CN106665369A - 一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基 - Google Patents
一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其以MS培养基为基础培养基，并添加6‑BA(6‑苄氨基腺嘌呤)、2,4‑D（2,4‑二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖，其以甘草的无菌苗的子叶作为外植体，避免了外植体带有病毒而影响植物品质的问题，同时将子叶进行废物利用，本发明具有萌发率高和成本低的优点。
Description
技术领域
本发明属于甘草组织培养技术领域，尤其涉及一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基。
背景技术
甘草，（学名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽率极低，野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用。
稀土元素是17种特殊的元素的统称，它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称，稀土是从18世纪末开始陆续发现，当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土，例如，将氧化铝称为“陶土”，氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的，当时比较稀少，因而得名为稀土（Rare Earth，简称RE或R），然而经过大量的科学研究，在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。
铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。
发明内容
基于现有技术中甘草的需求量巨大但供给品质参差不齐，且现有培养基的诱导效率低的问题，本发明提供一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其以MS培养基为基础培养基，并添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖，其以甘草的无菌苗的子叶作为外植体，避免了外植体带有病毒而影响植物品质的问题，同时将子叶进行废物利用，本发明具有萌发率高和成本低的优点。
一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其以MS培养基为基础培养基，并添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖。
优选地，6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.3-0.8mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为2-4 mg/L、活性炭的浓度为0.05-0.2 mg/L、硝酸铈的浓度为1-5g/L，维生素的浓度为0.1-0.5mg/L，琼脂粉的浓度为8-12g/L、白砂糖的浓度为20-40g/L。
优选地，6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.4-0.7mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为2.5-3.5 mg/L、活性炭的浓度为0.1-0.15 mg/L、硝酸铈的浓度为2-4g/L，维生素的浓度为0.2-0.4mg/L，琼脂粉的浓度为9-11g/L、白砂糖的浓度为25-35g/L。
优选地，所述的培养基的pH值为5.0-6.0。
优选地，所述的培养基的pH值为5.5。
优选地，所述的维生素是维生素C。
一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基的配制方法，其包括以下步骤：
步骤S10，使用电子秤按照MS培养基标准配方配制1000倍MS培养基母液；
步骤S20，取MS培养基母液配制MS培养基，并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖，使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基pH值；
步骤S30，使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟，取出培养基并在超净工作台中静置冷却；
步骤S40，按照配方配制6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和维生素溶液，并进行过滤灭菌；
步骤S50，待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤S40配制好的试剂，摇晃均匀，静置，冷却凝固。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
实施例一：
按以下步骤配制对照组的MS培养基和实验组N6培养基：
步骤S10，使用电子秤按照MS培养基标准配方配制1000倍MS培养基母液；
步骤S20，取MS培养基母液配制MS培养基，并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖，使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基pH值至5.0；
步骤S30，使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟，取出培养基并在超净工作台中静置冷却；
步骤S40，按照配方配制6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和维生素C溶液，并进行过滤灭菌；
步骤S50，待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤S40配制好的试剂，摇晃均匀，静置，冷却凝固。
其中培养基的配方如下：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.3mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为2 mg/L、活性炭的浓度为0.05mg/L、硝酸铈的浓度为1g/L，维生素C的浓度为0.1mg/L，琼脂粉的浓度为8g/L、白砂糖的浓度为20g/L。
将已经消毒的外植体分别接种到实验组的MS培养基进行常规组织培养，20天后统计诱导率得出诱导率为87%，高于现有技术中甘草子叶80%的诱导率。
实施例二：
实施例二与实施例一的不同之处在于，调整了培养基配方浓度和pH值。
步骤S10，使用电子秤按照MS培养基标准配方配制1000倍MS培养基母液；
步骤S20，取MS培养基母液配制MS培养基，并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖，使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基pH值至6.0；
步骤S30，使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟，取出培养基并在超净工作台中静置冷却；
步骤S40，按照配方配制6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和维生素C溶液，并进行过滤灭菌；
步骤S50，待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤S40配制好的试剂，摇晃均匀，静置，冷却凝固。
其中培养基的配方如下：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.8mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为4 mg/L、活性炭的浓度为0.2 mg/L、硝酸铈的浓度为5g/L，维生素C的浓度为0.5mg/L，琼脂粉的浓度为12g/L、白砂糖的浓度为40g/L。
将已经消毒的外植体分别接种到实验组的MS培养基进行常规组织培养，20天后统计诱导率得出诱导率为91%，高于现有技术中甘草子叶80%的诱导率。
实施例三：
实施例三与实施例一和二的不同之处在于，调整了培养基配方浓度和pH值。
步骤S10，使用电子秤按照MS培养基标准配方配制1000倍MS培养基母液；
步骤S20，取MS培养基母液配制MS培养基，并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖，使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基pH值至5.5；
步骤S30，使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟，取出培养基并在超净工作台中静置冷却；
步骤S40，按照配方配制6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和维生素C溶液，并进行过滤灭菌；
步骤S50，待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤S40配制好的试剂，摇晃均匀，静置，冷却凝固。
其中培养基的配方如下：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3 mg/L、活性炭的浓度为0.1 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素C的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L。
将已经消毒的外植体分别接种到实验组的MS培养基进行常规组织培养，20天后统计诱导率得出诱导率为93%，高于现有技术中甘草子叶80%的诱导率。
Claims (7)
1.一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其特征在于，其以MS培养基为基础培养基，并添加6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖。
2.根据权利要求1所述的一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其特征在于，6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.3-0.8mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为2-4 mg/L、活性炭的浓度为0.05-0.2 mg/L、硝酸铈的浓度为1-5g/L，维生素的浓度为0.1-0.5mg/L，琼脂粉的浓度为8-12g/L、白砂糖的浓度为20-40g/L。
3.根据权利要求1所述的一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其特征在于，6-BA (6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.4-0.7mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为2.5-3.5 mg/L、活性炭的浓度为0.1-0.15 mg/L、硝酸铈的浓度为2-4g/L，维生素的浓度为0.2-0.4mg/L，琼脂粉的浓度为9-11g/L、白砂糖的浓度为25-35g/L。
4.根据权利要求1至3其中之一所述的一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其特征在于，所述的培养基的pH值为5.0-6.0。
5.根据权利要求4所述的一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其特征在于，所述的培养基的pH值为5.5。
6.根据权利要求1至3其中之一所述的一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基，其特征在于，所述的维生素是维生素C。
7.一种甘草子叶的高诱导率诱导培养基的配制方法，其特征在于，其包括以下步骤：
步骤S10，使用电子秤按照MS培养基标准配方配制1000倍MS培养基母液；
步骤S20，取MS培养基母液配制MS培养基，并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖，使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基pH值；
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