVNWKRDIKPYAEEVISVIRKNDPDNIIIVGTGTWSQDVNDAADDQLKDANVMYALHFYAGTHGQFLRDKANYALSKGAPIFVTEWGTSDASGNGGVFLDQSREWLKYLDSKTISWVNWNLSDKQESSSALKPGASKTGGWRLSDLSASGTFVRENILGTKDSTKDIPETPSKDKPTQENGISVQYRAGDGSMNSNQIRPQLQIKNNGNTTVDLKDVTARYWYKAKNKGQNFDCDYAQIGCGNVTHKFVTLHKPKQGADTYLELGFKNGTLAPGASTGNIQLRLHNDDWSNYAQSGDYSFFKSNTFKTTKKITLYDQGKLIWGTEPN
BsuXyn3，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)木聚糖酶变体(SEQ ID NO:17)：
ASTDYWQNWTFGGGIVNAVNGSGGNYSVNWSNTGNFVVGKGWTTGSPFRTINYNAGVWAPNGNGYLTLYGWTRSPLIEYYVVDSWGTYRPTGTYKGTVKSDGGTYDIYTTTRYNAPSIDGDDTTFTQYWSVRQSKRPTGSNATITFSNHVNAWKSHGMNLGSNWAYQVMATEGYQSSGSSNVTVW
BsuXyn4，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)木聚糖酶变体(SEQ ID NO:18)：
ASTDYWQNWTDGYGIVNAVNGSGGNYSVNWSNTGNFVVGKGWTTGSPFRTINYNAGVWAPNGNGYLTLYGWTRSPLIEYYVVDSWGTYRPTGTYKGTVYSDGGWYDIYTATRDNAPSIDGDFTTFTQYWSVRQSKRPTGSNATITFSNHVNAWRSHGMDLGSNWAYQVMATEGYLSSGSSNVTVW
Claims (15)
1.一种生产发芽的谷物的方法，该方法包括：
a)提供包含一种或多种β-葡聚糖以及一种或多种阿拉伯糖基木聚糖的谷物颗粒，
b)在麦芽制造过程期间向所述谷物中添加有效量的β-葡聚糖酶和有效量的木聚糖酶；并且
c)获得发芽的谷物。
2.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述方法包括浸泡步骤，该浸泡步骤包含一个或多个润湿阶段，其中在所述一个或多个润湿阶段期间，一次或多次添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶。
3.如权利要求2所述的方法，其中：
(i)在该谷物的第一次润湿开始时添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(ii)在该谷物的第一次润湿期间添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(iii)在该谷物的第二次润湿开始时添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(iv)在该谷物的第二次润湿期间添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(v)在该谷物的第三次润湿开始时添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(vi)在该谷物的第三次润湿期间添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(vii)在该谷物的所有润湿阶段开始时添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(viii)在该谷物的所有润湿阶段期间添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶；或
(ix)所述一个或多个润湿阶段包括喷洒该谷物，并且其中在所述喷洒期间一次或多次添加或不断添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶。
4.如任何前述权利要求所述的方法，其中该谷物达到在约40％至约50％W/W之间的水分含量，其中在少于12小时内达到所述水分含量，并且其中使用如下的水达到所述水分含量，所述水比不用所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶制备的发芽的谷物所用的水少至少10％。
5.如任何前述权利要求所述的方法，其中：
(i)所述谷物具有1％-10％W/W的β-葡聚糖；或
(ii)所述谷物具有1％-10％W/W的阿拉伯糖基木聚糖；或
(iii)该谷物中高分子量β-葡聚糖的量降低至少50％；或
(iv)该谷物中高分子量β-葡聚糖的量降低至少80％；或
(v)该谷物中高分子量阿拉伯糖基木聚糖的量降低至少50％；或
(vi)该谷物选自下组，该组由以下各项组成：大麦、小麦、黑麦、玉米、燕麦、水稻、粟、黑小麦、木薯、高粱及其组合；或
(vii)以0.01mg-100mg酶蛋白质/千克谷物的剂量给予所述β-葡聚糖酶；或
(viii)以1mg-15mg酶蛋白质/千克谷物的剂量给予所述β-葡聚糖酶；或
(ix)以0.01mg-100mg酶蛋白质/千克谷物的剂量给予所述木聚糖酶；或
(xi)以1mg-15mg酶蛋白质/千克谷物的剂量给予所述木聚糖酶。
6.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述β-葡聚糖酶是内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶包含与选自SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、和SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16中的任一者具有至少80％同一性的氨基酸序列或其任何功能片段。
8.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述木聚糖酶是内切-1,4-β-木聚糖酶。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述内切-1,4-β-木聚糖酶包含与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:17和SEQID NO:18中的任一者具有至少80％同一性的氨基酸序列或其任何功能片段。
10.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述β-葡聚糖酶和所述木聚糖酶具有与选自以下列表的各SEQ ID具有至少80％序列同一性的氨基酸序列或其任何功能片段，该列表由以下各项组成：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:10；SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:11；SEQ IDNO:4和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:11；SEQ IDNO:17和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:12；SEQID NO:2和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:12；SEQID NO:5和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:13；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:18和SEQID NO:13；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:3和SEQID NO:14；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:6和SEQID NO:14；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:16；SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:16；SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:16；以及SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:16。
11.如任何前述权利要求所述的方法，其中所述β-葡聚糖酶和所述木聚糖酶具有与选自以下列表的各SEQ ID具有至少80％序列同一性的氨基酸序列或其任何功能片段，该列表由以下各项组成：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:8；以及SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:8。
12.如任何前述权利要求所述的方法，其中：
(i)所述木聚糖酶和所述β-葡聚糖酶以1:1的重量比进行组合；或
(ii)所述β-葡聚糖酶具有至少9000U/g的β-葡聚糖酶活性，并且所述木聚糖酶具有至少13000U/g的木聚糖酶活性；或
(iii)所述β-葡聚糖酶和所述木聚糖酶包含具有木聚糖酶活性和/或β-葡聚糖酶活性的可商购的酶，该可商购的酶选自下组，该组由以下各项组成：UltraFlo L(可获得自诺维信公司-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo XL(可获得自诺维信公司-具有木聚糖酶和α淀粉酶副活性的β葡聚糖酶)、UltraFlo Max(可获得自诺维信公司-β葡聚糖酶和木聚糖酶)、Finizyme 250L(可获得自诺维信公司-具有纤维素酶、木聚糖酶副活性的β葡聚糖酶)和Filtrase系列(可获得自DSM-β葡聚糖酶和木聚糖酶)；或
(iv)总浸泡时间比不用所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶制备的发芽的谷物的时间少至少10％；或
(v)该总浸泡时间不超过25小时；或
(vi)该总浸泡时间不超过12小时；或
(vii)在浸泡过程期间所使用的水的总量比不用所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶来制备发芽的谷物所使用的水量少至少10％；或
(viii)在该发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量比在不用所述β-葡聚糖酶制备的发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量少至少10％；或
(ix)高分子量阿拉伯糖基木聚糖的量比在不用所述木聚糖酶制备的发芽的谷物中的阿拉伯糖基木聚糖的量少至少10％；或
(x)高分子量β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖的量比在不用所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶制备的发芽的谷物中的β-葡聚糖和/或阿拉伯糖基木聚糖的量少至少50％；或
(xi)在所述发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量为50mg/l或更小，并且在所述发芽的谷物中的阿拉伯糖基木聚糖的量为2000mg/l或更小；或
(xii)从所述发芽的谷物中制备的提取物比从不用所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶制备的发芽的谷物中制备的提取物具有更低的粘度；或
(xiii)该发芽的谷物具有增加的酶活性。
13.如权利要求12(xiii)所述的方法，其中：
(a)与不用所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶制备的发芽的谷物相比，所述酶活性增加了至少约2倍；或
(b)所述酶活性选自下组，该组由以下各项组成：β-葡聚糖酶活性、木聚糖酶活性、淀粉酶活性、蛋白酶活性、在谷物中天然存在的酶活性及其组合；或
(c)所述酶活性是β-葡聚糖酶和/或木聚糖酶活性。
14.根据任何前述权利要求所述的方法，进一步包括添加选自下组的一种或多种酶，该组具有：淀粉酶、蛋白酶、在谷物中天然存在的酶及其组合。
15.根据任何前述权利要求所述的方法，所述方法包括浸泡步骤，该浸泡步骤包含一个或多个润湿阶段，其中在所述一个或多个润湿阶段期间一次或多次添加所述β-葡聚糖酶和/或所述木聚糖酶，并且其中在所述发芽的谷物中的高分子量β-葡聚糖的量为50mg/l或更小，并且在所述发芽的谷物中的阿拉伯糖基木聚糖的量为2000mg/l或更小。
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