CN107022536B - 高催化效率的纤维素酶突变体及其基因和应用 - Google Patents

高催化效率的纤维素酶突变体及其基因和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及基因工程领域，具体涉及高催化效率的纤维素酶突变体及其基因和应用。所述纤维素酶突变体的氨基酸序列为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的纤维素酶GtCel5的第233位天冬酰胺突变为丙氨酸或甘氨酸。纤维素酶突变体比活性比野生型的催化效率及比活性有显著提高，为其在工业生产领域提供了基础。

Description

高催化效率的纤维素酶突变体及其基因和应用
技术领域
本发明涉及基因工程领域，具体涉及高催化效率的纤维素酶突变体及其基因和应用。
背景技术
纤维素酶是将纤维素水解成纤维二糖和葡萄糖的一组复杂酶系的总称，又称纤维素酶系,根据其中各酶功能的差异，主要被分为3大类：内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶。纤维素酶已被广泛应用于食品、医药、饲料、造纸、纺织印染、石油开采、精细化工及生物技术等诸多领域，是一种新型的工业酶，具有很大的潜在应用价值。
不同的微生物产生的纤维素酶，其结构和功能差异较大，自然界中存在的纤维素资源来源复杂，其结构和功能差异较大，不同来源的纤维素酶对它们的降解效果也不尽相同，针对不同来源的纤维素寻找降解效果较高的纤维素酶，是当前纤维素酶领域的热点之一。虽然许多纤维素酶被克隆分离及性质测定，但这些酶的性质特征，均存在一些缺陷，例如，pH作用范围不合适，热稳定性差，表达量低等，均不能满足实际应用的需要。因此人们希望能够找到新的能够满足实际应用需求的纤维素酶，从而能够进一步推广纤维素酶在饲料、食品、医药等行业中应用。
高比活、高催化效率的纤维素酶工程菌株的获得主要通过诱变、筛选和酶分子改良获得。诱变分为自然突变和人工诱变，自然突变成功的几率非常小，人工诱变的工作量较大且有益突变频率仍然较低，变异的方向和性质难以控制。筛选的盲目性较大，不容易获得目的菌株。
发明内容
本发明提供了一种高催化效率纤维素酶突变体，将来源于Gloeophyllum trabeumCBS 900.73五家族的低催化效率纤维素酶GtCel5第233位点进行定点突变。
本发明的再一目的是提供包含上述维素酶突变体基因的重组载体。
本发明的另一目的是提供包含上述维素酶突变体基因的重组菌株。
根据本发明的具体实施方式，所述纤维素酶突变体的氨基酸序列为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的纤维素酶GtCel5的第233位天冬酰胺突变为丙氨酸或甘氨酸
野生型低催化效率的纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
高催化效率的纤维素酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
所述野生型低催化效率纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
Figure BDA0001277078960000021
所述高催化效率纤维素酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
Figure BDA0001277078960000022
所述高催化效率纤维素酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
Figure BDA0001277078960000023
根据本发明的具体实施方式，制备所述高催化效率纤维素酶突变体的方法包括以下步骤：
1)采用over-lap PCR的方法扩增高催化效率纤维素酶酶突变体序列片段；
2)将催化效率纤维素酶突变体序列片段克隆到表达载体pPIC 9r上，重组载体命名pPIC9r-Gtcel5-N233A,pPIC9r-Gtcel5-N233G；
3)将突变体重组载体转化毕赤酵母GS115，诱导表达，获得突变株，优选为GS115/Gtcel5-N233A,GS115/Gtcel5-N233G；
本发明提供的纤维素酶突变体催化效率高，在此改造条件下，两种突变体比活力达到野生型的比活力125％-172％；催化效率达到野生型的催化效率133％-141％；酶促反应最适pH值不变。相对于盲目筛菌或人工(自然)诱变等手段，酶分子改良缩短了酶学性质改造时间。使该高催化效率纤维素酶突变体具有广阔的应用前景。
本发明还提供了包含上述纤维素酶突变体基因的重组载体，优选为pPIC9r-Gtcel5-N233A,pPIC9r-Gtcel5-N233G。将本发明的纤维素酶突变体基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方案，优选为将纤维素酶基因插入到质粒pPIC9r上的EcoRI和NotI限制性酶切位点之间，得到重组表达质粒pPIC9r-Gtcel5-N233A,pPIC9r-Gtcel5-N233G。
本发明还提供了包含上述纤维素酶基因的重组菌株，优选为重组菌株GS115/Gtcel5-N233A,GS115/Gtcel5-N233G。
本发明还提供了一种制备高催化效率纤维素酶突变体的方法，包括以下步骤：
1)用上述重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；
2)培养重组菌株，诱导重组纤维素酶的表达；
3)回收并纯化所表达的高催化效率纤维素酶。
其中，优选所述宿主细胞为毕赤酵母细胞，优选将重组酵母表达质粒转化毕赤酵母细胞GS115，得到重组菌株GS115/Gtcel5-N233A,GS115/Gtcel5-N233G。
本发明还提供了上述高催化效率纤维素酶突变体的应用。运用基因工程手段来产业化生产纤维素酶。
本发明提供了两个新的高催化效率纤维素酶基因，可作应用于饲料、食品、医药等工业。根据本发明的技术方案就可以实现利用基因工程手段生产性质优良适合工业应用的纤维素酶。
附图说明
图1显示在毕赤酵母中表达的重组野生型和突变体纤维素酶的SDS-PAGE分析，其中，(A)：在毕赤酵母中表达的重组野生型纤维素酶的SDS-PAGE分析，其中，M:低分子量蛋白质Marker；1:野生型GtCel5原酶液；2：野生型GtCel5纯化后酶液；3：野生型GtCel5Endo H脱糖基处理后酶液；(B)：在毕赤酵母中表达的重组高催化效率纤维素酶突变体的SDS-PAGE分析，M:低分子量蛋白质Marker；1:突变体GtCel5-N233A纯化后酶液；2：突变体GtCel5-N233G纯化后酶液；
图2显示野生型纤维素酶和突变体的酶学性质；a:最适pH；b:pH稳定性；c:最适温度；d:温度稳定性；
图3显示野生型纤维素酶和高催化效率纤维素酶突变体的比活。
具体实施方式
试验材料和试剂
1、菌株及载体：表达宿主Pichia pastoris GS115，表达质粒载体pPIC9r为本实验室保存。
2、酶类及其它生化试剂：内切酶购自Fermentas公司，连接酶购自Invitrogen公司，羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，大麦葡聚糖(Barleyβ-glucan)购自Sigma公，地衣多糖(Lichenan)购自Megazyme公司，其它都为国产分析纯试剂(均可从普通生化试剂公司购买得到)。
3、培养基：
(1)产酶培养基：30g/L麦麸，30g/L玉米芯粉，30g/L豆粕，5g/L大麦葡聚糖，5g/L(NH4)SO4，1g/L KH2PO4，0.5g/L MgSO4·7H2O，0.01g/L FeSO4·7H2O，0.2g/L CaCl2于1L去离子水中，121℃，15磅条件下灭菌处理20min
(2)大肠杆菌培养基LB(126蛋白胨、0.5％酵母提取物、126 NaCI，pH7.O)。
(3)YPD培养基：1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖
(4)MD固体培养基：2％葡萄糖，1.5％琼脂糖，1.34％YNB，0.00004％Biotin
(5)BMGY培养基；1％酵母提取物，2％蛋白胨，1.34％YNB，0.000049<Biotin，1％甘油(v/v)。
(6)BMMY培养基：除以0.5％甲醇代替甘油，其余成份均与BMGY相同，pH4.0。
实施例1高催化效率纤维素酶突变体编码基因Gtcel5-N233A,Gtcel5-N233G的克隆
以pPIC9r-Gtcel5质粒为模板，采用over-lap PCR的方法扩增高催化效率纤维素酶突变体编码基因Gtcel5-N233A和Gtcel5-N233G。
表1.高催化效率纤维素酶突变体Gtcel5-N233A和Gtcel5-N233G所用特异性引物
Figure BDA0001277078960000051
aThe restriction sites are underlined
实施例2 高催化效率纤维素酶突变体的制备。
将表达载体pPIC9r进行双酶切(EcoRI+NotI)，同时将编码高催化效率纤维素酶突变体的基因Gtcel5-N233A，Gtcel5-N233G双酶切(EcoRI+NotI)，切好的编码成熟高催化效率纤维素酶突变体的基因片段(去除信号肽片段)与表达载体pPIC9r连接，获得含有高催化效率纤维素酶突变体基因的重组质粒pPIC9r-Gtcel5-N233A,pPIC9r-Gtcel5-N233G并转化毕赤酵母GS115，获得重组酵母菌株GS115/Gtcel5-N233A,GS115/Gtcel5-N233G。
取含有重组质粒的GS115菌株，接种于300mL BMGY培养基的1L三角瓶中，置于30℃，220rpm摇床培养48h；后将培养液3000g离心5min，弃上清，沉淀用100mL含有0.5％甲醇的BMMY培养基重悬，并再次置于30℃，220rpm条件下诱导培养。每隔12h补加0.5mL甲醇，使菌液中的甲醇浓度保持在0.5％，同时取上清用于酶活性检测。
SDS-PAGE结果(图1)表明，重组纤维素酶在毕赤酵母中得到了表达。所表达的纤维素酶经过纯化之后，其蛋白质的含量达到总蛋白的95％以上。重组高催化效率纤维素酶突变体最适pH为4.0，与野生型的一致，最适温度为60℃，较野生型降低了10℃，但是比活力达到野生型提高125％-172％倍；催化效率达到野生型133％-141％。
实施例3 重组高催化效率纤维素酶突变体和母本野生型的活性分析
一、DNS法：具体方法如下：在给定的pH、温度条件下，1mL的反应体系包括100μL适当的稀释酶液，900μL底物，反应10min，加入1.5mL DNS终止反应，沸水煮5min。冷却后540nm测定OD值。纤维素酶活性单位定义：在一定条件下，每分钟分解羧甲基纤维素生成lμmol还原糖所需的酶量为1个活性单位(U)。
二、重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型的性质测定
1、重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型的最适pH测定方法如下:
将实施例2纯化的重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型在不同的pH下进行酶促反应以测定其最适pH。底物CMC-Na用不同pH的0.1mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中70℃下进行纤维素酶酶活力测定。结果(图2，a)表明，重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型的最适反应pH一致，均为pH4.0,符合不改变最适pH值提高催化效率的目的。
将酶液在不同pH值的缓冲液中于37℃下处理60min，再测定酶活性以研究酶的pH稳定性。结果表明(图2，b)，在pH3.0-pH12.0之间，突变体和野生型均能够维持50％以上的酶活力。GtCel5-N233G在pH2.0下的相对酶活剩余80％以上高于野生型，说明具有相对优良的pH稳定性。
2、重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型的最适温度测定方法如下:
重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型的最适温度的测定为在0.1mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 4.0)缓冲液体系及不同温度下进行酶促反应。酶反应最适温度测定结果(图2，c)表明,重组高催化效率纤维素酶突变体(60℃)较野生型(70℃)的最适温度降低了10℃。
耐温性测定为纤维素酶在60℃和70℃下处理不同时间，再在最适温度下进行酶活性测定。实验表明：重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型在60℃下处理60min，均剩余酶活在90％以上。在70℃下处理10min,GtCel5-N233A的热稳定性降低。(图2，d)。
3、重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型比活测定方法如下：
选取不同的底物1％CMC-Na、1％Barleyβ-glucan、作为底物，在最适条件下反应10min,进行纤维素酶酶活力测定。重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型比活力如图3所示。重组高催化效率纤维素酶突变体比活力达到野生型125％-172％。
4、重组高催化效率纤维素酶突变体和野生型的动力学参数测定方法如下:
测定反应的一级反应时间，确定测定Km及Vmax的反应时间为5min。用不同浓度的CMC-Na(1–10mg mL–1)为底物，在最适条件(温度、pH)下测定酶活性，计算出相应的反应速度，利用GraFit7软件计算Km值及Vmax。以CMC-Na为底物时，重组高催化效率纤维素酶突变体和母本野生型在最适条件下的Km、Vmax、kcat、kcat/Km值分别如表2所示。重组高催化效率纤维素酶突变体的催化效率达到野生型133％-142％。
表2 以CMC-Na为底物时，重组高催化效率维素酶突变体和野生型动力学参数
Figure BDA0001277078960000071
<110> 中国农业科学院饲料研究所
<120> 高催化效率的纤维素酶突变体及其基因和应用
<160>3
<210> 1
<211> 338
<212> PRT
<213> Gloeophyllum trabeum
<400> 1
AALSPRVTGP APLKFAGVNI AGFDFGCGTD GTCTVSGAYP PLTQYYGADG AGQMQHFVND 60
DGYNLFRLPV GWQYLTNGVV GGTLNSTNFD KYDALVQACL NTGAYCIIDI HNYARWNGEI 120
IGQGGPTNAQ FAALWSSLAT QYKSQSRVMF GIMNEPHDLP SITTWAATVQ AAVTAIRNAG 180
ATSQYILLPG DNWTSAATFV SGGSAAALAT VTNPDGSTTN LIMDVHKYLD SDNSGTSNTC 240
VTNNTVEAWE PLSVWLRANN RLAINTETGG GNTASCVEYL CQQVAYQKTI ADVFLGYVGW 300
AAGNFDTGYV LSETPTDNGG TWTDTETVSS CLAPIANA 338
<210> 2
<211> 338
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
AALSPRVTGP APLKFAGVNI AGFDFGCGTD GTCTVSGAYP PLTQYYGADG AGQMQHFVND 60
DGYNLFRLPV GWQYLTNGVV GGTLNSTNFD KYDALVQACL NTGAYCIIDI HNYARWNGEI 120
IGQGGPTNAQ FAALWSSLAT QYKSQSRVMF GIMNEPHDLP SITTWAATVQ AAVTAIRNAG 180
ATSQYILLPG DNWTSAATFV SGGSAAALAT VTNPDGSTTN LIMDVHKYLD SDASGTSNTC 240
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<210> 3
<211> 338
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
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IGQGGPTNAQ FAALWSSLAT QYKSQSRVMF GIMNEPHDLP SITTWAATVQ AAVTAIRNAG 180
ATSQYILLPG DNWTSAATFV SGGSAAALAT VTNPDGSTTN LIMDVHKYLD SDGSGTSNTC 240
VTNNTVEAWE PLSVWLRANN RLAINTETGG GNTASCVEYL CQQVAYQKTI ADVFLGYVGW 300
AAGNFDTGYV LSETPTDNGG TWTDTETVSS CLAPIANA 338

Claims (6)

1.高催化效率的纤维素酶突变体，其特征在于，所述纤维素酶突变体的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的第233位天冬酰胺突变为丙氨酸或甘氨酸。
2.编码权利要求1所述的高催化效率的纤维素酶突变体的基因。
3.包含权利要求2所述基因的重组载体。
4.包含权利要求2所述基因的重组菌株。
5.权利要求1所述高催化效率的纤维素酶突变体在饲料或食品制备中的应用。
6.权利要求2所述基因在饲料或食品制备中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111676209B (zh) * 2020-08-05 2020-11-10 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种提高双功能纤维素酶的甘露聚糖酶活的方法及纤维素酶突变体rmx-m和应用
CN111676210B (zh) * 2020-08-05 2020-11-10 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种提高纤维素酶活性的方法及纤维素酶突变体5i77-m和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102732492A (zh) * 2011-04-06 2012-10-17 武汉新华扬生物股份有限公司 一种耐热中性纤维素酶Cel45及其基因和应用
CN105886484A (zh) * 2016-04-25 2016-08-24 中国农业科学院饲料研究所 一种嗜热纤维素酶及其编码基因和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102732492A (zh) * 2011-04-06 2012-10-17 武汉新华扬生物股份有限公司 一种耐热中性纤维素酶Cel45及其基因和应用
CN105886484A (zh) * 2016-04-25 2016-08-24 中国农业科学院饲料研究所 一种嗜热纤维素酶及其编码基因和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Enhancing the catalytic activity of a novel GH5 cellulase GtCel5 from Gloeophyllum trabeum CBS 900.73 by site‑directed mutagenesis on loop 6;Fei Zheng;《Biotechnology for Biofuels》;20180322;76号文章 *

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