CN107027631B - 一种鹧鸪茶的繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鹧鸪茶的繁殖方法，属于植物栽培技术领域。本发明方法选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA+土豆汁+琼脂的培养基里培养，之后更换为MS培养基+6‑BA+NAA+琼脂+蔗糖的培养基，之后将培养得到的芽切下进行增殖培养，接着将增殖培养得到的芽苗进行生根培养至根长为3‑3.5cm时，即可移栽。本发明方法可解决鹧鸪茶人工大面积栽培所面临的种苗来源紧缺、移栽成活率低等问题，起到了关键性的作用，移栽成活率在95%以上，产量提高40％以上，可大大推动鹧鸪茶产业化、规模化发展，具有良好的社会效益和经济效益。
Description
技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种鹧鸪茶的繁殖方法。
背景技术
鹧鸪茶，海南特产，叶圆味甘，是一种奇特的野生茶叶。主产于冠有“世界长寿之乡”美誉的海南万宁各山区、丘陵、沿海一带的优良品质原生态野生鹧鸪茶树大叶，其茶质醇厚，众口皆碑。品之其味，甘辛、香温、散发出浓郁的零陵香气。千年来，被历代文人墨客誉为茶品中的“灵芝草”，是海南各地方人们日常生活，四季常饮和接待宾客的绿色养生健康饮品。我国著名诗人、戏作家田汉当年登东山岭曾写下：“羊肥爱芝草，茶好伴名泉”的诗句。《本草求原卷一》云：“鹧鸪茶，甘辛，香温，主咳嗽，痰火内伤，散热毒瘤痢；理蛇要药。根治牙痛，疳积。”现代文献则有记载“干后有零陵香气”。
目前，鹧鸪茶资源的开发利用尚停留在利用野生资源的水平上，产业发展所需的鹧鸪茶人工规模种植和配套栽培技术尚处于空白。亦今为止，海南岛内外或国内外尚没有建立鹧鸪茶产品商业化生产的大规模种植基地，几乎所有市场上流通的鹧鸪茶产品均是直接从野生植物上获取。除了个别农户有零星的庭院式种植外，制作鹧鸪茶产品所需的原材料几乎全部依赖掠夺式地从野生植株上获取叶片。受到经济利益的驱使，目前鹧鸪茶野生资源已经逐年减少。由于鹧鸪茶的市场需求量较大，且随着“海南国际旅游岛”的发展，鹧鸪茶原叶的需求量也将会急剧增加。因此如何克服现有技术的不足是目前植物栽培技术领域亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种鹧鸪茶的繁殖方法，该方法提高鹧鸪茶的繁殖系数，可满足大规模生产的需要，弥补了目前鹧鸪茶组培繁殖的空白。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种鹧鸪茶的繁殖方法，包括如下步骤：
步骤（1），选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA 0.15-0.2mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L，pH为5.8-6.0的培养基里，培养3-5d，更换培养基，更换为MS培养基+6-BA 4-5mg/L+NAA 0.01-0.05 mg/L+琼脂6-7 g/L+蔗糖30 g/L，pH为5.8-6.0的培养基，继续培养20-25d；
步骤（2），将步骤（1）培养得到的芽切下，置于DKW培养基+芸苔素内酯 0.15-0.2mg/L+2-2.5mg/L多效唑+椰子汁10-15 g/L +蔗糖50-80g/L+琼脂5-5.5g/L，pH为5.7-5.9的培养基里进行增殖培养18-22d；
步骤（3），将步骤（2）培养得到的芽苗置于1/2MS培养基+IBA 1-2mg/L+6-BA 6-8mg/L +蔗糖20-25g/L+PVP（聚乙烯吡咯烷酮） 2-3 g/L+活性炭0.8g/L，pH为5.8-6.0的培养基里进行生根培养；
步骤（4），当步骤（3）的生根培养培养至根长为3-3.5cm时，即可移栽，移栽后，在遮阴度为40%-45%、基质湿度为50-60%条件下进行栽培，25-30d后，即可移栽至大田；
移栽的基质由如下组分组成：按照重量份数计，鸡枞菌渣5-10份、腐殖土8-12份、钠沸石粉1-2份、海藻粉2-3份、油橄榄果渣6-10份，将上述组分混合均匀，即为基质；钠沸石粉、海藻粉的粒径没有具有要求，优选为-100目；
油橄榄果渣为油橄榄果榨油后的废料。
进一步，优选的是所述的清洗采用含有洗涤剂的水溶液进行清洗1-3次。
进一步，优选的是所述的洗涤剂为十二烷基苯磺酸钠，在水溶液中的浓度为0.1-0.15mol/L。
进一步，优选的是所述的消毒方法为在质量浓度为0.1%的升汞溶液中消毒6-8min，再在质量浓度为0.3%的次氯酸钠溶液中消毒2-4min，然后用无菌水冲洗1-2min。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
本发明方法可解决鹧鸪茶人工大面积栽培所面临的种苗来源紧缺、移栽成活率低等问题，起到了关键性的作用，移栽成活率在95%以上，产量提高40％以上；本发明方法不仅防止无性繁殖中的病毒感染，还能培养出性状一致组培苗植株，有利于鹧鸪茶的标准化生产，并能提高单位面积的产值，并能大大推动鹧鸪茶产业化、规模化发展，具有良好的社会效益和经济效益。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
IBA为吲哚丁酸；NAA为萘乙酸；6-BA为6-苄基腺嘌呤；PVP为聚乙烯吡咯烷酮；土豆汁为新鲜的土豆榨汁；椰子汁为新鲜的椰子汁。
实施例1
一种鹧鸪茶的繁殖方法，包括如下步骤：
步骤（1），选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA 0.15mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L，pH为5.8-6.0的培养基里，培养3d，更换培养基，更换为MS培养基+6-BA 4mg/L+NAA 0.01mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30 g/L，pH为5.8-6.0的培养基，继续培养20d；
步骤（2），将步骤（1）培养得到的芽切下，置于DKW培养基+芸苔素内酯 0.15mg/L+2mg/L多效唑+椰子汁10 g/L +蔗糖50g/L+琼脂5g/L，pH为5.7-5.9的培养基里进行增殖培养18d；
步骤（3），将步骤（2）培养得到的芽苗置于1/2MS培养基+IBA 1mg/L+6-BA 6mg/L +蔗糖20g/L+PVP 2g/L+活性炭0.8g/L，pH为5.8-6.0的培养基里进行生根培养；
步骤（4），当步骤（3）的生根培养培养至根长为3-3.5cm时，即可移栽，移栽后，在遮阴度为40%-45%、基质湿度为50-60%条件下进行栽培，25-30d后，即可移栽至大田；
移栽的基质由如下组分组成：按照重量份数计，鸡枞菌渣10份、腐殖土12份、钠沸石粉2份、海藻粉3份、油橄榄果渣10份。
其中，步骤（1）中的清洗采用含有0.15mol/L十二烷基苯磺酸钠的水溶液进行清洗3次。步骤（1）中的消毒方法为在质量浓度为0.1%的升汞溶液中消毒8min，再在质量浓度为0.3%的次氯酸钠溶液中消毒4min，然后用无菌水冲洗2min。
实施例2
步骤（1），选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA 0.18mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L，pH为5.8-6.0的培养基里，培养5d，更换培养基，更换为MS培养基+6-BA 4.5mg/L+NAA 0.03 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L，pH为5.8-6.0的培养基，继续培养23d；
步骤（2），将步骤（1）培养得到的芽切下，置于DKW培养基+芸苔素内酯 0.17mg/L+2.4mg/L多效唑+椰子汁11g/L +蔗糖570g/L+琼脂5.2g/L，pH为5.7-5.9的培养基里进行增殖培养20d；
步骤（3），将步骤（2）培养得到的芽苗置于1/2MS培养基+IBA 1.4mg/L+6-BA 7mg/L+蔗糖22g/L+PVP 2.5 g/L+活性炭0.8g/L，pH为5.8-6.0的培养基里进行生根培养；
步骤（4），当步骤（3）的生根培养培养至根长为3-3.5cm时，即可移栽，移栽后，在遮阴度为40%-45%、基质湿度为50-60%条件下进行栽培，25-30d后，即可移栽至大田；
移栽的基质由如下组分组成：按照重量份数计，鸡枞菌渣5份、腐殖土8份、钠沸石粉1份、海藻粉2份、油橄榄果渣6份。
其中，步骤（1）中的清洗采用含有0.1mol/L十二烷基苯磺酸钠的水溶液进行清洗1次。步骤（1）中的消毒方法为在质量浓度为0.1%的升汞溶液中消毒6min，再在质量浓度为0.3%的次氯酸钠溶液中消毒2min，然后用无菌水冲洗1min。
实施例3
步骤（1），选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA 0.2mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L，pH为5.8-6.0的培养基里，培养5d，更换培养基，更换为MS培养基+6-BA 5mg/L+NAA 0.05 mg/L+琼脂7 g/L+蔗糖30 g/L，pH为5.8-6.0的培养基，继续培养25d；
步骤（2），将步骤（1）培养得到的芽切下，置于DKW培养基+芸苔素内酯 0.2mg/L+2.5mg/L多效唑+椰子汁15 g/L +蔗糖80g/L+琼脂5.5g/L，pH为5.7-5.9的培养基里进行增殖培养22d；
步骤（3），将步骤（2）培养得到的芽苗置于1/2MS培养基+IBA 2mg/L+6-BA 8mg/L +蔗糖25g/L+PVP 3 g/L+活性炭0.8g/L，pH为5.8-6.0的培养基里进行生根培养；
步骤（4），当步骤（3）的生根培养培养至根长为3-3.5cm时，即可移栽，移栽后，在遮阴度为40%-45%、基质湿度为50-60%条件下进行栽培，25-30d后，即可移栽至大田；
移栽的基质由如下组分组成：按照重量份数计，鸡枞菌渣8份、腐殖土10份、钠沸石粉1.2份、海藻粉2.5份、油橄榄果渣7份。
其中，步骤（1）中的清洗采用含有0.13mol/L十二烷基苯磺酸钠的水溶液进行清洗2次。步骤（1）中的消毒方法为在质量浓度为0.1%的升汞溶液中消毒7min，再在质量浓度为0.3%的次氯酸钠溶液中消毒3min，然后用无菌水冲洗1.5min。
对比例1
步骤（1），选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA 0.1mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L，pH为5.8-6.0的培养基里，培养5d，更换培养基，更换为MS培养基+6-BA 5mg/L+NAA 0.05 mg/L+琼脂7 g/L+蔗糖20 g/L，pH为5.8-6.0的培养基，继续培养25d；
步骤（2），将步骤（1）培养得到的芽切下，置于DKW培养基+芸苔素内酯 0.2mg/L +椰子汁15 g/L +蔗糖80g/L+琼脂5.5g/L，pH为5.7-5.9的培养基里进行增殖培养22d；
步骤（3），将步骤（2）培养得到的芽苗置于1/2MS培养基+IBA 2mg/L+6-BA 8mg/L +蔗糖25g/L +活性炭0.8g/L，pH为5.8-6.0的培养基里进行生根培养；
步骤（4），当步骤（3）的生根培养培养至根长为3-3.5cm时，即可移栽，移栽后，在遮阴度为40%-45%、基质湿度为50-60%条件下进行栽培，25-30d后，即可移栽至大田；
移栽的基质由如下组分组成：按照重量份数计，鸡枞菌渣8份、腐殖土10份、钠沸石粉1.2份、海藻粉2.5份、油橄榄果渣7份。
其中，步骤（1）中的清洗采用含有0.13mol/L十二烷基苯磺酸钠的水溶液进行清洗2次。步骤（1）中的消毒方法为在质量浓度为0.1%的升汞溶液中消毒7min，再在质量浓度为0.3%的次氯酸钠溶液中消毒3min，然后用无菌水冲洗1.5min。
对比例2
步骤（1），选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA 0.2mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L，pH为5.8-6.0的培养基里，培养5d，更换培养基，更换为MS培养基+6-BA 5mg/L+NAA 0.05 mg/L+琼脂15 g/L+蔗糖30g/L，pH为5.8-6.0的培养基，继续培养25d；
步骤（2），将步骤（1）培养得到的芽切下，置于DKW培养基+芸苔素内酯 0.2mg/L+2.5mg/L多效唑+蔗糖40g/L+琼脂5.5g/L，pH为5.7-5.9的培养基里进行增殖培养22d；
步骤（3），将步骤（2）培养得到的芽苗置于1/2MS培养基+IBA 4mg/L+6-BA 8mg/L +蔗糖25g/L+PVP 3 g/L，pH为5.8-6.0的培养基里进行生根培养；
步骤（4），当步骤（3）的生根培养培养至根长为3-3.5cm时，即可移栽，移栽后，在遮阴度为40%-45%、基质湿度为50-60%条件下进行栽培，25-30d后，即可移栽至大田；
移栽的基质由如下组分组成：按照重量份数计，鸡枞菌渣8份、腐殖土10份、钠沸石粉1.2份、海藻粉2.5份、油橄榄果渣7份。
其中，步骤（1）中的清洗采用含有0.13mol/L十二烷基苯磺酸钠的水溶液进行清洗2次。步骤（1）中的消毒方法为在质量浓度为0.1%的升汞溶液中消毒7min，再在质量浓度为0.3%的次氯酸钠溶液中消毒3min，然后用无菌水冲洗1.5min。
对比例3
对比例3与实施例3的差别在于：移栽的基质为泥炭土+蛭石（质量比1：1），其余都相同。
将实施例1-3方法与对比例1-3方法进行对比，比较移栽成活率如下表，同时与野生资源的产量进行比较，结果如下：
| 移栽成活率，% | 产量提高，% | |
| 实施例1 | 95.2 | 48 |
| 实施例2 | 96.3 | 62 |
| 实施例3 | 98 | 71 |
| 对比例1 | 75 | 15 |
| 对比例2 | 62 | 10 |
| 对比例3 | 74 | 28 |
由上表可知，本发明实施例的效果均优于对比例的效果，通过本发明各组分的配伍与各步骤的协同作用，使得移栽成活率在95%以上，且产量大大提高，弥补了目前鹧鸪茶组培繁殖的空白，具有良好的社会效益和经济效益。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (3)
1.一种鹧鸪茶的繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），选取生长健壮且带腋芽的鹧鸪茶茎段作为外植体，清洗干净并经过消毒处理后，于H培养基+NAA 0.15-0.2mg/L+土豆汁体积百分比20 ％+琼脂5g/L，pH为5.8-6.0的培养基里，培养3-5d，更换培养基，更换为MS培养基+6-BA 4-5mg/L+NAA 0.01-0.05 mg/L+琼脂6-7 g/L+蔗糖30 g/L，pH为5.8-6.0的培养基，继续培养20-25d；步骤（2），将步骤（1）培养得到的芽切下，置于DKW培养基+芸苔素内酯 0.15-0.2mg/L+2-2.5mg/L多效唑+椰子汁10-15 g/L +蔗糖50-80g/L+琼脂5-5.5g/L，pH为5.7-5.9的培养基里进行增殖培养18-22d；步骤（3），将步骤（2）培养得到的芽苗置于1/2MS培养基+IBA 1-2mg/L+6-BA 6-8mg/L +蔗糖20-25g/L+PVP 2-3 g/L+活性炭0.8g/L，pH为5.8-6.0的培养基里进行生根培养；步骤（4），当步骤（3）的生根培养培养至根长为3-3.5cm时，移栽，移栽后，在遮阴度为40%-45%、基质湿度为50-60%条件下进行栽培，25-30d后，移栽至大田；移栽的基质由如下组分组成：按照重量份数计，鸡枞菌渣5-10份、腐殖土8-12份、钠沸石粉1-2份、海藻粉2-3份、油橄榄果渣6-10份。
2.根据权利要求1所述的鹧鸪茶的繁殖方法，其特征在于，所述的清洗采用含有洗涤剂的水溶液进行清洗1-3次。
3.根据权利要求2所述的鹧鸪茶的繁殖方法，其特征在于，所述的洗涤剂为十二烷基苯磺酸钠，在水溶液中的浓度为0.1-0.15mol/L。
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