CN107019671A - 蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法 - Google Patents

蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107019671A
CN107019671A CN201710258425.6A CN201710258425A CN107019671A CN 107019671 A CN107019671 A CN 107019671A CN 201710258425 A CN201710258425 A CN 201710258425A CN 107019671 A CN107019671 A CN 107019671A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bufalin
liquid crystal
lysotropic liquid
feedstock composition
cosurfactant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710258425.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107019671B (zh
Inventor
龚亚斌
邹爱华
李雅文
许玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
East China University of Science and Technology
Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Shanghai University of TCM
Original Assignee
East China University of Science and Technology
Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Shanghai University of TCM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by East China University of Science and Technology, Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Shanghai University of TCM filed Critical East China University of Science and Technology
Priority to CN201710258425.6A priority Critical patent/CN107019671B/zh
Publication of CN107019671A publication Critical patent/CN107019671A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107019671B publication Critical patent/CN107019671B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A61K31/585—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin containing lactone rings, e.g. oxandrolone, bufalin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于非血管注射且在注射部位发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法。该原料组合物包括下列组分：蟾毒灵、溶致液晶载体材料。该制备方法包括下列步骤：将原料组合物按比例和顺序混合，在37℃水浴条件下平衡即可。本发明的原位相转变蟾毒灵溶致液晶非血管注射制剂可实现由微乳因遇水量的增多而发生原位相转变依次转变为液晶最终扩散为微乳的过程，生物利用度高，无任何毒副作用，室温条件下存储，稳定性好，在6个月内性质稳定无明显变化；同时药物释放速度慢，作用持久，有效降低蟾毒灵的毒副作用；且能够增加与癌细胞的亲和力，增加药物被癌细胞的摄取量，疗效更好；制备简单快捷，更具备商业化应用前景。

Description

蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体地说，是一种可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法。
背景技术
蟾毒灵是中药蟾酥中抗肿瘤活性最强的毒性配基之一，是一种蟾蜍二烯羟酸内酯单体，分子式为C24H3404，相对分子质量为386.5。研究表明，蟾毒灵是一种特异性抑制肿瘤细胞生长的抗癌成分，具有诱导肿瘤分化和凋亡作用。其发挥效用的浓度低于其他抗癌药物如顺铂、维甲酸、足叶乙甙等，联用则产生强协同作用，而且对正常细胞无诱导凋亡作用。
蟾毒灵对血肿、白血病、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌等有作用，但是由于它的疏水性，短半衰期性，窄的治疗窗等缺点以及与地高辛相似的结构，导致其出现血管刺激性、过敏性休克、高烧、窦体加速和高心脏毒性，高剂量时会产生心律失常、呼吸困难、昏迷等毒性副作用，它的临床应用受到了很大的限制。
目前蟾毒灵的剂型有华蟾素注射剂，聚氰基丙烯酸烷酯类载体，脂质体，固体脂质纳米粒，以白蛋白、壳聚糖等为载体的纳米粒，自乳化载药系统等。其中含有蟾毒灵单体成分的制剂有华蟾素注射剂(公开号：CN 1846712)在中国已通过正式审批用于癌症治疗的，临床上多联合放疗、化疗等方法，广泛用于多种中、晚期肿瘤病人。
普通的乳化体系属于多相热力学不稳定的分散体系，物理稳定性差，有效成分易氧化分解，生物利用度低。另外，由于蟾毒灵有一定的毒性，在临床应用中有不良反应。而普通的乳剂工艺不稳定，温度、乳化时间和生产设备都易对产品质量产生影响，而造成乳粒不均匀；并且贮存中容易出现油水分层、破裂、转相、絮凝和败坏等现象导致产品失效或性状不合格，而无法使用。
脂质体能解决以上问题，但是脂质体本身存在一定的局限性：(1)蟾毒灵脂质体静脉注射剂的制备方法难以实现工业化生产；(2)蟾毒灵易从脂质体中渗漏；(3)脂质体的制备过程中需要使用到有机溶剂，有机溶剂的残留有可能增加药物的毒性。
固体脂质纳米粒(SLN)也存在一些缺点：(1)对于某些活性物质载药量很低；(2)保存过程中活性物质的泄露；(3)SLN分散液中水含量太高。而对上述缺点(1)主要是由于固体脂质纳米粒由单一固体脂质基质组成，会形成脂质晶体，限制了它的载药能力，并且会逐渐向完美晶体转变，从而导致贮存过程中药物被排挤出晶格。
基于脂质分子在水溶液中自组装而形成的溶致液晶(Lyotropic liquidcrystallines，LLCs)具有由脂质双层分隔而成的亲水区和疏水区，其独特的内部结构、热力学稳定性、双重极性/非极性的性质、内部结构参数、相的几何形状或对称的优化调控使得溶致液晶在一定特定领域被应用，成为功能性药物载体的理想选择。这种新型给药载体使用无生物毒性的脂质作为材料，生物相容性好、物理稳定性高、载药量大、可控制药物释放速率以及良好的靶向性等优势，制备工艺简单、能大规模生产，是一种极有发展前景的新型给药载体。
溶致液晶是微观结构最复杂的一种表面活性剂有序组合体，常见的溶致液晶结构有层状液晶、六角相液晶和立方相液晶。溶致液晶具有纳米尺度的有序结构，水相区域能溶解水溶性物质，疏水区域可以溶解油溶性化合物，因此能够增溶多种生物活性物质如小分子化学药物、维生素、酶、多肽、蛋白质和核酸等，在食品和药品领域拥有强大的应用潜质。
层状液晶结构中脂质双分子层与水层交替排列，具有类似皮肤的特殊双分子层结构，可以包载水溶性、油溶性和两性药物。通常药物在层状液晶网状结构中的渗透主要有沿片层内部和在片层间穿梭两种路线，使得药物在层状相中的扩散系数比溶液中小一到两个数量级，因此层状液晶能够控制药物释放速率达到缓释目的。
而目前已有的蟾毒灵剂型存在包封率低，生物利用度低，在储存过程中稳定性差，易造成渗漏或泄露，毒副作用大；制备工艺不稳定或过程复杂成本过高，难以实现工业化生产等技术难题，该现状亟待解决。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的蟾毒灵剂型存在的包封率低，生物利用度低，在储存过程中稳定性差，易造成渗漏或泄露，毒副作用大；制备工艺不稳定或过程复杂成本过高，难以实现工业化生产等技术难题，而提供了一种可以发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法。本发明的蟾毒灵溶致液晶载体生物利用度高，无任何毒副作用；储存过程中稳定性好，在6个月内性质稳定无明显变化；同时药物释放速度慢，作用持久；MTT试验表明，以蟾毒灵计，在给药剂量相同的条件下，与纯蟾毒灵相比，可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体能够增加与癌细胞的亲和力，增加药物被癌细胞的摄取量，疗效更好；并且本发明原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体的制备方法操作简单，更具备工业化应用前景。
虽然现有技术中有关于一些药物溶致液晶载体、及其原料组合物及制备方法的报道，但是发明人经过试验研究发现，仅仅将其中的药物活性成分替换为蟾毒灵时，并不能够得到稳定性好和包封率高以及医学应用性强的蟾毒灵溶致液晶载体。本发明人经过大量实验最后发现，通过特别控制蟾毒灵、溶致液晶载体材料、表面活性剂、辅助表面活性剂以及助表面活性剂之间的用量关系以及平衡条件，最后制备得到的蟾毒灵溶致液晶载体在与水接触时会发生原位相转变，对蟾毒灵的释放起到良好的控制作用，而这种良好的控制作用可以使药物更好的穿透肿瘤内皮细胞并且可以渗透进肿瘤细胞间隙，提高药物疗效并减少药物毒性，医学应用性强；并且该原位相转变溶致液晶载体中，蟾毒灵的包封率一般在90％以上，较佳地在95％以上。
本发明提供了一种可以发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体的原料组合物，其包括下列组分：蟾毒灵、油相、表面活性剂、辅助表面活性剂、助表面活性剂和水；其中，所述的溶致液晶油相材料为辛酸癸酸甘油酯(MCT)或油酸聚乙二醇甘油酯(M 1944CS)；当所述溶致液晶载体油相为辛酸癸酸甘油酯时，所述蟾毒灵和所述的溶致液晶载体油相的质量比为1:13-1:340；当所述溶致液晶载体油相为油酸聚乙二醇甘油酯(M 1944CS)时，所述的蟾毒灵和所述的溶致液晶载体油相的质量比为1:100-1:200。
所述的蟾毒灵一般市售可得，或者可按照本领域常规制备方法得到。
所述的表面活性剂可为本领域常规的表面活性剂，较佳的为Solutol HS 15(15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯)。所述的表面活性剂的用量可为本领域常规的用量，较佳的，所述的溶致液晶载体的油相与所述的表面活性剂的质量比为1:1.3-1:7.8。
所述的表面活性剂与水较佳的质量比为1:1.95-1:4。
所述的溶致液晶的原料组合物中还进一步包含辅助表面活性剂；所述的辅助表面活性剂为本领域常规的表面活性剂，较佳的为司班80。所述的辅助表面活性剂的用量可为本领域常规的用量，较佳的，所述的辅助表面活性剂与所述的表面活性剂的质量比为1:3。
所述的原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体的原料组合物中还进一步包含助表面活性剂；所述的助表面活性剂为本领域常规助表面活性剂，较佳的为无水乙醇；所述的助表面活性剂的用量可为本领域常规的用量，较佳的，所述的助表面活性剂与所述的表面活性剂较佳的质量比为1:6。
本发明还提供了一种可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体的制备方法，其包括下列步骤：将如上所述的原料组合物混合后，平衡即可。
所述的原料组合物混合的方法较佳地包括下列步骤：
(1)将所述的助表面活性剂无水乙醇、所述表面活性剂和辅助表面活性剂，混合均匀，得一表面活性剂混合物；
(2)将所述的油脂和水与所述的表面活性剂混合物混合均匀，平衡即可；
当所述的溶致液晶载体的原料组合物中包含蟾毒灵时，所述的蟾毒灵溶解在步骤(1)的无水乙醇中。
步骤(1)中，所述的助表面活性剂无水乙醇、所述表面活性剂和辅助表面活性剂混合的温度可为本领域常规的温度，较佳的为30-40℃；所述的表面活性剂混合物混合的方法可为本领域常规方法，较佳的为涡旋和/或搅拌；所述的溶解蟾毒灵的辅助方法可为本领域常规方法，较佳的为超声。
步骤(2)中，所述的油脂和水与所述的表面活性剂混合物混合的方法可为本领域常规方法，较佳的为涡旋和/或搅拌；所述的混合温度可为本领域常规的温度，较佳的为30-40℃；所述的平衡温度可为本领域常规的温度，较佳的为37℃；所述的平衡时间可为本领域常规平衡时间，较佳的为24小时。
所述的制备方法中，所述的平衡结束后，所述的蟾毒灵溶致液晶原料混合物还可进一步的用水分散形成微乳。所述的水的用量可为本领域的常规的用量，较佳的，所述的蟾毒灵溶致液晶原料混合物与水的质量体积比为100mg/mL。所述的水还可替换为缓冲溶液或生理盐水。所述的缓冲溶液可为本领域常规的缓冲溶液，只要pH值在7.0-7.5即可；较佳地为磷酸盐缓冲溶液。
本发明还提供了上述制备方法制得的可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体。
本发明中，所述的可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体的原料组合物中，还可进一步包含与蟾毒灵理化性质相似的，同样存在溶解性差，生物利用率低，毒副作用大，在储存过程中稳定性差，易造成渗漏或泄露，制备工艺不稳定或复杂，难以实现工业化生产等问题的药物活性成分。只要该药物活性成分可以溶于所述的溶致液晶载体材料，或者可以溶于无水乙醇或水。在本发明可替代实施例中，也可以将蟾毒灵直接替换为上述药物活性成分。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体大大提高了蟾毒灵在水中的溶解度，包封率高，生物利用度高，无任何毒副作用，储存过程中稳定性好，在6个月内性质无明显变化；同时药物释放速度慢，作用持久；细胞毒性实验表明，以蟾毒灵计，在给药剂量相同的条件下，与纯蟾毒灵相比，可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体能够增加与癌细胞的亲和力，增加药物被癌细胞的摄取量，疗效更好；并且本发明蟾毒灵的制备方法操作简单，储存方便，具备工业化应用前景。
附图说明
附图1为纯蟾毒灵溶液以及按照实施例3制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵体外释放曲线。
附图2为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为0时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图。
附图3为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为2.5ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图。
附图4为为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为5ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图。
附图5为为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为10ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图。
附图6为为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为20ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例或效果实施例中，室温是指10～30℃。
实施例1-10中可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体包封率的测定方法，具体包括下列操作：
精密称取实施例1-10得的可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体，按照溶致液晶原料组合物与水的质量比为30mg/mL-10mg/mL的比例，将溶致液晶原料组合物与水混合均匀。使用10KDa的离心超滤管，在4℃的环境下离心30分钟，转速为5000转/分钟。离心结束后取出，用高效液相色谱法测定其中蟾毒灵的含量，即为未包封的游离蟾毒灵质量W2。
按以下公式计算包封率：EE(％)＝(Wl-W2)/W1×100％。注：EE为可发生原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体的包封率，Wl为各实施例中加入的蟾毒灵总质量，W2为未包封的游离蟾毒灵的质量。
实施例1
(1)取166.7mg乙醇，加入1mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入128.5mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为92.3％。
实施例2
(1)取166.7mg乙醇，加入5mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入128.5mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为93.7％。
实施例3
(1)取166.7mg乙醇，加入10mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入128.5mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为96.0％。
实施例4
(1)取166.7mg乙醇，加入1mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入346.4mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及462mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为91.5％。
实施例5
(1)取166.7mg乙醇，加入5mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入346.4mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及462mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为91.7％。
实施例6
(1)取166.7mg乙醇，加入10mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入346.4mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及462mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为92.3％。
实施例7
(1)取166.7mg乙醇，加入10mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入1.2g辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为86.0％。
实施例8
(1)取166.7mg乙醇，加入10mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入128.5mg油酸聚乙二醇甘油酯(M 1944 CS)。以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为90.6％。
实施例9
(1)取166.7mg乙醇，加入10mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g烷基糖苷，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入128.5mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为91.4％。
实施例10
(1)取166.7mg乙醇，加入10mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入333.3mg司班80以及1g烷基糖苷，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入128.5mg油酸聚乙二醇甘油酯(M 1944 CS)以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为89.6％。
实施例11
(1)取333.3mg司班80以及1g Solutol HS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)取10mg蟾毒灵以及入128.5mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)，溶解在10mL三氯甲烷中。完全溶解后使用减压旋蒸将三氯甲烷出去，然后在真空干燥箱内过夜除去多余的三氯甲烷。
(3)取步骤(2)中所得的油脂与药物的混合物加入步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为83.7％。该实施例制得的样品流动性稍差。
实施例12
(1)取166.7mg乙醇，加入10mg蟾毒灵，在超声条件下完全溶解后，加入1g SolutolHS 15，在30-40℃下混合均匀，得一表面活性剂混合物。
(2)步骤(1)混合均匀的表面活性剂混合物中依次加入128.5mg辛酸癸酸甘油酯(MCT)以及500mg水，涡旋1分钟使原料混合均匀，将样品封装好在37℃下平衡12小时。
其中，蟾毒灵的包封率为87.5％。所制备的样品不能发生原位相转变的过程。
效果实施例3蟾毒灵体外释放试验
测试实施例3制得的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体和纯蟾毒灵在磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.4)中的释放程度。具体操作如下：将原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体和纯蟾毒灵乙醇溶液分别放入透析袋中，其中，原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体和纯蟾毒灵溶液中蟾毒灵的浓度相同；37℃在100mL磷酸盐缓冲溶液中(pH＝7.4，20％无水乙醇，其中，％是指无水乙醇的体积与水的体积百分比，加入乙醇的目的是使蟾毒灵在透析过程中可以更好的溶解在缓释介质里)透析。在不同时间点，用高效液相色谱法(HPLC)测定透析外液的浓度，试验结果具体见图1，其中，曲线A为纯蟾毒灵乙醇溶液的体外释放曲线，曲线B为实施例3制得的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体的体外释放曲线。
由图1可以看出，纯蟾毒灵乙醇溶液在20～25小时完全释放，而原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体在80～90小时的释放率仅有50％左右，可见，本发明的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体有缓释效果，能够延长药物在体内的作用时间，提高蟾毒灵的药顺性和生物利用度。
效果实施例3体外细胞毒性试验(CCK8法)
(1)按照实施例3、6制备原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体，取样品以及纯品蟾毒灵加入适量的细胞培养液配制成一定浓度的溶液，该溶液中蟾毒灵的浓度分别为2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL。
(2)将A549人肺腺癌细胞接种在96板，每个孔中有100μL培养基，细胞浓度5×103。饱和湿度下，恒温37℃培养24小时。移除原培养液，向孔中分别予以含量为0、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL浓度纯蟾毒灵，包载同等量蟾毒灵载体及相应的空白载体的培养液溶液；每种物质设5个浓度，5个复孔，恒温37℃，继续培养48小时。随后，在避光条件下，每孔添加10ul CCK-8，培养箱中放置1小时，酶联免疫分析仪测量各组吸光度值，吸收波长490nm。对照1组(正常组)为未经任何处理的A549人肺腺癌细胞，简称空白细胞；对照2组为使用实施例3制备的空白载体处理的A549人肺腺癌细胞。对照3组为使用实施例6制备的空白载体处理的A549人肺腺癌细胞。细胞增殖率计算公式：(实验组/对照1组)*100％，共重复3次。
(3)结果：不同浓度的包载的蟾毒灵载体(0、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL)干预A549人肺腺癌细胞48小时后，可见细胞增殖率在一定剂量范围内随浓度的增加而减少，具有剂量依赖性。干预48小时后，经由载体包载过后的蟾毒灵对细胞增殖的抑制作用明显强于纯蟾毒灵，并且发现空白载体对A549细胞几乎没有毒性，具体试验结果见图2～图6以及表1～5(图2～6和表1～5中实施例3、6表示按照实施例3、6制得的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体)。
其中图2为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为0时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图；图3为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为2.5ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图；图4为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为5ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图；图5为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为10ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图；图6为纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为20ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率的比较图。
表1纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为0时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率
组别 浓度(ug/mL) 细胞增殖率
对照1组 / 100％
对照2组 / 100％
对照3组 / 100％
纯蟾毒灵溶液 0 100％
实施例3 0 100％
实施例6 0 100％
表2纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为2.5ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率
组别 蟾毒灵浓度(ng/mL) 细胞增殖率
对照1组 / 100％
对照2组 / 100％
对照3组 / 100％
纯蟾毒灵溶液 2.5 93.28％
实施例3 2.5 72.90％
实施例6 2.5 78.93％
表3纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为5ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率
表4纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为10ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率
组别 蟾毒灵浓度(ng/mL) 细胞增殖率
对照1组 / 100％
对照2组 / 100％
对照3组 / 100％
纯蟾毒灵溶液 10 46.61％
实施例3 10 37.15％
实施例6 10 42.12％
表5纯蟾毒灵溶液和按照实施例3、6制备的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中蟾毒灵的浓度为20ng/mL时的细胞增殖率与对照1组、对照2组、对照3组的细胞增殖率
组别 蟾毒灵浓度(ng/mL) 细胞增殖率
对照1组 / 100％
对照2组 / 100％
对照3组 / 100％
纯蟾毒灵溶液 20 28.64％
实施例3 20 28.69％
实施例6 20 29.97％
效果实施例3稳定性试验
分别取2个实施例3中制得的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中，在室温、干燥处进行储存，放置6个月后，观察其包封率变化，具体见表6。
表6
样品 第1天 第30天 第90天 第180天
实施例3 96.03％ 95.72％ 95.81％ 95.39％
由表6中数据可知，本发明的原位相转变蟾毒灵溶致液晶载体中储存过程中包封率无明显变化，在6个月内保持澄清透明、流动性良好，证明本发明稳定性良好，且储存方便。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体原料组合物，其特征在于，其包括下列组分：蟾毒灵、油相、表面活性剂、辅助表面活性剂、助表面活性剂和水；其中，所述的油相为辛酸癸酸甘油酯(MCT)或油酸聚乙二醇甘油酯(M 1944CS)；当所述溶致液晶载体油相为辛酸癸酸甘油酯时，所述蟾毒灵和所述的溶致液晶载体油相的质量比为1:11-1:700；当所述溶致液晶载体油相为油酸聚乙二醇甘油酯(M 1944CS)时，所述的蟾毒灵和所述的溶致液晶载体油相的质量比为1:100-1:200。
2.如权利要求1所述的原料组合物，其特征在于，所述的溶致液晶载体的油相与表面活性剂的质量比为1:1.3-1:7.8；和/或，所述的表面活性剂为Solutol HS 15(15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯)。
3.如权利要求2所述的原料组合物，其特征在于，所述的表面活性剂与水的质量比为1:1.95-1:4。
4.如权利要求2或3所述的原料组合物，其特征在于，所述的原料组合物中还进一步包含辅助表面活性剂；所述的辅助表面活性剂较佳的为司班80；所述的辅助表面活性剂与表面活性剂的质量比为1:3。
5.如权利要求2或3或4所述的原料组合物，其特征在于，所述的原料组合物中还进一步包含助表面活性剂；所述的助表面活性剂较佳的为无水乙醇；所述的助表面活性剂与表面活性剂的质量比为1:6。
6.一种原位相转变的蟾毒灵溶致液晶载体的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：将如权利要求1～5任一项所述的原料组合物混合后，平衡即可。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的原料组合物混合的方法包括下列步骤：
(1)将蟾毒灵溶解在所述的助表面活性剂无水乙醇中，得一蟾毒灵乙醇溶液；再加入所述表面活性剂和辅助表面活性剂，混合均匀，得一表面活性剂混合物；
(2)将所述的油脂和水与所述的表面活性剂混合物混合均匀，平衡即可。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的溶解蟾毒灵的辅助方法为超声；所述的表面活性剂混合物混合的方法为涡旋和/或搅拌；所述的混合均匀的温度为30-40℃。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的油脂和水与所述的表面活性剂混合物混合的方法为涡旋和/或搅拌；所述的混合温度为30-40℃；所述的平衡温度为37℃；所述的平衡时间为24小时。
10.一种如权利要求6～9任一项所述的制备方法制备得到的蟾毒灵溶致液晶载体。
CN201710258425.6A 2017-04-19 2017-04-19 蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法 Active CN107019671B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710258425.6A CN107019671B (zh) 2017-04-19 2017-04-19 蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710258425.6A CN107019671B (zh) 2017-04-19 2017-04-19 蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107019671A true CN107019671A (zh) 2017-08-08
CN107019671B CN107019671B (zh) 2020-12-01

Family

ID=59527321

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710258425.6A Active CN107019671B (zh) 2017-04-19 2017-04-19 蟾毒灵溶致液晶载体、原料组合物及制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107019671B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103202773A (zh) * 2013-03-25 2013-07-17 上海应用技术学院 一种含液晶结构固体脂质纳米粒及其制备方法
CN105030680A (zh) * 2015-08-19 2015-11-11 合肥华方医药科技有限公司 一种注射用总蟾毒内酯纳米脂质载体给药系统及其制备方法
CN105125592A (zh) * 2015-10-12 2015-12-09 北京诺康达医药科技有限公司 一种含蟾酥脂溶物的药物及其制备方法
CN106309515A (zh) * 2015-07-08 2017-01-11 上海中医药大学附属龙华医院 鸦胆子油溶致液晶纳米粒分散体、原料组合物及制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103202773A (zh) * 2013-03-25 2013-07-17 上海应用技术学院 一种含液晶结构固体脂质纳米粒及其制备方法
CN106309515A (zh) * 2015-07-08 2017-01-11 上海中医药大学附属龙华医院 鸦胆子油溶致液晶纳米粒分散体、原料组合物及制备方法
CN105030680A (zh) * 2015-08-19 2015-11-11 合肥华方医药科技有限公司 一种注射用总蟾毒内酯纳米脂质载体给药系统及其制备方法
CN105125592A (zh) * 2015-10-12 2015-12-09 北京诺康达医药科技有限公司 一种含蟾酥脂溶物的药物及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107019671B (zh) 2020-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Alshaer et al. Encapsulation of echinomycin in cyclodextrin inclusion complexes into liposomes: in vitro anti-proliferative and anti-invasive activity in glioblastoma
Mukerabigwi et al. Polymersome nanoreactors with tumor pH-triggered selective membrane permeability for prodrug delivery, activation, and combined oxidation-chemotherapy
Dana et al. Active targeting liposome-PLGA composite for cisplatin delivery against cervical cancer
Ju et al. Octreotide-modified liposomes containing daunorubicin and dihydroartemisinin for treatment of invasive breast cancer
Chen et al. Saporin-loaded CD44 and EGFR dual-targeted nanogels for potent inhibition of metastatic breast cancer in vivo
Jin et al. Efficient intravesical therapy of bladder cancer with cationic doxorubicin nanoassemblies
Guo et al. Direct site-specific treatment of skin cancer using doxorubicin-loaded nanofibrous membranes
Li et al. Antitumor activity and safety evaluation of nanaparticle-based delivery of quercetin through intravenous administration in mice
CN113577101A (zh) 茶多酚-金属纳米粒、载药纳米粒及其制备方法和用途
Leonhard et al. Self-assembled micelles of monosialogangliosides as nanodelivery vehicles for taxanes
CN104523723A (zh) 一种可逆转肿瘤耐药的线粒体靶向胶束递药系统
WO2018233095A1 (zh) 具有淋巴靶向功能的生物自组装纳米晶注射剂及制备方法
CN106474064B (zh) 一种蒿甲醚纳米脂质体及其制备方法与应用
CN109224084A (zh) Tpgs修饰的多西他赛脂质体纳米给药系统及及其制备方法、应用
CN106177982A (zh) 一种透明质酸修饰的脂质介孔硅核壳纳米组装体及其制备方法
Meng et al. Oxygen-rich chemotherapy via modified Abraxane to inhibit the growth and metastasis of triple-negative breast cancer
Du et al. F7 and topotecan co-loaded thermosensitive liposome as a nano-drug delivery system for tumor hyperthermia
Wang et al. Glioma-targeted multifunctional nanoparticles to co-deliver camptothecin and curcumin for enhanced chemo-immunotherapy
Hang et al. Rational design of non-toxic GOx-based biocatalytic nanoreactor for multimodal synergistic therapy and tumor metastasis suppression
CN107019673A (zh) 一种具有肿瘤主动靶向功能的紫杉醇脂质体制剂及其制备方法和应用
CN114376986B (zh) 一种同源重组外泌体多药递送的仿生纳米粒及其制备方法和应用
Di et al. Co-delivery of hydrophilic gemcitabine and hydrophobic paclitaxel into novel polymeric micelles for cancer treatment
CN104666247A (zh) 肝素修饰的可断键阿霉素脂质体制剂及其制备方法
Thakkar et al. Vincristine-sulphate–loaded liposome-templated calcium phosphate nanoshell as potential tumor-targeting delivery system
CN113456614A (zh) 一种基于plga的粒径可变型抗肿瘤仿生纳米制剂及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant