CN106937595A - 一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法,包括如下步骤:金针菜母株选择,外植体剥取,对外植体进行消毒,初代培养,增殖培养,壮苗培养,生根培养,组培苗炼苗移栽,穴盘苗炼苗,本发明操作简单、成本低、能有效的促使大乌嘴金针菜在短期内进行快速繁殖,在繁殖的过程中保持大乌嘴金针菜的原种性、稳定性及一致性,采用本发明的方式进行组织培养,在穴盘中培育2~3个月后,穴盘苗长至10~15 cm,苗健壮、挺拔和新鲜,叶片在8片叶以上,形态完整,叶片大小协调,叶色具原品种特性,有光泽,具有完整而发达的根系,根系充满穴盘孔,能轻易拔出而基质不散,同一批次90%以上的苗高达到标准,适合宿迁地区大面积区域种植。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域,具体涉及一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法。
背景技术
金针菜又名“黄花菜”,属百合科萱草属植物,具有丰富的营养成分,与香菇、木耳、冬笋,同为素菜中的珍品。主要分布在江苏、湖南、湖北、四川等地,宿迁是江苏省金针菜主要产地之一,尤以“大乌嘴”花蕾长而粗壮,色泽黄亮,肉质紧实,口感甜香脆,品质优而闻名中外;然而,由于一直采用传统的栽培技术,忽视了大乌嘴的提纯复壮工作,导致其混杂严重、种性退化、品质和产量下降;针对这一问题,本发明提供一种大乌嘴金针菜组培快繁方法,包括外植体的建立、启动培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽等步骤。
发明内容
本发明针对背景技术中的不足,提供一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法,目的在于:促使大乌嘴金针菜能在短期内进行快速繁殖,在繁殖的过程中保持大乌嘴金针菜的原种性、稳定性及一致性。
本发明的目的是通过如下途径实现的:
一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法,包括如下步骤:
(1)金针菜母株选择
选择环境:需在连续晴天为3天以上的上午,无大风和空气污染的情况下;
对母株的形态要求:具有典型性状,无病害,形态健壮;
取株要求:离根部5cm处挖出整株,轻轻抖落根部泥土,减少植株表面附带的微生物和害虫;
(2)外植体剥取
剥去外层叶片,用刀片切取茎尖作为外植体,注意刀口要平整,切割次数尽量少,一般大小约为0.5 cm*0.5 cm *0.5 cm;
(3)对外植体进行消毒
将茎尖放入大烧杯中,用水摇晃冲洗3次后,加入质量浓度3%洗衣粉或洗洁精溶液,再放在水龙头下,流水冲洗2小时后用镊子夹取,之后再用无菌水冲洗3次,然后放入3%的山农一号杀灭剂,灭菌18小时;
(4)初代培养
在无菌滤纸上将表面灭菌处理后的外植体擦干,切除外表皮,之后放入初代培养基中进行培养;3天后观察有无污染,7~15 天后,幼芽生出;所述初代培养基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(5)增殖培养
将初代培养生出的幼芽切割掉,留下茎尖部分接入到增殖培养基1中进行培养;培养周期为45~60 天,诱导出愈伤组织,然后再放入增殖培养基2中进行培养,培养周期为45~60天,诱导出新芽;所述增殖培养基1包括MS 4.74g/L+6-BA3.0mg/L+ NAA 0.3~0.5mg/L+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;所述增殖培养基2包括MS 4.74g/L +6-BA3.0mg/L +NAA 0.1~0.2mg/L+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(6)壮苗培养
将经过增殖培养基2培养后的幼芽上的愈伤去除后,接入壮苗培养基中,培养周期为20~30天后,幼苗高度可达2~5cm;所述壮苗培养基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(7)生根培养
将经过壮苗培养基培养后的幼苗中生长健壮、叶色正常、叶片舒展、适于生根的无根苗,接种在生根培养基中进行培养,培养20~30天后幼苗基部长出数根新根;所述生根培养基包括1/2MS 39.3g/L + NAA 0.2 mg/L(或者IBA 0.2 mg/L)+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(8)组培苗炼苗移栽
① 组培苗选取标准
幼苗基部长出3条以上、长1~3 cm的新根,长势好、色白健壮,基本无愈伤组织,苗高一般3~5 cm,叶片数一般不少于3片,作为组培苗;
② 组培苗炼苗
将选取的组培苗,进行炼苗处理,先旋松瓶盖1~3天,然后打开瓶盖2~4天,之后炼苗3~7 天;
③ 移瓶
用手指或镊子轻轻取出瓶中的组培苗,放入清水内洗去琼脂,并将其进行分级等待移栽,冬季水温为20 ℃~25 ℃;
④ 组培苗定植
将经过移瓶清洗的组培苗放入混合基质的穴盘中,首先用竹签在混合基质的穴盘每个穴位上打下能容纳根系的孔,然后再把组培苗逐一放入每个穴位的孔中,最后覆土压实,分类,分日期摆放整齐;
所述混合基质包括泥碳土、珍珠岩和蛭石,三者的体积比为3:1:1,此时组培苗成了穴盘苗;
(9)穴盘苗炼苗
将穴盘苗放在温室大棚中,先用遮阳网覆盖,第一天上午8:00-10:00进行采光、通风,然后每日逐渐增加采光和通风时间,7天后,待穴盘苗长出新根后,进行正常的管理,温度保持在15~25℃,相对湿度保持在60~80%,移栽第4周~8周,每周喷施叶面肥一次,氮: 磷:钾=15:15:15,浓度为1000倍,移栽8周后,视穴盘苗生长情况,浓度逐渐增加;培育2~3个月,穴盘苗长至10~15cm,苗健壮、挺拔和新鲜,叶片在8片叶以上。
本发明的有益效果:
本发明操作简单、成本低、能有效的促使大乌嘴金针菜在短期内进行快速繁殖,在繁殖的过程中保持大乌嘴金针菜的原种性、稳定性及一致性,采用本发明的方式进行组织培养,在穴盘中培育2~3个月后,穴盘苗长至10~15 cm,苗健壮、挺拔和新鲜,叶片在8片叶以上,形态完整,叶片大小协调,叶色具原品种特性,有光泽,具有完整而发达的根系,根系充满穴盘孔,能轻易拔出而基质不散,同一批次90%以上的苗高达到标准,并且无病虫害,经过多次实验反复研究表明,本发明重复利用率高,适合宿迁地区大面积区域种植。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例
准备工作,购买济南普朗特生物科技有限公司生产的山农一号(III型),许可证号:201300720;购买上海雨涵生物科技有限公司生产的MS培养基,编号为A0025-500G;购买济南普朗特生物科技有限公司生产的1/2MS干粉培养基,许可号:20120805;制作初代培养基:称取MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L溶于蒸馏水中,调节pH 5.8~6.0; 制作增殖培养基1:在制作完成的初代培养基中+6-BA 3.0mg/L+ NAA 0.3~0.5mg/L,制作增殖培养基2:在制作完成的初代培养基中+6-BA 3.0mg/L + NAA 0.1~0.2mg/L;制作壮苗培养基: 与初代培养基相同;制作生根培养基: 1/2MS 39.3g/L + NAA 0.2 mg/L或IBA 0.2mg/L+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L溶于蒸馏水中,调节pH 5.8~6.0;所述一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法,包括如下步骤:(1)金针菜母株选择:需在连续晴天为3天以上的上午,无大风和空气污染的情况下;母株具有典型性状,无病害,形态健壮;离根部5cm处挖出整株,轻轻抖落根部泥土,减少植株表面附带的微生物和害虫;(2)外植体剥取:剥去外层叶片,用刀片割去根系2-5cm,直接剥取茎尖做外植体,一般大小约为0.5 cm*0.5 cm *0.5 cm;(3)外植体消毒: 将茎尖放入大烧杯中,用水摇晃冲洗3次后,加入质量浓度3%洗衣粉或洗洁精溶液,流水冲洗2小时后用镊子夹取,之后再用无菌水冲洗3次,然后放入3%的山农一号杀灭剂,灭菌18小时;所述山农一号是一种杀灭剂,可以直接从市场中买到;(4)初代培养,用无菌滤纸将灭菌处理后的外植体表面擦干,在不锈钢托盘上切割掉外表层,之后放入初代培养基中进行培养;3天后检查有无污染,初代培养7~15 天后,幼芽生出;(5)增殖培养:将初代培养生出的幼芽切除,留下茎尖部分接种到增殖培养基1中进行培养;培养周期为45~60天,诱导出愈伤组织,然后再放入增殖培养基2中进行培养,培养周期为45~60天,诱导出新芽;(6)壮苗培养:将经过增殖培养后的新芽上的愈伤切除后,接入壮苗培养基中,培养周期为20~30天后,幼苗高度可达2~5 cm;(7)生根培养:选取经过壮苗培养后的幼苗中生长健壮、叶色正常、叶片舒展、适于生根的无根苗,接种在生根培养基中进行培养,培养20~30天后幼苗基部长出数根新根;(8)组培苗炼苗移栽:①组培苗选取标准:幼苗基部长出3条以上、长1~3 cm的新根,长势好、色白健壮,根长适中,基本无愈伤组织,苗高一般3~5 cm,叶片数一般不少于3片; ②炼苗:将选取的组培苗,先旋松瓶盖1~3天,然后打开瓶盖2~4天,之后炼苗3~7 天;③移瓶:用手指或镊子轻轻取出瓶中的组培苗,放入清水内洗去琼脂,并将其进行分级等待移栽,冬季水温为20 ℃~25 ℃;④定植:将经过移瓶清洗的组培苗移入混合基质的穴盘中,首先用竹签在混合基质的穴盘每穴中间打下能容纳根系的孔,然后再把组培苗逐一放入孔中,最后覆土压实,分类,分日期摆放整齐;所述混合基质包括泥碳土、珍珠岩和蛭石,三者之间的比例为3:1:1,此时完成组培苗向穴盘苗转化;(9)穴盘苗炼苗:将穴盘苗放在温室大棚中,先用遮阳网覆盖,第一天上午8:00-10:00进行采光、通风,然后每日逐渐增加采光和通风时间,7天后,待穴盘苗长出新根后,进行正常的管理,温度保持在15~25 ℃,相对湿度保持在60~80%,移栽第4周~8周,每周喷施叶面肥(氮: 磷: 钾=15:15:15,浓度为1000倍)一次,移栽8周后,视穴盘苗生长情况,浓度逐渐增加;培育2~3个月,穴盘苗长至10~15 cm,苗健壮、挺拔和新鲜,叶片在8片叶以上。
说明书中MS是指上海雨涵生物科技有限公司生产的MS培养基,编号为A0025-500G;6-BA是指6-苄氨基腺嘌呤;NAA是指萘乙酸;IBA是指吲哚丁酸。
Claims (1)
1.一种大乌嘴金针菜的提纯复壮方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)金针菜母株选择
选择环境:需在连续晴天为3天以上的上午,无大风和空气污染的情况下;
对母株的形态要求:具有典型性状,无病害,形态健壮;
取株要求:离根部5cm处挖出整株,轻轻抖落根部泥土,减少植株表面附带的微生物和害虫;
(2)外植体剥取
剥去外层叶片,用刀片切取茎尖作为外植体,注意刀口要平整,切割次数尽量少,一般大小约为0.5 cm*0.5 cm *0.5 cm;
(3)对外植体进行消毒
将茎尖放入大烧杯中,用水摇晃冲洗3次后,加入质量浓度3%洗衣粉或洗洁精溶液,再放在水龙头下,流水冲洗2小时后用镊子夹取,之后再用无菌水冲洗3次,然后放入3%的山农一号杀灭剂,灭菌18小时;
(4)初代培养
在无菌滤纸上将表面灭菌处理后的外植体擦干,切除外表皮,之后放入初代培养基中进行培养;3天后观察有无污染,7~15 天后,幼芽生出;所述初代培养基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(5)增殖培养
将初代培养生出的幼芽切割掉,留下茎尖部分接入到增殖培养基1中进行培养;培养周期为45~60 天,诱导出愈伤组织,然后再放入增殖培养基2中进行培养,培养周期为45~60天,诱导出新芽;所述增殖培养基1包括MS 4.74g/L+6-BA3.0mg/L+ NAA 0.3~0.5mg/L+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;所述增殖培养基2包括MS 4.74g/L +6-BA3.0mg/L +NAA 0.1~0.2mg/L+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(6)壮苗培养
将经过增殖培养基2培养后的幼芽上的愈伤去除后,接入壮苗培养基中,培养周期为20~30天后,幼苗高度可达2~5cm;所述壮苗培养基包括MS 4.74g/L +蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(7)生根培养
将经过壮苗培养基培养后的幼苗中生长健壮、叶色正常、叶片舒展、适于生根的无根苗,接种在生根培养基中进行培养,培养20~30天后幼苗基部长出数根新根;所述生根培养基包括1/2MS 39.3g/L + NAA 0.2 mg/L(或者IBA 0.2 mg/L)+蔗糖20g /L+琼脂粉8g/L,pH 5.8~6.0;
(8)组培苗炼苗移栽
① 组培苗选取标准
幼苗基部长出3条以上、长1~3 cm的新根,长势好、色白健壮,基本无愈伤组织,苗高一般3~5 cm,叶片数一般不少于3片,作为组培苗;
② 组培苗炼苗
将选取的组培苗,进行炼苗处理,先旋松瓶盖1~3天,然后打开瓶盖2~4天,之后炼苗3~7 天;
③ 移瓶
用手指或镊子轻轻取出瓶中的组培苗,放入清水内洗去琼脂,并将其进行分级等待移栽,冬季水温为20 ℃~25 ℃;
④ 组培苗定植
将经过移瓶清洗的组培苗放入混合基质的穴盘中,首先用竹签在混合基质的穴盘每个穴位上打下能容纳根系的孔,然后再把组培苗逐一放入每个穴位的孔中,最后覆土压实,分类,分日期摆放整齐;
所述混合基质包括泥碳土、珍珠岩和蛭石,三者的体积比为3:1:1,此时组培苗成了穴盘苗;
(9)穴盘苗炼苗
将穴盘苗放在温室大棚中,先用遮阳网覆盖,第一天上午8:00-10:00进行采光、通风,然后每日逐渐增加采光和通风时间,7天后,待穴盘苗长出新根后,进行正常的管理,温度保持在15~25℃,相对湿度保持在60~80%,移栽第4周~8周,每周喷施叶面肥一次,氮: 磷:钾=15:15:15,浓度为1000倍,移栽8周后,视穴盘苗生长情况,浓度逐渐增加;培育2~3个月,穴盘苗长至10~15cm,苗健壮、挺拔和新鲜,叶片在8片叶以上。
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