CN107014922A - 一种ase‑hplc法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法 - Google Patents

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陈学松
欧妮
廖强
韦日伟
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Abstract

本发明公开了一种ASE‑HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，该方法萃取所需时间短，且检测精度高。属于化学检测领域。该方法采用ASE法萃取迷蒙花粉末，并收集甲醇萃取液；其中萃取包括先用正己烷去酯，再用40％甲醇萃取；采用HPLC法测定甲醇萃取液中蒙花苷的含量。本发明可以代替药典方法对迷蒙花中蒙花苷进行提取以及含量检测。

Description

一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法
技术领域
本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法。
背景技术
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粉末约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)100ml，加热回流2小时，弃去石油醚，药渣挥干，再加甲醇100ml继续加热回流4小时，提取液置蒸发皿中，浓缩至适量，转移至50ml量瓶中，残渣及容器用少量甲醇洗涤，洗液并入同一量瓶中.加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
该方法回流时间较长，且对技术人员的专业水平要求较高。
发明内容
针对上述不足，本发明旨在提供一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，该方法萃取所需时间短，且检测精度高。
为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE法萃取迷蒙花粉末，并收集甲醇萃取液；其中萃取包括先用正己烷去酯，再用40％甲醇萃取；
步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中蒙花苷的含量。
优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：
步骤S1：将迷蒙花粉碎，过三号筛，取0.5g与1g硅藻土混合均匀；
步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有玻璃纤维滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S3：用正己烷去酯，再用40％甲醇萃取；
步骤S4：结束后，将其烘干，并用甲醇定容至50ml，过滤，取滤液，即可。
优选地，所述的去酯条件为：溶剂为正己烷，温度为80℃，时间为7min，循环次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为200s。
优选地，所述的提取条件为：溶剂为甲醇，温度为100℃，时间为5min，循环次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。
优选地，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：
a)仪器：安捷伦1290高效液相色谱仪；
b)色谱柱：ThermoSyncronis C18；
c)柱温：40℃；
d)流速：0.5mL/min；
e)流动相：甲醇-0.1％冰醋酸；
f)检测波长：326nm。
优选地，所述的色谱柱的规格为3μm，3×100mm。
优选地，所述的流动相为体积比等于48：52的甲醇-0.1％冰醋酸。
本发明与传统方法相比，具有以下优点：
《中国药典》采用石油醚去脂溶性成分，考虑ASE仪器对溶剂的使用要求，以及石油醚为宽沸程的烃类成分，本实验考察了正己烷去脂效果，结果使用正己烷循环1次，杂质峰较小，对蒙花苷的定量影响。参考《中国药典》采用甲醇作为提取溶剂，能提取完全。
本实验提取溶剂为甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间5min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果见表5，循环2次基本能提取完全。
附图说明
图1为以蒙花苷对照品的浓度(μg)-平均峰面积进行线性回归图；
图2为蒙花苷对照品的色谱图；
图3为采用ASE法萃取所得的供试品溶液色谱图；
图4为采用药典方法提取所得的供试品溶液色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的权利要求做进一步详细说明，但不对本发明构成任何限制，任何在精神上和原则上对本发明的权利要求书保护范围做修改、等同替换和改进，仍属于本发明所要保护的范围。
实施例1
1、仪器设备及试剂
1.1仪器：
电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、安捷伦1290高效液相色谱仪
1.2试剂：
水：符合GB/T 6682规定的一级水；
甲醇(CH4O)：色谱纯；
冰醋酸(CH3COOH)：分析纯。
2、方法
2.1对照品溶液的制备：
取蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
2.2供试品溶液的制备
2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：
取本品粉末约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)100ml，加热回流2小时，弃去石油醚，药渣挥干，再加甲醇100ml继续加热回流4小时，提取液置蒸发皿中，浓缩至适量，转移至50ml量瓶中，残渣及容器用少量甲醇洗涤，洗液并入同一量瓶中.加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：
样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.5g，精密称定，与0.5g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好过滤膜的10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3ASE萃取条件
除杂条件：溶剂为正己烷，温度为80℃，时间为7min，循环次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为200s。
提取条件：溶剂为甲醇，温度为100℃，时间为5min，循环次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。
2.4色谱条件与系统适用性试验
a)仪器：安捷伦1290高效液相色谱仪；
b)色谱柱：ThermoSyncronis C18，3μm，3×100mm；
c)柱温：40℃；
d)流速：0.5mL/min；
e)流动相：甲醇-0.1％冰醋酸(48:52)；
f)检测波长：326nm；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按蒙花苷峰计算应不低于1000。
2.5测定法
照高效液相色谱法(通则0512)测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.6标准限值要求
本品含蒙花苷(C28H34O14)不得少于0.50％。
2.7计算(外标法)
式中CR——对照品溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；
AX——供试品的峰面积；
AR——对照品峰面积。
注意：
使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；
萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；
萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；
开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；
使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。
3、结果
3.1线性关系
取蒙花苷对照品溶液(浓度：0.1321mg/ml)，分别精密吸取该溶液0.5μl、1μl、2μl、4μl、5μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表1。
以浓度(μg)-平均峰面积进行线性回归，求得回归方程：y＝70.215x+0.1362，R2＝0.9998。蒙花苷在0.06605～0.6605μg范围内呈良好的线性关系，详见图1。
表1线性试验结果
3.2重复性试验
取相同批号的样品(批号：150301)0.5g，共3份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为2μl，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中蒙花苷的含量见表2，RSD为1.0％，试验表明ASE提取方法重复性良好。
表2重复性试验结果
3.3精密度试验
取蒙花苷对照品溶液(0.1321mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为0.8％，表明仪器精密度良好。
其中，蒙花苷对照品的色谱图详见图2，采用ASE法萃取所得的供试品溶液色谱图详见图3，采用药典方法提取所得的供试品溶液色谱图详见图4。
3.4样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(4批)
表3不同仪器提取结果比较
表4ASE与药典提取结果比较
4、讨论：
4.1ASE提取溶剂的选择：
《中国药典》采用石油醚去脂溶性成分，考虑ASE仪器对溶剂的使用要求，以及石油醚为宽沸程的烃类成分，本实验考察了正己烷去脂效果，结果使用正己烷循环1次，杂质峰较小，对蒙花苷的定量影响。参考《中国药典》采用甲醇作为提取溶剂，能提取完全。
4.2ASE提取条件的优化
本实验提取溶剂为甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间5min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果见表5，循环2次基本能提取完全。
表5循环次数试验结果
循环次数 含量％
1 1.121
2 0.017
3 0.004
以上所述仅为本发明的较佳实施例，不构成对本发明的权利要求所要保护的范围任何限制。

Claims (7)

1.一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE法萃取迷蒙花粉末，并收集甲醇萃取液；其中萃取包括先用正己烷去酯，再用40％甲醇萃取；
步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中蒙花苷的含量。
2.根据权利要求1所述的一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：
步骤S1：将迷蒙花粉碎，过三号筛，取0.5g与1g硅藻土混合均匀；
步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有玻璃纤维滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S3：用正己烷去酯，再用40％甲醇萃取；
步骤S4：结束后，将其烘干，并用甲醇定容至50ml，过滤，取滤液，即可。
3.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，其特征在于，所述的去酯条件为：溶剂为正己烷，温度为80℃，时间为7min，循环次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为200s。
4.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，其特征在于，所述的提取条件为：溶剂为甲醇，温度为100℃，时间为5min，循环次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。
5.根据权利要求1所述的一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，其特征在于，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：
a)仪器：安捷伦1290高效液相色谱仪；
b)色谱柱：ThermoSyncronis C18；
c)柱温：40℃；
d)流速：0.5mL/min；
e)流动相：甲醇-0.1％冰醋酸；
f)检测波长：326nm。
6.根据权利要求5所述的一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，其特征在于，所述的色谱柱的规格为3μm，3×100mm。
7.根据权利要求5所述的一种ASE-HPLC法测定迷蒙花中蒙花苷含量的方法，其特征在于，所述的流动相为体积比等于48：52的甲醇-0.1％冰醋酸。
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