CN106892859A

CN106892859A - 苯并[c, d]吲哚‑2(H)‑酮‑多胺缀合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN106892859A
Application number: CN201710172206.6A
Authority: CN
Inventors: 王超杰; 王玉霞; 田润果; 谢松强; 刘晓旦; 李景华
Original assignee: Henan University
Current assignee: Henan University
Priority date: 2017-03-22
Filing date: 2017-03-22
Publication date: 2017-06-27
Anticipated expiration: 2037-03-22
Also published as: CN106892859B

Abstract

本发明涉及一种苯并[c,d]吲哚‑2(H)‑酮‑多胺缀合物或其药用盐，其具有如式Ⅰ所示的结构：式中，m取1或2；n取1、2或3；R为、、、、、或

Description

苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种多胺修饰的苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物及其制备方法和应用。

背景技术

苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮，是含有三个环的平面小分子，并且分子结构中有三个活性位点，是一种人工合成的重要抗肿瘤的化合物母体。近来，因为苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮衍生物所表现出来的良好的生物活性，人们对苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮母体的改造有了较大进展，胸苷酸（TS）合成酶抑制剂剂AG331已进入临床试验阶段。

多胺，一般指含有三个或三个以上自由氮原子的有机化合物。天然多胺是一类广泛分布于人体内的小分子天然脂肪族胺类物质，广泛存在于一切生物（包括人体）内的原核细胞和真核细胞中。天然多胺虽然结构简单，却在人体内具有广泛的生物学调控作用。研究表明在快速生长和分化的细胞中，多胺的含量以及与它们合成代谢相关的酶的活性都将显著提高，因而它们能影响细胞的增殖、分裂等多种生理进程，具有多种重要的生理功能。由于细胞内多胺含量异常升高与多种肿瘤的发生、发展密切相关，多胺途径逐渐成为抗肿瘤药物研究的热点之一, 随着人们对其认识的不断深入，多胺很可能成为肿瘤治疗的一个新的靶点。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物及其制备方法和用途，其以苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮为原料，在萘环2-位引入活性基团多胺链，设计合成了一类苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺衍生物，扩展了苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮衍生物的多样性，改善了分子生物学活性，从而提高了抗肿瘤活性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐，其具有如式Ⅰ所示的结构：

式中，m取1或2；n取1、2或3；R为、、、、、或；X取1、2或3。所述的药用盐优选为盐酸盐。R取代基中表示R所取代的位置。

上述苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐的制备方法，其包括如下步骤：

1）将饱和脂肪二胺或哌嗪与二碳酸二叔丁酯（Boc₂O）反应得到化合物1或4；

2）将化合物1溶于乙腈中, 在碳酸钾作用下与N-溴代烷基邻苯二甲酰亚胺反应，然后再与二碳酸二叔丁酯反应, 产物经柱层析分离纯化得化合物2；

将化合物4或吗啉溶于乙腈中, 在碳酸钾作用下与N-溴代烷基邻苯二甲酰亚胺反应，产物经柱分离纯化得化合物5或7（化合物5或7可直接用于下一步肼解反应）；

3）将化合物2、5或7溶于无水乙醇中，在水合肼的催化下肼解得化合物3、6或8；

4）化合物9于乙腈中与1,3-二溴丙烷或1,4-二溴丁烷反应得化合物10；

5）化合物10溶于适量乙腈中，与相对应的胺链化合物1、3、6或8反应，产物经硅胶柱分离提纯得化合物11；

6）将化合物11于无水乙醇中，在4 M 盐酸作用下反应过夜，过滤，得目标化合物12，即式Ⅰ化合物；

具体合成路线如下所示：

Scheme 1 胺链的合成；

Scheme 2 目标化合物的合成。

上述苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐在制备抗肿瘤药物方面的应用。

上述苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐在制备预防和治疗肿瘤转移药物方面的应用。

本发明利用多胺的靶向性，用多胺修饰苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮合成了一类苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物，结果结果表明：这些化合物对多种肿瘤细胞株均有不同程度的抑制活性和选择性，动物模型测试结果表明这些化合物具有较好的抑制肿瘤肺转移的能力；当其用于制备预防和治疗肿瘤转移药物时，与阳性对照药氨萘菲特相比，具有更高的抗肿瘤转移活性；重要的是，发现该化合物定位于细胞亚器溶酶体，可作为溶酶体靶向性荧光探针。本发明化合物在体内及体外均表现出了较高的抗肿瘤活性，由此提示我们含苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮的多胺化合物及其盐酸盐在作为溶酶体靶向性抗肿瘤及抗肿瘤转移药物方面具有较好的研究价值。本发明提供的含苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮结构的多胺衍生物拓宽了多胺衍生物的研究及应用领域，可以通过调节多胺链上碳及氮原子的个数来调节对肿瘤细胞的毒性和选择性。

和现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明提供的苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺衍生物具有良好的抗肿瘤和抑制肿瘤转移的活性，与阳性对照药氨萘菲特相比，具有更高的治疗指数及明确的亚细胞定位，具有制备预防和治疗肿瘤转移药物的前景。此外，本发明多胺缀合物的制备方法操作简便、条件温和、反应收率高。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。

实施例1

1-[3-(3-氨基丙基)-氨基丙基]-苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12a)的制备：

（1）取1,3-丙二胺（或1,4-丁二胺；当为1,4-丁二胺时对应所得的产物为化合物1b）（50mmol）溶于30 mL 10%的三乙胺甲醇溶液，于冰浴下将含4.3g Boc₂O（20 mmol）的甲醇溶液缓慢滴入上述溶液中，滴毕反应液升至室温继续搅拌过夜；减压蒸除溶剂，二氯甲烷溶解残余物，饱和Na₂CO₃水溶液洗涤，收集有机层，无水 Na₂SO₄ 干燥后浓缩蒸干，得化合物1a；

（2）在 250 mL 的圆底烧瓶中，取4.50g（23.9 mmol）的化合物1a溶于100 mL乙腈，加无水碳酸钾4.5 g（32 mmol），室温搅拌15 min后，升温至45℃，分批加入5.45 g ( 20.4mmol)3-溴丙基邻苯二甲酰亚胺（4-溴丁基邻苯二甲酰亚胺），控制在45℃反应 12 h。反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物用二氯甲烷萃取，10%的 Na₂CO₃水溶液洗涤，收集有机层，无水 Na₂SO₄ 干燥，减压浓缩，柱层析分离纯化得化合物2；

（3）取2.1 g化合物2（4.3 mmol）于烧瓶中，加无水乙醇100 mL、水合肼2.55g (50mmol)，室温搅拌过夜，减压整除溶剂，残余物用二氯甲烷萃取，10%的Na₂CO₃水溶液洗涤，收集有机层干燥后，减压蒸除二氯甲烷，得化合物3，不需分离直接用于下步反应；

（4）1,8-萘内酰胺1.35g（化合物9，8 mmol）溶于100 mL乙腈中，加入无水碳酸钾4.41 g( 32 mmol )，室温搅拌10 min，再加入1,3-二溴丙烷（或1,4-二溴丁烷；当为1,4-二溴丁烷时对应所得的产物为化合物10b）32 mmol，于85℃反应5 h，反应结束过滤，收集滤液，减压浓缩，用适量二氯甲烷萃取，水洗3次，收集有机层，减压蒸除溶剂，硅胶柱分离纯化得化合物10 a；

（5）取1.0g化合物10a ( 3.2 mmol )于适量乙腈中，加无水碳酸钾0.67 g ( 4.8 mmol)搅拌约10分钟，然后加入3.2 mmol对应的胺链化合物1a，加热回流的条件下反应4 h，过滤收集滤液，减压整除溶剂，二氯甲烷萃取，水洗，收集有机层并减压浓缩，硅胶柱分离纯化得化合物11a。取化合物11a于适量重蒸无水乙醇中，冰浴条件下，缓慢滴加4 M 的盐酸乙醇溶液，室温搅拌过夜，过滤，用重蒸过的无水乙醇多次洗涤，得目标化合物12a，即式Ⅰ化合物。

产率：51%, ¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 8.09(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.89(d, J=7.0Hz, 1H), 7.74~7.68(m, 1H), 7.63(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.52~7.46(m, 1H), 7.05(d, J=7.1 Hz, 1H), 3.91(t, J=6.6 Hz, 2H), 3.13 ~3.02(m, 6H), 2.18~2.09(m, 2H),2.09~2.00(m, 2H).ESI-MS m/z:284.1 [M+1–2HCl]+. ESI-MS m/z: 284.1 [M+1–2HCl]+.Anal. calcd for C₁₇H₂₃Cl₂N₃O·0.5H₂O; C 55.89%; H 6.62%, N 11.50%; found C55.70%, H 6.7%, N 12.01%。

实施例2

1-{3-[3-(3-氨基丙基)-氨基丙基]-氨基丙基}-苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮（12b）的制备：

除步骤（5）中以化合物3a代替1a外，其余步骤同实施例1。

化合物3a的制备过程如下所示：

（2）在 250 mL 的圆底烧瓶中，取20 mol（3.48 g）化合物1a溶于45 mL乙腈中, 加无水碳酸钾30 mol（4.17 g），45℃下分批加入3-溴丙基邻苯二甲酰亚胺（或4-溴丁基邻苯二甲酰亚胺；当为4-溴丁基邻苯二甲酰亚胺时对应所得的产物为化合物2b），加毕保持45℃反应12 h。反应结束后减压蒸除溶剂，二氯甲烷溶解残余物，饱和Na₂CO₃水溶液洗涤，收集有机层，无水 Na₂SO₄ 干燥后浓缩蒸干。然后加无水甲醇溶解，于冰浴下将含6.45g Boc₂O（30mmol）的甲醇溶液缓慢滴入上述溶液中，滴毕反应液升至室温继续搅拌过夜，减压蒸除溶剂，二氯甲烷溶解残余物，饱和Na₂CO₃水溶液洗涤，收集有机层，无水 Na₂SO₄ 干燥后浓缩蒸干，得化合物2a；

（3）取2.31 g化合物2a（5 mmol）于烧瓶中，加无水乙醇100 mL、水合肼2.96g (58mmol)，室温搅拌过夜，减压整除溶剂，残余物用二氯甲烷萃取，10%的Na₂CO₃水溶液洗涤，收集有机层干燥后，减压蒸除二氯甲烷，得化合物3a，不需分离直接用于下步反应。

产率: 47%,¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 8.20(d, J=8.0 Hz, 1H), 8.07(d, J=7.1Hz, 1H), 7.80(d, J=7.1 Hz, 1H), 7.73(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.57(t, J=6.6 Hz, 1H),7.20(d, J=7.3 Hz, 1H), 4.09~ 4.00 (m, 2H), 3.18~2.98 (m, 10H), 2.19 (d, J=5.9Hz, 2H), 2.06 (d, J=7.9 Hz, 4H). ESI-MS m/z: 341.2 [M+1–3HCl]+. ESI-MS m/z:341.2 [M+1–3HCl]+. Anal.calcd for C₂₀H₃₁Cl₃N₄O·H₂O: C 53.4%, H 6.95%, N12.45%; found C 53.6%, H 6.90%, N 12.31%。

实施例3

1-{3-[4-(3-氨基丙基）-氨基丁基]-氨基丙基}-苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12C)的制备：

除步骤（5）中以化合物3c（制备方法参照3a）代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率: 49%,¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.77 (d, J=42.5 Hz, 1H), 7.39 (d, J=7.88 Hz, 4H), 6.72 (d, J=9.8 Hz, 1H), 3.83~3.57 (m, 2H), 3.20~2.92 (m, 10H),2.14~1.96 (m, 4H), 1.70~ 1.63 (t, J=12.7 Hz, 4H).ESI-MS m/z: 355.2 [M+1–3HCl]+. ESI-MS m/z: 355.2 [M+1-3HCl]+. Anal.calcd for C₂₁H₃₃Cl₃N₄O·0.8H₂O: C 52.74%, H 7.29%, N 11.71%; found C 52.85%, H 7.19%, N 11.69%。

实施例4

1-[4-(4-氨基丁基)-丁基]-苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12d)的制备：

除在步骤（5）中以正丁胺代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率: 63%, ¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.75 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.49 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.42 ~7.37 (m, 1H), 7.32 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.26~7.21 (m, 1H),6.73 (d, J=7.0 Hz, 1H), 3.54 (t, J =5.9 Hz, 2H), 2.98~2.86 (m, 6H), 1.65~1.46(m, 8H), 1.38 ~1.20 (m, 3H), 0.85 (t, J= 7.4 Hz, 4H). ESI-MS m/z: 297.2 [M+1–HCl]⁺. Anal.calcd for C₁₉H₂₅ClN₂O·1.2H₂O: C 68.56 %, H 7.57%, N 8.42%; found C68.49 %, H 7.50%, N 8.50%。

实施例5

1- [4-(3-氨基丙基）-氨基丁基] -苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12e)的制备：

除在步骤（5）中以10b代替10a外，其余步骤同实施例1。

产率: 53%,¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.97 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.74 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.63~7.57 (m, 1H), 7.52 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.43~7.35 (m, 1H),6.93 (d, J=7.1 Hz, 1H), 3.72 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.09~2.97 (m, 6H), 2.06~1.95(m, 2H), 1.74 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 1.64 (d, J=8.0 Hz, 2H).ESI-MS m/z: 298.2 [M+1-2HCl]⁺. Anal.calcd for C₁₈H₂₅Cl₂N₃O·1.06H₂O: C 58.38%, H 6.80%, N 11.35%;found C 58.42%, H 6.83%, N 11.10%。

实施例6

1- [4-(4-氨基丁基）-氨基丁基] -苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12f)的制备：

除在步骤（5）中以10b代替10a，1b代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率: 41%,¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.93 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.59~7.52 (m, 1H), 7.48 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.39~7.33 (m, 1H),6.89 (d, J=7.1 Hz, 1H), 3.68 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.00 (t, J=7.4 Hz, 6H), 1.77~1.59 (m, 8H).ESI-MS m/z: 312.2 [M+1-2HCl]+. Anal.calcd for C₁₉H₂₇Cl₂N₃O·1.5H₂O: C 55.47%, H 7.35%, N 10.21%; found C 55.6%, H 7.37%, N 10.09%。

实施例7

1-[4-[2-(二甲基氨基)-乙基]-氨基丁基] -苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12g)的制备：

除步骤（5）中以10b代替10a，N,N-二甲基乙二胺代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率: 66%,¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.98 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.74 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.63~7.57 (m, 1H), 7.53 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.43~7.37 (m, 1H),6.94 (d, J=7.1 Hz, 1H), 3.73 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.53~3.39 (m, 4H), 3.16~3.06(m, 2H), 2.93 (s, 6H), 1.77 (t, J=8.7 Hz, 2H), 1.72 ~1.62 (m, 2H). ESI-MS m/z: 312.2 [M+1-2HCl]⁺. Anal.calcd for C₁₉H₂₇Cl₂N₃O·1.8H₂O: C 54.76%, H 7.40%, N10.08%; found C 54.60%, H 7.46%, N 10.19%。

实施例8

1-{4-[(3-二甲基氨基)-丙基]-氨基丁基}-苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12h)的制备：

除步骤（5）中以10b代替10a，N,N-二甲基丙二胺代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率: 54%,¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 8.01 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.78 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.67~7.59 (m, 1H), 7.55 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.46 ~7.39 (m, 1H),6.97 (d, J=7.1 Hz, 1H), 3.76 (t, J=6.7 Hz, 2H), 3.22~3.13 (m, 2H), 3.08~2.98(m, 4H), 2.87 (s, 6H), 2.07 (d, J=8.1 Hz, 2H), 1.77 (d, J=6.9 Hz, 2H), 1.66(d, J=7.8 Hz,2H). ESI-MS m/z: 326.2 [M+1-2HCl]+. Anal.calcd for C₂₀H₂₉Cl₂N₃O·0.9H₂O: C 57.94%, H 7.49%, N 10.14%; found C 57.80%, H 7.51%, N 10.20%。

实施例9

1-{4-[3-(3-氨基丙基)-氨基丙基]-氨基丁基}-苯并[c,d]吲哚-2(H)-酮(12i)的制备：

除步骤（5）中以10b代替10a，化合物3a代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率:68%,¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 8.06 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.85 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.72 ~7.65 (m, 1H), 7.60 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.51~7.43 (m, 1H),7.03 (d, J=7.1 Hz, 1H), 3.81 (t, J=6.7 Hz, 2H), 3.23~2.92 (m, 10H), 2.11~2.04(m, 4H), 1.86~1.75 (m, 2H), 1.68 (d, J=7.9 Hz, 2H). ESI-MS m/z: 355.2 [M+1-3HCl]+. Anal.calcd for C₂₁H₃₃Cl₃N₄O·2.5H₂O: C 49.56%, H 7.53%, N 11.01%; foundC 49.68%, H 7.49%, N 11.13%。

实施例10

1-{4-[4-(4-氨基丁基)-氨基丁基]-氨基丁基}-苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12j)的制备：

除步骤（5）中以10b代替10a，化合物3d（制备方法参照3a）代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率:¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 8.20 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.06 (d, J=7.0Hz, 1H), 7.85~7.77 (m, 1H), 7.73 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.62~7.55 (m, 1H), 7.21(d, J=7.1Hz, 1H), 3.98 (t, J=6.6Hz, 2H), 3.09~3.01(m, 10H), 1.88(d, J=5.8Hz,2H), 1.78~1.70 (m, 10H). ESI-MS m/z: 383.2[M+1-3HCl]+. Anal.calcd forC₂₃H₃₇Cl₃N₄O·2.8H₂O: C 50.93%, H 7.92%, N 10.33%; found C 50.75%, H 7.95%, N10.42%。

实施例11

1-{4-[(4-哌嗪基)-丁基]- 氨基丁基} -苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12k)的制备：

除步骤（5）中以10b代替10a，化合物6代替1a外，其余步骤同实施例1。

产率:¹H NMR(400MHz, D₂O) δ7.87(t, J=9.1Hz, 1H), 7.68~7.54 (m, 1H),7.49(d, J=6.4Hz, 1H), 7.47~7.37(m, 1H), 7.31(d, J=6.2Hz, 1H), 6.82(t, J=6.1Hz, 1H), 3.92~3.30(m, 10H), 3.28~3.15(m, 2H), 3.12~2.84(m, 4H), 1.83~1.70(m, 2H), 1.71~1.46(m, 6H). ESI-MS m/z:381.3[M+1-3HCl]+. Anal.calcd forC₂₃H₃₅Cl₃N₄O·2.1H₂O: C 52.34%, H 7.49%, N 10.62%; found C 52.45%, H 7.53%, N10.50%。

实施例12

1-{4-[(3-吗啉基)-丙基]-氨基丁基} -苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮(12l)的制备：

除步骤（5）中以10b代替10a，化合物8代替1a外，其余步骤同实施例1。产率: 65%,¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.93 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.59~7.52 (m, 1H), 7.48 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.40~7.33 (m, 1H), 6.89 (d, J=7.1 Hz,1H), 3.93 (d, J=9.09 Hz, 4H), 3.68 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.64~3.20 (m, 4H), 3.19(d, J=8.3 Hz, 2H), 3.09~2.96 (m, 4H), 2.14~2.02 (m, 2H), 1.77~1.67 (m, 2H),1.67~1.55 (m, 2H). ESI-MS m/z: 368.2 [M+1-2HCl]⁺. Anal.calcd for C₂₂H₃₁Cl₂N₃O₂·1.3H₂O: C 56.97%, H 7.30%, N 9.06%; found C 56.74%, H 7.34%, N 9.12%。

生理活性评价

（1）化合物的体外细胞毒实验

选择实施例1-12制备的化合物，以氨萘菲特（Amonafide）做为阳性对照药，分别取对数生长期的HCT-116（人癌细胞）、K562（人慢性髓原白血病细胞）、HepG2（人肝癌细胞）、SMMC7721（人肝癌细胞）四种肿瘤细胞株，以每孔5000-8000个细胞埋入96孔板，90µL/孔。培养24 h后，加入已知浓度的样品，对每个细胞株，每个浓度都有四个复孔，在37℃、5% CO₂条件下培养48 h后，加MTT 50µL，继续培养4 h后弃上清，每孔加入100 µL DMSO，轻轻振荡15min，用酶标仪在570 nm波长处测其吸光度A值。按下面的公式计算不同被测物对肿瘤细胞生长的抑制率，实验重复三次，并由统计软件求出IC₅₀值。结果见表1。

肿瘤细胞生长抑制率(%) =(OD对照-OD实验)/ (OD对照-OD空白)×100% 。

表1各实施例化合物的细胞毒结果

。

（2）化合物对小鼠体内肺转移的抑制测定：

化合物对小鼠体内肺转移的抑制作用，本申请分别采用H22 肝癌和 CT-26结肠癌两种肺转移模型进行测定。

H22 肝癌肺转移模型：取体外对数生长期的小鼠H22肝癌细胞，通过静脉注射向30只昆明小鼠注入H22肝癌细胞（3×106个/只），为确保在给药前所有小鼠的肿瘤平均生长，将其接种肿瘤后培养7天，取接种第7天后的小鼠模型，随机分为3组（每组10只），分别为生理盐水组（阴性对照）、实施例10组、阳性对照（氨萘菲特）组。在第8天通过尾部静脉注射向小鼠分别注射实施例10 化合物（1 mg/kg）、氨萘菲特（5mg/kg）和生理盐水，并且持续7天。第15天以颈椎脱臼法处死小鼠，用解剖显微镜计数各肺叶的结节数。

CT-26结肠癌肺转移模型：按照上述方法取体外对数生长期的小鼠CT-26结肠癌细胞 30只生长状态良好的BALB/c小鼠（5×10⁵细胞/只）进行接种，并按上述同样方法分组，在第8天通过尾部静脉注射向小鼠分别注射实施例10 化合物（1 mg/kg）、氨萘菲特（5mg/kg）和生理盐水（阴性对照），持续7天。第15天以颈椎脱臼法处死小鼠，用解剖显微镜计数各肺叶的结节数。

以下列公式计算肺转移抑制率：

抑制率（%）=（1－治疗组平均肺结节数/阴性对照组平均肺结节数）×100%。

实验结果见表2，3。结果表明：实施例10化合物可有效抑制小鼠肿瘤肺转移。

表2 实施例化合物抑制小鼠H22肝癌肺转移活性

表3 实施例化合物抑制小鼠ct-26结肠癌肺转移活性

与对照药物氨萘菲特相比，本发明中提供的化合物在体外对多种肿瘤细胞与氨萘菲特活性相当；而在体内实验中, 实施例10化合物对小鼠体内肝癌和结肠癌肺转移的抑制能力明显高于对照药物氨蔡非特，因此可以将其应用于制备治疗肿瘤转移的药物。利用激光共聚焦进行细胞内的荧光检测试验，证明该化合物定位于细胞亚器溶酶体，可作为溶酶体靶向性荧光探针。体内生物活性表明该类化合物能有效抑制肿瘤肺转移，是潜在的抗肿瘤药物。

上述实施例为本发明优选的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明所作的改变均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐，其特征在于，具有如式Ⅰ所示的结构：

式中，m取1或2；n取1、2或3；R为、、、、、或；X取1、2或3。

2.权利要求1所述苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）将饱和脂肪二胺或哌嗪与二碳酸二叔丁酯反应得到化合物1或4；

2）将化合物1溶于乙腈中, 在碳酸钾作用下与N-溴代烷基邻苯二甲酰亚胺反应，然后再与二碳酸二叔丁酯反应得化合物2；

将化合物4或吗啉溶于乙腈中, 在碳酸钾作用下与N-溴代烷基邻苯二甲酰亚胺反应得化合物5或7；

5）化合物10溶于适量乙腈中，与相对应的化合物1、3、6或8反应，产物经硅胶柱分离提纯得化合物11；

6）将化合物11于无水乙醇中，在盐酸作用下反应，过滤，得目标化合物12，即式Ⅰ化合物；

具体合成路线如下所示：

。

3.权利要求1所述苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐在制备抗肿瘤药物方面的应用。

4.权利要求1所述苯并[c, d]吲哚-2(H)-酮-多胺缀合物或其药用盐在制备预防和治疗肿瘤转移药物方面的应用。