CN106885895A - 血小板功能检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血小板功能检测方法,分析评价血小板功能,包括以下血小板检测:1)血小板活化检测;2)凝血因子激活检测;3)血小板抑制检测。本发明适用于血栓弹力图仪以凝固法进行血小板功能测定,通过在被检血液样品中分别所得到的上述血小板检测数值,通过进一步的计算,得到血小板功能检测结果。由于本方法采用了血小板抑制剂,其检测数值作为血小板功能分析中的本底对照参数,使检测结果更可靠。且与之前的检测方法相比,本方法不需要使用昂贵的蛇毒血凝酶,使检测成本降低,适于临床推广。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域,尤其涉及一种血小板功能检测方法。
背景技术
血栓性疾病(如心梗、脑梗等)具有高发病率,高致残和高致死率,已成为目前全球疾病致死的首要因素,而血小板在血栓形成中起关键作用,也是形成动脉血栓的主要因素。在医学临床实践中也将抗血小板药物作为血栓性疾病治疗和预防的主要措施。医学研究已证实血小板功能异常时发生血栓性疾病和出血性疾病的风险增加。因此,要维护机体处于健康状态,避免血栓或出血性疾病的发生,需要控制血小板功能处于一个合理的功能状态范围内。
血小板功能检测的临床意义:
1,抗血小板药物与血小板功能检测
前抗血小板药物已成为临床对血栓性疾病进行预防和治疗的有效的和重要的核心措施。现在许多中年及以上患者每天服用一片阿司匹林预防血栓性疾病。阿司匹林的抗血栓机理主要是通过抑制机体中血小板的功能实现预防血栓的目的。但医学研究发现,人对阿司匹林等抗血小板药物的反应个体差异很大。其中约20%的人被确定为血小板对阿司匹无反应性;还有13%会出现临床阿司匹林抵抗(即服用阿司匹林非但没有抑制血栓病的发生,反而出现血栓症状)。近年来对抗血小板药物个体差异的研究也比较成熟,可以确定约有30%的个体在使用相同品种、相同剂量的抗血小板药物无效,同时约有10%的患者服药抗血小板药物后会出现出血,说明人体对抗血小板药物存在较大的个体差异。因此,如果及时检测出抗血小板药物无效的患者以及用药过量或不适的患者,抗血栓的预防、治疗效率至少将提供20%以上。而目前由于95%以上的高风险人群及抗血小板药物应用的患者都没有得到血小板功能检测,无法及时发现哪些患者属于受到不利影响的群体,目前的血栓病治疗或预防的效果只能凭临床经验,由于目前血小板功能检测缺失导致血栓性疾病危害十分严重。因此,开展血小板功能检测不仅可以作为血栓性疾病的诊断依据,而且更重要的是血小板功能检测可以及时对患者使用抗血小板药物的疗效进行有效评价和监控,指导临床医师进行必要的用药调整,确保对血栓性疾病预防和治疗达到预期效果并避免或减少副作用。
2,血小板功能检测的现状
血小板功能检测的方法有多种,包括以检测血小板粘附功能;血小板聚集功能;血小板释放因子等几种类型。其中一种以光学比浊法为基本原理检测血小板聚集功能的方法应用最为普遍,但是由于该方法操作十分繁琐、检测结果稳定性差,在临床应用较少。除此之外其它的血小板功能检测的方法如血小板粘附功能检测、血小板释放因子检测等方法也因为检测操作复杂、设备成本高、检测结果质量差等原因也没有得到普及应用。近年来,使用血栓弹力图仪检测血小板功能逐步增多,这种方式采用的是凝固法检测,由于直接检测了血小板参与促凝的功能,其结果较之前的方法更可靠。
但是血栓弹力图仪检测技术产生在上世纪七十年代以前,虽然现在逐步广泛用于应用于临床,但由于过去生产技术和检测方法较为落后,使基于血栓弹力图仪的凝固法检测血小板功能的结果误差较大,而且由于成本高,影响了它在临床上的价值,现在,由于新的生物化学合成技术、分子生物技术与检测技术的更新,所以现在提供一种新的血小板功能的检测方法,以提高检测可靠性和降低检测低成本 ,解决现有检测技术中的存在的同题,作为目前更适合临床应用的血小板功能检测方法。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术中的缺点,提供一种检测结果可靠稳定、准确率高、成本低、适用临床推广的血小板功能检测方法。
为实现上述目的,本发明的技术方案是设计一种血小板功能检测方法,分析评价血小板功能,包括以下血小板检测:
1)血小板活化检测:在血液样本中加入血小板激活剂后进行检测,得到血小板被活化后的凝血因子激活检测值;
2)凝血因子激活检测:在血液样本中加入凝血因子激活剂进行检测,得到凝血因子激活后的血小板活化检测值;
3)血小板抑制检测:在血液样本中加入血小板抑制剂进行检测,得到血小板被抑制后的血小板抑制检测值。
优选的,所述血小板激活剂包括二磷酸腺苷、花生四烯酸、瑞思妥霉素、肾上腺素。
优选的,所述凝血因子激活剂包括组织因子、高岭土、鞣花酸、磷脂、氯化钙。
优选的,所述血小板抑制剂包括替罗非班、阿昔单抗。
本发明适用于血栓弹力图仪以凝固法进行血小板功能测定,通过在被检血液样品中分别加入血小板激活剂、血小板抑制剂、血小板激活剂并分别所得到血小板检测数值,通过进一步的计算,得到血小板功能检测结果。由于本方法采用了血小板抑制剂,其检测数值作为血小板功能分析中的本底对照参数,使检测结果更可靠。且与现有的检测方法相比,本方法不需要使用昂贵的蛇毒血凝酶,使检测成本降低。本发明还提供了一种血小板功能检测试剂盒,适于临床推广。
本发明使用了血小板抑制剂使血小板功能被抑制,检测时血液样本在凝固过程中没有血小板的促凝作用参与,所以其检测结果用于分析血小板功能时作为空白对照。
现有技术以血栓弹力图仪为血小板功能检测的试剂,在作为检测血液样本空白对照时,为了让血小板不参与血液的凝固,使用了蛇毒血凝酶,因为蛇毒血凝酶在检测中不活化血小板,其检测数值可以作为空白对照。但是使用蛇毒血凝酶的问题是,因为蛇毒血凝酶仅能部分水解纤维蛋白原变为纤维蛋白,其凝固的强度低,使以检测血液样本弹力为技术基础的血栓弹力图仪不能很好的得到样本的凝固状态,使检测结果不稳定。另一方面,蛇毒血凝酶来源少,成本高,易分解,试剂保存困难。而本血小板功能试剂不使用蛇毒血凝酶,使用成本低的材料,例如使用替罗非班,在检测中抑制血小板的功能,使其不参与凝固的过程,样本凝固产生时,所有纤维蛋白原均可以参与凝固,使结果稳定可靠。
本发明中的试剂检测可以为多种组合,例如血小板活化检测试剂,在检测血小板活化时可以同时进行二磷酸腺苷、花生四烯酸两种激活剂的检测,可以分别得到血小板在不同激活剂下的活化结果,用于分析针对阿司匹林及氯吡格雷的血小板的药效反应。
本发明使用了凝血因子激活检测试剂,用于激活血液样本中的凝血因子,由于凝血因子在激活剂在作用下被激活,凝血因子活化后所产生的血液凝固的强度可达到最大值,远大于血小板的促凝作用,所以将凝血因子激活检测数值作为分析计算的最大值。
本发明中血小板功能结果的计算:
血小板功能=(凝血因子激活检测值-血小板活化检测值/凝血因子激活检测值-血小板抑制检测值)×100%。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案,而不能以此来限制本发明的保护范围。
在下述具体实施例中使用的原料、试剂、仪器来源如下:
原料及试剂 厂家
Tris,Hcl,Proclin-300 SIGMA
组织因子、磷脂 SIGMA
替罗非班、阿昔单抗 SIGMA
二磷酸腺苷,花生四烯酸 国药
瑞思妥霉素、肾上腺素 国药
高岭土、鞣花酸、氯化钙 国药
仪器:本公司全自动血栓弹力图仪
调Tris-Hcl缓冲液PH=7.20,缓冲液中加入0.2% Proclin-300。
鞣花酸溶液在上述缓冲液中的浓度为0.1%
替罗非班溶液在上述缓冲液中浓度为0.1%
二磷酸腺苷在上述缓冲液中的浓度为0.5%
检测时,按照全自动血栓弹力图仪的操作手册,将上述试剂放置在仪器的试剂区,将血液样本放置在仪器的样本区。
下发检测任务,仪器自动开始检测。
仪器将鞣花酸加入血液样本中,测得凝血因子激活检测值;
仪器将鞣花酸和替罗非班分别加入到血液样本中,测得血小板抑制检测值;
仪器将二磷酸腺苷加入到血液样本中测得血小板被二磷酸腺苷活化检测值。
血小板功能的计算:
血小板功能(二磷酸腺苷)=(凝血因子激活检测值-血小板活化检测值/凝血因子激活检测值-血小板抑制检测值)×100%
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.血小板功能检测方法,其特征在于,包括以下血小板检测:
1)血小板活化检测:在血液样本中加入血小板激活剂后进行检测,得到血小板被活化后的凝血因子激活检测值;
2)凝血因子激活检测:在血液样本中加入凝血因子激活剂进行检测,得到凝血因子激活后的血小板活化检测值;
3)血小板抑制检测:在血液样本中加入血小板抑制剂进行检测,得到血小板被抑制后的血小板抑制检测值。
2.根据权利要求1所述的血小板功能检测方法,其特征在于,所述血小板激活剂包括二磷酸腺苷、花生四烯酸、瑞思妥霉素、肾上腺素。
3.根据权利要求2所述的血小板功能检测方法,其特征在于,所述凝血因子激活剂包括组织因子、高岭土、鞣花酸、磷脂、氯化钙。
4.根据权利要求3所述的血小板功能检测方法,其特征在于,所述血小板抑制剂包括替罗非班、阿昔单抗。
5.通过权利要求4所述的血小板功能检测方法,分析评价血小板功能,其特征在于,血小板功能=(凝血因子激活检测值-血小板活化检测值/凝血因子激活检测值-血小板抑制检测值)×100%。
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