CN106979986B - 一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法，属于环境健康风险评价领域。其步骤为：选取不同的微塑料与不同邻苯二甲酸酯化合物结合；检测微塑料上吸附邻苯二甲酸酯化合物的含量；分离出微塑料；选取模式动物进行灌胃实验；解剖模式动物采集肝脏，肾脏和小肠等主要器官；冷冻干燥组织；取一定质量的冻干组织，采用有机溶液进行萃取；采用气相色谱与质谱联用技术(GC‑MS)检测进入组织的有机污染物含量。通过本方法可以准确定量微塑料上吸附的邻苯二甲酸酯化合物含量以及微塑料上吸附的邻苯二甲酸酯类化合物进入生物体组织器官中的含量。

Description

一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集 含量的方法

技术领域

本发明属于环境健康风险评价领域，更具体地说，涉及一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法。

背景技术

近些年微塑料污染问题受到越来越多的关注，越来越多的环境介质中检测出微塑料。与此同时，众多科学研究表明，微塑料能够被不同营养级的生物摄入体内并在体内保留不同时间。当这些微塑料被生物体摄入体内会引发很多健康风险，研究表明蚌摄入微塑料会造成生物体内氧化应激，降低繁殖能力；斑马鱼摄入微塑料会造成肝脏代谢损伤；鲫鱼摄入微塑料会造成神经损伤；但是微塑料在环境中不是单独存在，环境中的一些有机污染物会和微塑料相互作用，但是对微塑料与环境污染物相互作用的健康风险研究处于刚刚起步阶段。中国专利申请号为201610045344.3，申请公布日为2016年6月15日的专利申请文件公开了一种定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法，该方法是一种基于荧光标记技术来定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布规律的方法，属于环境健康风险评价领域。其步骤为：合成具有荧光标记的微塑料；选取模式动物进行灌胃实验；解剖模式动物采集肝脏，肾脏和小肠组织等主要器官；冷冻干燥组织；取一定质量的冻干组织，采取湿发消解；配置不同浓度梯度的荧光微塑料悬浊溶液，根据荧光光谱仪测定的荧光值得到标准曲线；分别测定各个组织样品消解液的荧光值，依据标准曲线得到单位组织样品中微塑料含量；最终确定进入组织的微塑料含量。

目前对微塑料与环境污染物联合作用的健康风险研究较多集中在终端毒性评估上，少有对微塑料上吸附的有机污染物含量进行评估，这是因为迄今为止人们对微塑料危害认知还只停留在微塑料本身具有的毒性这个层次上，因此缺乏对微塑料上吸附的污染物进入生物体的含量进行系统的定量分析，更无法获知微塑料上吸附的污染物在哺乳动物体内主要器官中的富集和分布规律，这为后期微塑料和污染物联合作用的毒性评估带来诸多不确定性。

尽管目前有多种方法可以检测环境样品(水、土壤和大气颗粒)中邻苯二甲酸酯含量，但是目前为止缺乏一个完整的方法去评估微塑料作为新型环境载体携带领苯二甲酸酯的能力，及其进入生物体内后含量的定性和定量研究方法，因此，建立一种易操作，准确性高的定量分析微塑料上吸附环境污染物含量以及微塑料上吸附的污染物进入生物体的分布和富集规律的方法显得尤为重要。本发明基于气相色谱与质谱联用技术和有机物萃取技术，可以简单有效的定量分析微塑料上吸附污染物的含量，同时用预吸附污染物的微塑料进行哺乳动物染毒实验，准确检测哺乳动物体内污染物的含量，为后期微塑料与污染物联合作用的健康风险评估提供可靠的基础数据。

发明内容

1.要解决的问题

由于目前普遍缺乏对微塑料吸附邻苯二甲酸酯类化合物能力定量分析和微塑料预吸附邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内分布及其含量定量分析方法，本发明提供一种基于气象色谱与质谱联用技术和有机物萃取技术分析微塑料与邻苯二甲酸酯类化合物联合作用规律，并准确定量分析预吸附于微塑料上的邻苯二甲酸酯进生物体内含量，为后期微塑料与邻苯二甲酸酯联合作用的毒性作用提供基础数据。

2.技术方案

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯化合物在生物体内富集含量的方法，其步骤包括：

(1)预吸附邻苯二甲酸酯化合物的微塑料的制备：首先配置浓度为5-50μg/L的邻苯二甲酸酯化合物溶液，然后按照体积与质量比为10：1(单位是L:g)称取粒径1-50μm聚乙烯微塑料加入上述污染物溶液中，并在摇床中震荡48-96小时，上述反应结束后，分离出溶液中的微塑料，并用超纯水重新配置浓度0.1-0.5mg/mL微塑料溶液；

(2)微塑料上邻苯二甲酸酯类化合物吸附量检测：用有机溶剂对过滤出微塑料后的反应溶液进行液液萃取，并用色谱-质谱联用检测萃取中邻苯二甲酸酯类化合物的浓度；

(3)模式动物暴露实验：选择上述预吸附邻苯二甲酸酯化合物的微塑料作为受试样品，选取模式动物进行灌胃染毒实验，以健康的模式动物作为空白组；

(4)样品采集：预吸附邻苯二甲酸酯化合物的微塑料染毒实验周期结束后，解剖模式动物，并采集相应的组织样品；

(5)冷冻干燥组织样品：使用冷冻干燥仪，分别冷冻干燥空白组和染毒组的组织样品至恒重；

(6)有机溶剂液萃取组织中邻苯二甲酸酯化合物：称取一定量的冻干组织样品，分别加入有机溶剂进行萃取组织中的邻苯二甲酸酯化合物；

(7)色谱-质谱联用检测组织提取液中的邻苯二甲酸酯化合物的含量：首先配置不同浓度的邻苯二甲酸酯化合物溶液，建立相应的标准曲线；其次，分别检测空白组和染毒组的生物组织提取液中邻苯二甲酸酯化合物含量。

更进一步地，所述的步骤(1)中，摇床在条件为25℃温度，200转/分钟震荡48小时，分离微塑料条件为使用0.22μm孔径的亲水玻璃纤维膜PTEF过滤出微塑料，然后使用超纯水重新配置浓度0.1-0.5mg/mL微塑料溶液。

更进一步地，所述的步骤(2)中液液萃取的条件为：往反应溶液中加入5mL正己烷和丙酮体积比为1:1混合有机溶剂后，震荡30分钟后，转移上层有机萃取液，同时再加入同等体积的上述萃取液，重复操作一次；萃取液过无水硫酸钠柱去除水后，氮吹有机萃取液至500μL左右，转移到气相小瓶中并定容至1mL，同时建立标准曲线，然后气相色谱与质谱联用检测反应液中所剩邻苯二甲酯类化合物含量。

更进一步地，所述的步骤(3)中，模式动物为SD大鼠或者CD-1小鼠，暴露周期为30-120天。

更进一步地，步骤(4)中采集的模式动物的组织样品为小肠、肾脏和肝脏或者其组合。

更进一步地，步骤(5)中组织样品在条件为-80℃和0.02mBar下，冷冻干燥组织至恒重。

更进一步地，步骤(6)中具体机萃取条件为：每0.1g组织样品中加入5mL正己烷和丙酮体积比为1:1混合有机溶剂后，涡旋2分钟充分混合，转移至超声仪中超声30分钟，超声结束后取上层有机萃取液，0.22μm孔径有机膜过滤，并氮吹浓缩过滤后的有机溶剂至1mL。

更进一步地，所述步骤(2)和步骤(7)中采用的色谱与质谱联用检测的条件分别为：

气相色谱条件为：

载气：高纯氦气；

柱流量：1.0mL/min；

进口温度：280℃；

进样方式：不分流进样；

进样量：1μL；

升温程序：60℃保温2min，然后按照8℃/min的速度升至300℃，保温15min；

质谱条件为：

质谱扫描范围：120-180amu；

离子源温度：250℃；

界面传输温度：250℃；

扫描时间：1s/次或者更少，每个峰至少5次扫描。

3.有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

(1)本发明基于色谱与质谱联用技术和有机物萃取技术，提供一种基于气相色谱与质谱联合检测技术和有机物萃取组织中污染物技术分析微塑料上吸附邻苯二甲酸酯类化合物含量以及微塑料上吸附的邻苯二甲酸酯类化合物进入生物体内的含量的方法，填补了至今无简便、准确定量分析微塑料上吸附邻苯二甲酸酯类化合物含量以及微塑料上吸附的邻苯二甲酸酯类化合物进入生物体内的含量的方法，为后续微塑料与邻苯二甲酯类化合物联合作用的环境健康风险评估提供不可或缺的基础数据；

(2)本发明与专利201610045344.3最大的区别是，本发明是建立一种方法检测由微塑料携带环境污染物邻苯二甲酸酯类化合物进入体内含量的方法，为评估微塑料与环境污染物复合毒性的提供基础支撑，然而现有专利201610045344.3是一种通过使用荧光标记材料和荧光光谱检测技术定性定量分析微塑料进入生物体内的含量，所以两者具有本质区别，从专利201610045344.3不易想到本发明的技术方法，理由如下(1)迄今为止，微塑料的研究重点在于微塑料的本身毒性，如能否进入生物体内，粒径大小是否影响毒性大小，等等；(2)把微塑料与环境中已经存在污染物作为一个复合污染物是一个非常新颖的研究微塑料在环境中行为、毒性迁移变化的全新角度，同时也具有一定的复杂性；

(3)本发明能够简单有效的分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物进入哺乳动物小鼠和大鼠体内含量，解决当前相关检测技术的空白，为准确评价微塑料与邻苯二甲酸酯类化合物联合作用的健康风险提供技术支持。

附图说明

图1为本发明的流程图；

图2为本发明的微塑料上吸附邻苯二甲酸二辛酯(diethylhexyl phthalate，DEHP)的含量和暴露组小鼠各组织器官中邻苯二甲酸二辛酯(DEHP)含量；

图3为本发明的微塑料上吸附邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl Phthalate，DBP)的含量和暴露组小鼠各组织器官中邻苯二甲酸二丁酯(DBP)含量；

图4为本发明的微塑料上吸附邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate,DEP)的含量和暴露组大鼠各组织器官中的邻苯二甲酸二乙酯(DEP)含量。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

实施例1

基于色谱与质谱联用分析技术和有机物萃取技术来定量分析微塑料携带邻苯二甲酸酯进入实验小鼠(CD-1)内含量的方法，定量分析粒径为40-50μm聚乙烯材质(PE)的微塑料携带邻苯二甲酸二辛酯(diethylhexyl phthalate，DEHP)进入小鼠体内含量，分析流程如图1所示，具体步骤如下：

(1)预吸附DEHP的PE微塑料的制备：首先配置浓度为50μg/L的DEHP溶液50mL，然后称取10mg粒径40-50μm聚乙烯微塑料(PE-MPs)加入上述污染物溶液中，并在摇床中震荡48小时，摇床在条件为25℃温度，200转/分钟。上述反应结束后，使用0.22μm孔径的亲水玻璃纤维膜(PTEF)分离出溶液中的微塑料，并用超纯水重新配置浓度0.1mg/mL PE微塑料溶液。

(2)PE微塑料上DEHP吸附量检测：5mL正己烷和丙酮混合有机溶剂(1:1)，后加入50mL反应液中震荡30分钟后，转移上层有机萃取液，同时再加入同等体积的上述萃取液，重复操作一次。萃取液过无水硫酸钠柱去除水后，氮吹有机萃取液至500μL左右，转移到气相小瓶中并定容至1mL。同时建立DEHP的标准曲线，然后气相色谱质谱(GC-MS，AgilentTechnologies,USA)联用检测反应液中所剩DEHP含量，检测结果如图2所示，其中气相色谱条件为：

载气：高纯氦气；

柱流量：1.0mL/min；

进口温度：280℃；

进样方式：不分流进样；

进样量：1μL；

升温程序：60℃保温2min，然后按照8℃/min的速度升至300℃，保温15min；

质谱条件为：

质谱扫描范围：120-180amu；

离子源温度：250℃；

界面传输温度：250℃；

扫描时间：1s/次，每个峰8次扫描。

(3)实验小鼠暴露实验：选择上述预吸附DEHP的PE微塑料水溶液(0.1mg/mL,PE-MPs)作为受试样品，选取CD-1雄性小鼠进行灌胃染毒实验(每天1mL)，同时选取健康CD-1雄性小鼠作为空白组，每个实验组组10只模式哺乳动物，灌胃染毒30天；

(4)样品采集：染毒实验周期结束后，解剖小鼠，并采集肠道、肾脏和肝脏等组织样品，放入液氮中保存；

(5)冷冻干燥组织样品：从液氮中取出组织样品，使用冷冻干燥仪(LABCONCO,USA)，设置条件为-80℃和0.02mBar，分别冷冻干燥空白组和染毒组的小鼠组织样品至恒重；

(6)有机溶剂液萃取组织中DEHP：称取0.1g干燥组织样品中加入5mL正己烷和丙酮混合有机溶剂(1:1)后，涡旋2分钟充分混合，转移至超声仪中超声30分钟，超声结束后取上层有机萃取液，0.22μm孔径有机膜过滤，氮吹浓缩过滤后的有机溶剂至1mL。

(7)色谱-质谱联用检测组织提取液中的DEHP含量：首先配置不同浓度的DEHP溶液，建立相应的标准曲线；其次，分别检测空白组和染毒组的小鼠不同组织提取液中DEHP含量，检测结果如图2所示。具体检测条件为：

载气：高纯氦气；

柱流量：1.0mL/min；

进口温度：280℃；

进样方式：不分流进样；

进样量：1μL；

升温程序：60℃保温2min，然后按照8℃/min的速度升至300℃，保温15min；

质谱条件为：

质谱扫描范围：120-180amu；

离子源温度：250℃；

界面传输温度：250℃；

扫描时间：1s/次，每个峰8次扫描。

实施例2

基于色谱与质谱联用分析技术和有机物萃取技术来定量分析微塑料携带邻苯二甲酸酯进入实验小鼠(CD-1)体内含量的方法，定量分析粒径为1-5μm聚乙烯材质(PE)的微塑料携带邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl Phthalate，DBP)进入小鼠体内含量，分析流程如图1所示，具体步骤如下：

(1)预吸附DBP的PE微塑料的制备：首先配置浓度为5μg/L的DBP溶液50mL，然后称取10mg粒径1-5μm聚乙烯微塑料(PE-MPs)加入上述污染物溶液中，并在摇床中震荡96小时，摇床在条件为25℃温度，200转/分钟。上述反应结束后，使用0.22μm孔径的亲水玻璃纤维膜(PTEF)分离出溶液中的微塑料，并用超纯水重新配置浓度0.5mg/mL PE微塑料溶液。

(2)PE微塑料上DBP吸附量检测：5mL正己烷和丙酮混合有机溶剂(1:1)，后加入50ml反应液中震荡30分钟后，转移上层有机萃取液，同时再加入同等体积的上述萃取液，重复操作一次。萃取液过无水硫酸钠柱去除水后，氮吹有机萃取液至500μL左右，转移到气相小瓶中并定容至1mL。同时建立DBP的标准曲线，然后气相色谱质谱(GC-MS，AgilentTechnologies,USA)联用检测反应液中所剩DBP含量，检测结果如图3所示，其中气相色谱条件为：

载气：高纯氦气；

柱流量：1.0mL/min；

进口温度：280℃；

进样方式：不分流进样；

进样量：1μL；

升温程序：60℃保温2min，然后按照8℃/min的速度升至300℃，保温15min；

质谱条件为：

质谱扫描范围：120-180amu；

离子源温度：250℃；

界面传输温度：250℃；

扫描时间：1s/次，每个峰8次扫描。

(3)实验小鼠暴露实验：选择上述预吸附DBP的PE微塑料水溶液(0.5mg/mL，PE-MPs)作为受试样品，选取CD-1雄性小鼠进行灌胃染毒实验(每天1mL)，同时选取健康CD-1雄性小鼠作为空白组，每个实验组组10只模式哺乳动物，灌胃染毒90天；

(4)样品采集：染毒实验周期结束后，解剖小鼠，并采集肠道、肾脏和肝脏等组织样品，放入液氮中保存；

(5)冷冻干燥组织样品：从液氮中取出组织样品，使用冷冻干燥仪(LABCONCO,USA)，设置条件为-80℃和0.02mBar，分别冷冻干燥空白组和染毒组的小鼠组织样品至恒重；

(6)有机溶剂液萃取组织中DBP：称取0.1g干燥组织样品中加入5mL正己烷和丙酮混合有机溶剂(1:1)后，涡旋2分钟充分混合，转移至超声仪中超声30分钟，超声结束后取上层有机萃取液，0.22μm孔径有机膜过滤，氮吹浓缩过滤后的有机溶剂至1mL。

(7)色谱-质谱联用检测组织提取液中的DBP含量：首先配置不同浓度的DBP溶液，建立相应的标准曲线；其次，分别检测空白组和染毒组的小鼠不同组织提取液中DBP含量，检测结果如图3所示。具体检测条件为：

载气：高纯氦气；

柱流量：1.0mL/min；

进口温度：280℃；

进样方式：不分流进样；

进样量：1μL；

升温程序：60℃保温2min，然后按照8℃/min的速度升至300℃，保温15min；

质谱条件为：

质谱扫描范围：120-180amu；

离子源温度：250℃；

界面传输温度：250℃；

扫描时间：1s/次，每个峰8次扫描。

实施例3

基于色谱与质谱联用分析技术和有机物萃取技术来定量分析微塑料携带邻苯二甲酸酯进入实验大鼠(SD)体内含量的方法，定量分析粒径为10-30μm聚乙烯材质(PE)的微塑料携带邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate,DEP)进入大鼠体内含量，分析流程如图1所示，具体步骤如下：

(1)预吸附DEP的PE微塑料的制备：首先配置浓度为25μg/L的DEP溶液50mL，然后称取10mg粒径10-30μm聚乙烯微塑料(PE-MPs)加入上述污染物溶液中，并在摇床中震荡72小时，摇床在条件为25℃温度，200转/分钟。上述反应结束后，使用0.22μm孔径的亲水玻璃纤维膜(PTEF)分离出溶液中的微塑料，并用超纯水重新配置浓度0.25mg/mL PE微塑料溶液。

(2)PE微塑料上DEP吸附量检测：5mL正己烷和丙酮混合有机溶剂(1:1)，后加入50ml反应液中震荡30分钟后，转移上层有机萃取液，同时再加入同等体积的上述萃取液，重复操作一次。萃取液过无水硫酸钠柱去除水后，氮吹有机萃取液至500μL左右，转移到气相小瓶中并定容至1mL。同时建立DEP的标准曲线，然后气相色谱质谱(GC-MS，AgilentTechnologies,USA)联用检测反应液中所剩DEP含量，检测结果如图4所示，其中气相色谱条件为：

载气：高纯氦气；

柱流量：1.0mL/min；

进口温度：280℃；

进样方式：不分流进样；

进样量：1μL；

升温程序：60℃保温2min，然后按照8℃/min的速度升至300℃，保温15min；

质谱条件为：

质谱扫描范围：120-180amu；

离子源温度：250℃；

界面传输温度：250℃；

扫描时间：1s/次，每个峰8次扫描。

(3)实验大鼠暴露实验：选择上述预吸附DEP的PE微塑料水溶液(0.25mg/mL，PE-MPs)作为受试样品，选取SD雄性大鼠进行灌胃染毒实验(每天1mL)，同时选取健康CD-1雄性小鼠作为空白组，每个实验组组10只模式哺乳动物，灌胃染毒120天；

(4)样品采集：染毒实验周期结束后，解剖SD大鼠，并采集肠道、肾脏和肝脏等组织样品，放入液氮中保存；

(5)冷冻干燥组织样品：从液氮中取出组织样品，使用冷冻干燥仪(LABCONCO,USA)，设置条件为-80℃和0.02mBar，分别冷冻干燥空白组和染毒组的大鼠组织样品至恒重；

(6)有机溶剂液萃取组织中DEP：称取0.1g干燥组织样品中加入5mL正己烷和丙酮混合有机溶剂(1:1)后，涡旋2分钟充分混合，转移至超声仪中超声30分钟，超声结束后取上层有机萃取液，0.22μm孔径有机膜过滤，氮吹浓缩过滤后的有机溶剂至1mL。

(7)色谱-质谱联用检测组织提取液中的DEP含量：首先配置不同浓度的DEP溶液，建立相应的标准曲线；其次，分别检测空白组和染毒组的大鼠不同组织提取液中DEP含量，检测结果如图4所示。具体检测条件为：

载气：高纯氦气；

柱流量：1.0mL/min；

进口温度：280℃；

进样方式：不分流进样；

进样量：1μL；

升温程序：60℃保温2min，然后按照8℃/min的速度升至300℃，保温15min；

质谱条件为：

质谱扫描范围：120-180amu；

离子源温度：250℃；

界面传输温度：250℃；

扫描时间：1s/次，每个峰8次扫描。

综上所述，结合附图和具体实施例对本发明的实施方式做了详细的说明，但是本发明不限于上述实施方式，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出相应变化。

Claims (5)

1.一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法，其步骤包括：(1)预吸附邻苯二甲酸酯化合物的微塑料的制备：首先配制浓度为5-50μ/L 的邻苯二甲酸酯化合物溶液，然后按照体积与质量比为10g：1L称取粒径1-50μm 聚乙烯微塑料加入上述污染物溶液中，并在摇床中震荡48-96 小时，上述反应结束后，分离出溶液中的微塑料，并用超纯水重新配制浓度0.1-0.5mg/mL 微塑料溶液；所述的步骤(1)中，摇床在条件为25°C 温度，200 转/分钟震荡48-96 小时，分离微塑料条件为使用0.22μm 孔径的亲水玻璃纤维膜PTEF 过滤出微塑料，然后使用超纯水重新配制浓度0.1-0.5mg/mL 微塑料溶液；

(2)微塑料上邻苯二甲酸酯类化合物吸附量检测：用有机溶剂对过滤出微塑料后的反应溶液进行液液萃取，并用色谱-质谱联用检测萃取液中邻苯二甲酸酯类化合物的浓度；所述的步骤(2)中液液萃取的条件为：往反应溶液中加入5mL 正己烷和丙酮体积比为1:1 混合有机溶剂后，震荡30 分钟后，转移上层有机萃取液，同时再加入同等体积的混合有机溶剂，重复操作一次；萃取液过无水硫酸钠柱去除水后，氮吹有机萃取液至500μL 左右，转移到气相小瓶中并定容至1mL，同时建立标准曲线，然后气相色谱与质谱联用检测反应液中所剩邻苯二甲酯类化合物含量；

(3)模式动物暴露实验：选择上述预吸附邻苯二甲酸酯化合物的微塑料作为受试样品，选取模式动物进行灌胃染毒实验，以健康的模式动物作为空白组；所述的步骤(3)中，模式动物为SD 大鼠或者CD-1 小鼠，暴露周期为30-120 天；

(4)样品采集：预吸附邻苯二甲酸酯化合物的微塑料染毒实验周期结束后，解剖模式动物，并采集相应的组织样品；

(5)冷冻干燥组织样品：使用冷冻干燥仪，分别冷冻干燥空白组和染毒组的组织样品至恒重；

(6)有机溶剂萃取组织中邻苯二甲酸酯化合物：称取一定量的冻干组织样品，分别加入有机溶剂进行萃取组织中的邻苯二甲酸酯化合物；

(7)色谱-质谱联用检测组织提取液中的邻苯二甲酸酯化合物的含量：首先配制不同浓度的邻苯二甲酸酯化合物溶液，建立相应的标准曲线；其次，分别检测空白组和染毒组的生物组织提取液中邻苯二甲酸酯化合物含量。

2.根据权利要求1 所述的一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法，其特征在于：步骤(4)中采集的模式动物的组织样品为小肠、肾脏或肝脏或者其组合。

3.根据权利要求1 所述的一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法，其特征在于：步骤(5)中组织样品在条件为-80°C 和0.02mBar 下，冷冻干燥组织至恒重。

4.根据权利要求1 所述的一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法，其特征在于：步骤(6)中具体萃取条件为：每0.1g 干燥组织样品中加入5mL正己烷和丙酮体积比为1:1 混合有机溶剂后，涡旋2 分钟充分混合，转移至超声仪中超声30 分钟，超声结束后取上层有机萃取液，0.22μm 孔径有机膜过滤，并氮吹浓缩过滤后的有机萃取液至1mL。

5.根据权利要求1 所述的一种分析微塑料携带邻苯二甲酸酯类化合物在生物体内富集含量的方法，其特征在于：所述步骤(2)和步骤(7)中采用的色谱与质谱联用检测的条件分别为：

气相色谱条件为：载气：高纯氦气；柱流量：1.0mL/min；进口温度：280°C；进样方式：不分流进样；进样量：1μL；升温程序：60°C 保温2min，然后按照8°C/min 的速度升至300°C，保温15min；质谱条件为：质谱扫描范围：120-180amu；离子源温度：250°C；界面传输温度：250°C；扫描时间：1s/次或者更少，每个峰至少5 次扫描。

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