CN106868082A - 一种新的参苏补肾胶囊中脑蛋白水解物的制备方法 - Google Patents

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姜文月
王美惠
魏晓雨
徐杰
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    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
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Abstract

本发明涉及一种新的参苏补肾胶囊中脑蛋白水解物的制备方法，以猪脑组织为原料，首次将乙醇溶剂应用于猪脑脱脂研究，并优化其脱脂工艺，采用单一酶水解而制备脑蛋白水解物。并以总氮、氨基氮、脂肪、磷脂、胆固醇、氨基酸等多指标进行脑蛋白水解物的综合性质量评价。本发明与原生产工艺技术相比，不仅保证产品质量一致性，还具有如下优点：(1)脱脂溶剂采用乙醇替代传统丙酮，提高生产安全性，排除丙酮脱脂危险性隐患；(2)减少脱脂次数，简化脱脂工艺，降低生产成本；(3)提高脱脂率，促进酶解反应；(4)选择单一酶水解，操作过程简便。(5)多指标检测能更全面表征脑蛋白水解物的质量。

Description

一种新的参苏补肾胶囊中脑蛋白水解物的制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种新的参苏补肾胶囊中脑蛋白水解物的制备方法。
背景技术
参苏补肾胶囊为中成药中经典品种药，具有补肾健脑、活血通络，对老年人失眠、健忘具有较好疗效，临床效果良好，市场需求较大。参苏补肾胶囊处方中包括脑蛋白水解物，脑蛋白水解物系健康猪脑经脱脂、酶水解，干燥得到的产物，猪脑含有人脑正常活动中必需的活性物质，主要为小分子活性肽和多种氨基氮，能直接通过脑屏障提供细胞营养，增强脑功能、促进大脑发育，效果显著。猪脑中除有效成分外还含有大量的脂肪，使水解反应难于进行，水解体系浑浊导致无法分离，最终影响蛋白水解产物外观及稳定性，可见脱脂环节尤为重要。现今猪脑蛋白水解物的生产工艺，一般多采用丙酮溶剂脱脂处理制备脱脂猪脑粉，再进行蛋白酶水解操作，最终得到猪脑蛋白水解物。该脱脂工艺中丙酮作为脱脂剂，脱脂效果良好，但其为易制毒品，存在危险性大和成本高等缺点，目前生产中正在不断寻找脱脂剂丙酮的替代溶剂，完善其不足之处。
发明内容
本发明目的是提供一种新的参苏补肾胶囊中猪脑蛋白水解物的制备方法，包括脱脂、酶解两步工艺，建立脑蛋白水解物的多指标检测方法，新工艺简单，降低成本，适用于工业化生产，可为企业获得较高的经济收益。
实现本发明的步骤如下：
(1)将新鲜猪脑洗净、剔除杂质，匀浆，得到猪脑匀浆液。
(2)向猪脑匀浆液中加入脱脂剂乙醇，控制脱脂温度，搅拌脱脂0.5～3小时后过滤，收集滤渣。
(3)将滤渣在70～80℃条件下干燥，粉碎至细粉，即得猪脑脱脂粉。
(4)向步骤(3)中脱脂猪脑粉加入适量水搅拌混匀，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.5～8.5，加入胰蛋白酶适量，在35～50℃水浴下水解5～10小时后，在100℃水浴下煮沸10分钟，冷却至室温，离心分离10分钟(3000r/min)，将上清液pH调至中性，浓缩，减压干燥，粉碎过100目筛，即得猪脑蛋白水解物。步骤(2)中所述新鲜猪脑匀浆液与脱脂剂的体积比为5～10倍。
步骤(2)中所述脱脂溶剂温度为24～30℃。
步骤(2)中所述脱脂搅拌频率为80～120r/min。
步骤(3)中所述脱脂粉加水量为3～6倍。
步骤(3)中所述胰蛋白酶的酶活力为4000U/g。
步骤(3)中所述胰蛋白酶加入量为2～15g/kg鲜猪脑。
本发明与现有技术相比具有明显的技术进步和实用性，具体优点如下：
1、本发明制备的脱脂猪脑粉，改变现有工艺丙酮脱脂法，将丙酮更换为乙醇，在保证蛋白质量同时，提高了脱脂率，克服了丙酮溶剂的毒性和易爆的危险性，简化了脱脂工艺环节，降低了生产成本。
2、本发明制备的猪脑酶解物，选用单一酶水解猪脑脱脂粉，保证猪脑蛋白水解物质量，简化了酶解工艺，降低了生产时间及成本。
3、猪脑蛋白水解物质量检测除原标准指标外，还增加了脂肪、磷脂、胆固醇、氨基酸等含量检测，全面地表征其质量。
附图说明
图1是十六种氨基酸混合对照品高效液相色谱图；
图2是实施例1脑蛋白水解物样品中各氨基酸高效液相色谱图；
图3是实施例2脑蛋白水解物样品中各氨基酸高效液相色谱图；
图4是实施例3脑蛋白水解物样品中各氨基酸高效液相色谱图；
图5是原工艺脑蛋白水解物样品中各氨基酸高效液相色谱图。
具体实施方式：
实施例1
新鲜猪脑去除血管、杂质后取20kg，搅碎匀浆，加7倍体积乙醇，恒温控制26℃、搅拌频率90r/min条件下脱脂0.5小时，过滤，滤渣80℃干燥，得2.90kg脱脂猪脑粉。取此粉加入4倍体积水匀浆，调节pH为8.0，加0.2％胰蛋白酶水解，45℃搅拌酶解7小时，离心收集清液，减压干燥，粉碎成细粉过100目筛，得2.03kg猪脑蛋白水解物。
实施例2
新鲜猪脑去除血管、杂质后取20kg，搅碎匀浆，加6倍体积乙醇，恒温控制27℃、搅拌频率80r/min条件下脱脂1小时，过滤，滤渣80℃干燥，得2.81kg脱脂猪脑粉。取此粉加入4倍体积水匀浆，调节pH为8.0，加0.3％胰蛋白酶水解，45℃搅拌酶解6小时，离心收集清液，减压干燥，粉碎成细粉过100目筛，得1.97kg猪脑蛋白水解物。
实施例3
新鲜猪脑去除血管、杂质后取20kg，搅碎匀浆，加7倍体积乙醇，恒温控制28℃、搅拌频率100r/min条件下脱脂1小时，过滤，滤渣80℃干燥，得2.71kg脱脂猪脑粉。取此粉加入5倍体积水匀浆，调节pH为8.2，加0.2％胰蛋白酶水解，45℃搅拌酶解7小时，离心收集清液，减压干燥，粉碎成细粉过100目筛，得1.84kg猪脑蛋白水解物。
实验例1猪脑蛋白水解物总氮及氨基氮含量测定：
方法参照国家标准脑蛋白水解物(编号WS1-XG-130-2002)中总氮及氨基氮含量的测定方法。
测定结果可知，三批新脑水解物新生产工艺与原工艺水解物各含量相对比，总氮及氨基氮含量较高，有效成分达到精制。氨基氮含量为总氮的40～50之间，脑蛋白水解物符合标准要求。
实验例2猪脑水解物脂肪含量测定
方法参照GB/T 14772-2008《食品中粗脂肪的测定》。
类别 脂肪含量(％)
实施例1 20.41
实施例2 19.87
实施例3 19.25
原工艺(丙酮脱脂酶解水解物) 27.21
测定结果可知，三批新脑蛋白水解物中脂肪含量均低于原工艺水解物，表明乙醇脱脂效果好于丙酮。
实验例3猪脑蛋白水解物磷脂含量检测：
方法参照GB/T 5537-2008《粮油检验磷脂含量的测定》。
类别 磷脂含量(％)
实施例1 42.51
实施例2 42.14
实施例3 41.54
原工艺(丙酮脱脂酶解水解物) 37.27
测定结果可知，三批新猪脑蛋白水解物中磷脂含量均较高于原工艺水解物，磷脂为功效成分对人体有用，可作为新、原工艺对比分析指标。
实验例4猪脑蛋白水解物胆固醇含量检测：
方法参照GB/T 5009.128-2003《食品中胆固醇的测定》。
类别 胆固醇含量(％)
实施例1 0.72
实施例2 0.68
实施例3 0.62
原工艺(丙酮脱脂酶解水解物) 0.94
测定结果可知，三批猪脑蛋白水解物中磷脂含量均低于原工艺水解物，胆固醇也为人体有益成分，但是当含量过多时容易导致冠心病等疾病，参苏补肾胶囊多适用于中老年人群，故不宜服用过高，可作为新、原工艺对比分析指标。
实验例5猪脑蛋白水解物游离氨基酸含量检测：
氨基酸测定方法参照JYT 019-1996氨基酸分析方法通则，测定脑蛋白水解物中游离氨基酸的种类及含量。
类别 游离氨基酸总量％
实施例1 16.42
实施例2 16.55
实施例3 16.51
原工艺(丙酮脱脂水解物) 14.32
测定结果可知，优化猪脑蛋白水解物生产工艺后的样品中游离氨基酸种类与原产品一致，共16种氨基酸，分别为谷氨酸、门冬氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、赖氨酸，本发明制备的猪脑蛋白水解物中游离氨基酸总含量高于原产品，各氨基酸混合对照品及样品图谱见附图1、2、3、4、5。
综合分析，乙醇可作为新脱脂溶剂替代传统丙酮，乙醇极性稍大于丙酮，可能脱脂同时带走部分蛋白质，但通过试验研究发现，严格控制脱脂溶剂的温度能有效降低蛋白质的损失，同时脱脂溶剂的温度还影响猪脑水解物中胆固醇及磷脂的含量，溶剂温度过高时能有效减低胆固醇含量，但同时会导磷脂含量的损失，温度过低时会降低磷脂含量的损失，但胆固醇成分较难除去，本发明制备的猪脑蛋白水解物中磷脂及胆固醇成分含量均优于传统工艺。新工艺选择乙醇脱脂，胰蛋白酶水解得到的脑蛋白水解物中游离氨基酸种类和原工艺水解物一致，其总含量高于工艺。多指标含量检测结果均表明新工艺优于原工艺。
综上所述此新工艺替代传统丙酮脱脂-蛋白酶水解法，可作为参苏补肾胶囊中猪脑蛋白水解物的制备方法。

Claims (7)

1.一种新的参苏补肾胶囊中脑蛋白水解物的制备方法，其特征在于
(1)将新鲜猪脑洗净、剔除杂质，匀浆，得到猪脑匀浆液。
(2)向猪脑匀浆液中加入脱脂剂乙醇，控制脱脂温度，搅拌脱脂0.5～3小时后过滤，收集滤渣。
(3)将滤渣在70～80℃条件下干燥，粉碎至细粉，即得猪脑脱脂粉。
(4)向步骤(3)中脱脂猪脑粉加入适量水搅拌混匀，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.5～8.5，加入胰蛋白酶适量，在35～50℃水浴下水解5～10小时后，在100℃水浴下煮沸10分钟，冷却至室温，离心分离10分钟(3000r/min)，将上清液pH调至中性，浓缩，减压干燥，粉碎过100目筛，即得猪脑蛋白水解物。
2.按照权利要求书1所述脑蛋白水解物的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述新鲜猪脑匀浆液与脱脂剂的体积比为5～10倍。
3.按照权利要求书1所述脑蛋白水解物的新制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述脱脂溶剂温度为24～30℃。
4.按照权利要求书1所述脑蛋白水解物的新制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述脱脂搅拌频率为80～120r/min。
5.按照权利要求书1所述脑蛋白水解物的新制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述脱脂粉加水量为3～6倍。
6.按照权利要求书1所述脑蛋白水解物的新制备方法，其特征在于：步骤(4)胰蛋白酶的酶活力为4000U/g。
7.按照权利要求书1所述脑蛋白水解物的新制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述胰蛋白酶加入量为2～15g/kg鲜猪脑。
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