CN107048087A - 一种半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法，其是将生长状况优异的芽孢杆菌和乳酸杆菌的液态发酵制剂按比例混合，制得所述半滑舌鳎养殖用饲料添加剂。所得半滑舌鳎养殖用饲料添加剂不仅可以促进半滑舌鳎的快速生长，还能提高幼苗的存活率，且该饲料添加剂本身稳定性良好，可以长期储存。
Description
技术领域
本发明属于饲料添加剂技术领域，具体涉及一种半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法。
背景技术
微生态制剂，是指运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂，其活性物质包括活菌体、死菌体及其代谢产物。微生态制剂经口或者其他黏膜途径投放，旨在改善黏膜表面微生物或酶的动态平衡，或用于刺激特异性或非特异性免疫机制。目前，微生物添加剂己被应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域中。
芽孢杆菌属于好氧菌或兼性厌氧菌，在一定极端条件下会产生芽孢，从而具有耐高温、耐酸碱等特性；同时，一般芽孢杆菌制剂能够发挥生物夺氧作用，以维持胃肠道厌氧环境，并且通常能够和乳酸菌等厌氧菌混合使用，改善胃肠道环境；且芽孢杆菌在作用过程中可产生淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶等多种酶类及氨基酸、维生素和促生长物质，促进水产生物对营养物质的消化吸收；并能够与致病菌发生拮抗作用，从而抑制致病菌的生长；能够促进淋巴细胞增殖及免疫球蛋白分泌，改善动物机体的免疫功能。
半滑舌鳎是海水养殖物，对水体环境的要求很高，幼苗的存活率低，个体的生长缓慢，且容易感染有害致病菌，产生疾病。目前半滑舌鳎的养殖多采取喂药养殖，即使用抗生素来抑制有害病菌的生长。但是长期使用抗生素不仅对半滑舌鳎的养殖造成危害，而且滥用抗生素产生的耐药菌对人类健康具有巨大的威胁。
发明内容
本发明的目的在于提供一种半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法。所得半滑舌鳎养殖用饲料添加剂既能提高半滑舌鳎幼苗存活率，又能促进半滑舌鳎个体的成长，在半滑舌鳎养殖方面具有良好市场前景。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
1）乳酸杆菌的扩大培养：将从试管斜面培养基中取出的乳酸杆菌单菌落接入到液体培养基中，然后置于揺床中，20℃、150-250r/min条件下培养3天；然后于对数期将所得乳酸杆菌培养液按1-3vol%的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵温度为20℃，发酵时间为24-48h；在所得发酵液中加入柠檬酸钠0.5-0.8vol %、NaCl 2-6vol %和黄原胶1-5vol%，并调节pH至5-6，得乳酸杆菌液体制剂；
2）芽孢杆菌的扩大培养：将从固体培养基中取出的芽孢杆菌单菌落接入到液体培养基中，然后置于揺床中，15℃、150-250r/min条件下培养3天；然后于对数期将所得芽孢杆菌培养液按3-5vol%的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵温度为15℃，发酵时间为24-48h，得芽孢杆菌液体制剂；
3）复配：将步骤1）、2）所得乳酸杆菌液体制剂、芽孢杆菌液体制剂按体积比1-3:2（优选1:2）混合，制得所述半滑舌鳎养殖用饲料添加剂。
步骤1）中所述液体培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：酪蛋白胨8-12g、牛肉提取物10-12g、酵母提取物5-8g、葡萄糖5-6g、乙酸钠5-6g、柠檬酸二铵2-4g、吐温801-2g、磷酸氢二钾2-4g、七水硫酸镁0.2-0.6g、一水硫酸锰0.03-0.05g、碳酸钙20-22g；
所述发酵培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：蛋白胨5-8g、酵母粉1-3g。
步骤2）中所述液体培养基的原料配方为：每1000mL无菌水中含：蛋白胨5-8g、酵母粉1-3g、柠檬酸铁0.1-0.3g、氯化钠18-20g、氯化镁5-6g、氯化钙1.5-2.0g；
所述发酵培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：蛋白胨5-10g、酵母粉1-3g。
所述半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的应用方法为，按饲料重量的1-3%称取半滑舌鳎养殖用饲料添加剂，将其与饲料混合后泼洒进半滑舌鳎养殖池进行饲养。
本发明的有益效果在于：本发明所得半滑舌鳎养殖用饲料添加剂可直接投入养殖水体中，并可以降低水体中有害病菌的生长，帮助半滑舌鳎对营养物质进行消化吸收，从而显著提高半滑舌鳎的增重率以及幼苗的存活率，且该饲料添加剂稳定性良好，可以长期储存。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1 乳酸杆菌液体制剂的制备
用接种环在乳酸杆菌的固体培养基上进行划线，然后置于摇床中，以20℃、150-250r/min的条件恒温培养48h，获得单菌落；挑取单菌落，接入装有200mL液体培养基的500mL锥形瓶中，然后置于摇床中，以20℃、150-250r/min的条件恒温培养48h，获取种子液；按照1vol%的接种量将种子液接入发酵培养基中进行液体发酵培养，然后置于摇床中，以20℃、150-250r/min的条件恒温培养48h，得乳酸杆菌发酵液，最后往发酵液内加入柠檬酸钠5vol%、NaCl 4vol%和黄原胶 3vol%，并调节pH至5，获得乳酸杆菌液体制剂。
所用液体培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：酪蛋白胨10.0g、牛肉提取物10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g。
所用发酵培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：蛋白胨5.0g、酵母粉1.0g。
实施例2 芽孢杆菌最优培养基的确定
将从固体培养基中取出的芽孢杆菌单菌落接入到装有200mL液体培养基的500mL锥形瓶中，15℃、150-250r/min条件下培养3天；然后将所得芽孢杆菌菌种液从液体培养基中取出，按5vol%的接种量接入18个内装有200mL不同碳氮比的培养基的500mL锥形瓶中，置于揺床中，15℃、150-250r/min条件下培养72±3小时。将其稀释之后用酶标仪测定发酵液的OD值，绘制生长曲线，对比以确定最佳培养基配方。
实验确定最佳的液体培养基配方为：每1000mL无菌水中含：蛋白胨5.0g、酵母粉1.0g、柠檬酸铁0.1g、氯化钠19.45g、氯化镁5.98g、氯化钙1.8g。
所用发酵培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：蛋白胨5.0g、酵母粉1.0g。
实施例3 半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备
将实施例1、2所得芽孢杆菌液体制剂、乳酸杆菌液体制剂按照4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4混合，然后撒入鱼池之中，测定不同比例饲料添加剂对半滑舌鳎幼苗存活率的影响。
表1 不同比例饲料添加剂对半滑舌鳎幼苗存活率的影响
实施例4 温度变化对饲料添加剂品质的影响
将芽孢杆菌液体制、乳酸杆菌液体制剂剂按体积比2:1混合制得的饲料添加剂分别放置在10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃恒温水浴环境下，经过3h处理，分别检测饲料添加剂中芽孢杆菌含量及乳酸杆菌含量，确定菌种变化量，其结果见表2。
表2 温度对饲料添加剂品质的影响
由表2可见，饲料添加剂中的芽孢杆菌和乳酸杆菌具有良好的稳定性，温度变化对其影响较小。
实施例5 饲料添加剂稳定性试验
将芽孢杆菌液体制剂、乳酸杆菌液体制剂按体积比2:1混合制得的饲料添加剂在4℃冰箱中避光保存0个月、1个月、2个月、3个月后，分别检测其中芽孢杆菌含量及低温乳酸菌含量，其结果见表3。
表3 稳定性试验
由表3可见，经3个月的存放，饲料添加剂中的芽孢杆菌和乳酸杆菌含量仍较高。
实施例6 饲料添加剂用于半滑舌鳎的养殖实验
将芽孢杆菌液体制剂、乳酸杆菌液体制剂按体积比2:1混合制得的饲料添加剂与半滑舌鳎饲料混合，加水润湿后进行投料。选择无外伤，体质健壮，规格均一，摄食、游动能力强的个体进行喂养。
具体喂养方式为：分别在上午08:30-09:30和下午14:00-15:00，分两次进行喂食，每天喂食时间共2小时；估算半滑舌鳎幼鱼的采食量；温度控制在19±3℃，盐度千分之28-30、pH7.4-7.9，溶解氧保持在5mg/L以上；及时将病鱼、死鱼捞出；为期60天。记录鱼体存活率、初重、终重、初始体长、最终体长，并以单纯饲料喂养为对照，以探究该饲料添加剂对半滑舌鳎幼鱼增重、增长和成活率的影响。
表4 半滑舌鳎水箱养殖试验
由表4可见，将本发明所制备的半滑舌鳎饲料添加剂应用于半滑舌鳎的养殖，可以明显增加鱼体的重量和体长，其平均增重198g，比正常饲料喂养的对照组多26g，平均增长12cm，比正常饲料喂养的对照组多2cm；同时，其可以提高养殖存活率，使存活率提高22%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (4)
1.一种半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）乳酸杆菌的扩大培养：将乳酸杆菌单菌落接入到液体培养基中，然后置于揺床中，20℃、150-250r/min条件下培养3天；然后于对数期将所得乳酸杆菌培养液按1-3vol%的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵温度为20℃，发酵时间为24-48h；在所得发酵液中加入柠檬酸钠0.5-0.8vol %、NaCl 2-6vol %和黄原胶1-5 vol%，并调节pH至5-6，得乳酸杆菌液体制剂；
2）芽孢杆菌的扩大培养：将芽孢杆菌单菌落接入到液体培养基中，然后置于揺床中，15℃、150-250r/min条件下培养3天；然后于对数期将所得芽孢杆菌培养液按3-5vol%的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵温度为15℃，发酵时间为24-48h，得芽孢杆菌液体制剂；
3）复配：将步骤1）、2）所得乳酸杆菌液体制剂、芽孢杆菌液体制剂按体积比1-3:2混合，制得所述半滑舌鳎养殖用饲料添加剂。
2. 根据权利要求1所述半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤1）中所述液体培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：酪蛋白胨8-12g、牛肉提取物10-12g、酵母提取物5-8g、葡萄糖5-6g、乙酸钠5-6g、柠檬酸二铵2-4g、吐温80 1-2g、磷酸氢二钾2-4g、七水硫酸镁0.2-0.6g、一水硫酸锰0.03-0.05g、碳酸钙20-22g；
所述发酵培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：蛋白胨5-8g、酵母粉1-3g。
3.根据权利要求1所述半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤2）中所述液体培养基的原料配方为：每1000mL无菌水中含：蛋白胨5-8g、酵母粉1-3g、柠檬酸铁0.1-0.3g、氯化钠18-20g、氯化镁5-6g、氯化钙1.5-2.0g；
所述发酵培养基的原料配方为：每1000mL蒸馏水中含：蛋白胨5-10g、酵母粉1-3g。
4.根据权利要求1所述半滑舌鳎养殖用饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤3）中芽孢杆菌液体制剂、乳酸杆菌液体制剂混合的体积比为2:1。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109527269A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-03-29 | 天津农学院 | 一种用于改善肠道微生态结构的复合物 |
| CN114190307A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-18 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 半滑舌鳎循环水养殖肠炎防治方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103497906A (zh) * | 2013-08-02 | 2014-01-08 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 一种微生态制剂及其制备方法与应用 |
| CN105907674A (zh) * | 2016-05-04 | 2016-08-31 | 福州大学 | 一种复合微生态制剂的制备方法及其应用 |
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2017
- 2017-05-09 CN CN201710322839.0A patent/CN107048087A/zh active Pending
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