CN106905379A

CN106905379A - 二茂铁甲酸衍生物、制备方法及其用途

Info

Publication number: CN106905379A
Application number: CN201710070338.8A
Authority: CN
Inventors: 雍建平; 卢灿忠
Original assignee: Xiamen Institute of Rare Earth Materials
Current assignee: Xiamen Institute of Rare Earth Materials
Priority date: 2017-02-09
Filing date: 2017-02-09
Publication date: 2017-06-30

Abstract

本发明公开一种二茂铁甲酸衍生物、制备方法及其用途，其为式(I)所示的二茂铁甲酸衍生物及其盐或溶剂化物及其药物组合物。其中：Z选自‑O‑或‑NH‑；R选自2‑氟、2‑溴、3‑溴、2,4,6‑三甲基、4‑叔丁基、4‑乙基、2‑甲氧基、3‑甲氧基、2‑三氟甲基、4‑硝基或4‑氰基，n为0‑5的整数，R可以相同或不同。本发明还提供式(I)化合物、制备方法及医药用途，该类化合物具有抗肿瘤活性，可以作为治疗肿瘤、癌症等疾病的候选药物或先导化合物。

Description

二茂铁甲酸衍生物、制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及一类结构新颖的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物及含该类衍生物的药物组合物及其用途。具体而言，该类二茂铁甲酸衍生物对肺癌细胞株A549、大肠癌细胞株HCT-116和乳腺癌细胞株MCF-7具有较强的抑制活性。可作为治疗肿瘤、癌症等疾病的药物或先导化合物。

背景技术

癌症已成为世界范围内最重要的致死性疾病。癌症可于任何年龄在各种器官及组织中发生，导致死亡的主要癌症种类有：肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌和乳腺癌等。近年来，肺癌成为发病率最高的恶性肿瘤。根据世界卫生组织(WHO)统计：2008年全世界被诊断为肺癌的人数为1,600,000人，占癌症总发病人数的13%，死亡人数1,400,000例，占癌症总死亡人数的18%(Jemal A, et al. C A Cancer J. Clin. 2011, 61: 69-90)；2010年，美国新增肺癌患者222,520人，死亡人数157,330例，其中死于非小细胞肺癌(NSCLC)患者占肺癌总死亡人数的85%(Jemal A, et al. C A Cancer J. Clin. 2010, 60: 277-300)。从我国近年来城乡前10位恶性肿瘤构成来看，肺癌已代替肝癌成为我国首位致死的恶性肿瘤，占全部恶性肿瘤死亡的22.7% (She J, et al. Chest. 2013, 143(4): 1117-1126)。乳腺癌是全世界妇女目前面临的最为常见的癌症, 每年约有138万乳腺癌新发病例及45.8万例死亡。据报道：美国每年新增232,340例乳腺癌患者。2011年，美国有接近40,000女性死于乳腺癌；印度每年有100,000新增乳腺癌患者被确诊，而且每28位女性中有1位会患乳腺癌(Yadav DK, et al. Curr. Med. Chem.2014, 21(9): 1160-1170)；在我国，乳腺癌也成为女性最常见的癌症，截止2008年，我国总计有169,452例新发乳腺癌患者，449,08例死亡，分别占世界的12.2%和9.6%。我国乳腺癌全年检出人数是欧洲(2008年共计332,000例，总人口四亿九千八百万)的一半，与美国(2008年共计182,000例，总人口三亿零四百万)基本相当。如果这一趋势保持不变，到2021年，我国乳腺患者将高达250万，发病率将从不到60例/10万女性(年龄在55岁到69岁之间)增加到超过100例/10万女性(Fan L, et al. Lancet Oncol. 2014,15: e279-289)。就全球来看，女性患乳腺癌数量在不断增加，乳腺癌对妇女的生存造成巨大威胁。结肠癌和直肠癌统称大肠癌，是消化道常见恶性肿瘤，发病率呈上升趋势，平均每年递增2%，在欧美国家病死率居肿瘤死亡的第2位，2003年美国大肠癌新发展病例数和死亡率均居第3位(徐富星. 国际消化病杂志. 2006, 26(6): 365-366)。近年来我国大肠癌的发病率以极快的速度上升，就全国范围而言，大肠癌已上升至恶性肿瘤发病的第4位，在一些经济发展较快的城市中，如上海已高居第2位(李德録, 等。中国肿瘤. 2011, 20(6):413-418)。

然而大部分癌症患者发觉病情时已是中期至晚期，临床治疗总体效果较差，尤其是多药耐药性的不断出现，使得癌症的治疗困难重重。因此，开发出活性高、副作用低的新型抗癌药物来满足临床的需求迫在眉睫。

二茂铁（Ferrocene）是一种具有独特的夹心结构化合物，二价铁离子被夹在两个平面环之间互为交错构型。二茂铁及其衍生物因其自身的特点：(1) 芳香性，能发生取代反应，易进行修饰；(2) 亲脂性，能够通过细胞膜与细胞内的各种酶相互作用；(3) 低毒性，能够在体内进行代谢。二茂铁衍生物在医学领域显示出广泛的药理活性，尤其是在抗肿瘤领域药理活性尤为突出： A. Rosenefeld等研究表明二茂铁修饰的顺铂衍生物具有相当强的抑制白血病活性，而且其肾毒比cis-DDP低的多(A. Rosenfeld, etal. Inorg. Chim. Acat. 1992, 201:219)；E. W. Neuse等人研究表明二茂铁衍生物具有独特的抗肿瘤、抗癌活性(E. W.Neuse. J. Inorga. Organoment. Polymers and Materials. 2005, 15(1):3-32)； X. F. Huang等合成了一系列含吡唑环的二茂铁衍生物，活性研究表明部分化合物具有比5-氟尿嘧啶强的抗癌活性(X. F. Huang, etal. J. Organomet. Chem. 2012,706-707: 113-123)；W. Liu 等合成了一系列二茂铁脲衍生物，活性研究表明部分化合物具有较强的抑制HIV-1蛋白酶活性(W. Liu, et al. Appl. Organomet.Chem. 2012, 26:189-193)；美国专利申请8426462B2公开了含芳香环的二茂铁衍生物对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和前列腺癌细胞株PC-3具有很强的抑制活性。

二茂铁作为抗肿瘤药物设计合成的先导化合物(E. W. Neuse. J. Inorg.Organoment. P. 2005, 15(1):3-32; S. S. Braga, et al. Organometallics, 2013,32:5626-5639)。异噁唑杂环是一种具有潜在生物活性的药效团，通常被引入药物分子以提高活性。在我们前期研究中，我们将异噁唑杂环引入二茂铁母核，合成了一系列结构新颖的含异噁唑杂环的二茂铁衍生物，并研究了其初步的体外抑肺癌细胞株A549、大肠癌细胞株HCT-116和乳腺癌细胞株MCF-7活性，结果表明大部分化合物对A549，HCT116和MCF-7细胞株具有很强的抑制活性(雍建平，等. 申请公开号CN103601762A)。基于前期良好的研究基础，为了丰富该类化合物的种类，我们继续设计合成该类含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物，以期发现新的抗癌先导化合物或候选化合物。

发明内容

本发明的目的在于，提供了如式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物及其制备方法用途。其能体外抑大肠癌细胞株HCT-116、人肺癌细胞株A549和乳腺癌细胞株MCF-7研究结果表明：该类化合物对大肠癌细胞株HCT-116、人肺癌细胞株A549和乳腺癌细胞株MCF-7具有较强的抑制活性。可作为抗癌药物的候选化合物或先导化合物。

本发明通过如下的技术方案实现：

一种式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物，或其药学上可接受的盐，或组合物或溶剂化物：

(I)

其中：R选自卤素、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基或卤代C_1-6烷基；

n为0-5的整数。当n大于1时，R可以为相同或不同的基团。

Z选自NR₁，S或O，其中R₁为氢或C_1-6烷基；

根据本发明的优选技术方案，式(I)中：

Z优选为NH 或O；

R选氟、氯、溴、氰基、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、硝基或三氟甲基，n优选为1或 2或3。

根据本发明的优选技术方案，式(I)中：

R优选为2-氟、2-溴、3-溴、4-乙基、4-叔丁基、2,3,5-三甲基、2-甲氧基、3-甲氧基、2-三氟甲基、4-硝基、4-氰基。

根据本发明，所述式(I)所示的二茂铁甲酸衍生物优选为下述任一种化合物：

。

式(I)所示的二茂铁甲酸衍生物，可以分别选择与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。其中术语“药学上可接受的盐”包括但不限于与无机酸形成的盐，如盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐、硝酸盐、及其类似盐；也包括与有机酸形成的盐，如乳酸、草酸、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟乙基磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、三氟乙酸或氨基酸和链烷酸盐如醋酸盐，HOOC-(CH2)n-COOH（其中n是1-4的整数）的盐，及其类似盐。类似地，药学上可接受的阳离子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂或铵。

术语“溶剂化物”包括水合物和醇合物。

本发明还提供一种药物组合物，其包括前述任一项的式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及至少一种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体或稀释剂。

根据所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物还包含一种或多种选自填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、矫味剂、防腐剂和包衣材料的药学可接受的辅助材料。

本发明还提供一种药物制剂，其包含前述的式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及至少一种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体或稀释剂。

本发明提供一种药物制剂，其特征在于，所述制剂优选为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。

根据本发明的药物制剂，所述的制剂选自片剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、颗粒剂、口服溶液剂、注射用水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。

本发明还提供一种用作药物的式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物或其药学上可接受的盐，尤其是一种有效用于治疗肿瘤/癌症的药物或先导化合物。

本发明还提供一种前述任意一项的式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于抗肿瘤或抗癌药物中的应用。

根据本发明所述的应用，其中所述的肿瘤或癌症选自：膀胱癌，非小细胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胃癌，食道癌，肺癌，头颈癌，结肠癌，咽癌，和胰腺癌等，更优选为非小细胞肺癌。

本发明还提供了一种前述任一项式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物和/或药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于抗肿瘤或癌症药物中的应用。

本发明还提供了一种式(I)所示的含异噁唑杂环的二茂铁甲酸衍生物的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

二茂铁甲酸和3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(式III)或3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(式IV)，在干燥的有机溶剂和酯缩合剂体系中反应制备得到式I-1所示的二茂铁脂类化合物或式I-2所示的二茂铁酰胺类化合物。

同时，对于Z为其他取代基的式(I)化合物，例如Z为S时，可以丙炔硫醇为原料，按照化合物(III)的合成过程制备3-取代苯基-5-巯基甲基-异噁唑，接着采用化合物I-1的合成过程制备。

根据本发明，所述反应温度为-20℃至回流条件，优选室温至回流条件。

根据本发明，所述有机溶剂为芳烃、卤代烃、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)、二氧六环、乙腈、DMF及离子液体。优选地，所述的溶剂选自苯，甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙腈或DMF，更优选四氢呋喃。

根据本发明：所述的缩合剂(1)为DCC/DMAP 或DCC,HOBt/DMAP 或DCC/NMM或DCC/HATU等。

根据本发明，所述式(III)的中间体3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑通过如下的方法制备：

(1) 取代苯甲醛与羟胺或羟胺盐酸盐在甲醇/水体系中，在碳酸钠的催化下反应生成相应的苯甲醛肟；

(2) 将步骤(1)制得的苯甲醛肟与丙炔醇在N-溴丁二酰亚胺(NCS)和碱性缚酸剂的作用下通过1,3-偶极环加成反应形成式(III)异噁唑化合物。

根据本发明，优选地，所述的碱性缚酸剂选自有机碱或无机碱，所述有机碱选自三乙胺、三丙胺、DMAP、DMF、N-甲基吗啉等；所述的无机碱选自碳酸钾、氢化钠、碳酸钠等。更优选的碱性缚酸剂为三乙胺。

所述反应温度为0℃至回流温度，优选为室温至回流温度。

根据本发明，所述式(IV)的中间体3-取代苯基5-氨甲基-异噁唑通过如下的方法制备：

(3)式(III)的异噁唑化合物(优选通过前述方法获得)与甲磺酰氯反应获得式(V)化合物；

根据本发明的优选技术方案，步骤(3)中，所述磺酰氯选自：甲磺酰氯、苯磺酰氯、取代苯磺酰氯(如卤代苯磺酰氯、烷基苯磺酰氯)等，更优选为甲磺酰氯。所述反应温度为-5℃至回流温度，优选室温至回流温度。所述反应溶剂选自苯、甲苯、卤代芳烃、卤代烷烃(如氯仿或二氯甲烷)、四氢呋喃、乙腈及离子液体。更优选地，所述反应在二氯甲烷体系中回流反应。

(4)式(V)化合物与叠氮化钠反应，优选在DMF体系中，60℃温度下反应获得式(VI)化合物；

(5)式(VI)化合物与氯化铵及锌粉、铁粉或钯碳催化还原制备式(IV)化合物，优选所述催化剂在无机酸条件下进行催化，优选为盐酸或硫酸，所述催化剂优选为锌粉和氯化铵。

步骤(5)中优选的反应溶剂是水或有机溶剂(例如醇类，卤代烃类，芳烃类等)或其混合物，优选为乙醇和水的反应体系。

优选的合成路线如下所示：

同时，对于Z为其他取代基的式(I)化合物，例如Z为S时，可采用丙炔基硫醇为原料，按照化合物(III)的合成过程制备3-取代苯基-5-巯基甲基-异噁唑，接着采用化合物I-1的合成过程来制备。

术语”有效量”指的是，所述至少一种化合物和/或至少一种药学上可接受的盐对于能有效“治疗”个体的一种疾病或不适的用量。如果是癌症时，有效量能减少癌症或肿瘤细胞的数目；缩小肿瘤的大小；抑制或阻止肿瘤细胞向周边器官的侵入，例如，肿瘤蔓延入软组织或骨骼中；抑制或阻止肿瘤的转移；抑制或阻止肿瘤的生长；一定程度上减轻一种或多种与癌症相关的症状；减少发病率和死亡率；提高生活质量；或者是上述效果的结合。有效量可以是通过抑制EGFR活性来减少疾病症状的用量。对于癌症治疗，体内实验的效果可以通过评估如存活期、疾病进展时间(Time to DiseaseProgression，TTP)、反应率(Response Rates，RR)、持续反应期和/或生活质量来测量。专业人员已经意识到，有效量可以随着给药的途径、赋形剂的剂量、以及与其他药物的合用而变化。

术语“有效量”还可指得是所述至少一种化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐对抑制EGFR的过度表达和/或活性过高有效的剂量。

本发明所述的二茂铁甲酸衍生物的制备方法，其特征在于，二茂铁甲酸衍生物通过以二茂铁甲酰氯分别和3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(式III)或3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(式IV)反应来制备；其中二茂铁甲酰氯通过以二茂铁甲酸和二氯亚砜或三氯氧磷或五氯化磷或草酰氯反应制备；

如果需要，可以将(III)和(IV)中的任何官能团予以保护；

并且其后，如果有必要以任何次序：

(1) 除去任何保护剂，

（2）形成式(I)化合物的药物组合物。

本发明的有益效果是：本发明提供式(I)化合物、制备方法及医药用途，该类化合物对三种EGFR高表达的肿瘤株（A549, HCT116和MCF-7）均具有较强的抑制活性，其中化合物YJP-2抑制A549,HCT116和MCF-7肿瘤株的IC₅₀分别为：244.7,401.8和699.3μM；化合物YJP-4对A549和MCF-7肿瘤株具有很强的抑制活性，其IC₅₀分别为：184.2和139.2μM；化合物YJP-9 对三种肿瘤株A549,HCT116和MCF-7均具有很强的抑制活性，其IC₅₀分别为：290.2,246.9和144.0μM；该类化合物可以作为治疗肿瘤、癌症等疾病的候选药物或先导化合物。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是，下述实施例不能作为对本发明保护范围的限制，任何在本发明基础上做出的改进都不违背本发明的精神。

其中，中间体和目标化合物的合成过程均以实施例中的代表说明，其余的中间体和目标化合物的合成过程同代表化合物。

仪器与试剂：

AVANCE III 核磁共振仪(400MHz, DMSO-d₆,TMS为内标)，离子阱液质连用仪(DECAX-30000 LCQ Deca XP)，Shimadzu FTIR-8400S(日本岛津制作所生产)，XT5数字显示显微熔点测定仪(北京市科仪电光仪器厂制造，温度未经校正)，可调波长式微孔板酶标仪(Molecular Devies SPECTRAMAX190).

实施例1 中间体3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(II) 及3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(III) 的合成

以取代苯甲醛为原料，通过合成肟、1,3-偶极环加成反应、甲磺酰酯化反应、叠氮化、还原反应制备(R为2-氟、2-溴、3-溴、2,4,6-三甲基、4-叔丁基、4-乙基、2-甲氧基、3-甲氧基、2-三氟甲基、4-硝基或4-氰基；n 为1，或3), 具体见如下路线：

中间体3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(II) 及3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(III) 的具体的合成过程详见申请人在前期申请的公开号为CN103360382A、CN103664991A和CN103601762A。

实施例2 二茂铁甲酸-[(3-(4-乙基-苯基)-异噁唑-5-基)-甲氧基-]-酯的合成过程：

将0.23 g (1mmol)的二茂铁甲酸和8 mL干燥的THF加入50 mL单口圆底烧瓶，搅拌下将0.206 g(1 mmol) DCC和0.122g(1 mmol) DMAP加入反应体系，0℃反应30 min后，接着将0.203 g(1 mmol) 3-(4-乙基-苯基)-5-羟甲基-异噁唑加入反应体系，0℃反应30 min后自然升至室温反应，整个反应过程在氮气保护下进行。TLC检测反应完成后，反应液减压浓缩，残渣柱分离(V _{（石油醚）}：V _{（乙酸乙酯）}=5:1~2:1)即得目标化合物二茂铁甲酸-[(3-(4-乙基-苯基)-异噁唑-5-基)-甲氧基-]-酯(YJP-1)。

其余的化合物按照二茂铁甲酸-[(3-(4-乙基-苯基)-异噁唑-5-基)-甲氧基-]-酯的合成过程合成出（YJP-2，YJP-3，YJP-4，YJP-5, YJP-6,YJP-7,YJP-8,YJP-9,YJP-10,YJP-21 ）。

实施例3 N-[(3-(4-乙基-苯基)-异噁唑-5-基)-甲基]-二茂铁甲酰胺的合成过程

将0.23 g (1 mmol)的二茂铁甲酸和8 mL干燥的THF加入50 mL单口圆底烧瓶，搅拌下将0.206 g(1 mmol) DCC，0.135 g(1 mmol) HOBT和0.122 g(1 mmol) DMAP加入反应体系，0℃反应30 min后，接着将0.202 g(1 mmol) 3-(4-乙基-苯基)-异噁唑-5-羟甲基-甲胺加入反应体系，0℃反应30 min后自然升至室温反应，整个反应过程在氮气保护下进行。TLC检测反应完成后，反应液减压浓缩，残渣柱分离V _{（石油醚）}：V _{（乙酸乙酯）}=5:1~2:1）即得目标化合物N-[(3-(4-乙基-苯基)-异噁唑-5-基)-甲基]-二茂铁甲酰胺(YJP-11)。

其余的化合物按照N-[(3-(4-乙基-苯基)-异噁唑-5-基)-甲基]-二茂铁甲酰胺的合成过程合成出（YJP-12，YJP-13，YJP-14, YJP-15, YJP-16,YJP-17, YJP-18, YJP-19,YJP-20, YJP-22 ）。

其结构均通过¹H NMR, ESI-MS等分析方法进行了表征。优选出的化合物的物性常数及光谱数据以列表的形式进行说明：

优选出的化合物的编号及名称如下表所示：

表1 优选化合物代号及名称

代号	名称	代号	名称
				YJP-1	二茂铁甲酸-{[3-(4-乙基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-11
YJP-2	二茂铁甲酸-{[3-(4-叔丁基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-12
				YJP-3	二茂铁甲酸-{[3-(2,4,6-三甲基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-13
YJP-4	二茂铁甲酸-{[3-(2-三氟甲基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-14
				YJP-5	二茂铁甲酸-{[3-(4-硝基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-15
YJP-6	二茂铁甲酸-{[3-(2-甲氧基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-16
				YJP-7	二茂铁甲酸-{[3-(3-甲氧基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-17
YJP-8	二茂铁甲酸-{[3-(2-氟苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-18
				YJP-9	二茂铁甲酸-4-{[3-(2-溴苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-19
YJP-10	二茂铁甲酸-4-{[3-(3-溴苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-20
				YJP-21	二茂铁甲酸-{[3-(4-氰基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基} -酯	YJP-22

表2 表1化合物的¹H NMR

编号
		YJP-1
YJP-2
		YJP-3
YJP-4
		YJP-5
YJP-6
		YJP-7
YJP-8
		YJP-9
YJP-10
		YJP-11
YJP-12
		YJP-13
YJP-14
		YJP-15
YJP-16
		YJP-17
YJP-18
		YJP-19
YJP-20
		YJP-21
YJP-22

实施例4 N-{[3-(4-乙基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基} -二茂铁甲酰胺的盐酸盐和醋酸盐的制备

(1) N-{[3-(4-乙基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基} -二茂铁甲酰胺盐酸盐的制备:

将0.5 mmol N-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲基-]-二茂铁甲酰胺加入20 mL（V: V, 1:1）5%的盐酸溶液和甲醇混合溶液中，氮气保护下搅拌30 min后，室温缓慢蒸发结晶即得N-{[3-(4-乙基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基} -二茂铁甲酰胺盐酸盐，淡黄色固体，收率： 70%。

(2) N-{[3-(4-乙基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基} -二茂铁甲酰胺乙酸盐的制备:

将0.5mmol N-{[3-(4-乙基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基} -二茂铁甲酰胺加入盛有10mL干燥二氯甲烷的50 mL 单口圆底烧瓶中，氮气保护下搅拌，缓慢滴加入2 mL 冰乙酸，搅拌30 min，冷却后冷藏结晶，过滤，真空干燥后即得N-{[3-(4-乙基苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基} -二茂铁甲酰胺乙酸盐，淡黄色固体，收率：82%。

实施例5 抗癌活性实验

采用MTT法进行了抑大肠癌细胞株(HCT-116)、人肺癌细胞株(A549)和乳腺癌细胞株MCF-7活性筛选。

具体的实验筛选过程如下：

(1) 将处于对数生长期的大肠癌细胞株HCT-116接种于96孔培养板培养，待细胞长至90%, 将1μL 1×10^-4M 的药品加入，其浓度设3个复孔，并设置阳性对照（吉非替尼），阴性对照为1μL DMSO。之后在37℃、5% CO₂条件下培养12小时; (2) 接着在每个孔中加入20 μL5 mg/mL的 MTT溶液，放置4小时后将培养基吸出; (3) 每孔加入100 μL DMSO，用可调波长式微孔酶标仪测595 nm波长下的吸光度值(A₅₉₅)。采用如下的公式计算抑制率。

(2) 抑肺癌细胞株A549 和乳腺癌细胞株MCF-7的实验过程同大肠癌细胞株HCT-116的筛选过程。

优选的化合物抑制大肠癌细胞株(HCT-116)、人肺癌细胞株A549和乳腺癌细胞株MCF-7的活性结果见下表3、表4和表5。

表3 式I中部分实施例化合物抑制大肠癌细胞株(HCT-116)活性测试结果

表4 式I中部分实施例化合物抑制人肺癌细胞株(A549)活性测试结果

表5 式I中部分实施例化合物抑制乳腺癌细胞株(MCF-7)活性测试结果

Claims

1.一种式(I)所示的二茂铁甲酸衍生物及其盐

(I)

其中：R选自卤素，C₁~C₆烷基、C₁~C₆烷氧基、卤代C₁~C₆烷基或硝基；n为0-5的整数。

2.根据权利要求1所述的二茂铁甲酸衍生物及其盐，其特征在于，

Z选自NH或O；

R选自氟、溴、甲基、叔丁基、乙基、甲氧基、三氟甲基、氰基或硝基，n选1、2或3。

3.根据权利要求1所述的二茂铁甲酸衍生物及其盐，其特征在于，

R选2-氟、2-溴、3-溴、2,4,6-三甲基、4-叔丁基、4-乙基、2-甲氧基、3-甲氧基、2-三氟甲基、4-硝基或4-氰基。

4.根据权利要求1-3任一项所述的二茂铁甲酸衍生物及其盐，其特征在于，所述二茂铁甲酸衍生物及其盐选自下述的任一种化合物：

。

5.一种药物组合物，其包含权利要求1-4任一所述的二茂铁甲酸衍生物，或其药学上可接受的盐，或至少有一种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体或稀释剂；优选地，所述药物组合物还包含一种或多种选自填充剂、崩解剂、助流剂、泡腾剂、矫味剂、防腐剂和包衣材料的药学可接受的辅助材料。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为制剂形式，优选为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂；优选地，所述的制剂选自片剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、颗粒剂、口服溶液剂、注射用水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。

7.权利要求1-4任一所述的二茂铁甲酸衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤/癌症的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤或癌症选自：膀胱癌，非小细胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胃癌，食道癌，肺癌，头颈癌，结肠癌，咽癌或胰腺癌，优选为非小细胞肺癌。

9.一种权利要求1-4任一项所述的二茂铁甲酸衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(式III)或3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(式IV)以取代苯甲醛为原料，通过如下的系列反应合成：

式(I)所示的二茂铁甲酸衍生物以二茂铁甲酸和3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(式III)或3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(式IV)为原料，在干燥的有机溶剂和缩合剂体系中通过在特定的反应温度下制备得到下述的式I-1所示的二茂铁脂类化合物或式I-2所示的二茂铁酰胺类化合物

其中干燥的有机溶剂为：四氢呋喃或二氯甲烷或氯仿或1,2-二氯甲烷或苯或甲苯或吡啶或DMF或离子液体；所述的缩合剂(1)为：DCC/DMAP，DCC, HOBt/DMAP, DCC或 HOBt/NMM；缩合剂(2)为：DCC/DMAP，DCC, HOBt/DMAP, DCC或HOBt/NMM；所述的特定的反应温度指反应温度在-20℃至回流范围变化。

10.一种权利要求1-4任一项所述的二茂铁甲酸衍生物的制备方法，其特征在于，二茂铁甲酸衍生物通过以二茂铁甲酰氯分别和3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(式III)或3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(式IV)反应来制备；其中二茂铁甲酰氯通过以二茂铁甲酸和二氯亚砜或三氯氧磷或五氯化磷或草酰氯反应制备；

如果需要，可以将(III)和(IV)中的任何官能团予以保护；

并且其后，如果有必要以任何次序：

(1) 除去任何保护剂，

（2）形成式(I)化合物的药物组合物。