CN107047306B - 用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组，包括原球茎增殖培养基、原球茎分化培养基和生根培养基，且揭露了原球茎增殖培养基、原球茎分化培养基、生根培养基的具体组分。本发明培养基组能够使得秋石斛兰的原球茎在较短的时间内经历了原球茎增殖培养、原球茎分化培养及生根培养三个阶段，从而获得健壮的秋石斛兰生根苗，即提高了秋石斛兰快速繁殖能力，达到较为理想的培养效果；具体地，原球茎增殖率高且质量好，能够保持较强分化能力与再生能力，且培养获得的苗健壮、生根能力强。
Description
【技术领域】
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组。
【背景技术】
秋石斛兰(Dendrobium spp.)为兰科石斛属常绿类石斛，又称蝴蝶石斛、杜兰、石斛、石兰等；多是以原产于新几内亚的热带原生种蝴蝶石解(Dendrobium Phalaenopsis)为亲本育成的杂交品种。秋石斛兰是是近几年在中国插花市场上流行的花卉，种类繁多，花形花姿优美，色彩艳丽，花期长，具有较高的观赏价值，在国内切花和盆花的市场需求量逐年增加。
近年我国大陆引进了不少秋石斛兰品种，但是种苗生产主要靠分株繁殖，不仅繁殖速度慢，而且病毒不断积累严重影响品质，难以满足生产需求。利用植物组织培养技术能够使秋石斛兰种苗快速繁殖，目前国内虽然有对秋石斛兰组织培养的相关报道，但是现有的秋石斛兰组织培养均存在着培养效果不理想的问题，尤其是组织快速繁殖过程中常出现原球茎与芽并存生长现象，极大影响了种苗繁育的效率，并且不利于原球茎的进一步研究与利用。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组，提高了秋石斛兰快速繁殖能力，而且培养获得的苗健壮、生根能力强。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组，该培养基组包括原球茎增殖培养基、原球茎分化培养基和生根培养基，其中：
原球茎增殖培养基的组分为：HM1基本培养基、TDZ 0.5～1.0mg/L、NAA 0.1～0.2mg/L、活性炭0.3～0.6g/L、椰汁20～80ml/L、白糖20～30g，且pH为5.4～5.8；所述HM1基本培养基的成份及各成份用量如下：花宝1号1.0～1.5g/L、KNO3 800～950mg/L、NH4NO3 825～875mg/L、KH2PO4 100～125mg/L、MgSO4.7H2O 200～250mg/L、CaCl2.2H2O 330～440mg/L、MnSO4.H2O 16.9mg/L、ZnSO4.7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO2.2H2O0.25mg/L、CoCl2.6H2O 0.025mg/L、CuSO4.5H2O 0.025mg/L、FeSO4.7H2O27.8mg/L、Na2.EDTA37.3mg/L、盐酸硫胺素10.0～15.0mg/L、烟酸3.0～5.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100～120mg/L；
原球茎分化培养基的组分为：HM2基本培养基、6-BA 1.0～3.0mg/L、KT 0.5～2.0mg/L、Ad 0～1.0mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、水解乳蛋白200～500mg/L、酸水解酪蛋白200～500mg/L、白糖25～30g/L、香蕉泥50～100g/L、凝固剂6.0～6.5g/L，且pH为5.4～5.8；所述改良HM2基本培养基的成份及各成份用量如下：花宝1号1.3～1.8g/L、KNO3 800～950mg/L、NH4NO3 825～875mg/L、KH2PO4 100～150mg/L、MgSO4.7H2O 200～250mg/L、CaCl2.2H2O 330～440mg/L、MnSO4.H2O 16.9mg/L、ZnSO4.7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO2.2H2O 0.25mg/L、CoCl2.6H2O 0.025mg/L、CuSO4.5H2O 0.025mg/L、FeSO4.7H2O27.8mg/L、Na2.EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素5.0～7.0mg/L、烟酸2.0～3.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇150～180mg/L；
生根培养基的组分为：HM3基本培养基、IBA0.2～0.3mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、活性炭0.5～0.8g/L、香蕉粉2.0～3.5g/L、白糖20～25g、凝固剂6.3～7.0g/L，且pH为5.4～5.8；所述HM3基本培养基的成份及各成份用量如下：花宝1号0.8～1.2g/L、KNO3 700～800mg/L、NH4NO3 500～700mg/L、KH2PO4 85～125mg/L、MgSO4.7H2O 185～250mg/L、CaCl2.2H2O 330～440mg/L、MnSO4.H2O 16.9mg/L、ZnSO4.7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO2.2H2O 0.25mg/L、CoCl2.6H2O 0.025mg/L、CuSO4.5H2O 0.025mg/L、FeSO4.7H2O27.8mg/L、Na2.EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素1.0～3.0mg/L、烟酸1.0～2.0mg/L、盐酸吡哆醇5.0～8.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100～120mg/L。
进一步地，所述凝固剂为琼脂粉、卡拉胶、或琼脂粉和卡拉胶的混合物。
进一步地，所述凝固剂为琼脂粉和卡拉胶的混合物，且琼脂粉与卡拉胶的质量比为1:1。
本发明用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组的有益效果在于：
仅需165～185d的时间就能将秋石斛兰的原球茎依次经历原球茎增殖培养、原球茎分化培养及生根培养三个阶段，从而获得健壮的秋石斛兰生根苗，即提高了秋石斛兰快速繁殖能力，实现较为理想的培养效果；具体地，原球茎增殖率高且质量好，能够保持较强分化能力与再生能力，且培养获得的苗健壮、生根能力强；进而克服了现有技术中原球茎培养效率低、苗分化率低等缺陷；另外，本发明培养基组中的各培养基组分成本低廉，使得本发明培养基组易于推广与应用。
【具体实施方式】
本发明用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组，该培养基组包括原球茎增殖培养基、原球茎分化培养基和生根培养基，其中：
原球茎增殖培养基的组分为：HM1基本培养基、TDZ 0.5～1.0mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、活性炭0.3～0.6g/L、椰汁20～80ml/L、白糖20～30g，且pH为5.4～5.8；所述HM1基本培养基的成份及各成份用量如下表1所示；
表1 HM1基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成份名称 | 用量mg/L | 序号 | 成份名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 1000～1500 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 800～950 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 825～875 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 100～125 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 200～250 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 330～440 | 16 | 盐酸硫胺素 | 10.0～15.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 3.0～5.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 1.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 100～120 |
原球茎分化培养基的组分为：HM2基本培养基、6-BA 1.0～3.0mg/L、KT 0.5～2.0mg/L、Ad 0～1.0mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、水解乳蛋白(LH)200～500mg/L、酸水解酪蛋白(CH)200～500mg/L、白糖25～30g/L、香蕉泥50～100g/L、凝固剂6.0～6.5g/L，且pH为5.4～5.8；所述改良HM2培养基的成份及各成份用量如下表2所示；
表2 HM2基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成份名称 | 用量mg/L | 序号 | 成份名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 1300～1800 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 800～950 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 825～875 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 100～150 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 200～250 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 330～440 | 16 | 盐酸硫胺素 | 5.0～7.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 2.0～3.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 1.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 150～180 |
生根培养基的组分为：HM3基本培养基、花宝1号0.8～1.2g/L、IBA0.2～0.3mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、活性炭0.5～0.8g/L、香蕉粉2.0～3.5g/L、白糖20～25g、凝固剂6.3～7.0g/L，且pH为5.4～5.8；所述改良HM3培养基的成份及各成份用量如下表3所示。
表3 HM3基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成份名称 | 用量mg/L | 序号 | 成份名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 800～1200 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 700～800 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 500～700 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 85～125 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 185～250 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 330～440 | 16 | 盐酸硫胺素 | 1.0～3.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 1.0～2.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 5.0～8.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 100～120 |
其中，原球茎分化培养基与生根培养基凝固剂可具体选用琼脂粉、卡拉胶、或琼脂粉和卡拉胶的混合物；当凝固剂选用琼脂粉和卡拉胶的混合物时，其中琼脂粉与卡拉胶的质量比为1:1。
其中，原球茎分化培养基与生根培养基凝固剂可具体选用琼脂粉、卡拉胶、或琼脂粉和卡拉胶的混合物；当凝固剂选用琼脂粉和卡拉胶的混合物时，其中琼脂粉与卡拉胶的质量比为1:1。
且需要说明的是，在本发明中花宝1号产地美国，其N、P、K质量比为7：6：19；琼脂粉、卡拉胶产地日本，强度分别为1400g/cm2、1500g/cm2；白糖为市售质量等级一级的袋装白砂糖；香蕉泥与香蕉粉的原料香蕉均选用福建漳州产的天宝香蕉。
本发明培养基组用于秋石斛兰快速繁殖时，将秋石斛兰的原球茎置于原球茎增殖培养基中，并以摇床振荡方式进行增殖培养，摇床转速80～100r/min，培养温度25℃，光强为800～1000lx，光照时间为12h/d；接着将增殖培养后的原球茎接种至原球茎分化培养基上进行分化培养，培养温度(24±3)℃，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养5～7d，之后光强为1800～2000lx，光照时间12h/d；然后分化培养分化出的芽接种至生根培养基中进行生根培养即可，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养5～7d，之后光强为2000～2500lx，光照时间12～14h/d。
为了对本发明培养基组进行进一步的阐述说明，申请人给出了如下几个将本发明具体培养基组进行应用的实施例，且这些实施例仅是示例性的，并不用于限制本发明的保护范围。
实施例1
(1)繁殖材料：秋石斛兰‘三亚阳光’幼芽诱导获得的原球茎。
(2)原球茎增殖培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例原球茎增殖培养基:HM1基本培养基(具体成份及各成份用量如下表4所示)、TDZ 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、活性炭0.3g/L、椰汁50ml/L、白糖25g/L，且pH为5.4；接着将繁殖材料即所述原球茎置于配制的原球茎增殖培养基中，并以摇床振荡方式进行增殖培养，摇床转速90r/min，培养温度25℃，光强为800lx，光照时间为12h/d；
表4 实施例1中HM1基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成份名称 | 用量mg/L | 序号 | 成份名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 1500 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 800 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 825 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 100 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 200 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 330 | 16 | 盐酸硫胺素 | 10.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 3.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 1.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 100 |
通过观察与分析得知原球茎增殖培养的结果为：培养周期35d，增殖系数7.6，增殖培养后的原球茎颗粒大且饱满。
(3)原球茎分化培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例原球茎分化培养基:HM2基本培养基(具体成份及各成份用量如下表5所示)、6-BA 3.0mg/L、KT 2.0mg/L、Ad 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、香蕉泥100g/L、白糖25g g/L、琼脂粉6.0g/L，且pH为5.4；接着将增殖培养后的原球茎接种至配制的原球茎分化培养基上进行分化培养，培养温度(24±3)℃，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养5d，之后光强为1800lx，光照时间12h/d；
表5 实施例1中HM2基本培养基的成份及各成份用量
通过观察与分析得知原球茎分化培养的结果为：培养周期75d，芽分化量大，每克原球茎可分化出150个芽。
(4)生根培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例生根培养基:HM3基本培养基(具体成份及各成份用量如下表6所示)、IBA0.2mg/L、NAA0.1mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉粉2.0g/L、白糖20g/L、卡拉胶6.3g/L，且pH为5.4；接着将分化培养分化出的芽接种至配制的生根培养基上进行生根培养，培养温度(24±3)℃，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养6d，之后光强为2000lx，光照时间12h/d；
表6 实施例1中HM3基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成分名称 | 用量mg/L | 序号 | 成分名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 800 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 700 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 500 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 85 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 185 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 330 | 16 | 盐酸硫胺素 | 1.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 1.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 5.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 100 |
通过观察与分析得知生根培养的结果为：培养周期75d，获得株高6.0～7.0cm、根长2.0～3.0cm、根数3～5条的完整植株，且生根率达100.0％。
实施例2
(1)繁殖材料：秋石斛兰‘水晶’幼芽诱导获得的原球茎。
(2)原球茎增殖培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例原球茎增殖培养基:HM1基本培养基(具体成份及各成份用量如下表7所示)、TDZ 0.6mg/L、NAA0.2mg/L、活性炭0.5g/L、椰汁20ml/L、白糖20g/L，且pH为5.6；接着将繁殖材料即所述原球茎置于配制的原球茎增殖培养基中，并以摇床振荡方式进行增殖培养，摇床转速80r/min，培养温度25℃，光强为950lx，光照时间为12h/d；
表7 实施例2中HM1基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成分名称 | 用量mg/L | 序号 | 成分名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 1000 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 900 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 850 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 110 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 230 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 380 | 16 | 盐酸硫胺素 | 13.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 4.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 1.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 110 |
通过观察与分析得知原球茎增殖培养的结果为：培养周期30d，增殖系数6.5，增殖培养后的原球茎颗粒大且饱满。
(3)原球茎分化培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例原球茎分化培养基:HM2基本培养基(具体成份及各成份用量如下表8所示)、6-BA 1.0mg/L、KT 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、LH200mg/L、CH 500mg/L、白糖25g/L、琼脂粉与卡拉胶的混合物6.0g/L(该混合物中琼脂粉与卡拉胶的质量比为1:1)，且pH为5.6；接着将增殖培养后的原球茎接种至配制的原球茎分化培养基上进行分化培养，培养温度(24±3)℃，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养7d，之后光强为1900lx，光照时间12h/d；
表8 实施例2中HM2基本培养基的成份及各成份用量
通过观察与分析得知原球茎分化培养的结果为：培养周期60d，芽分化量大，每克原球茎可分化出130个芽。
(4)生根培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例生根培养基:HM3基本培养基(具体成份及各成份用量如下表9所示)、IBA0.2mg/L、NAA0.2mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉粉3.0g/L、白糖22g/L、卡拉胶6.5g/L，且pH为5.6；接着将分化培养分化出的芽接种至配制的生根培养基上进行生根培养，培养温度(24±3)℃，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养5d，之后光强为2300lx，光照时间13h/d；
表9 实施例2中HM3基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成分名称 | 用量mg/L | 序号 | 成分名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 800 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 750 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 600 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 100 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 230 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 380 | 16 | 盐酸硫胺素 | 2.5 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 1.5 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 7.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 肌醇 | 110 |
通过观察与分析得知生根培养的结果为：培养周期75d，获得株高6.0～7.0cm、根长2.0～3.0cm、根数3～5条的完整植株，且生根率达100.0％。
实施例3
(1)繁殖材料：秋石斛兰‘红粉佳人’幼芽诱导获得的原球茎。
(2)原球茎增殖培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例原球茎增殖培养基:HM1基本培养基(具体成份及各成份用量如下表10所示)、TDZ 1.0mg/L、NAA 0.1mg/L、活性炭0.6g/L、椰汁80ml/L、白糖30g/L，且pH为5.8；接着将繁殖材料即所述原球茎置于配制的原球茎增殖培养基中，并以摇床振荡方式进行增殖培养，摇床转速100r/min，培养温度25℃，光强为1000lx，光照时间为12h/d；
表10 实施例3中HM1基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成分名称 | 用量mg/L | 序号 | 成分名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 1500 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 950 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 875 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 125 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 250 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 440 | 16 | 盐酸硫胺素 | 15.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 5.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 1.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 120 |
通过观察与分析得知原球茎增殖培养的结果为：培养周期33d，增殖系数6.8，增殖培养后的原球茎颗粒大且饱满。
(3)原球茎分化培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例原球茎分化培养基:HM2基本培养基(具体成份及各成份用量如下表11所示)、花宝1号1.8g/L、6-BA 2.0.0mg/L、KT 2.0mg/L、Ad1.0mg/L、NAA0.2mg/L、LH500mg/L、CH 500mg/、白糖30g/L、琼脂粉与卡拉胶混合物6.5g/L(该混合物中琼脂粉与卡拉胶的质量比为1:1)，且pH为5.8；接着将增殖培养后的原球茎接种至配制的原球茎分化培养基上进行分化培养，培养温度(24±3)℃，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养7d，之后光强为2000lx，光照时间12h/d；
表11 实施例3中HM2基本培养基的成份及各成份用量
通过观察与分析得知原球茎分化培养的结果为：培养周期70d，芽分化量大，每克原球茎可分化出145个芽。
(4)生根培养：按照如下组分并依据常规的培养基配制方法配制本实施例生根培养基:HM3基本培养基(具体成份及各成份用量如下表12所示)、IBA0.3mg/L、NAA0.2mg/L、活性炭0.8g/L、香蕉粉3.5g/L、白糖25g/L、琼脂粉与卡拉胶混合物7.0g/L(该混合物中琼脂粉与卡拉胶的质量比为1:1)且pH为5.8；接着将分化培养分化出的芽接种至配制的生根培养基上进行生根培养，培养温度(24±3)℃，且刚接种时先放置培养室不开培养架灯管即自然光照下培养7d，之后光强为2500lx，光照时间14h/d；
表12 实施例2中HM3基本培养基的成份及各成份用量
| 序号 | 成分名称 | 用量mg/L | 序号 | 成分名称 | 用量mg/L |
| 1 | 花宝1号 | 1200 | 11 | Na<sub>2</sub>MoO<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 0.25 |
| 2 | KNO<sub>3</sub> | 800 | 12 | CoCl<sub>2</sub>.6H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 3 | NH<sub>4</sub>NO<sub>3</sub> | 700 | 13 | CuSO<sub>4</sub>.5H<sub>2</sub>O | 0.025 |
| 4 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> | 125 | 14 | FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 27.8 |
| 5 | MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 250 | 15 | Na<sub>2</sub>.EDTA | 37.3 |
| 6 | CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O | 330～440 | 16 | 盐酸硫胺素 | 3.0 |
| 7 | MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O | 16.9 | 17 | 烟酸 | 2.0 |
| 8 | ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O | 8.6 | 18 | 盐酸吡哆醇 | 8.0 |
| 9 | H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> | 6.2 | 19 | 甘氨酸 | 2.0 |
| 10 | KI | 0.83 | 20 | 肌醇 | 120 |
通过观察与分析得知生根培养的结果为：培养周期75d，获得株高6.0～7.0cm、根长2.0～3.0cm、根数3～5条的完整植株，且生根率达100.0％。
综上，本发明培养基组用于秋石斛兰的快速繁殖培养时，仅需165～185d的时间，就能将外植体的原球茎依次经历原球茎增殖培养、原球茎分化培养及生根培养三个阶段，从而获得健壮的秋石斛兰生根苗；具体地，原球茎增殖率高且质量好，能够保持较强分化能力与再生能力，且培养获得的苗健壮、生根能力强；进而克服了现有技术中原球茎培养效率低、苗分化率低等缺陷；另外，本发明培养基组中的各培养基组分成本低廉，使得本发明培养基组易于推广与应用。
Claims (1)
1.一种用于秋石斛兰快速繁殖的培养基组，其特征在于：该培养基组包括原球茎增殖培养基、原球茎分化培养基和生根培养基，其中：
原球茎增殖培养基的组分为：HM1基本培养基、TDZ 0.5～1.0mg/L、NAA 0.1～0.2mg/L、活性炭0.3～0.6g/L、椰汁20～80ml/L、白糖20～30g，且pH为5.4～5.8；所述HM1基本培养基的成份及各成份用量如下：花宝1号1.0～1.5g/L、KNO3 800～950mg/L、NH4NO3 825～875mg/L、KH2PO4 100～125mg/L、MgSO4.7H2O 200～250mg/L、CaCl2.2H2O 330～440mg/L、MnSO4.H2O16.9mg/L、ZnSO4.7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO2.2H2O 0.25mg/L、CoCl2.6H2O 0.025mg/L、CuSO4.5H2O 0.025mg/L、FeSO4.7H2O 27.8mg/L、Na2.EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素10.0～15.0mg/L、烟酸3.0～5.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100～120mg/L；
原球茎分化培养基的组分为：HM2基本培养基、6-BA 1.0～3.0mg/L、KT 0.5～2.0mg/L、Ad 0～1.0mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、水解乳蛋白200～500mg/L、酸水解酪蛋白200～500mg/L、白糖25～30g/L、香蕉泥50～100g/L、凝固剂6.0～6.5g/L，且pH为5.4～5.8；所述改良HM2基本培养基的成份及各成份用量如下：花宝1号1.3～1.8g/L、KNO3 800～950mg/L、NH4NO3825～875mg/L、KH2PO4 100～150mg/L、MgSO4.7H2O 200～250mg/L、CaCl2.2H2O 330～440mg/L、MnSO4.H2O 16.9mg/L、ZnSO4.7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO2.2H2O0.25mg/L、CoCl2.6H2O 0.025mg/L、CuSO4.5H2O 0.025mg/L、FeSO4.7H2O 27.8mg/L、Na2.EDTA37.3mg/L、盐酸硫胺素5.0～7.0mg/L、烟酸2.0～3.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇150～180mg/L；
生根培养基的组分为：HM3基本培养基、IBA0.2～0.3mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、活性炭0.5～0.8g/L、香蕉粉2.0～3.5g/L、白糖20～25g、凝固剂6.3～7.0g/L，且pH为5.4～5.8；所述HM3基本培养基的成份及各成份用量如下：花宝1号0.8～1.2g/L、KNO3 700～800mg/L、NH4NO3 500～700mg/L、KH2PO4 85～125mg/L、MgSO4.7H2O 185～250mg/L、CaCl2.2H2O 330～440mg/L、MnSO4.H2O 16.9mg/L、ZnSO4.7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO2.2H2O 0.25mg/L、CoCl2.6H2O 0.025mg/L、CuSO4.5H2O 0.025mg/L、FeSO4.7H2O27.8mg/L、Na2.EDTA 37.3mg/L、盐酸硫胺素1.0～3.0mg/L、烟酸1.0～2.0mg/L、盐酸吡哆醇5.0～8.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100～120mg/L；
所述凝固剂为琼脂粉和卡拉胶的混合物，且琼脂粉与卡拉胶的质量比为1:1。
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