CN107015261A - 一种6.5Gy电离辐射的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种电离辐射的检测方法，其包括以下步骤：1）将实验动物置于辐射环境中，照射完成后取出；2）照射完毕24小时后抽取实验动物血清；3）检测实验动物血清外泌体中的miRNA电离辐射标志物，当miRNA含量降低为未受照射样品的20%以下时，即说明该环境存在电离辐射；其中，miRNA选自mmu‑miR‑5113、mmu‑miR‑204‑5p。该方法能够准确测定环境中是否存在着危害到生物体的电离辐射强度，并对之进行评估，具有快速、方便的特点。
Description
技术领域
本发明涉及检测领域，特别涉及一种6.5Gy电离辐射的检测方法。
背景技术
microRNA(miRNA)是一类长度约为19～25nt的内源性非编码RNA，广泛参与基因转录后调控活动，具有重要的生命调节功能。细胞间的相互作用可通过释放蛋白质、核酸、脂质等分子到胞外，与受体结合从而介导胞内信号转导。除了这些单分子以外，细胞还可以释放外泌体，通过水平转移功能性的mRNA、miRNA和蛋白质到受体细胞，改变细胞的功能。
凡能与物质作用引起电离的辐射，统称为电离辐射。高速的带电粒字，如α粒子、β粒子、质子等，能直接引起被穿透的物质产生电离，属于直接电离粒子；致电离光子(如X射线和γ射线)及中子等不带电粒子，是在与物质相互作用时产生带电的次级粒子而引起物质电离，属间接电离粒子。电离辐射在人类的生活中无处不在，如天然的本底辐射，包括来自宇宙空间的宇宙射线，由宇宙射线与大气中的原子核相互作用产生的宇生核素以及存在于地壳中的天然放射性元素(如放射性元素铀、钍和氡等)。还有来自人工的辐射源，如核试验产生的放射性核素；原子能反应堆、原子能电站、核动力舰艇等产生的电离辐射；工农业、医学、科研等部门的排放废物中含有的放射性元素产生的电离辐射，以及稀土金属和其他共生金属矿开采、提炼的过程中，其三废排放物中含有的铀、钍、氡等放射性核素等等。当这些物质产生的电离辐射作用于生物体时，可以引发一些生物学上的效应，所以研究电离辐射的生物学效应是必要的，这对人类健康等有重大意义。
发明内容
本发明的目的在于发明一种6.5Gy电离辐射的检测方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种电离辐射的检测方法，其包括以下步骤：
1)将实验动物置于辐射环境中，照射完成后取出；
2)照射完毕24小时后抽取实验动物血清；
3)检测实验动物血清外泌体中的miRNA电离辐射标志物，当miRNA含量降低为未受照射样品的20％以下时，即说明该环境存在电离辐射；其中，miRNA选自mmu-miR-5113、mmu-miR-204-5p。
优选的，电离辐射剂量为6.5Gy。
优选的，实验动物为小鼠。
一种检测电离辐射的试剂盒，试剂盒中含有定量mmu-miR-5113、mmu-miR-204-5p的检测试剂。
定量mmu-miR-5113和mmu-miR-204-5p含量的试剂在制备检测电离辐射强度试剂中的应用。
本发明的有益效果是：能够准确测定环境中是否存在着危害到生物体的电离辐射，该检测方法具有快速、方便的特点。
附图说明
图1是电镜下血清外泌体。
图2是mmu-miR-5113在不同电离辐射条件下的表达量柱状图。
图3是mmu-miR-204-5p在不同电离辐射条件下的表达量柱状图。
具体实施方式
实验例
1动物和电磁辐射
本实验采用了初始年龄为13周的雄性C57BL/6小鼠，共30只。随机分为3组，每组10只。本实验共有0，6.5，8Gy三个剂量，照射结束24小时后取样。初始未照射组作为对照组进行比较。
2.血清的收集：
采用眼球后静脉丛取血法对每只小鼠进行取血。每只小鼠约获得800～1200ul外周血。样品于4℃冰箱中静置4～5小时后，4000rpm，4℃，离心15分钟。每个样品均吸取200ul的上清液，并汇总各组的10个样品，收集于灭菌过的离心管中，共2ml。
3.外泌体提取
将血清样本从低温储存环境中取出，并置于冰上。在室温下，2000g离心20分钟，以去除残留细胞及碎片。转移血浆或清样本至一新管，加入外泌体提取试剂，颠倒混合或移液器，直至完全匀样本。放入4℃冰箱静置30分钟。4℃，15000g离心2分钟，用移液器小心地吸去上清。离心获得的沉淀就是外泌体。
4.外泌体形状分析
1)纳米颗粒跟踪分析技术鉴定提取外泌体的粒径大小及分布
2)透射电子显微镜观察外泌体形态和大小
3)Western Blotting方法鉴定外泌体膜表面标志物TSG101，CD63。
5.MicroRNA深度测序和生物信息学分析
对于small RNA测序实验，从总RNA到最终的cDNA文库制备完成主要包括以下步骤：用电泳切胶法获取长度范围在18～30nt左右的RNA片段；片段进行末端修复并在其两端分别连接5’-adapter和3’-adapter；随后扩增，得到最终的cDNA文库；DNA文库上机测序。将所得的测序数据通过与miRNA的生物信息数据库进行比较，可以获取数据库中已有的miRNA的表达信息，包括结构、长度、表达水平等。将测序获得的Clean Data与miRBase数据库(version 21)中该物种所有miRNA成熟体序列比对，计算其表达量。检测结果如下：
mmu-miR-5113
| Group | 0Gy | 6.5Gy | 8Gy |
| Normalized expression | 14.5472 | 1.8092 | 7.6509 |
mmu-miR-204-5p
| Group | 0Gy | 6.5Gy | 8Gy |
| Normalized expression | 8.3127 | 1.4474 | 6.4943 |
检测结果表明，在6.5Gy条件下时，mmu-miR-5113和mmu-miR-204-5p的表达量有显著的降低，其中mmu-miR-5113约为正常水平的13％，mmu-miR-204-5p约为正常水平的18％。
Claims (5)
1.一种电离辐射的检测方法，其包括以下步骤：
1)将实验动物置于辐射环境中，照射完成后取出；
2)照射完毕24小时后抽取实验动物血清；
3)检测实验动物血清外泌体中的miRNA电离辐射标志物，当miRNA含量降低为未受照射样品的20%以下时，即说明该环境存在电离辐射；
其中，miRNA选自mmu-miR-5113、mmu-miR-204-5p。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述电离辐射剂量为6.5Gy。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述实验动物为小鼠。
4.一种检测电离辐射的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有定量mmu-miR-5113、mmu-miR-204-5p的检测试剂。
5.定量检测mmu-miR-5113和mmu-miR-204-5p含量的试剂在制备检测电离辐射强度试剂中的应用。
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