CN106908596A - 体液检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种体液检测方法，该方法包括识别检测试剂类型和进行检测。该方法通用性好，检测效率高，解决了没有仪器的试剂厂家对仪器的需求问题，解决了单一厂家优势项目有限的问题，解决了使用不同试剂厂家的试剂时需要更换管路或清洗管路的问题，用户选择灵活性更大，有助于降低就医的检测费用。

Description

体液检测方法
技术领域
本发明涉及一种体液检测方法，尤其是涉及化学发光免疫分析领域。
背景技术
机体含有大量的水分，这些水和溶解在水里的各种物质总称为体液，约占体重的60％。体液可分为两大部分:细胞内液和细胞外液。存在于细胞内的称为细胞内液，约占体重的40％。存在于细胞外的称为细胞外液。细胞外液又分为两类:一类是存在于组织细胞之间的组织间液(包括淋巴液和脑脊液)，约占体重的16％。另一类是血液的血浆(约占体重的5％)
细胞外液:是动物的内环境，它的成分极为复杂。其中主要成分是水，其二是气体。当然最重要的是氧和二氧化碳。其三是还有各种无机离子，其中钠离子(Na+)、氯离子(Cl-)、钾离子(K+)、钙离子(Ca2+)、碳酸氢根(HCO3-)和磷酸根(PO43-)含量较多。其四是有机化合物，包括食物消化吸收后，进入血，再进入细胞外液的葡萄糖、氨基酸、脂类物质和多种维生素。其五是细胞外液中还含有多种激素。其六是有限量的废物，这些废物是细胞新陈代谢活动的产物。对动物而言，最主要的是蛋白质和核酸代谢的产物。这些产物都是含氮的，如氨、尿素、尿酸。其毒性不等，一般都要及时排出，以免细胞受害。在正常状况下，它们的含量都只能在一个很小的范围内变动。
细胞内液:小分子的水、无机离子，中等分子的脂类、氨基酸、核苷酸，大分子的蛋白质、核酸、脂蛋白、多糖。
人体内的正常液体，可以保持身体机能的正常运作，而观察这些基于水分调节所发出的讯号，对于检查自身健康状况有很大帮助，因此体液可说是身体健康的指标。如果身体哪一类水分调节有异常现象，就可能是相关脏器出了状况。
体液检测需要借助相关仪器进行，现有的体液检测方法，通常是采用检测仪器与测试方法学(有两种测试方法学，闪光型和辉光型)一一匹配或对应，也就是说一个型号的检测设备，通常和一种测试方法学配套开发，这样就导致不同的测试方法学需要不同的检测仪器进行体液测量，导致检测仪器和测试方法学的通用性不足。
针对现有技术中存在的上述问题，需要一种开放性的分析仪器，使得各类试剂都可以在该仪器上进行应用，减少由于试剂与仪器之间的相互关联性而导致的试剂和仪器选择性的局限。
发明内容
本发明的目的在于提供一种体液检测方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种体液检测方法，该方法包括如下步骤：
a.识别检测试剂类型；
b.进行检测。
优选地，步骤a所述识别检测试剂的类型包括甄别样本和检测试剂，根据甄别结果，确定样本的量、磁颗粒的量及标记物的量，孵育时间，试剂厂家，并依据试剂厂家的值确定待加注的第一激发底物和第二激发底物。
优选地，所述甄别为依据测试方法学得到的M值及试剂厂家的值，确定第一激发底物及其加注次数，以及第二激发底物及其加注次数。
优选地，
所述第一激发底物包括：
氧化剂；
所述第二激发底物包括：
碱性物质，或
碱性环境下的发光剂与发光增强剂；
所述氧化剂选自H2O2；
所述碱性物质选自NaOH；
所述碱性环境下的发光剂选自碱性的鲁米诺、鲁米诺衍生物、碱性的金刚烷或金刚烷衍生物。
优选地，所述试剂厂家的值是为区分不同试剂厂家而对每个试剂厂家标注的数字标识，所述试剂厂家的值用X表示，X＝1,2，…n，n为正整数；所述测试方法学得到的M值为，当试剂类型为闪光型试剂时，M＝1，当试剂类型为辉光型试剂时，M＝0。
优选地，所述加注次数为0或1次。
优选地，步骤b中的检测包括加样、反应及检测阶段。
优选地，所述反应阶段包括如下步骤：
孵育；洗涤；在预注底物时间点加激发底物，当留存有结合后的抗原和抗体的反应容器内，到达预注底物时间点，将经过甄别的激发底物加入到反应容器中。
优选地，所述检测阶段为使用检测装置对反应容器中的光进行检测，并通过软件计算待检测样本的浓度。
一种体液检测装置，该装置适用于上述的体液检测方法。
本发明的有益效果如下：
本发明提出通用平台理念，即各试剂都可以应用到一台分析仪上，
1.通用性好，检测效率高，解决了没有仪器的试剂厂家对仪器的需求问题；
2.解决了单一厂家优势项目有限的问题；
3.解决了使用不同试剂厂家的试剂时，需要更换管路或清洗管路的问题；
4.用户选择灵活性更大；
5.有助于降低就医的检测费用。
附图说明
图1为闪光型化学发光免疫分析示意图；
图2为辉光型化学发光免疫分析示意图；
图3为闪光和辉光原理示意图；
图4为兼容闪光和辉光的操作流程图。
具体实施方式
下面将结合优选实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
对于检测试剂，操作流程如下：
用标记抗原(Ag)或抗体(Ab)后的发光标记物Tr(如辣根酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)或者直接化学发光剂(如AE))，与待测标本中相应Ab或Ag、包被磁颗粒的Ag或Ab反应，形成免疫复合物，通过磁场把结合状态的免疫复合物(沉淀部分)和游离状态的发光剂标记物和未反应的Ab或Ag分离开来，然后加入发光底物催化发光反应，通过对发光强度的检测进行定量检测。
1)检测试剂甄别：检测试剂盒上粘贴电子标签或二维码，使用阅读器读取电子标签或二维码，获得试剂盒信息，包括以下内容：
*样本量SM；
*磁微粒量MM和标记物量RM；
*孵育时间T；
*厂家X，依据X的值，得到第一激发底物和第二激发底物；
*测试方法学M的值(M＝1代表闪光型，M＝0代表辉光型)；
2)抗原抗体结合反应：将SM微升的待测标本、MM微升的包被磁颗粒和RM微升的标记物，加入到反应容器U中，标本中待测抗原(Ag)与磁珠上抗体(Ab)结合，再结合标记抗体；
3)孵育：反应容器U在恒温(37℃±0.5℃)的空间内放置T时间，在这段时间内，抗原抗体充分结合，形成磁珠Ab-Ag-Tr标记Ab复合物；
4)分离技术：将反应容器U放置在磁场中，使用针头或其他装置抽走反应容器U内部的上清液，然后再注入洗液。如此抽液、注液，重复2-4次后，将未结合的多余Ag和标记Ab洗去；
5)方法学甄别：依据M的值，确定检测试剂是闪光型还是辉光型试剂；M的值存储在二维码中，M＝1代表闪光型，M＝0代表辉光型；
6)闪光型试剂的化学发光反应：如果M＝1，在经过洗涤的反应容器U中，加入第一激发底物，经过一定时间后，在U中加入第二激发底物。这时Tr不需要催化剂即反应并发光。由集光器接收，经光电倍增管放大，记录N秒内所产生的光子能，按标准曲线，可计算出被测物含量；
7)辉光型试剂的化学发光反应：如果M＝0，在经洗涤过的反应容器U中，加入第一激发底物和第二激发底物，催化反应并发光。间隔一段时间后，由集光器接收，经光电倍增管放大，记录N秒内所产生的光子能，按标准曲线，可计算出被测物含量。
以吖啶酯体系为例说明闪光型第一激发底物和第二激发底物：
用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂(H2O2)和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。
辉光型第一激发底物和第二激发底物的说明：
化学发光酶免疫分析是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。
该分析系统以碱性磷酸酶(ALP)标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂、碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
闪光型化学发光免疫分析示意如图1所示，辉光型化学发光免疫分析示意如图2所示。图3为闪光和辉光原理示意图。
实施例1
如图4所示，利用本发明方法进行体液检测的过程如下：
1)检测试剂甄别：(以采用吖啶酯为标记物的闪光型试剂——甲胎蛋白为例)甲胎蛋白试剂盒上粘贴电子标签或二维码，使用阅读器读取电子标签或二维码，获得该试剂盒信息：
*样本量25微升；
*磁微粒量20微升和标记物量100微升；
*孵育时间15分钟；
*厂家X，依据X的值得到第一激发底物和第二激发底物；
*测试方法学M＝1；
2)抗原抗体结合反应：将25微升的待测标本、20微升的包被磁颗粒和100微升的标记物，加入到反应容器U中，标本中甲胎蛋白抗原(与磁珠上甲胎蛋白抗体结合，再结合标记甲胎蛋白抗体；
3)孵育：反应容器U在恒温(37℃±0.5℃)的空间内放置15分钟，在这段时间内，抗原抗体充分结合，形成磁珠甲胎蛋白抗体-甲胎蛋白抗原-标记吖啶酯的甲胎蛋白抗体的标记复合物；
4)分离技术：将反应容器U放置在磁场中，使用针头或其他装置抽走反应容器U内部的上清液，然后再注入洗液。如此抽液、注液，重复3次后，将未结合的多余甲胎蛋白抗原和标记甲胎蛋白抗体洗去；
5)方法学甄别：因为M＝1，所以确定检测试剂是闪光型试剂；
6)闪光型试剂的化学发光反应：在经过洗涤的反应容器U中，加入X厂家的第一激发底物H2O2经过一定时间后，在U中加入X厂家的第二激发底物NaOH，这时不需要催化剂即反应并发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记录1秒内所产生的光子能，按标准曲线，可计算出被测物含量。
应用本方法的优越性：在同一设备上，可以依据实际需求，同时使用同一厂家或不同厂家的闪光型和辉光型试剂，而无需进行管路清洗。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种体液检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
a.识别检测试剂类型；
b.进行检测。
2.根据权利要求1所述的体液检测方法，其特征在于，步骤a所述识别检测试剂的类型包括甄别样本和检测试剂，根据甄别结果，确定样本的量、磁颗粒的量及标记物的量，孵育时间，试剂厂家，并依据试剂厂家的值确定待加注的第一激发底物和第二激发底物。
3.根据权利要求2所述的体液检测方法，其特征在于，所述甄别为依据测试方法学得到的M值及试剂厂家的值，确定第一激发底物及其加注次数，以及第二激发底物及其加注次数。
4.根据权利要求3所述的体液检测方法，其特征在于，
所述第一激发底物包括：
氧化剂；
所述第二激发底物包括：
碱性物质，或
碱性环境下的发光剂与发光增强剂；
所述氧化剂选自H2O2；
所述碱性物质选自NaOH；
所述碱性环境下的发光剂选自碱性的鲁米诺、鲁米诺衍生物、碱性的金刚烷或金刚烷衍生物。
5.根据权利要求3所述的体液检测方法，其特征在于，所述试剂厂家的值是为区分不同试剂厂家而对每个试剂厂家标注的数字标识，所述试剂厂家的值用X表示，X＝1,2，…n，n为正整数；所述测试方法学得到的M值为，当试剂类型为闪光型试剂时，M＝1，当试剂类型为辉光型试剂时，M＝0。
6.根据权利要求3所述的体液检测方法，其特征在于，所述加注次数为0或1次。
7.根据权利要求1所述的体液检测方法，其特征在于，步骤b中的检测包括加样阶段、反应阶段及检测阶段。
8.根据权利要求7所述的体液检测方法，其特征在于，所述反应阶段包括如下步骤：
孵育；洗涤；在预注底物时间点加激发底物，当留存有结合后的抗原和抗体的反应容器内，到达预注底物时间点，将经过甄别的激发底物加入到反应容器中。
9.根据权利要求7所述的体液检测方法，其特征在于，所述检测阶段为使用检测装置对反应容器中的光进行检测，并通过软件计算待检测样本的浓度。
10.一种体液检测装置，其特征在于，使用上述权利要求1所述的方法进行检测。
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