CN107006522B - 蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法。针对现有蝠蛾饲养时防治拟青霉采用的化学法，会对蝠蛾幼虫产生药害，降低其生活力，还会抑制其他有益真菌生长等问题，本发明提供一种蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，包括木霉菌丝的活化与扩培、拌土分装、饲养蝠蛾幼虫等步骤，通过将木霉菌丝活化扩培后，按比例拌入混有木屑的土壤中，用此土壤饲养蝠蛾幼虫。本发明方法能减少蝠蛾饲养中拟青霉的危害，蝠蛾生长、增重更快，且死亡率大幅降低；并且施用简便，无毒无害，与环境更友好。
Description
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法。
背景技术
木霉属真菌Trichoderma大多生活在土壤、腐木以及枯草中，主要包括哈茨木霉Trichoderma harzianum、里氏木霉Trichoderma reesei、绿色木霉Trichoderma viride、短密木霉Trichoderma brevicompactum、棘孢木霉Trichoderma asperellum、康宁木霉Trichoderma koningii苇状木霉Trichoderma arundinaceum和紫杉木霉Trichodermataxi等。它们具有多种拮抗作用机制：
1、一种是竞争机制：木霉适应性广、生长快，可迅速利用营养和占据空间；
2、一种是重寄生现象：木霉菌可以寄生于许多真菌。木霉菌丝缠绕附着于病菌上,产生吸器吸取病原菌的营养,使病原菌丝消解或断裂；
3、还有一些木霉可产生酶类(如细胞壁溶解酶)、抗生素类物质。
木霉可以抑制常见病原真菌如镰刀菌、灰葡萄孢、腐霉等的生长,但未见木霉影响拟青霉生长的报道。
在人工饲养蝙蝠蛾幼虫时，拟青霉作为主要污染菌，容易寄生于幼虫上吸取虫体营养，感染并杀死幼虫，这极大影响了冬虫夏草的产量。现有技术在防治蝠蛾饲养时拟青霉共生的方法主要为化学防治法,即利用杀菌剂的喷施防治拟青霉对幼虫的感染,该方法杀菌力强，见效快。但化学防治法在杀灭拟青霉的同时，也会对蝠蛾幼虫产生药害，降低蝠蛾的生活力，还会抑制其他有益真菌的生长，均会对蝠蛾饲养造成不利影响。
发明内容
本发明要解决的技术问题为：现有蝠蛾饲养时防治拟青霉采用的化学法，会对蝠蛾幼虫产生药害，降低其生活力，还会抑制其他有益真菌生长等问题。
本发明解决技术问题的技术方案为：提供一种蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法。该方法包括以下步骤：
a、木霉菌丝的活化与扩培
将木霉菌丝块在PDA培养基中、20～26℃下活化培养3～5天；再采用打孔器打孔取菌丝，将所取菌丝打散后接种于PDB培养基中，于20～26℃下培养3～7天，得到活化的木霉菌液；所述的PDB培养基组成为：每升培养基中含有马铃薯50～300g,葡萄糖5～40g，余量为水；
将活化的木霉菌液进行扩培，每100ml木霉菌液分装至300～1200ml PDB培养基中培养3～5天后，采用滤纸过滤，洗涤过滤得到的沉淀，得到扩培后的木霉菌丝；
b、拌土分装
将步骤a得到的木霉菌丝与土壤混匀后装入虫盒中，装入体积为虫盒容积的1/3～1/2；
c、饲养蝠蛾幼虫
将步骤b所述的虫盒于18～28℃下放置2～3天，放入蝠蛾幼虫和饲料进行饲养。
其中，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，步骤a中所述的打孔器孔径为5～10mm。
其中，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，步骤a中在制备木霉菌液时，每100ml PDB培养基中接种5～20孔菌丝。
其中，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，步骤a中所述的洗涤为用清水洗涤2～3次。
其中，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，步骤b中所述木霉菌丝与土壤的重量比为1～10﹕500。
其中，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，步骤b中所述土壤为含有15～50wt％木屑的混合土壤。
优选的，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，步骤b中所述土壤在使用前于115～121℃下灭菌15～40min。
其中，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，步骤c中所述放入蝠蛾幼虫的数量≤15条/500g土壤。
其中，上述蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法中，所述木霉为哈茨木霉。
本发明的有益效果为：本发明提供一种蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，该方法以木霉作为生防菌，通过将木霉菌丝进行扩培后拌入土中，饲养蝠蛾，能减少蝠蛾饲养中拟青霉的危害，蝠蛾生长、增重更快，且死亡率大幅降低。本发明方法施用简便，木霉菌丝与土拌匀即可使用，且拌入一次后长期有效，相比化学防治每天喷施更为简便；并且，本发明的生物防治方法无毒无害，在施用过程也不会对操作人员产生毒害，与环境更友好。
具体实施方式
本发明提供一种蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，包括以下步骤：
将木霉菌丝块在PDA培养基中、20～26℃下活化培养3～5天；再采用打孔器打孔取菌丝，将所取菌丝打散后接种于PDB培养基中，于20～26℃下培养3～7天，得到活化的木霉菌液；所述的PDB培养基组成为：每升培养基中含有马铃薯50～300g,葡萄糖5～40g，余量为水；
将活化的木霉菌液进行扩培，每100ml木霉菌液分装至300～1200ml PDB培养基中培养3～5天后，采用滤纸过滤，洗涤过滤得到的沉淀，得到扩培后的木霉菌丝；
a、木霉菌丝的活化与扩培
将木霉菌丝块在PDA培养基中、20～26℃下活化培养3～5天；再采用5～10mm的打孔器打孔取菌丝，将所取菌丝打散后接种于PDB培养基中，每100ml PDB培养基接种5～20孔菌丝，于20～26℃下培养3～7天，得到活化的木霉菌液；所述的PDB培养基组成为：每升培养基中含有马铃薯50～300g,葡萄糖5～40g，余量为水；
将活化的木霉菌液进行扩培，每100ml木霉菌液分装至300～1200ml PDB培养基中培养3～5天后，采用滤纸过滤，洗涤过滤得到的沉淀，得到扩培后的木霉菌丝；
b、拌土分装
将步骤a得到的木霉菌丝与含有15～50wt％木屑的混合土壤按重量比1～10﹕500混匀后装入虫盒中，装入体积为虫盒容积的1/3～1/2；所述混合土壤在使用前于115～121℃下灭菌15～40min；
c、饲养蝠蛾幼虫
将步骤b所述的虫盒于18～28℃下放置2～3天，放入蝠蛾幼虫和饲料，每500g土壤中放入的蝠蛾幼虫≤15条，进行饲养。
本发明中使用的木霉菌丝块为已经接种培养后的木霉，储存于液体石蜡中。使用时，在使用前需要先按上述步骤进行活化和扩培。相应的，常见的木霉属，如里氏木霉、绿色木霉、短密木霉、棘孢木霉、康宁木霉苇状木霉或紫杉木霉等均可以用于蝠蛾饲养时对拟青霉进行生物防治。
本发明将木霉进行活化和扩培后，将木霉拌入土壤中，拌入重量比为1～10﹕500，选择该比例是因为其能将最大化的抑制拟青霉的生长，如木霉比例过多，土壤中营养物质不够木霉生长，木霉生长不好，如果木霉过少，难以长到能抑制拟青霉生长的浓度，不能起到生物防治的效果。
为了使木霉在土壤中充分生长，本发明将木霉与土壤混匀后，于18～28℃下放置2～3天后再放入蝠蛾幼虫进行饲养。
下面通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例和对比例所放入的蝠蛾幼虫为0.4～0.5g，5～6龄左右的自然状态下饲养的蝠蛾幼虫，其体内或体表随机的寄生有拟青霉菌。
实施例中所用的木霉购至中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC中保藏编号为3.6604，分离号SQP-36-2的哈茨木霉。
实施例用本发明方法防治蝠蛾饲养中的拟青霉
具体操作步骤如下：
a、将处于液体石蜡中保存的木霉菌丝块接种于PDA培养基中，在25℃条件下活化5天；所述PDA培养基组成为：马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,琼脂15g/L；
采用直径为9mm的打孔器打孔，取10个菌丝块接种于装有100ml PDB培养基的250ml的三角瓶中，所述PDB培养基组成为：马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L；用分散器将菌丝块打碎后置于25℃摇培5天，分装于含PDB培养基的1000ml大三角瓶中，进一步在25℃下扩培，将扩培的木霉菌丝过滤，用清水漂洗3次；
b、将121℃灭菌30min后的土壤(含木屑30wt％)与步骤a得到的木霉菌丝混合，每500g土壤中混入4g木霉菌丝，分装至每个养虫盒，装入体积为虫盒体积的1/2；
c、将步骤b所述的虫盒于25℃下放置2～3天，放入蝠蛾幼虫与饲料进行饲养；设置5个重复，每盒养蝠蛾幼虫10头，期间每7天更换一次饲料，观察35天，记录蝠蛾幼虫的死亡情况和体重增长情况。
对比例1自然情况下饲养蝠蛾
操作步骤如下：
将121℃灭菌30min后的土壤(含木屑30wt％)分装至每个养虫盒，装入体积为虫盒体积的1/2；将虫盒于25℃下放置2～3天，放入蝠蛾幼虫与饲料进行饲养；设置5个重复，每盒养蝠蛾幼虫10头，期间每7天更换一次饲料，观察35天，记录蝠蛾幼虫的死亡情况和体重增长情况。
对比例2加入拟青霉的情况下饲养蝠蛾
操作步骤如下：
将121℃灭菌30min后的土壤(含木屑30wt％)与拟青霉混合，每500g土壤中混入4g拟青霉，将混合后的土壤分装至每个养虫盒，装入体积为虫盒体积的1/2；
将上述虫盒于25℃下放置2～3天，放入蝠蛾幼虫与饲料进行饲养；设置5个重复，每盒养蝠蛾幼虫10头，期间每7天更换一次饲料，观察35天，记录蝠蛾幼虫的死亡情况和体重增长情况。
对比例3采用化学方法防治蝠蛾饲养中的拟青霉
操作步骤如下：
将121℃灭菌30min后的土壤(含木屑30wt％)中搅拌加入灭蚕病药液，使灭蚕病药液的终浓度达到0.3％；所述灭蚕病药液为南充春雷动物药业有限公司生产的灭蚕病粉剂配制的水溶液；将混合后的土壤分装至每个养虫盒，装入体积为虫盒体积的1/2；
将上述虫盒于25℃下放置2～3天，放入蝠蛾幼虫与饲料进行饲养；设置5个重复，每盒养蝠蛾幼虫10头，期间每7天更换一次饲料，观察35天，记录蝠蛾幼虫的死亡情况和体重增长情况。
实施例与对比例的蝠蛾饲养35天后，死亡率和蝠蛾重量如下表1所示。
| 实施例 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | |
| 饲养总数(头) | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 死亡数(头) | 8 | 28 | 31 | 13 |
| 死亡率(％) | 16 | 56 | 62 | 26 |
| 平均原重量(g/头) | 0.4047 | 0.4871 | 0.4516 | 0.4711 |
| 35天后平均重量(g/头) | 0.5879 | 0.5370 | 0.5688 | 0.5114 |
| 重量增长率％ | 44.7 | 10.2 | 25.9 | 8.5 |
由实施例和对比例可知：对比例1为自然状态下饲养蝠蛾，由于蝠蛾体表或体内寄生有拟青霉菌，死亡率较高，对比例2为加入拟青霉菌饲养蝠蛾的情况，拟青霉菌的作用更明显，死亡率较对比例1有所增加。而实施例中采用木霉菌丝和对比例3中采用化学药物灭蚕病药液，都可以降低蝠蛾的死亡率，但采用木霉菌丝防治时，蝠蛾死亡率更低，说明生物防治效果更好。并且，采用木霉菌丝防治时，蝠蛾的平均体重增长率较自然状态下(对比例1)和采用化学防治法(对比例3)都高出4～5倍，具有预料不到的技术效果。
Claims (8)
1.蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、木霉菌丝的活化与扩培
将木霉菌丝块在PDA培养基中、20～26℃下活化培养3～5天；再采用打孔器打孔取菌丝，将所取菌丝打散后接种于PDB培养基中，于20～26℃下培养3～7天，得到活化的木霉菌液；所述的PDB培养基组成为：每升培养基中含有马铃薯50～300g,葡萄糖5～40g，余量为水；所述木霉为哈茨木霉；保藏编号为CGMCC No.3.6604，分离号SQP-36-2；将活化的木霉菌液进行扩培，每100ml木霉菌液分装至300～1200ml PDB培养基中培养3～5天后，采用滤纸过滤，洗涤过滤得到的沉淀，得到扩培后的木霉菌丝；
b、拌土分装
将步骤a得到的木霉菌丝与土壤混匀后装入虫盒中，装入体积为虫盒容积的1/3～1/2；
c、饲养蝠蛾幼虫
将步骤b所述的虫盒于18～28℃下放置2～3天，放入蝠蛾幼虫和饲料进行饲养。
2.根据权利要求1所述的蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于：步骤a中所述的打孔器孔径为5～10mm。
3.根据权利要求1所述的蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于：步骤a中在制备木霉菌液时，每100ml PDB培养基中接种5～20孔菌丝。
4.根据权利要求1所述的蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于：步骤a中所述的洗涤为用清水洗涤2～3次。
5.根据权利要求1所述的蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于：步骤b中所述木霉菌丝与土壤的重量比为1～10﹕500。
6.根据权利要求1所述的蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于：步骤b中所述土壤为含有15～50wt％木屑的混合土壤。
7.根据权利要求1所述的蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于：骤b中所述土壤在使用前于115～121℃下灭菌15～40min。
8.根据权利要求1所述的蝠蛾饲养中拟青霉的生物防治方法，其特征在于：步骤c中所述放入蝠蛾幼虫的数量≤15条/500g土壤。
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