CN106999592A - 泛fgfr抑制剂的用途及鉴定患有适于用泛fgfr抑制剂治疗的癌症的患者的方法 - Google Patents

Abstract

本发明是基于用于在受试者中治疗癌症的泛FGFR抑制剂，其中所述受试者是这样的受试者，即已发现来自所述受试者的肿瘤组织样品中的FGFR1、FGFR2和/或FGFR3mRNA的总和被过表达。

Description

泛FGFR抑制剂的用途及鉴定患有适于用泛FGFR抑制剂治疗的 癌症的患者的方法

本发明是基于用于在受试者中治疗癌症的泛FGFR抑制剂(pan FGFR inhibitor)，其中所述受试者是这样的受试者，即已发现来自所述受试者的肿瘤组织样品中的FGFR1、FGFR2和/或FGFR3 mRNA的总和被过表达。

在其他实施方案中，本发明涉及鉴定患有适于用泛FGFR抑制剂治疗的癌症的患者的方法，其包括测试来自患者的肿瘤组织样品中FGFR1、FGFR2和/或FGFR3 mRNA过表达的存在，其中如果所测量的FGFR1、FGFR2和FGFR3的mRNA表达的总和过表达，则该患者适于用泛FGFR抑制剂治疗。

癌症是世界范围内死亡的主要原因，在2008年导致760万人死亡(所有死亡的约13％)。预计在2030年因癌症导致的死亡在世界范围内会继续上升至超过1100万(WHO来源，Fact Sheet第297期，2011年2月)。

存在许多产生癌症的方式，这是它们难以治疗的原因之一。可以发生细胞转化的一种方式是采用遗传改变。人类基因组计划的完成显示出人类癌基因的基因组不稳定性和异质性。鉴定这些基因变化的最近的策略加快了癌基因发现的过程。基因异常可以，例如，导致蛋白的过表达，并因此导致这些蛋白的非生理学激活。由其衍生出许多癌蛋白的一个蛋白家族是酪氨酸激酶，特别是受体酪氨酸激酶(RTK)。在过去二十年中，大量研究手段已经表明RTK介导的信号传导在导致癌症的不良细胞生长中的重要性。近年来，在临床中已经使用酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂作为一类新的抗肿瘤发生剂实现了有希望的结果[Swinney and Anthony,Nature Rev.Drug Disc.10(7),507-519(2011)]。

成纤维细胞生长因子(FGF)及其受体(FGFR)构成独特且不同的信号传导系统的一部分，所述系统在多种生物学过程(其涵盖胚胎发育和成体病理生理学的各个方面)中起着关键作用[Itoh和Ornitz,J.Bio-chem.149(2),121-130(2011)]。以时空的方式，FGF通过FGFR结合而刺激多种细胞功能，包括迁移、增殖、分化和存活。

FGF家族包含18种分泌的多肽生长因子，其与在细胞表面表达的四种高度保守的受体酪氨酸激酶(FGFR-1至-4)结合。此外，FGFR-5可以结合FGF，但不具有激酶结构域，因此缺乏细胞内信号传导。配体/受体相互作用的特异性被许多转录和翻译过程增强，其通过选择性转录起始、选择性剪接和C-末端截短而产生多种亚型(isoform)。各种硫酸乙酰肝素蛋白多糖(例如，多配体蛋白聚糖)可以是FGF/FGFR复合物的一部分，并且强烈影响FGF诱导信号传导响应的能力[Polanska et al.,Developmental Dynamics 238(2),277-293(2009)]。FGFR是细胞表面受体，其由三个胞外免疫球蛋白样结构域、一个单次跨膜结构域和一个胞内二聚化酪氨酸激酶结构域组成。FGF的结合使细胞内激酶紧密接近，使它们能够彼此反式磷酸化。已经鉴定了七个磷酸化位点(例如，在FGFR-1Tyr463、Tyr583、Tyr585、Tyr653、Tyr654、Tyr730和Tyr766中)。

这些磷酸酪氨酸基团中的一些充当下游信号传导分子的锚定位点，其本身也可以被FGFR直接磷酸化，导致多种信号转导途径的激活。因此，MAPK信号传导级联涉及细胞生长和分化，PI3K/Akt信号传导级联参与细胞存活和细胞命运决定，而PI3K和PKC信号传导级联在细胞极性的控制中发挥作用。FGF信号传导的几个反馈抑制剂目前已经得到鉴定，并且包括Spry(Sprouty)和Sef(与FGF类似的表达)家族的成员。此外，在某些条件下，FGFR被从前-高尔基体膜释放到胞质溶胶中。受体及其配体FGF-2通过涉及输入蛋白的机制被共同转运到核中，并且参与到CREB结合蛋白(CBP)复合物(充当基因激活门控因子的一种常见和必要的转录共激活剂)中。已经观察到FGF-2、FGFR-1和FGFR-2的免疫组织化学表达与它们的细胞质和核肿瘤细胞定位之间的多种相关性。例如，在肺腺癌中，在核水平上也发现了该关联，强调了所述复合物在核中的活跃作用[Korc and Friesel,Curr.Cancer DrugsTargets 5,639-651(2009)]。

FGF在发育中组织和成体组织中广泛表达，并且在各种正常和病理过程(包括组织发育、组织再生、血管生成、致瘤性转化、细胞迁移、细胞分化和细胞存活)中发挥重要作用。此外，FGF作为促血管生成因子也已经涉及新出现的对血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)抑制的抵抗的现象中[Bergers and Hanahan,Nat.Rev.Cancer 8,592-603(2008)]。

信号传导网络的最近癌基因组谱(profile)证明了异常FGF信号传导在一些常见人类癌症的出现中的重要作用[Wesche et al.,Biochem.J.437(2),199-213(2011)]。已经在许多人类癌症(诸如脑癌、头颈癌、胃癌和卵巢癌)中记载了配体非依赖性FGFR组成型信号传导。已经在恶性肿瘤诸如骨髓增生性疾病中鉴定了FGFR-突变形式以及FGFR-基因内易位。值得注意的是，发现是许多发育障碍的病因的相同突变也存在于肿瘤细胞中(例如，软骨发育不全和致死性发育异常中存在的突变(其引起FGFR-3的二聚化，从而引起其组成型激活)也常存在于膀胱癌中)。促进二聚化的突变仅仅是可以增加来自FGFR的配体非依赖性信号传导的一种机制。位于FGFR的激酶结构域之内或之外的其他突变可以改变结构域的构象，从而产生永久活性的激酶。

染色体区域8p11-12(FGFR-1的基因组位置)的扩增是乳腺癌中常见的病灶扩增，并且在约10％的乳腺癌中发生，主要在雌激素受体阳性癌症中发生。FGFR-1扩增也已经被报道存在于非小细胞肺鳞癌中，并且以低发生率存在于卵巢癌、膀胱癌和横纹肌肉瘤。类似地，约10％的胃癌显示FGFR-2扩增，这与不良的鳞状非小细胞肺癌(sqNSCLC)预后、弥漫型癌症相关。此外，位于FGFR-1至-4的多个单核苷酸多态性(SNP)被发现与发生选择性癌症的风险增加相关，或者被报道与预后不良相关(例如，乳腺癌、结肠癌和肺腺癌中的FGFR-4G388R等位基因)。这些SNP促进癌症的直接作用仍然是有争议的。

在最高达20％的受试者中观察到FGFR1 8p12基因座的扩增[Dutt A.et al.,PLoSOne.2011；6(6):e20351]。FGFR1基因扩增是迄今为止在sqNSCLC中最常观察到的分子改变之一，而FGFR编码基因中的突变在sqNSCLC受试者中相当罕见(<2％)[Lim et al.,FutureOncol.2013Mar；9(3):377-86]。研究FGFR1基因扩增与靶标表达水平(mRNA或蛋白质表达)之间相关性的最近出版物揭示了，在不存在FGFR1基因扩增的情况下，确实在肿瘤组织中表现出高FGFR1 mRNA过表达的sqNSCLC受试者的比例非常高(50％)。甚至更重要的是，在54％的具有确认的FGFR1拷贝数增加的受试者中，这种增加并不会导致更高的FGFR1靶标表达水平，使得泛-FGFR抑制剂的治疗不太可能成功。此外，在22％的肺腺癌(AC)中也可以观察到高的FGFR1 mRNA表达，而在该组织学类型中没有发现单一的FGFR1扩增情况。在体外，与各细胞系的FGFR1拷贝数相比，肺癌细胞系中的FGFR1 mRNA表达与对FGFR抑制剂帕纳替尼(ponatinib)的抗增殖反应相关性更好[Wynes et al.]。

在12.6％的头颈鳞状细胞癌(HNSCC)病例中观察到FGFR1基因扩增[Boehm D.etal.,Virchows Arch.2014年5月；464(5):547-51]，而文献中FGFR1肿瘤蛋白过表达的发生率为12-100％。目前文献中尚未检查HNSCC患者肿瘤中FGFR1 mRNA过表达的发生率，但最近的出版物根据它们的FGFR1拷贝数、mRNA和蛋白质表达状态表征了头颈区域的SCC(鳞状细胞癌)细胞系，并随后测试了它们对小分子FGFR抑制剂BGJ398的敏感性。作者们发现FGFR1基因扩增既不与mRNA相关也不与蛋白质表达相关。值得注意的是，仅在具有高的蛋白和mRNA水平的那些细胞系中观察到对BGJ398的敏感性[Maessenhausen et al.,Annals ofTranslational Medicine第1卷,第3期(2013年10月)]。在原发性HNSCC肿瘤中FGFR2mRNA过表达的发生率及其与FGFR抑制剂的治疗-响应相关性是未知的，而FGFR2编码基因中的激活突变使患者来源的HNSCC细胞系对使用FGFR抑制剂的治疗敏感[Liao,RG Cancer Res.2013年8月,15；73(16):5195-205]。关于HNSCC中的FGFR3 mRNA表达，最近的出版物观察到，与非肿瘤对照相比，HNSCC癌症患者肿瘤中FGFR3mRNA的表达低得多[Marshall ME et al.,ClinCancer Res.2011年8月1；17(15):5016-25]。至今已经描述了HNSCC中FGFR3mRNA表达与使用FGFR抑制剂的治疗-响应之间无相关性。

FGFR1基因在约21％的食管癌患者中被扩增[Bandla et al,Ann ThoracSurg.2012年4月；93(4):1101-6]，而FGFR2基因在约4％的食管癌患者中被扩增[Kato H etal.Int J Oncol.2013年4月；42(4):1151-8]。FGFR1[De-Chen,L第46卷|第5期|2014年5月Nature Genetics]和FGFR2[Paterson et al.,J Pathol.2013年5月；230(1):118-28]蛋白已被发现在10-20％的食管癌患者中被过表达。迄今为止，尚未在食管癌患者中研究FGFR1和FGFR2 mRNA表达水平。食管癌对泛-FGFR抑制剂的药物敏感性是未知的。

已在约8％的卵巢癌中观察到FGFR1扩增[Theillet et al.,GenesChromosom.Cancer,7:219-226]，而且近来也FGFR2过表达观察到[Taniguchi et al.,IntJ Gynecol Cancer.2013年6月；23(5):791-6]。关于对FGFR抑制剂的药物敏感性，发现卵巢癌细胞系A2780在体外对BGJ398的治疗敏感[Guagnano et al.,Cancer Discov.2012年12月；2(12):1118-33]。相比之下，卵巢癌患者中的FGFR2融合使其循环肿瘤细胞对BGJ398治疗敏感[Martignetti et al.,Neoplasia.2014年1月；16(1):97-103]。因此，FGFR编码基因中DNA改变的致癌驱动功能仍然存在争议。

在约18％的骨肉瘤患者中观察到FGFR1扩增[Fernanda-Amary et al.,CancerMed.2014年8月；3(4):980-7]，并且与此一致，在FGFR1扩增的骨肉瘤细胞系G-292中观察到FGFR小分子抑制剂BGJ398的抗增殖作用[参见Guagnano et al]。

总之，已经进行了大量体外和体内研究来验证FGFR-1至-4为重要癌症靶标，并且全面的综述已经总结了这些研究结果[参见，例如Heinzle et al.,ExpertOpin.Ther.Targets 15(7),829-846(2011)；Wesche et al.,Bio-chem.J.437(2),199-213(2011)；Greulich and Pollock,Trends in Molecular Medicine 17(5),283-292(2011)；Haugsten et al.,Mol.Cancer Res.8(11),1439-1452(2010)]。已经采用了几种策略来减弱人肿瘤中的异常FGFR-1至-4信号传导，包括阻断抗体和小分子抑制剂等。很多选择性小分子FGFR抑制剂目前处在临床开发中，例如AZD-4547(Astra-Zeneca，式(III)的化合物)、BJG-398(Novartis，式(II)的化合物)、JNJ-42756493(Johnson&Johnson，式(IV)的化合物)和CH 5183284(Chanugi，式(V)的化合物)。

但是基于a)增加的FGFR1或FGFR2基因拷贝数、b)FGFR编码基因中的激活突变或c)FGFR融合蛋白的发生，在FGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)临床试验中仅在测试和收入癌症患者[Wynes et al.,Clin Cancer Res.2014年6月,15；20(12):3299-309]。

在此，本发明人鉴定出FGFR1、FGFR2和/或FGFR3mRNA表达的总和特别适合于预测对式(I)的泛FGFR抑制剂的治疗响应：

式(I)的泛FGFR抑制剂能够以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

本发明的其他优选的泛FGFR抑制剂是例如AZD-4547(Astra-Zeneca，式(III)的化合物)、BJG-398(Novartis、式(II)的化合物)、JNJ-42756493(Johnson&Johnson，式(IV)的化合物)和CH 5183284(Chanugi，式(V)的化合物)，它们均能够以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

用于本发明目的的盐优选地为本发明化合物的药学上可接受的盐(例如，参见S.M.Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.1977,66,1-19)。还包括本身不适用于制药用途但可以用于例如本发明化合物的分离或纯化的盐。

药学上可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸和苯甲酸。

药学上可接受的盐还包括常用碱的盐，例如且优选碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和衍生自氨或有机胺(如示例性地且优选乙胺、二乙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基氨基乙醇、二乙基氨基乙醇、普鲁卡因、二环己基胺、二苄胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、精氨酸、赖氨酸和1,2-乙二胺)的铵盐。

本发明上下文中的溶剂合物是指通过与溶剂分子化学计量配位形成固体或液体状态的复合物的本发明化合物的那些形式。水合物是溶剂合物的一种具体形式，其中与水发生配位。本发明上下文中优选的溶剂合物是水合物。

本发明是基于用于在受试者中治疗癌症的泛FGFR抑制剂，其中所述受试者是这样的受试者，即已发现来自所述受试者的肿瘤组织样品中的FGFR1、FGFR2和/或FGFR3 mRNA的总和被过表达。

在另一个实施方案中，本发明涉及鉴定患有适于用泛FGFR抑制剂治疗的癌症的患者的方法，其包括测试来自所述患者的肿瘤组织样品中FGFR1、FGFR2和/或FGFR3 mRNA过表达的存在，其中如果所测量的FGFR1、FGFR2和FGFR3的mRNA表达的总和被过表达，则该患者适于用泛FGFR抑制剂治疗。

根据本发明，癌症是癌症和肿瘤疾病。这些被理解为意指，特别是以下疾病，但不限于它们：乳腺癌和乳腺肿瘤(导管和小叶形式，也是原位的)，呼吸道肿瘤(小细胞和非小细胞肺癌(NSCLC)，NSCLC包括肺的肺腺癌、鳞状细胞肺癌和大细胞肺癌，小细胞性和非小细胞性癌，支气管癌，支气管腺瘤，胸膜肺母细胞瘤)，脑肿瘤(例如，脑干和下丘脑的脑肿瘤、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤、以及神经外胚层和松果体肿瘤)，消化器官(食管、胃、胆囊、小肠、大肠、直肠、肛门)的肿瘤，肝脏肿瘤(特别是肝细胞癌、胆管细胞癌以及混合肝细胞和胆管细胞癌)，头和颈区域(喉、下咽、鼻咽、口咽、嘴唇和口腔)的肿瘤，皮肤肿瘤(鳞状上皮癌、卡波西肉瘤、恶性黑色素瘤、Merkel细胞皮肤癌和非黑色素瘤皮肤癌)，软组织的肿瘤(特别是软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤)，眼肿瘤(特别是眼内黑色素瘤、葡萄膜黑素瘤和视网膜母细胞瘤)，内分泌和外分泌腺(例如甲状腺和甲状旁腺，胰腺和唾液腺)的肿瘤，泌尿道的肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管的肿瘤)，生殖器官的肿瘤(妇女的子宫内膜、子宫颈、卵巢、阴道、外阴(vulva)和子宫的癌，和男性的前列腺和睾丸的癌)，以及它们的远端转移。这些病症还包括实体形式和作为循环血细胞的增殖性血液病，例如淋巴瘤，白血病和骨髓增生性疾病，例如急性髓细胞白血病，急性成淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，慢性粒细胞白血病和毛细胞白血病，和AIDS相关淋巴瘤，霍奇金氏淋巴瘤，非霍奇金氏淋巴瘤，皮肤T-细胞淋巴瘤，伯基特氏淋巴瘤，以及中枢神经系统中的淋巴瘤。

在一个优选的实施方案中，根据本发明的癌症是头和颈的癌症(优选头和颈的鳞状细胞癌)、食管癌、卵巢癌、膀胱癌、结肠癌和/或肺癌。在一个甚至更优选的实施方案中，根据本发明的肺癌是NSCLC，更优选肺的鳞状细胞癌。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明的肉瘤可以是脂肪肉瘤、纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、软骨肉瘤、滑膜肉瘤、血管肉瘤、尤因肉瘤(ewingsarcoma)和透明细胞肉瘤。

在一个优选的实施方案中，所述泛FGFR抑制剂选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物，它们能够以它们的盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

在一个特别优选的实施方案中，根据本发明的所述泛FGFR抑制剂是式(I)的抑制剂。

式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物可作为单独的药剂给药或与一种或多种其他治疗剂组合给药，只要这种组合不导致不合需要的和/或不可接受的副作用。此类组合疗法包括给予含有如上所定义的式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物和一种或多种其他治疗剂的单一药物剂量制剂，以及给予以其各自的单独药物剂量制剂形式的式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物和每种他治疗剂。例如，可以单一(固定)口服剂量组合物(例如片剂或胶囊)向所述患者一起给予式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物和治疗剂，或者每种药剂可以单独的剂量制剂给药。

如果使用单独的剂量制剂，则式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物及一种或多种其他治疗剂可以基本上同时(即同时地)给药或在分开的交错时间(即依次地)给药。

具体而言，可将式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物与其他抗癌剂以固定的或分开的组合使用，所述其他抗癌剂例如烷化剂，抗代谢物，植物来源的抗肿瘤剂，激素治疗剂，拓扑异构酶抑制剂，微管蛋白抑制剂，激酶抑制剂，靶向药物，抗体，抗体-药物缀合物(ADC)，免疫制剂，生物反应调节剂，抗血管生成化合物，和其他抗增殖的、抑制细胞生长的和/或细胞毒性物质。在这方面，以下是可以与本发明化合物组合使用的第二药剂的实例的非限制性列表：

阿巴瑞克(Abarelix)、阿比特龙(abiraterone)、阿柔比星(aclarubicin)、阿法替尼(afatinib)、阿柏西普(aflibercept)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利维A酸(alitretinoin)、alpharadin、六甲蜜胺(altretamine)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、氨萘非特(amonafide)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、andromustine、阿加来必(arglabin)、天冬酰胺酶(asparaginase)、阿西替尼(axitinib)、5-氮杂胞苷(5-azacitidine)、巴利昔单抗(basiliximab)、贝洛替康(belotecan)、苯达莫司汀(bendamustine)、贝伐单抗(bevacizumab)、贝沙罗汀(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、博来霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、伯舒替尼(bosutinib)、丙氨酸布立尼布(brivanib alaninate)、布舍瑞林(buserelin)、白消安(busulfan)、卡巴他赛(cabazitaxel)、CAL-101、亚叶酸钙(calcium folinate)、左亚叶酸钙(calciumlevofolinate)、喜树碱(camptothecin)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀(carmustine)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西地尼布(cediranib)、西莫白介素(celmoleukin)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯地孕酮(chlormadinone)、氮芥(chlormethine)、西多福韦(cidofovir)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、氯膦酸(clodronic acid)、氯法拉滨(clofarabine)、康普瑞汀(combretastatin)、克立他酶(crisantaspase)、克唑替尼(crizotinib)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、更生霉素(dactinomycin)、阿法达贝泊汀(darbepoetin alfa)、darinaparsin、达沙替尼(dasatinib)、道诺霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼白介素(denileukin diftitox)、狄诺塞麦(denosumab)、地洛瑞林(deslorelin)、二溴螺氯铵(dibrospidium chloride)、多西他赛(docetaxel)、多韦替尼(dovitinib)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、阿霉素(doxorubicin)、度他雄胺(dutasteride)、依库珠单抗(eculizumab)、依决洛单抗(edrecolomab)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、依利醋铵(elliptinium acetate)、伊屈泼帕(eltrombopag)、内皮抑素(endostatin)、依诺他滨(enocitabine)、表柔比星(epimbicin)、表阿霉素(epirubicin)、环硫雄醇(epitiostanol)、阿法依泊汀(epoetin alfa)、倍他依泊汀(epoetin beta)、埃坡霉素(epothilone)、依铂(eptaplatin)、艾瑞布林(eribulin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌二醇(estradiol)、雌莫司汀(estramustine)、依托泊苷(etoposide)、依维莫司(everolimus)、依喜替康(exatecan)、依西美坦(exemestane)、依昔舒林(exisulind)、法倔唑(fadrozole)、芬维A胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、夫拉平度(flavopiridol)、氟达拉滨(fludarabine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、foretinib、福美司坦(formestane)、福莫司汀(fotemustine)、氟维司群(fulvestrant)、加尼瑞克(ganirelix)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、吉马替康(gimatecan)、吉莫斯特(gimeracil)、葡磷酰胺(glufosfamide)、氧化型谷胱甘肽(glutoxim)、戈舍瑞林(goserelin)、组氨瑞林(histrelin)、羟基脲(hydroxyurea)、伊班膦酸(ibandronic acid)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊马替尼(imatinib)、咪喹莫特(imiquimod)、英丙舒凡(improsulfan)、尼达尼布(intedanib)、干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ、白介素-2、易普利姆玛(ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、伊沙匹隆(ixabepilone)、兰瑞肽(lanreotide)、拉帕替尼(lapatinib)、拉索昔芬(lasofoxifene)、来那度胺(lenalidomide)、来格司亭(lenograstim)、香菇多糖(lentinan)、乐伐替尼(lenvatinib)、来他替尼(lestaurtinib)、来曲唑(letrozole)、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)、linifanib、linsitinib、麦角乙脲(lisuride)、洛铂(lobaplatin)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼达明(lonidamine)、勒托替康(lurtotecan)、马磷酰胺(mafosfamide)、马帕木单抗(mapatumumab)、马赛替尼(masitinib)、马索罗酚(masoprocol)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美拉胂醇(melarsoprol)、美法仑(melphalan)、美雄烷(mepitiostane)、巯基嘌呤、氨甲喋呤(methotrexate)、氨基乙酰丙酸甲酯(methyl aminolevulinate)、甲睾酮(methyltestosterone)、米伐木肽(mifamurtide)、米非司酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米铂(miriplatin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫拉司亭(molgramostim)、莫替沙尼(motesanib)、诺龙(nandrolone)、奈达铂(nedaplatin)、奈拉滨(nelarabine)、来那替尼(neratinib)、尼洛替尼(nilotinib)、尼鲁米特(nilutamide)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、尼莫司汀(nimustine)、二胺硝吖啶(nitracrine)、洛拉曲克(nolatrexed)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥普瑞白介素(oprelvekin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、帕利夫明(palifermin)、帕米膦酸(pamidronic acid)、帕尼单抗(panitumumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、培门冬酶(pegaspargase)、peg-红细胞生成素β(peg-epoetin beta)、pegfilgastrim、peg-干扰素α-2b(peg-interferon alpha 2b)、吡利曲索(pelitrexol)、培美曲塞(pemetrexed)、pemtumomab、喷司他丁(pentostatin)、培洛霉素(peplomycin)、培磷酰胺(perfosfamide)、哌立福辛(perifosine)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、溶链菌制剂(picibanil)、吡喃阿霉素(pirambicin)、吡柔比星(pirarubicin)、普乐沙福(plerixafor)、普卡霉素(plicamycin)、聚氨葡糖(poliglusam)、聚磷酸雌二醇(polyestradiol phosphate)、帕纳替尼(ponatinib)、卟吩姆钠(porfimersodium)、普拉曲沙(pralatrexate)、泼尼莫司汀(prednimustine)、丙卡巴肼(procarbazine)、丙考达唑(procodazole)、PX-866、喹高利特(quinagolide)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲塞(raltitrexed)、雷珠单抗(ranibizumab)、雷莫司汀(ranimustine)、雷佐生(razoxane)、瑞格非尼(regorafenib)、利塞膦酸(risedronicacid)、利妥昔单抗(rituximab)、罗米地辛(romidepsin)、咯咪珀咯(romiplostim)、卢比替康(rubitecan)、塞卡替尼(saracatinib)、沙格司亭(sargramostim)、赛特铂(satraplatin)、司美替尼(selumetinib)、sipuleucel-T、西罗莫司(sirolimus)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、索拉非尼(sorafenib)、链佐星(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、他拉泊芬(talaporfin)、他米巴罗汀(tamibarotene)、他莫昔芬(tamoxifen)、坦度替尼(tandutinib)、他索纳明(tasonermin)、替西白介素(teceleukin)、替加氟(tegafur)、替拉替尼(telatinib)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替西罗莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睾内酯(testolactone)、睾酮(testosterone)、替曲膦(tetrofosmin)、沙利度胺(thalidomide)、噻替哌(thiotepa)、胸腺法新(thymalfasin)、硫鸟嘌呤(tioguanine)、替吡法尼(tipifarnib)、tivozanib、toceranib、托珠单抗(tocilizumab)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲贝替定(trabectedin)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、曲奥舒凡(treosulfan)、维甲酸(tretinoin)、triapine、曲洛司坦(trilostane)、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、曲洛磷胺(trofosfamide)、乌苯美司(ubenimex)、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、伐普肽(vapreotide)、varlitinib、瓦他拉尼(vatalanib)、维罗非尼(vemurafenib)、阿糖腺苷(vidarabine)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春氟宁(vinflunine)、长春瑞滨(vinorelbine)、volociximab、伏立诺他(vorinostat)、净司他丁(zinostatin)、唑来膦酸(zoledronic acid)以及佐柔比星(zorubicin)。

通常，可以用式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物与其他抗癌剂的组合寻求以下目的：

●与使用单一活性化合物的治疗相比，在减缓肿瘤生长、减小其大小或甚至其完全消除方面的提高的活性；

●采用比单一疗法更低剂量使用的化疗剂的可能性；

●与单独给药相比，几乎没有副作用的更可耐受的疗法的可能性；

●治疗更广谱癌症和肿瘤疾病的可能性；

●实现更高的对治疗的响应率；

●与标准疗法相比，患者更长的存活时间。

在癌症治疗中，可以将式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物与放射治疗和/或外科手术结合应用。

本文使用的“FGF受体”是属于FGF受体家族的受体蛋白酪氨酸激酶，并且包括FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4及将来待鉴定的该家族的其他成员。FGF受体通常包含可结合FGF配体的细胞外结构域；亲脂性跨膜结构域；保守的细胞内酪氨酸激酶结构域；以及带有数个可被磷酸化的酪氨酸残基的羧基末端信号传导结构域。FGF受体可以是天然序列FGF受体或其氨基酸序列变体。优选地，FGF受体是天然序列人FGF受体。

根据本发明，“组织样品”是指从受试者或患者的组织获得的类似细胞的集合，优选地包含具有染色体物质的有核细胞。四种主要的人体组织是(1)上皮；(2)结缔组织，包括血管，骨和软骨；(3)肌肉组织；和(4)神经组织。组织样品的来源可以是来自新鲜的、冷冻的和/或保存的器官或组织样品或活检的固体组织。

为了本文的目的，组织样品的“切片”是指组织样品的单个部分或单片，例如从组织样品切割的组织或细胞的薄片。应理解，可以取组织样品的多个切片并进行本发明的分析。

样品制备

可以使用来自受试者的任何组织样品。可以使用的组织样品的实例包括但不限于卵巢、肺、子宫内膜、头、颈、食管和膀胱。组织样品可以通过多种方法获得，包括但不限于手术切除或活检。组织可是新鲜的或冷冻的。在一个实施方案中，将组织样品固定并包埋在石蜡等中。

组织样品可以通过常规方法固定(即保存)(参见，例如，Manual of HistologicalStaining Method of the Armed Forces Institute of Pathology,第3版,Lee G.Luna,HT(ASCP)Editor,The Blakston Division McGraw-Hill Book Company:纽约；(1960)；TheArmed Forces Institute of Pathology Advanced Laboratory Methods in Histologyand Pathology(1994)Ulreka V.Mikel,Editor,Armed Forces Institute of Pathology,American Registry of Pathology,华盛顿,D.C.)。本领域技术人员将理解，固定剂的选择是由对组织进行的组织学染色或以其他方式进行分析的目的决定。本领域技术人员还将理解，固定长度取决于组织样品的大小和所使用的固定剂。举例来说，中性缓冲福尔马林可用于固定组织样品。

通常，首先将组织样品固定，然后通过一系列递增的醇脱水，渗透并用石蜡或其他切片介质包埋，以使得可以对组织样品进行切片。或者，可以将组织切片并固定所获得的切片。举例来说，可以通过常规方法将组织样品在石蜡中包埋并加工。可以使用的石蜡的实例包括但不限于高纯石蜡(Paraplast)、Broloid和Tissuemay。一旦组织样品被包埋，可以通过显微切片机等对该样品进行切片。作为该方法的实例，切片的厚度可以在约3微米至约5微米的范围内。一旦切片，这些切片可以通过几种标准方法附着到载玻片上。载玻片粘合剂的实例包括但不限于硅烷、明胶、聚-L-赖氨酸等。尤其适于RNA原位杂交的是附着在带正电荷的载玻片上的石蜡包埋的切片，例如涂有聚-L-赖氨酸的载玻片。

如果使用石蜡作为包埋材料，组织切片通常被脱蜡并与水进行再水合。组织切片可以通过几种常规的标准方法脱蜡。例如，可以使用二甲苯和一系列逐渐递减的醇。或者，可以使用市售的脱蜡非有机试剂如Hemo-De7(CMS，休斯顿，德克萨斯州)。

根据本发明，mRNA-过表达是指与正常细胞相比，在肿瘤细胞上以较高水平表达的编码FGFR蛋白的信使RNA。通常，用于比较的正常细胞与肿瘤具有相同的组织类型特别是表型，或者产生所述肿瘤的细胞。

通过使用FGFR1、2或3探针的RNA原位杂交来定量肿瘤组织样品中的FGFR1、2和3mRNA表达水平。原位杂交的方法是本领域已知的，如Wang et al in J MolDiagn.2012Jan；14(1):22-9中所述。例如，根据Jin and Lloyd(J Clin Lab Anal.1997；11(1):2-9)设计用于检测FGFR1、FGFR2或FGFR3mRNA表达的ISH探针。根据本发明，用于设计探针的序列是具有GenBank序列登录号NM_023110.2(FGFR1)、NM_000141.4(FGFR2)或NM_000142.4(FGFR3)的序列，而本领域技术人员知道上述GenBank登录号中提供的多聚A尾巴不用于探针设计。福尔马林固定、石蜡包埋的组织标本或冷冻标本的方法是已知的。可以使用常规的显色染料用于亮视野显微镜术或荧光染料用于多路分析。Levsky和Singer J在JCell Sci.2003Jul 15；116(Pt 14):2833-8中讨论了原位杂交中荧光的发展。

优选地，使用来自ACD(Advanced Cell Diagnostics,Inc.,3960Point Eden Way,Hayward,CA 94545,美国)的RNAscope技术通过RNA原位杂交来定量肿瘤组织样品中的FGFR1、2和/或-3mRNA表达水平，优选地通过使用FGFR1探针目录#310071、FGFR2探针目录#311171和FGFR3探针目录#310791。

原位杂交(ISH)

原位杂交通常在固定在载玻片上的细胞或组织切片上进行。通常，在原位过程中，采用直接和间接方法。

在直接方法中，可检测分子(例如荧光团，即荧光原位杂交或FISH)直接与核酸探针结合，以使得探针-靶标杂交体可以在杂交反应后立即在显微镜下显现。对于这种方法，探针-报告分子键禁受住相当严格的杂交和洗涤条件是至关重要的。然而，可能更重要的是，报告分子不会干扰杂交反应。由Bauman等人(1980,1984)开发的RNA探针的末端荧光染料标记方法和由Renz和Kurz(1984)描述的核酸的直接酶标记方法符合这些标准。Boehringer Mannheim已经引入了几种可用于标记和直接检测DNA或RNA探针的荧光染料标记的核苷酸。或者，可以使用放射性标记。间接方法要求探针含有通过化学或酶法引入的可通过亲和细胞化学检测的可检测分子，例如生物素-链霉亲和素系统。

例如，荧光团用于标记与细胞中的靶核苷酸序列互补的核酸序列探针。含有靶核苷酸序列的每个细胞均将结合标记的探针，产生荧光信号。靶核苷酸序列是FGFR1、FGFR2或FGFR3序列。ISH分析可以与其他测定结合使用，包括但不限于形态学染色。

可以通过采用不同程度的杂交严格性来调整ISH测定的灵敏度。随着杂交条件变得更加严格，需要探针和靶标之间具有更大程度的互补性以形成和维持稳定的双链体。通过调整杂交条件例如通过提高测定温度或降低杂交溶液的盐浓度来增加严格性。杂交后，将载玻片在通常含有类似于在杂交溶液中存在的那些试剂的试剂的溶液中洗涤，洗涤时间根据所要求的严格性而从几分钟到几小时变化(参见，例如，“Darby,Ian A.,和TimD.Hewitson.2006.In situ hybridization protocols.Totowa,新泽西州:胡马纳出版社；或Schwarzacher,Trude,和J.Heslop-Harrison.2000.Practical in situhybridization.牛津,英国:BIOS；；或Buzdin,Anton,和Sergey Lukyanov.2007.Nucleicacids hybridization modern applications.Dordrecht:Springer)。

在ISH分析中使用的探针可以是RNA或DNA寡核苷酸或多核苷酸，并且可以不仅含有天然存在的核苷酸，还可以含有它们的类似物例如洋地黄毒苷(digoxygenin)标记的dCTP，或生物素标记的衍生物例如生物素dcTP 7-氮杂鸟苷。

探针应该与目的靶核酸序列具有足够的互补性，以使得在靶核酸序列和探针之间发生稳定且特异性的结合。稳定杂交所需的互补程度随杂交和/或洗涤缓冲液的严格性而变化。优选地，在本发明中使用与靶序列完全互补的探针(参见，例如，Sambrook,J.et al.,Molecular Cloning A Laboratory Manual,冷泉港出版社,(1989))。

本领域技术人员将理解，探针的选择取决于目的靶基因的特征。探针可以是克隆在质粒、噬菌体、粘粒、YAC、细菌人工染色体(BAC)、病毒载体或任何其他合适载体中的基因组DNA、cDNA或RNA。探针可以通过常规方法进行克隆或化学合成(参见例如Sambrook，同上)。在本发明中，探针优选地用荧光团标记。荧光团的实例包括但不限于稀土螯合物(铕螯合物)、德克萨斯红、罗丹明、荧光素或丹酰。用于所述测定中的多个探针可以用一个以上的可区分的荧光或间接标记来进行标记。

在针对ISH进行处理后，可以通过显微镜的标准技术分析载玻片。简言之，使用配备有适当的激发滤光片、二色的和屏障滤光片的显微镜观察每个载玻片。对于FISH，基于所使用的荧光团的激发和发射光谱来选择滤光片。

通常，在组织样品中扫描数百个细胞，并以荧光点的形式确定特定靶核酸序列的定量，其相对于细胞数进行计数。如本文所提供的，对FGFR1、FGFR2和FGFR3过表达的测定提供了对于泛FGFR抑制剂疗法是有效的可能性的更有效的指示，优选使用式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物的疗法，最优选使用式(I)的化合物的疗法，所述化合物都能够以它们的盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

得分定义如下：

染色分数 显微镜物镜评分

0 每10个细胞无染色或小于1个点(40X放大倍数)

1 1-3个点/细胞(20-40X放大倍数下可见)

2 4-10个点/细胞。很少的点簇(在20-40X放大倍数下可见)

3 >10个点/细胞。小于10％的阳性细胞具有点簇(在20X放大倍数下可见)

4 >10个点/细胞。超过10％的阳性细胞具有点簇(在20X放大倍数下可见)

根据本发明，适合于用泛FGFR抑制剂治疗的是任一种FGFR亚型(FGFR1、FGFR2或FGFR3)的得分显示为3或者所有三种FGFR亚型的总和的得分显示为3的那些，优选适合的是其中肿瘤组织样品显示分数至少为4的那些，尤其优选具有分数超过4的那些。

根据本发明，所述癌症优选地为头和颈癌症，尤其优选头颈部鳞状细胞癌。甚至更优选头颈部鳞状细胞癌，其中得分的总和至少为6，甚至更优选其中FGFR1、FGFR2或FGFR3中的至少一个的得分至少为3。

在另一个实施方案中，所述癌症是食管癌，优选显示为得分的总和至少为5。甚至更优选FGFR1、FGFR2或FGFR3中的至少一个的得分至少为4。

另一个优选的实施方案是卵巢癌，尤其优选得分的总和至少为9时。

在另一个实施方案中，所述癌症是肺癌，优选NSCLC，甚至更优选鳞状细胞肺癌。得分的总和优选地至少为5，甚至更优选地至少为7，最优选地至少为9。

在另一个实施方案中，所述癌症是结肠癌，优选地显示至少为4的得分的总和。

在另一个实施方案中，所述癌症是膀胱癌，优选地显示至少为5的得分的总和。

在另一个实施方案中，本发明涉及通过给予有效量的泛FGFR抑制剂治疗受试者中的癌症的方法，其中所述受试者是这样的受试者，即已发现来自所述受试者的肿瘤组织样品中FGFR1、FGFR2和/或FGFR3 mRNA的总和被过表达。

实施例

材料和方法

RNA提取和定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)

将异种移植肿瘤块立即在干冰上快速冷冻，并使用Trizol方法提取总RNA。在Bioanalyzer(Agilent)上检查获得的RNA的完整性。对于逆转录，首先将1μg总RNA在室温下用无RNA酶的DNase I消化15min，然后根据试剂盒供应商的标准方案使用Promiscript在40μl的总反应体积中逆转录。通过加热15min至65℃使酶失活后，将得到的cDNA用双蒸馏水(bidest.water)稀释至终体积为150μl，并为每个PCR反应选择4μl，所述PCR反应使用TaqMan Universal Master Mix(2x)，终体积反应体积为20μl，在标准循环仪条件(细节参见TaqMan User Guide,Applied Biosytems)和ABI PRISM 9600序列检测系统下。通过Primer Express 1.5软件(Applied Biosystems)设计PCR引物和FAM标记探针的DNA序列，并总结在表1中。引物和标记探针的浓度分别为300nM和150nM。通过标准稀释曲线检查所有引物/探针组的可比较的扩增效率。使用由Livak and Schmittgen(Methods.2001Dec；25(4):402-8)所述的ddCt方法计算表达，除了使用以下公式计算每个FGFR mRNA的归一化表达水平：表达＝2(20-dCt)，其中dCt是目的基因与参照基因之间的Ct值的差异。用核糖体蛋白L32、β-2微球蛋白、胞质β肌动蛋白和甘油醛3-磷酸脱氢酶mRNA水平校正Ct值以排除总RNA的不同起始量。本发明人观察到所计算的表达水平与所使用的管家基因无关。因此，本发明人决定将所有FGFR mRNA表达数据相对于L32核糖体蛋白归一化。表2和3中示出的所得的表达水平是三次独立实验(+/-)SD的平均值，以任意单位给出。

FGFR1基因拷贝数增加的定量。

使用Qiagen的DNeasy基因组DNA提取试剂盒分离异种移植肿瘤的基因组DNA。使用Life Technologies的FGFR1 TaqMan基因拷贝数测定法分析每个样品的0.5ng基因组DNA的FGFR基因拷贝数增加。将FGFR的结果相对于供应商方案中给出的单拷贝参照基因RNase P归一化。根据表2扩增的被认为是FGFR1的所有异种移植物模型均显示比单拷贝基因预期的信号强度更高的信号强度。

体内

HN9897

将Harlan-Winkelmann(德国)的雌性6-8周龄的免疫受损的nu/nu小鼠(19-27g)用于患者来源的HN9798头颈部鳞状细胞癌研究。

实验是在6天的最短驯化期后开始的。使小鼠保持在12小时光照/黑暗周期中，食物和水可随意获得，室内温度为20-26℃。将小鼠随机分为2个实验组，每组10只小鼠。在开始治疗时，通过耳朵编码标记动物，并且每个笼子的鉴定标签包含以下信息：动物数量、性别、品种(strain)、接收日期、治疗、研究编号、组号和治疗起始日期。

收获用所选的原发性人头颈部癌组织(HN9798)接种的饲养小鼠(stock mouse)的肿瘤碎块，并将其用于接种到雌性nu/nu裸鼠上。在每只小鼠的右腹皮下接种一个肿瘤碎块(2×2mm)。当平均肿瘤大小达到约0.075cm³时，在植入后第6天开始治疗。在对照组的小鼠达到处死标准时对肿瘤进行取样，并在接种后第50天测量最终的肿瘤重量。

每周两次使用卡尺在两个维度上测量肿瘤大小，并且使用以下公式以mm³表示体积：V＝0.5a×b²，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。然后将肿瘤大小用于T/C值。计算T－C，T为治疗组的平均肿瘤大小达到预定大小(例如1000mm³)所需的时间(以天计)，C为对照组的平均肿瘤大小达到相同大小的时间(以天计)。T/C值指示抗肿瘤效果；T和C分别是给定日的治疗组和对照组的平均体积。

在尸检当天就最终肿瘤区域和肿瘤重量对所有组进行描述性统计。使用SigmaStat软件评估统计学分析。进行单向方差分析，并使用Dunn方法通过多重比较来比较与对照的差异。

ES204

将VitalRiver(中国)的雌性6-8周龄的免疫受损的nu/nu小鼠(18-24g)用于患者来源的ES204食管鳞状细胞癌研究。

实验是在6天的最短驯化期后开始的。使小鼠保持在12小时光照/黑暗周期中，食物和水可随意获取，室内温度为20-26℃。与本研究中的动物处理、护理和治疗相关的所有程序均按照实验室动物护理评估和认证协会(AAALAC)的指导，根据CrownBio的动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南进行。

将小鼠随机分为4个实验组，每组10只小鼠。在开始治疗时，通过耳朵编码标记动物，并且每个笼子的鉴定标签包含以下信息：动物数量、性别、品种、接收日期、治疗、研究编号、组号和治疗起始日期。

收获用所选的原发性人食管癌组织(ES204)接种的饲养小鼠的肿瘤碎块，并将其用于接种到雌性nu/nu裸鼠上。在每只小鼠的右腹皮下接种一个肿瘤碎块(2-3mm直径)。当平均肿瘤大小达到约100-150mm³时在植入后第25天开始治疗。在对照组的小鼠达到处死标准时对肿瘤进行取样，并在治疗开始后第23天测量最终肿瘤重量。

每周两次使用卡尺在两个维度上测量肿瘤大小，并且使用以下公式以mm³表示体积：V＝0.5a×b²，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。然后将肿瘤大小用于T/C值的计算。计算T－C，T为治疗组平均肿瘤大小达到预定大小(如1000mm³)所需的时间(以天计)，C为对照组平均肿瘤大小达到相同大小的时间(以天计)。T/C值指示抗肿瘤效果；T和C分别是给定日的治疗组和对照组的平均体积。

在尸检当天就最终肿瘤区域和肿瘤重量对所有组进行描述性统计。使用SigmaStat软件评估统计学分析。进行单向方差分析，并使用Dunn方法通过多重比较来比较与对照的差异。

OVX1023

将Janvier(法国)的雌性5-7周龄免疫受损的nu/nu小鼠(18-24g)用于患者来源的OVX1023卵巢癌研究。

将动物饲养在单独通风的笼子(TECNIPLAST Sealsafe^TM-IVC-System，TECNIPLAST，Hohenpeissenberg，德国)中，并保持在14L：10D人造光周期下。每天两次监测动物。根据组大小，使用III型笼或II型长笼。使用具有约5×5×1mm的维度的由白杨木片组成的无尘垫子(-LAB&VET Service GmbH，Vienna，奥地利，产品编号：LTE E-001)。常规加入附加的筑巢材料。每周更换包括垫子和筑巢材料的笼子。使笼内温度保持在25±1℃，相对湿度为45-65％。使笼中的空气变化(AC)率保持在60AC/h。所有材料在使用前进行高压灭菌。给动物喂食高压灭菌的Teklad Global 19％Protein Extruded Diet(T.2019S.12，Harlan Laboratories)。所有动物均可获得无菌过滤和酸化(pH 2.5)的自来水。瓶子在使用前进行高压灭菌，每周更换两次。食物和水随意提供。所有材料在使用前进行高压灭菌。

所有实验均经地方当局批准，并按照所有适用的国际、国家和地方法律法规进行。仅选择健康无异议的动物进入检测程序。在工作日每天两次定期监测动物，周末和公众假期每天监测。

将小鼠随机分为4个实验组，每组10只小鼠。在肿瘤植入期间或在使用射频识别(RFID)转发器的剂量发现实验开始时，将动物任意编号。每个笼子均用记录卡标记，指示动物种类、品种、来源、性别、交付日期、实验编号、肿瘤移植日期、随机化日期、肿瘤组织型、肿瘤数目和传代、组标识号、测试化合物、剂量、时间表、以及给药途径。

收获用所选的原发性人食管癌组织(OVX1023)接种的饲养小鼠的肿瘤碎块，并将其接种到雌性nu/nu裸鼠上。在每只小鼠右腹皮下接种一个肿瘤碎块(直径4-5mm)。每天监测动物和肿瘤植入物，直到植入物的最大数量显示开始实体肿瘤生长的明显迹象。

当平均肿瘤大小达到约100-150mm³时，在植入后第49天开始治疗。在对照组的小鼠达到处死标准时对肿瘤进行取样，并在治疗开始后第50天测量最终的肿瘤重量。

每周两次使用卡尺在两个维度上测量肿瘤大小，并且使用以下公式以mm³表示体积：V＝0.5a×b²，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。然后将肿瘤大小用于T/C值的计算。计算T－C，T为治疗组平均肿瘤大小达到预定大小(如1000mm³)所需的时间(以天计)，C为对照组平均肿瘤大小达到相同大小的时间(以天计)。T/C值指示抗肿瘤效果；T和C分别是给定日的治疗组和对照组的平均体积。

在尸检当天就最终肿瘤区域和肿瘤重量对所有组进行描述性统计。使用SigmaStat软件评估统计学分析。进行单向方差分析，并使用Dunn方法通过多重比较来比较与对照的差异。

对于表2和3中列出的所有其他肿瘤，以如上所述的类似方式进行实验。

表1：用于mRNA定量的RT-PCR引物/探针的序列(全部为5'-3'方向)。

人成纤维细胞生长因子受体-1：

正向 GGCCCAGACAACCTGCCTTA

探针 CCACCGACAAAGAGATGGAGGTGCTT

反向 TGCGTCCTCAAAGGAGACAT

人成纤维细胞生长因子受体-2：

正向 GCTGCTGAAGGAAGGACACA

探针 AGCCAGCCAACTGCACCAACGAA

反向 GCATGCCAACAGTCCCTCA

人成纤维细胞生长因子受体-3：

正向 CTCGGGAGATGACGAAGAC

探针 CTGTGTCCACACCTGTGTCCTCA

反向 CGGGCCGTGTCCAGTAA

人胞质β-肌动蛋白

正向 TCCACCTTCCAGCAGATGTG

探针 ATCAGCAAGCAGGAGTATGACGAGTCCG

反向 CTAGAAGCATTTGCGGTGGAC

人β-2微球蛋白：

正向 GTCTCGCTCCGTGGCCTTA

探针 TGCTCGCGCTACTCTCTCTTTCTGGC

反向 TGGAGTACGCTGGATAGCCTC

人L32核糖体蛋白：

正向 CTGGTCCACAACGTCAAGGA

探针 TGGAAGTGCTGCTGATGTGCAA

反向 AGCGATCTCGGCACAGTAAGA

人甘油醛3-磷酸脱氢酶：

正向 CTGGGCTACACTGAGCACCA

探针 TGGTCTCCTCTGACTTCAACAGCGACAC

反向 CAGCGTCAAAGGTGGAGGAG

模型	癌症类型	FGFR1 mRNA	FGFR1扩增	体内功效
					ES204	食管	72914	否	是
H520	肺	30407	是	否
					LXFL1121	肺	18937	是	是
LU1901	肺	16633	是	否
					MFE280	子宫内膜	15018	否	是
OVXF1023	卵巢	12632	否	是
					H1581	肺	11135	是	是
H1703	肺	8667	是	否
					Colo699	肺	8227	是	否
LXFE211	肺	7817	否	是
					A2780	卵巢	5565	否	是
LXFA1584	肺	5442	是	否
					DMS114	肺	5346	是	是

表2：体内FGFR-mRNA表达水平、FGFR1拷贝数增加和式(I)化合物治疗功效之间的相关性。通过实时PCR分离和定量异种移植肿瘤的总RNA中的FGFR1 mRNA，如材料和方法中所述。同时，分离基因组DNA并使用TaqMan拷贝数测定法定量FGFR1基因拷贝数增加。所有模型均被认为是经基因扩增的，其中FGFR1信号强度比单拷贝基因(RNAse P)的更强。在使用式(I)化合物治疗时，肿瘤重量减少至少50％的所有模型，被认为在体内有效。

表3：体内FGFR1、2和3-mRNA表达水平与式(I)化合物的治疗功效之间的相关性。分离肿瘤RNA，通过RT-PCR定量FGFR1-3mRNA水平，如材料和方法中所述。在使用式(I)化合物治疗时肿瘤重量减少至少50％的所有模型，被认为在体内有效。

HN9897	T/C2.治疗开始后第44天
		对照(vehicle)1.10ml/kg 2QD po	1
式(I)的Cpd 50mg/kg 2QD po	0.08

^1.10％乙醇。40％Solutol HS15，50％NaCl 0.9％

^2.T/C：式(I)化合物处理的肿瘤平均值/对照(vehicle)处理的肿瘤平均值(体积)

在单一疗法中用式(I)化合物治疗时测试体内功效时，同样的发现适用于具有极强FGFR1-mRNA过表达的患者来源的食管鳞状细胞肿瘤[表2中的ES204]：

ES204	T/C2.开始治疗后第23天
		对照(vehicle)1.10ml/kg 2QD po	1
式(I)的Cpd 50mg/kg 2QD po	0.1

^1.10％乙醇。40％Solutol HS15，50％水

^2.T/C：式(I)化合物处理的肿瘤平均值/对照(vehicle)处理的肿瘤平均值(体积)

高FGFR1 mRNA过表达的患者来源的卵巢癌模型[表2中的OVXF1023]也显示出非常高的体内功效：

OVXF1023	T/C2.开始治疗后第38天
		对照(vehicle)1.10ml/kg 2QD 5天有-2天没有po	1
式(I)的Cpd 35mg/kg 2QD 5天有-2天没有po	0.2

^1.10％乙醇。40％Solutol HS15，50％水

^2.T/C：式(I)化合物处理的肿瘤平均值/对照(vehicle)处理的肿瘤平均值(体积)

为了更好地定量肿瘤FGFR1-3RNA表达量，本发明人使用表3中所选的模型进行RNA原位杂交。使用FGFR1、FGFR2-或FGFR3特异性探针，将RNA在福尔马林固定的石蜡包埋异种移植肿瘤的5μm载玻片中染色，并通过评分系统使用光学显微镜进行定量(细节参见材料和方法部分)。

表4：使用FFPE载玻片和对FGFR1、FGFR2或FGFR3特异性的探针对所选的异种移植肿瘤模型的FGFR1-3RNA原位杂交评分。

根据供应商的手册使用ACD(Advanced Cell Diagnostics,Inc.，3960Point EdenWay，Hayward，CA 94545，美国)的RNAscope技术，通过RNA原位杂交来定量肿瘤组织样品中的FGFR1、2和3mRNA表达水平。FGFR1-3探针也可从ACD商购获得：

根据以下进行评分：

染色分数 显微镜物镜评分

0 每10个细胞无染色或小于1个点(40X放大倍数)

1 1-3个点/细胞(在20-40X放大倍数下可见)

2 4-10个点/细胞。很少的点簇(在20-40X放大倍数下可见)

3 >10个点/细胞。小于10％的阳性细胞具有点簇(在20X放大倍数下可见)

4 >10个点/细胞。超过10％的阳性细胞具有点簇(在20X放大倍数下可见)

尽管FGFR表达得分高但缺乏药物敏感性可以通过抗性机制来解释，例如LU1901是c-MET过表达的肿瘤，H520是kras突变的肿瘤，这两种机制都被描述为赋予对FGFR抑制剂的不敏感性。

表5：来自临床试验NCT01976741的所选患者的FGFR1-3RNA原位杂交评分数据，使用福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)的载玻片和特异性针对FGFR1、FGFR2或FGFR3的探针。如果FGFR1、FGFR2或FGFR3中的至少一个的评分至少为3，则将患者纳入试验。如表5所示，根据RECIST(实体肿瘤中的响应评估标准)——定义癌症患者在治疗期间改善(“响应”)、保持不变(“稳定”)或恶化(“进展”)的一组已公开的规则——实体肿瘤中的新响应评估标准：修订的RECIST指南(版本1.1)(European Journal of Cancer 45(2009)228-247)，在使用式(I)的化合物以800mg BID(“一日两次”＝每日两次)进行的2个周期(C2＝6周)或甚至5个周期(C5＝15周)治疗之后的CT扫描评估标准，具有这样评分结果的9名患者中有8名显示为稳定性疾病(SD)。只有一名FGFR mRNA阳性患者有进行性疾病(PD)并退出试验。

序列表

<110> Bayer Pharma Aktiengesellschaft

<120> 泛FGFR抑制剂的用途及鉴定患有适于用泛FGFR抑制剂治疗的癌症的患者的方法

<130> BHC 14 1 052-FC

<160> 24

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-1正向引物

<400> 1

ggcccagaca acctgcctta 20

<210> 2

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-1探针

<400> 2

ccaccgacaa agagatggag gtgctt 26

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-1反向引物

<400> 3

tgcgtcctca aaggagacat 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-2正向引物

<400> 4

gctgctgaag gaaggacaca 20

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-2探针

<400> 5

agccagccaa ctgcaccaac gaa 23

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-2反向引物

<400> 6

gcatgccaac agtccctca 19

<210> 7

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-3正向引物

<400> 7

ctcgggagat gacgaagac 19

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-3探针

<400> 8

agccagccaa ctgcaccaac gaa 23

<210> 9

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人成纤维细胞生长因子受体-3反向引物

<400> 9

cgggccgtgt ccagtaa 17

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人胞质β-肌动蛋白正向引物

<400> 10

tccaccttcc agcagatgtg 20

<210> 11

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人胞质β-肌动蛋白探针

<400> 11

atcagcaagc aggagtatga cgagtccg 28

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人胞质β-肌动蛋白反向引物

<400> 12

ctagaagcat ttgcggtgga c 21

<210> 13

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人β-2微球蛋白正向引物

<400> 13

gtctcgctcc gtggcctta 19

<210> 14

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人β-2微球蛋白探针

<400> 14

tgctcgcgct actctctctt tctggc 26

<210> 15

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人β-2微球蛋白反向引物

<400> 15

tggagtacgc tggatagcct c 21

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人L32核糖体蛋白正向引物

<400> 16

ctggtccaca acgtcaagga 20

<210> 17

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人L32核糖体蛋白探针

<400> 17

tggaagtgct gctgatgtgc aa 22

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人L32核糖体蛋白反向引物

<400> 18

agcgatctcg gcacagtaag a 21

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人甘油醛3-磷酸脱氢酶正向引物

<400> 19

ctgggctaca ctgagcacca 20

<210> 20

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人甘油醛3-磷酸脱氢酶探针

<400> 20

tggtctcctc tgacttcaac agcgacac 28

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人甘油醛3-磷酸脱氢酶反向引物

<400> 21

cagcgtcaaa ggtggaggag 20

<210> 22

<211> 5917

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NM_023110.2 (FGFR1)

<400> 22

agatgcaggg gcgcaaacgc caaaggagac caggctgtag gaagagaagg gcagagcgcc 60

ggacagctcg gcccgctccc cgtcctttgg ggccgcggct ggggaactac aaggcccagc 120

aggcagctgc agggggcgga ggcggaggag ggaccagcgc gggtgggagt gagagagcga 180

gccctcgcgc cccgccggcg catagcgctc ggagcgctct tgcggccaca ggcgcggcgt 240

cctcggcggc gggcggcagc tagcgggagc cgggacgccg gtgcagccgc agcgcgcgga 300

ggaacccggg tgtgccggga gctgggcggc cacgtccgga cgggaccgag acccctcgta 360

gcgcattgcg gcgacctcgc cttccccggc cgcgagcgcg ccgctgcttg aaaagccgcg 420

gaacccaagg acttttctcc ggtccgagct cggggcgccc cgcagggcgc acggtacccg 480

tgctgcagtc gggcacgccg cggcgccggg gcctccgcag ggcgatggag cccggtctgc 540

aaggaaagtg aggcgccgcc gctgcgttct ggaggagggg ggcacaaggt ctggagaccc 600

cgggtggcgg acgggagccc tccccccgcc ccgcctccgg ggcaccagct ccggctccat 660

tgttcccgcc cgggctggag gcgccgagca ccgagcgccg ccgggagtcg agcgccggcc 720

gcggagctct tgcgaccccg ccaggacccg aacagagccc gggggcggcg ggccggagcc 780

ggggacgcgg gcacacgccc gctcgcacaa gccacggcgg actctcccga ggcggaacct 840

ccacgccgag cgagggtcag tttgaaaagg aggatcgagc tcactgtgga gtatccatgg 900

agatgtggag ccttgtcacc aacctctaac tgcagaactg ggatgtggag ctggaagtgc 960

ctcctcttct gggctgtgct ggtcacagcc acactctgca ccgctaggcc gtccccgacc 1020

ttgcctgaac aagcccagcc ctggggagcc cctgtggaag tggagtcctt cctggtccac 1080

cccggtgacc tgctgcagct tcgctgtcgg ctgcgggacg atgtgcagag catcaactgg 1140

ctgcgggacg gggtgcagct ggcggaaagc aaccgcaccc gcatcacagg ggaggaggtg 1200

gaggtgcagg actccgtgcc cgcagactcc ggcctctatg cttgcgtaac cagcagcccc 1260

tcgggcagtg acaccaccta cttctccgtc aatgtttcag atgctctccc ctcctcggag 1320

gatgatgatg atgatgatga ctcctcttca gaggagaaag aaacagataa caccaaacca 1380

aaccgtatgc ccgtagctcc atattggaca tccccagaaa agatggaaaa gaaattgcat 1440

gcagtgccgg ctgccaagac agtgaagttc aaatgccctt ccagtgggac cccaaacccc 1500

acactgcgct ggttgaaaaa tggcaaagaa ttcaaacctg accacagaat tggaggctac 1560

aaggtccgtt atgccacctg gagcatcata atggactctg tggtgccctc tgacaagggc 1620

aactacacct gcattgtgga gaatgagtac ggcagcatca accacacata ccagctggat 1680

gtcgtggagc ggtcccctca ccggcccatc ctgcaagcag ggttgcccgc caacaaaaca 1740

gtggccctgg gtagcaacgt ggagttcatg tgtaaggtgt acagtgaccc gcagccgcac 1800

atccagtggc taaagcacat cgaggtgaat gggagcaaga ttggcccaga caacctgcct 1860

tatgtccaga tcttgaagac tgctggagtt aataccaccg acaaagagat ggaggtgctt 1920

cacttaagaa atgtctcctt tgaggacgca ggggagtata cgtgcttggc gggtaactct 1980

atcggactct cccatcactc tgcatggttg accgttctgg aagccctgga agagaggccg 2040

gcagtgatga cctcgcccct gtacctggag atcatcatct attgcacagg ggccttcctc 2100

atctcctgca tggtggggtc ggtcatcgtc tacaagatga agagtggtac caagaagagt 2160

gacttccaca gccagatggc tgtgcacaag ctggccaaga gcatccctct gcgcagacag 2220

gtaacagtgt ctgctgactc cagtgcatcc atgaactctg gggttcttct ggttcggcca 2280

tcacggctct cctccagtgg gactcccatg ctagcagggg tctctgagta tgagcttccc 2340

gaagaccctc gctgggagct gcctcgggac agactggtct taggcaaacc cctgggagag 2400

ggctgctttg ggcaggtggt gttggcagag gctatcgggc tggacaagga caaacccaac 2460

cgtgtgacca aagtggctgt gaagatgttg aagtcggacg caacagagaa agacttgtca 2520

gacctgatct cagaaatgga gatgatgaag atgatcggga agcataagaa tatcatcaac 2580

ctgctggggg cctgcacgca ggatggtccc ttgtatgtca tcgtggagta tgcctccaag 2640

ggcaacctgc gggagtacct gcaggcccgg aggcccccag ggctggaata ctgctacaac 2700

cccagccaca acccagagga gcagctctcc tccaaggacc tggtgtcctg cgcctaccag 2760

gtggcccgag gcatggagta tctggcctcc aagaagtgca tacaccgaga cctggcagcc 2820

aggaatgtcc tggtgacaga ggacaatgtg atgaagatag cagactttgg cctcgcacgg 2880

gacattcacc acatcgacta ctataaaaag acaaccaacg gccgactgcc tgtgaagtgg 2940

atggcacccg aggcattatt tgaccggatc tacacccacc agagtgatgt gtggtctttc 3000

ggggtgctcc tgtgggagat cttcactctg ggcggctccc cataccccgg tgtgcctgtg 3060

gaggaacttt tcaagctgct gaaggagggt caccgcatgg acaagcccag taactgcacc 3120

aacgagctgt acatgatgat gcgggactgc tggcatgcag tgccctcaca gagacccacc 3180

ttcaagcagc tggtggaaga cctggaccgc atcgtggcct tgacctccaa ccaggagtac 3240

ctggacctgt ccatgcccct ggaccagtac tcccccagct ttcccgacac ccggagctct 3300

acgtgctcct caggggagga ttccgtcttc tctcatgagc cgctgcccga ggagccctgc 3360

ctgccccgac acccagccca gcttgccaat ggcggactca aacgccgctg actgccaccc 3420

acacgccctc cccagactcc accgtcagct gtaaccctca cccacagccc ctgctgggcc 3480

caccacctgt ccgtccctgt cccctttcct gctggcagga gccggctgcc taccaggggc 3540

cttcctgtgt ggcctgcctt caccccactc agctcacctc tccctccacc tcctctccac 3600

ctgctggtga gaggtgcaaa gaggcagatc tttgctgcca gccacttcat cccctcccag 3660

atgttggacc aacacccctc cctgccacca ggcactgcct ggagggcagg gagtgggagc 3720

caatgaacag gcatgcaagt gagagcttcc tgagctttct cctgtcggtt tggtctgttt 3780

tgccttcacc cataagcccc tcgcactctg gtggcaggtg ccttgtcctc agggctacag 3840

cagtagggag gtcagtgctt cgtgcctcga ttgaaggtga cctctgcccc agataggtgg 3900

tgccagtggc ttattaattc cgatactagt ttgctttgct gaccaaatgc ctggtaccag 3960

aggatggtga ggcgaaggcc aggttggggg cagtgttgtg gccctggggc ccagccccaa 4020

actgggggct ctgtatatag ctatgaagaa aacacaaagt gtataaatct gagtatatat 4080

ttacatgtct ttttaaaagg gtcgttacca gagatttacc catcgggtaa gatgctcctg 4140

gtggctggga ggcatcagtt gctatatatt aaaaacaaaa aagaaaaaaa aggaaaatgt 4200

ttttaaaaag gtcatatatt ttttgctact tttgctgttt tattttttta aattatgttc 4260

taaacctatt ttcagtttag gtccctcaat aaaaattgct gctgcttcat ttatctatgg 4320

gctgtatgaa aagggtggga atgtccactg gaaagaaggg acacccacgg gccctggggc 4380

taggtctgtc ccgagggcac cgcatgctcc cggcgcaggt tccttgtaac ctcttcttcc 4440

taggtcctgc acccagacct cacgacgcac ctcctgcctc tccgctgctt ttggaaagtc 4500

agaaaaagaa gatgtctgct tcgagggcag gaaccccatc catgcagtag aggcgctggg 4560

cagagagtca aggcccagca gccatcgacc atggatggtt tcctccaagg aaaccggtgg 4620

ggttgggctg gggagggggc acctacctag gaatagccac ggggtagagc tacagtgatt 4680

aagaggaaag caagggcgcg gttgctcacg cctgtaatcc cagcactttg ggacaccgag 4740

gtgggcagat cacttcaggt caggagtttg agaccagcct ggccaactta gtgaaacccc 4800

atctctacta aaaatgcaaa aattatccag gcatggtggc acacgcctgt aatcccagct 4860

ccacaggagg ctgaggcaga atcccttgaa gctgggaggc ggaggttgca gtgagccgag 4920

attgcgccat tgcactccag cctgggcaac agagaaaaca aaaaggaaaa caaatgatga 4980

aggtctgcag aaactgaaac ccagacatgt gtctgccccc tctatgtggg catggttttg 5040

ccagtgcttc taagtgcagg agaacatgtc acctgaggct agttttgcat tcaggtccct 5100

ggcttcgttt cttgttggta tgcctcccca gatcgtcctt cctgtatcca tgtgaccaga 5160

ctgtatttgt tgggactgtc gcagatcttg gcttcttaca gttcttcctg tccaaactcc 5220

atcctgtccc tcaggaacgg ggggaaaatt ctccgaatgt ttttggtttt ttggctgctt 5280

ggaatttact tctgccacct gctggtcatc actgtcctca ctaagtggat tctggctccc 5340

ccgtacctca tggctcaaac taccactcct cagtcgctat attaaagctt atattttgct 5400

ggattactgc taaatacaaa agaaagttca atatgttttc atttctgtag ggaaaatggg 5460

attgctgctt taaatttctg agctagggat tttttggcag ctgcagtgtt ggcgactatt 5520

gtaaaattct ctttgtttct ctctgtaaat agcacctgct aacattacaa tttgtattta 5580

tgtttaaaga aggcatcatt tggtgaacag aactaggaaa tgaattttta gctcttaaaa 5640

gcatttgctt tgagaccgca caggagtgtc tttccttgta aaacagtgat gataatttct 5700

gccttggccc taccttgaag caatgttgtg tgaagggatg aagaatctaa aagtcttcat 5760

aagtccttgg gagaggtgct agaaaaatat aaggcactat cataattaca gtgatgtcct 5820

tgctgttact actcaaatca cccacaaatt tccccaaaga ctgcgctagc tgtcaaataa 5880

aagacagtga aattgacctg aaaaaaaaaa aaaaaaa 5917

<210> 23

<211> 4654

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NM_000141.4 (FGFR2)

<400> 23

ggcggcggct ggaggagagc gcggtggaga gccgagcggg cgggcggcgg gtgcggagcg 60

ggcgagggag cgcgcgcggc cgccacaaag ctcgggcgcc gcggggctgc atgcggcgta 120

cctggcccgg cgcggcgact gctctccggg ctggcggggg ccggccgcga gccccggggg 180

ccccgaggcc gcagcttgcc tgcgcgctct gagccttcgc aactcgcgag caaagtttgg 240

tggaggcaac gccaagcctg agtcctttct tcctctcgtt ccccaaatcc gagggcagcc 300

cgcgggcgtc atgcccgcgc tcctccgcag cctggggtac gcgtgaagcc cgggaggctt 360

ggcgccggcg aagacccaag gaccactctt ctgcgtttgg agttgctccc cgcaaccccg 420

ggctcgtcgc tttctccatc ccgacccacg cggggcgcgg ggacaacaca ggtcgcggag 480

gagcgttgcc attcaagtga ctgcagcagc agcggcagcg cctcggttcc tgagcccacc 540

gcaggctgaa ggcattgcgc gtagtccatg cccgtagagg aagtgtgcag atgggattaa 600

cgtccacatg gagatatgga agaggaccgg ggattggtac cgtaaccatg gtcagctggg 660

gtcgtttcat ctgcctggtc gtggtcacca tggcaacctt gtccctggcc cggccctcct 720

tcagtttagt tgaggatacc acattagagc cagaagagcc accaaccaaa taccaaatct 780

ctcaaccaga agtgtacgtg gctgcgccag gggagtcgct agaggtgcgc tgcctgttga 840

aagatgccgc cgtgatcagt tggactaagg atggggtgca cttggggccc aacaatagga 900

cagtgcttat tggggagtac ttgcagataa agggcgccac gcctagagac tccggcctct 960

atgcttgtac tgccagtagg actgtagaca gtgaaacttg gtacttcatg gtgaatgtca 1020

cagatgccat ctcatccgga gatgatgagg atgacaccga tggtgcggaa gattttgtca 1080

gtgagaacag taacaacaag agagcaccat actggaccaa cacagaaaag atggaaaagc 1140

ggctccatgc tgtgcctgcg gccaacactg tcaagtttcg ctgcccagcc ggggggaacc 1200

caatgccaac catgcggtgg ctgaaaaacg ggaaggagtt taagcaggag catcgcattg 1260

gaggctacaa ggtacgaaac cagcactgga gcctcattat ggaaagtgtg gtcccatctg 1320

acaagggaaa ttatacctgt gtagtggaga atgaatacgg gtccatcaat cacacgtacc 1380

acctggatgt tgtggagcga tcgcctcacc ggcccatcct ccaagccgga ctgccggcaa 1440

atgcctccac agtggtcgga ggagacgtag agtttgtctg caaggtttac agtgatgccc 1500

agccccacat ccagtggatc aagcacgtgg aaaagaacgg cagtaaatac gggcccgacg 1560

ggctgcccta cctcaaggtt ctcaaggccg ccggtgttaa caccacggac aaagagattg 1620

aggttctcta tattcggaat gtaacttttg aggacgctgg ggaatatacg tgcttggcgg 1680

gtaattctat tgggatatcc tttcactctg catggttgac agttctgcca gcgcctggaa 1740

gagaaaagga gattacagct tccccagact acctggagat agccatttac tgcatagggg 1800

tcttcttaat cgcctgtatg gtggtaacag tcatcctgtg ccgaatgaag aacacgacca 1860

agaagccaga cttcagcagc cagccggctg tgcacaagct gaccaaacgt atccccctgc 1920

ggagacaggt aacagtttcg gctgagtcca gctcctccat gaactccaac accccgctgg 1980

tgaggataac aacacgcctc tcttcaacgg cagacacccc catgctggca ggggtctccg 2040

agtatgaact tccagaggac ccaaaatggg agtttccaag agataagctg acactgggca 2100

agcccctggg agaaggttgc tttgggcaag tggtcatggc ggaagcagtg ggaattgaca 2160

aagacaagcc caaggaggcg gtcaccgtgg ccgtgaagat gttgaaagat gatgccacag 2220

agaaagacct ttctgatctg gtgtcagaga tggagatgat gaagatgatt gggaaacaca 2280

agaatatcat aaatcttctt ggagcctgca cacaggatgg gcctctctat gtcatagttg 2340

agtatgcctc taaaggcaac ctccgagaat acctccgagc ccggaggcca cccgggatgg 2400

agtactccta tgacattaac cgtgttcctg aggagcagat gaccttcaag gacttggtgt 2460

catgcaccta ccagctggcc agaggcatgg agtacttggc ttcccaaaaa tgtattcatc 2520

gagatttagc agccagaaat gttttggtaa cagaaaacaa tgtgatgaaa atagcagact 2580

ttggactcgc cagagatatc aacaatatag actattacaa aaagaccacc aatgggcggc 2640

ttccagtcaa gtggatggct ccagaagccc tgtttgatag agtatacact catcagagtg 2700

atgtctggtc cttcggggtg ttaatgtggg agatcttcac tttagggggc tcgccctacc 2760

cagggattcc cgtggaggaa ctttttaagc tgctgaagga aggacacaga atggataagc 2820

cagccaactg caccaacgaa ctgtacatga tgatgaggga ctgttggcat gcagtgccct 2880

cccagagacc aacgttcaag cagttggtag aagacttgga tcgaattctc actctcacaa 2940

ccaatgagga atacttggac ctcagccaac ctctcgaaca gtattcacct agttaccctg 3000

acacaagaag ttcttgttct tcaggagatg attctgtttt ttctccagac cccatgcctt 3060

acgaaccatg ccttcctcag tatccacaca taaacggcag tgttaaaaca tgaatgactg 3120

tgtctgcctg tccccaaaca ggacagcact gggaacctag ctacactgag cagggagacc 3180

atgcctccca gagcttgttg tctccacttg tatatatgga tcagaggagt aaataattgg 3240

aaaagtaatc agcatatgtg taaagattta tacagttgaa aacttgtaat cttccccagg 3300

aggagaagaa ggtttctgga gcagtggact gccacaagcc accatgtaac ccctctcacc 3360

tgccgtgcgt actggctgtg gaccagtagg actcaaggtg gacgtgcgtt ctgccttcct 3420

tgttaatttt gtaataattg gagaagattt atgtcagcac acacttacag agcacaaatg 3480

cagtatatag gtgctggatg tatgtaaata tattcaaatt atgtataaat atatattata 3540

tatttacaag gagttatttt ttgtattgat tttaaatgga tgtcccaatg cacctagaaa 3600

attggtctct ctttttttaa tagctatttg ctaaatgctg ttcttacaca taatttctta 3660

attttcaccg agcagaggtg gaaaaatact tttgctttca gggaaaatgg tataacgtta 3720

atttattaat aaattggtaa tatacaaaac aattaatcat ttatagtttt ttttgtaatt 3780

taagtggcat ttctatgcag gcagcacagc agactagtta atctattgct tggacttaac 3840

tagttatcag atcctttgaa aagagaatat ttacaatata tgactaattt ggggaaaatg 3900

aagttttgat ttatttgtgt ttaaatgctg ctgtcagacg attgttctta gacctcctaa 3960

atgccccata ttaaaagaac tcattcatag gaaggtgttt cattttggtg tgcaaccctg 4020

tcattacgtc aacgcaacgt ctaactggac ttcccaagat aaatggtacc agcgtcctct 4080

taaaagatgc cttaatccat tccttgagga cagaccttag ttgaaatgat agcagaatgt 4140

gcttctctct ggcagctggc cttctgcttc tgagttgcac attaatcaga ttagcctgta 4200

ttctcttcag tgaattttga taatggcttc cagactcttt ggcgttggag acgcctgtta 4260

ggatcttcaa gtcccatcat agaaaattga aacacagagt tgttctgctg atagttttgg 4320

ggatacgtcc atctttttaa gggattgctt tcatctaatt ctggcaggac ctcaccaaaa 4380

gatccagcct catacctaca tcagacaaaa tatcgccgtt gttccttctg tactaaagta 4440

ttgtgttttg ctttggaaac acccactcac tttgcaatag ccgtgcaaga tgaatgcaga 4500

ttacactgat cttatgtgtt acaaaattgg agaaagtatt taataaaacc tgttaatttt 4560

tatactgaca ataaaaatgt ttctacagat attaatgtta acaagacaaa ataaatgtca 4620

cgcaacttat ttttttaata aaaaaaaaaa aaaa 4654

<210> 24

<211> 4304

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NM_000142.4 (FGFR3)

<400> 24

gtcgcgggca gctggcgccg cgcggtcctg ctctgccggt cgcacggacg caccggcggg 60

ccgccggccg gagggacggg gcgggagctg ggcccgcgga cagcgagccg gagcgggagc 120

cgcgcgtagc gagccgggct ccggcgctcg ccagtctccc gagcggcgcc cgcctcccgc 180

cggtgcccgc gccgggccgt ggggggcagc atgcccgcgc gcgctgcctg aggacgccgc 240

ggcccccgcc cccgccatgg gcgcccctgc ctgcgccctc gcgctctgcg tggccgtggc 300

catcgtggcc ggcgcctcct cggagtcctt ggggacggag cagcgcgtcg tggggcgagc 360

ggcagaagtc ccgggcccag agcccggcca gcaggagcag ttggtcttcg gcagcgggga 420

tgctgtggag ctgagctgtc ccccgcccgg gggtggtccc atggggccca ctgtctgggt 480

caaggatggc acagggctgg tgccctcgga gcgtgtcctg gtggggcccc agcggctgca 540

ggtgctgaat gcctcccacg aggactccgg ggcctacagc tgccggcagc ggctcacgca 600

gcgcgtactg tgccacttca gtgtgcgggt gacagacgct ccatcctcgg gagatgacga 660

agacggggag gacgaggctg aggacacagg tgtggacaca ggggcccctt actggacacg 720

gcccgagcgg atggacaaga agctgctggc cgtgccggcc gccaacaccg tccgcttccg 780

ctgcccagcc gctggcaacc ccactccctc catctcctgg ctgaagaacg gcagggagtt 840

ccgcggcgag caccgcattg gaggcatcaa gctgcggcat cagcagtgga gcctggtcat 900

ggaaagcgtg gtgccctcgg accgcggcaa ctacacctgc gtcgtggaga acaagtttgg 960

cagcatccgg cagacgtaca cgctggacgt gctggagcgc tccccgcacc ggcccatcct 1020

gcaggcgggg ctgccggcca accagacggc ggtgctgggc agcgacgtgg agttccactg 1080

caaggtgtac agtgacgcac agccccacat ccagtggctc aagcacgtgg aggtgaatgg 1140

cagcaaggtg ggcccggacg gcacacccta cgttaccgtg ctcaagacgg cgggcgctaa 1200

caccaccgac aaggagctag aggttctctc cttgcacaac gtcacctttg aggacgccgg 1260

ggagtacacc tgcctggcgg gcaattctat tgggttttct catcactctg cgtggctggt 1320

ggtgctgcca gccgaggagg agctggtgga ggctgacgag gcgggcagtg tgtatgcagg 1380

catcctcagc tacggggtgg gcttcttcct gttcatcctg gtggtggcgg ctgtgacgct 1440

ctgccgcctg cgcagccccc ccaagaaagg cctgggctcc cccaccgtgc acaagatctc 1500

ccgcttcccg ctcaagcgac aggtgtccct ggagtccaac gcgtccatga gctccaacac 1560

accactggtg cgcatcgcaa ggctgtcctc aggggagggc cccacgctgg ccaatgtctc 1620

cgagctcgag ctgcctgccg accccaaatg ggagctgtct cgggcccggc tgaccctggg 1680

caagcccctt ggggagggct gcttcggcca ggtggtcatg gcggaggcca tcggcattga 1740

caaggaccgg gccgccaagc ctgtcaccgt agccgtgaag atgctgaaag acgatgccac 1800

tgacaaggac ctgtcggacc tggtgtctga gatggagatg atgaagatga tcgggaaaca 1860

caaaaacatc atcaacctgc tgggcgcctg cacgcagggc gggcccctgt acgtgctggt 1920

ggagtacgcg gccaagggta acctgcggga gtttctgcgg gcgcggcggc ccccgggcct 1980

ggactactcc ttcgacacct gcaagccgcc cgaggagcag ctcaccttca aggacctggt 2040

gtcctgtgcc taccaggtgg cccggggcat ggagtacttg gcctcccaga agtgcatcca 2100

cagggacctg gctgcccgca atgtgctggt gaccgaggac aacgtgatga agatcgcaga 2160

cttcgggctg gcccgggacg tgcacaacct cgactactac aagaagacaa ccaacggccg 2220

gctgcccgtg aagtggatgg cgcctgaggc cttgtttgac cgagtctaca ctcaccagag 2280

tgacgtctgg tcctttgggg tcctgctctg ggagatcttc acgctggggg gctccccgta 2340

ccccggcatc cctgtggagg agctcttcaa gctgctgaag gagggccacc gcatggacaa 2400

gcccgccaac tgcacacacg acctgtacat gatcatgcgg gagtgctggc atgccgcgcc 2460

ctcccagagg cccaccttca agcagctggt ggaggacctg gaccgtgtcc ttaccgtgac 2520

gtccaccgac gagtacctgg acctgtcggc gcctttcgag cagtactccc cgggtggcca 2580

ggacaccccc agctccagct cctcagggga cgactccgtg tttgcccacg acctgctgcc 2640

cccggcccca cccagcagtg ggggctcgcg gacgtgaagg gccactggtc cccaacaatg 2700

tgaggggtcc ctagcagccc accctgctgc tggtgcacag ccactccccg gcatgagact 2760

cagtgcagat ggagagacag ctacacagag ctttggtctg tgtgtgtgtg tgtgcgtgtg 2820

tgtgtgtgtg tgtgcacatc cgcgtgtgcc tgtgtgcgtg cgcatcttgc ctccaggtgc 2880

agaggtaccc tgggtgtccc cgctgctgtg caacggtctc ctgactggtg ctgcagcacc 2940

gaggggcctt tgttctgggg ggacccagtg cagaatgtaa gtgggcccac ccggtgggac 3000

ccccgtgggg cagggagctg ggcccgacat ggctccggcc tctgcctttg caccacggga 3060

catcacaggg tgggcctcgg cccctcccac acccaaagct gagcctgcag ggaagcccca 3120

catgtccagc accttgtgcc tggggtgtta gtggcaccgc ctccccacct ccaggctttc 3180

ccacttccca ccctgcccct cagagactga aattacgggt acctgaagat gggagccttt 3240

accttttatg caaaaggttt attccggaaa ctagtgtaca tttctataaa tagatgctgt 3300

gtatatggta tatatacata tatatatata acatatatgg aagaggaaaa ggctggtaca 3360

acggaggcct gcgaccctgg gggcacagga ggcaggcatg gccctgggcg gggcgtgggg 3420

gggcgtggag ggaggcccca gggggtctca cccatgcaag cagaggacca gggccttttc 3480

tggcaccgca gttttgtttt aaaactggac ctgtatattt gtaaagctat ttatgggccc 3540

ctggcactct tgttcccaca ccccaacact tccagcattt agctggccac atggcggaga 3600

gttttaattt ttaacttatt gacaaccgag aaggtttatc ccgccgatag agggacggcc 3660

aagaatgtac gtccagcctg ccccggagct ggaggatccc ctccaagcct aaaaggttgt 3720

taatagttgg aggtgattcc agtgaagata ttttatttcc tttgtccttt ttcaggagaa 3780

ttagatttct ataggatttt tctttaggag atttattttt tggacttcaa agcaagctgg 3840

tattttcata caaattcttc taattgctgt gtgtcccagg cagggagacg gtttccaggg 3900

aggggccggc cctgtgtgca ggttccgatg ttattagatg ttacaagttt atatatatct 3960

atatatataa tttattgagt ttttacaaga tgtatttgtt gtagacttaa cacttcttac 4020

gcaatgcttc tagagtttta tagcctggac tgctaccttt caaagcttgg agggaagccg 4080

tgaattcagt tggttcgttc tgtactgtta ctgggccctg agtctgggca gctgtccctt 4140

gcttgcctgc agggccatgg ctcagggtgg tctcttcttg gggcccagtg catggtggcc 4200

agaggtgtca cccaaaccgg caggtgcgat tttgttaacc cagcgacgaa ctttccgaaa 4260

aataaagaca cctggttgct aacctggaaa aaaaaaaaaa aaaa 4304

Claims (31)

1.一种用于在受试者中治疗癌症的泛FGFR抑制剂，其中所述受试者是这样的受试者，即已发现来自所述受试者的肿瘤组织样品中FGFR1、FGFR2和/或FGFR3mRNA的总和被过表达。

2.权利要求1使用的泛FGFR抑制剂，其中所述mRNA过表达的特征在于，肿瘤组织样品的FGFR1、FGFR2和/或FGFR3mRNA的总和的原位杂交的得分至少为4。

3.权利要求1或2的泛FGFR抑制剂，其中所述癌症是头颈部鳞状细胞癌。

4.权利要求3的泛FGFR抑制剂，其中所述得分的总和至少为6。

5.权利要求4的泛FGFR抑制剂，其中FGFR1、FGFR2或FGFR3中的至少一个的得分至少为3。

6.权利要求1或2的泛FGFR抑制剂，其中所述癌症是食管癌。

7.权利要求6的泛FGFR抑制剂，其中所述得分的总和至少为5。

8.权利要求7的泛FGFR抑制剂，其中FGFR1、FGFR2或FGFR3中的至少一个的得分至少为4。

9.权利要求8的泛FGFR抑制剂，其中FGFR1的得分至少为4。

10.权利要求1或2的泛FGFR抑制剂，其中所述癌症是卵巢癌。

11.权利要求10的泛FGFR抑制剂，其中所述得分的总和至少为9。

12.权利要求1或2的泛FGFR抑制剂，其中所述癌症是肺癌。

13.权利要求12的泛FGFR抑制剂，其中所述得分的总和至少为5。

14.权利要求1或2的泛FGFR抑制剂，其中所述癌症是结肠癌。

15.权利要求1或2的泛FGFR抑制剂，其中所述癌症是膀胱癌。

16.权利要求15的泛FGFR抑制剂，其中所述得分的总和至少为5。

17.前述权利要求中任一项的泛FGFR抑制剂的用途，其中所述泛FGFR抑制剂选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物：

所述化合物能够以它们的盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

18.一种鉴定患有适于用泛FGFR抑制剂治疗的癌症的患者的方法，其包括测试来自所述患者的肿瘤组织样品中FGFR1、FGFR2和/或FGFR3mRNA过表达的存在，其中如果所测量的FGFR1、FGFR2和/或FGFR3的mRNA表达的总和是过表达的，则该患者适于用泛FGFR抑制剂治疗。

19.权利要求18的方法，其中所述癌症是头颈部鳞状细胞癌。

20.权利要求18的方法，其中所述癌症是食管癌。

21.权利要求18的方法，其中所述癌症是卵巢癌。

22.权利要求18的方法，其中所述癌症是肺癌。

23.权利要求18的方法，其中所述癌症是结肠癌。

24.权利要求18的方法，其中所述癌症是膀胱癌。

25.权利要求18的方法，其中所述泛FGFR抑制剂是式(I)的化合物

所述化合物能够以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

26.权利要求18的方法，其中所述泛FGFR抑制剂是式(II)的化合物

所述化合物能够以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

27.权利要求18的方法，其中所述泛FGFR抑制剂是式(III)的化合物

所述化合物能够以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

28.权利要求18的方法，其中所述泛FGFR抑制剂是式(IV)的化合物，

所述化合物能够以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

29.权利要求18的方法，其中所述泛FGFR抑制剂是式(V)的化合物

所述化合物能够以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。

30.前述权利要求18-29中任一项的方法，其中显示甲醛固定的癌组织样品中FGFR1、FGFR2和/或FGFR3的总和的原位杂交的得分至少为4的患者适于用所述各个抑制剂治疗。

31.一种通过给予有效量的泛FGFR抑制剂在受试者中治疗癌症的方法，其中所述受试者是这样的受试者，即已发现来自所述受试者的肿瘤组织样品中的FGFR1、FGFR2和/或FGFR3mRNA的总和被过表达。