CN106888975A - 一种甘草子叶诱导组织培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种甘草子叶诱导组织培养方法，其以MS培养基为基础培养基，添加6‑BA (6‑苄氨基腺嘌呤)、2,4‑D（2,4‑二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖，在后期诱导培养中添加增强颜色光源，极大地提高了甘草子叶的诱导率，本发明具有诱导率高低的优点。

Description

一种甘草子叶诱导组织培养方法
技术领域
本发明属于甘草组织培养技术领域，尤其涉及一种甘草子叶诱导组织培养方法。
背景技术
甘草，（学名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽率极低，野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用。
稀土元素是17种特殊的元素的统称，它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称，稀土是从18世纪末开始陆续发现，当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土，例如，将氧化铝称为“陶土”，氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的，当时比较稀少，因而得名为稀土（Rare Earth，简称RE或R），然而经过大量的科学研究，在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。
铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。
发明内容
基于现有技术中甘草的需求量巨大但供给品质参差不齐，且现有培养基的诱导效率低的问题，本发明提供一种甘草子叶诱导组织培养方法，其以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖，在后期诱导培养中添加增强颜色光源，极大地提高了甘草子叶的诱导率，本发明具有诱导率高低的优点。
一种甘草子叶诱导组织培养方法，其包括以下步骤：
步骤S10，按以下配方配制培养基：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3 mg/L、活性炭的浓度为0.1mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L；
步骤S20，选择品质优良、健康的甘草无菌苗作为母本，用手术刀将无菌子叶切出，备用；
步骤S30，使用镊子将子叶以伤口向下的竖直方向插入培养基中，将装有子叶的组培瓶密封取出，并转移到组培室中；
步骤S40，将组培室中的环境温度调整为25℃～30℃，黑暗培养一周，一周后调整光源为2000～2500Lxs，光照时间为光照12小时/黑暗12小时；
步骤S50，在接种后一周添加80%红色增强光源和20%蓝色增强光源。
优选地，所述的步骤S10中还包括步骤S11，对培养基进行121℃的高温蒸汽灭菌20分钟。
优选地，所述的步骤S50中的增强光源是LED灯，红色增强光源是红色LED灯，蓝色增强光源蓝色LED灯。
优选地，所述的步骤S50中的红色光源是波段为650nm-670nm的红光，蓝色光源是波段为450nm-470nm的蓝光。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
一种甘草子叶诱导组织培养方法，其包括以下步骤：
步骤S10，按以下配方配制培养基：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3 mg/L、活性炭的浓度为0.1mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L；
步骤S20，选择品质优良、健康的甘草无菌苗作为母本，用手术刀将无菌子叶切出，备用；
步骤S30，使用镊子将子叶以伤口向下的竖直方向插入培养基中，将装有子叶的组培瓶密封取出，并转移到组培室中；
步骤S40，将组培室中的环境温度调整为28℃，黑暗培养一周，一周后调整光源为2500Lxs，光照时间为光照12小时/黑暗12小时；
步骤S50，在接种后一周添加80%红色增强光源和20%蓝色增强光源。
作为优选实施例，所述的步骤S10中还包括步骤S11，对培养基进行121℃的高温蒸汽灭菌20分钟。
作为优选实施例，所述的步骤S50中的增强光源是LED灯，红色增强光源是红色LED灯，蓝色增强光源蓝色LED灯。
作为优选实施例，所述的步骤S50中的红色光源是波段为660nm的红光，蓝色光源是波段为460nm的蓝光。。
将已经消毒的外植体接种到培养基中进行常规组织培养作为对照组，然后设置实验组使用本发明提供的组织培养方法，20天后统计诱导率得出对照组的诱导率为80%，实验组诱导率为91%，实验组诱导率远远高于对照组。
以上所述实施例仅表达了本发明的一种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (4)

1.一种甘草子叶诱导组织培养方法，其特征在于，其包括以下步骤：
步骤S10，按以下配方配制培养基：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3 mg/L、活性炭的浓度为0.1mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L；
步骤S20，选择品质优良、健康的甘草无菌苗作为母本，用手术刀将无菌子叶切出，备用；
步骤S30，使用镊子将子叶以伤口向下的竖直方向插入培养基中，将装有子叶的组培瓶密封取出，并转移到组培室中；
步骤S40，将组培室中的环境温度调整为25℃～30℃，黑暗培养一周，一周后调整光源为2000～2500Lxs，光照时间为光照12小时/黑暗12小时；
步骤S50，在接种后一周添加80%红色增强光源和20%蓝色增强光源。
2.根据权利要求1所述的一种甘草子叶诱导组织培养方法，其特征在于，所述的步骤S10中还包括步骤S11，对培养基进行121℃的高温蒸汽灭菌20分钟。
3.根据权利要求1所述的一种甘草子叶诱导组织培养方法，其特征在于，所述的步骤S50中的增强光源是LED灯，红色增强光源是红色LED灯，蓝色增强光源蓝色LED灯。
4.根据权利要求2所述的一种甘草子叶诱导组织培养方法，其特征在于，所述的步骤S50中的红色光源是波段为650nm-670nm的红光，蓝色光源是波段为450nm-470nm的蓝光。
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