CN106860854A - 醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽 - Google Patents

醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽 Download PDF

Info

Publication number
CN106860854A
CN106860854A CN201710259895.4A CN201710259895A CN106860854A CN 106860854 A CN106860854 A CN 106860854A CN 201710259895 A CN201710259895 A CN 201710259895A CN 106860854 A CN106860854 A CN 106860854A
Authority
CN
China
Prior art keywords
boc
thr
tbu
dcm
hcl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710259895.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106860854B (zh
Inventor
余茹
金春花
王秀琼
黄小石
曾业浩
王良红
丁牡丹
吴国庆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL CO LTD
Original Assignee
CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN201710259895.4A priority Critical patent/CN106860854B/zh
Publication of CN106860854A publication Critical patent/CN106860854A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106860854B publication Critical patent/CN106860854B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽。具体的，本发明涉及的醋酸奥曲肽注射液药物组合物其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇40～50g、乳酸3～4g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml等。本发明还涉及醋酸奥曲肽产品及其制备方法。本发明呈现如说明书所述优异技术效果。

Description

醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽
技术领域
本发明属于医药技术领域，更具体地，本发明公开了一种醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽，以及该醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制法。本发明制备的醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽具有优异的性质。
背景技术
醋酸奥曲肽(Octreotide Acetate)是由八个氨基酸组成的合成多肽，其化学名为：D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-N-[(1R,2R)-2-羟基-1-(羟甲基)丙基]-L-半胱氨酰胺环(2→7)-二硫键醋酸盐，其英文化学名为：L-Cysteinamide,D-phenylalanyl-L-cysteinyl-L-phenylalanyl-D-tryptophyl-L-lysyl-L-threonyl-N-[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)propyl]-，cyclic(2→7)-disulfide；[R-(R*，R*)]acetate salt，CAS：83150-76-9，其化学结构式和分子式、分子量分别为：
或者，其化学结构式为：
自1973年Brazeau等从羊下丘脑中分离出生长抑素(Somatostatin，ST)以来，对ST的产生、分布及生物活性作了大量研究，并测定了它的一级结构。
随着放射免疫检测和免疫细胞化学的进展，发现ST族激素在体内广泛分布。如中枢神经系统、下丘脑、周围神经系统、胰岛D细胞、胃肠道上皮腺上皮和轴突细胞等。在垂体前叶，ST抑制生长激素和促甲状腺激素的释放。在胰腺，ST抑制胰岛和胰高血糖素的分泌。ST对胃肠道系统影响广泛，抑制激素，如胃泌素、胰泌素、血管活性肠肽和其它激素的释放，抑制胃酸、胃蛋白酶的分泌，降低内脏血流量和肠活动，降低碳水化合物吸收，增加大肠对水和电解质的吸收。ST还具有细胞保护作用等。因而被认为能够用于治疗某些胃肠道及外科疾病。但ST的体内半衰期非常短，仅有2-3min，需连续静注，并且ST无器官特异性，停药后易引起生长激素等过度分泌，长期应用ST可导致肠道吸收不良和葡萄糖耐受性降低。因此ST的临床应用一直受到限制。
在1982年，瑞士Sandoz药厂(现为Novartis Co.)合成了新一代长效型生长抑素类似物醋酸奥曲肽(Octreotide，Sandostatin，SMS201-995，以下简称奥曲肽)。它是一个以ST相同，并除去了ST中6个氨基酸。它可与广泛存在于中枢神经系统、垂体和胰腺β细胞等处的ST受体结合产生生物学效应，而且抑制生长激素(GH)、胰岛素、胰高血糖素、胃酸分泌均比ST强，特异性也较高。同时，由于1，4位L-氨基酸分别被相应D-氨基酸取代，8位为氨基L醇，故奥曲肽不易被蛋白酶迅速水解，并延长了体内半衰期，t1/2为80-160min，使用时不需连续静注。
因此，奥曲肽除具有ST类似物的抑制功能外，还具有下列特点：
(1)对内分泌的抑制作用更强，对生长激素，胰离糖素和胰岛素的抑制作用分别是ST的45倍、11倍和1.3倍。
(2)半衰期长：皮下注射半衰期为2h。
(3)停药后不发生反跳性高分泌。
所以奥曲肽近年来被用于多种疾病的治疗，且副作用相对减少，已广泛应用于消化道肿瘤、上消化道出血、急性胰腺炎、转移性类癌、肢端肥大症等病的治疗。
奥曲肽于1988年在新西兰首先上市，上市剂型为注射剂，1989年美国FDA批准在美国上市。醋酸奥曲肽注射液，临床使用可静脉注射、皮下注射、静脉滴注(滴注给药时间可达12小时以上)，其储存方式为2～8℃，避光保存，在室温中(20～30℃)可保存14天，由此可见醋酸奥曲肽溶液稳定性是其产品质量优劣的重要衡量标准。
有一些文献公开了醋酸奥曲肽的制备方法。例如，
CN103965291A(专利申请号201410228795.1)公开了奥曲肽、奥曲肽醋酸盐的制备方法。该奥曲肽的制备方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将奥曲肽粗品溶液依次进行反相纯化、反相脱盐，即可；高效液相反相色谱法的填料为苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)共聚物。本发明将反相纯化和反相脱盐联用，设计出聚合物填料苯乙烯-二乙烯基苯的最新应用，可以大批量制备奥曲肽和奥曲肽醋酸盐。
CN103965291A(专利申请号201010165270.X)公开了一种采用固相合成法制备奥曲肽的方法，包括如下步骤：(1)、将N-芴甲氧羰基-O-叔丁基苏氨醇连接到作为载体的树脂上获得N-芴甲氧羰基-O-叔丁基苏氨醇树脂；(2)、按照Fmoc/tBu固相多肽合成的方法，根据奥曲肽的序列，将保护氨基酸按C端至N端的顺序逐个偶联到步骤(1)所得树脂上获得奥曲肽八肽树脂；(3)、使用裂解剂将八肽从所述奥曲肽八肽树脂上切下，得到线性粗肽；(4)、步骤(3)所得线性粗肽经氧化反应形成二硫键，经制备高效液相色谱纯化即得所述奥曲肽，其特征在于：步骤(4)中，所述氧化反应在pH＝7.0～7.5以及氧化剂H2O2的存在下进行，其中H2O2与线性粗肽的投料摩尔比为7～9∶1。据信该发明采用双氧水来氧化线性粗肽获得奥曲肽，仅需1～3小时氧化反应即完全，与传统的空气氧化法相比，反应时间大大缩短，且奥曲肽产品收率大幅提高，适于大规模生产奥曲肽及其盐。
CN103102390A(专利申请号201110352635.4)公开了一种奥曲肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：获得氨基酸序列为D-Phe-Cys的二肽；以树脂为载体，按照固相法合成六肽树脂；所述六肽树脂中氨基酸残基序列为Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol；在碱性条件下，取所述二肽与所述六肽树脂发生缩合反应，切肽制得线性八肽；所述线性八肽的氨基酸残基序列为D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol；步骤2：取所述线性八肽溶于过量的N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中，调整pH值为6.8～8.0，加入过量的氧化剂，在18～30℃环化2～3h，调整pH值为3.5～5.0，纯化后，制得结构如式Ⅰ所示的奥曲肽；其中，Thr-ol是苏氨醇，Cys是半胱氨酸，Thr是苏氨酸，Lys是赖氨酸，D-Trp是D型色氨酸，Phe是苯丙氨酸，D-Phe是D型苯丙氨酸。据信该发明提高了奥曲肽的收率及纯度。
CN1355173A(专利申请号00134258.4)公开了制备醋酸奥曲肽的方法，其包括：a).将下式三肽R1-D-Phe-Cys(R2)-Phe-OH与下式五肽R3-D-Trp-Lys(R4)-Thr(R5)-Cys(R2)-NH-CH(CH2-OR6)-CH(OR5)-CH3反应生成下式八肽R1-D-Phe-Cys(R2)-Phe-D-Trp-Lys(R4)-Thr(R5)-Cys(R2)-NH-CH(CH2-OR6)-CH(OR5)-CH3在上述三肽、五肽及八肽中，R1＝BOC；R2＝Bzl、4-Me-Bzl或4-MeO-Bzl；R3＝Fmoc；R4＝Z或2-Cl-Z；R5＝Bzl；R6＝CH3-、CH3CH2-、CH3CH2CH2-或CH3CH2CH2CH2-。b).用无水氟化氢脱除a)中所得八肽上所有侧链保护基，得到下式还原型奥曲肽，D-Phe-Cys-Phe-D-Try-Lys-Thr-Cys-Thr-Ol；c)将b)中所得八肽的水溶液在空气中搅拌自然氧化，得到奥曲肽，经过纯化后，奥曲肽水溶液用碱性水溶液调pH值至7.0-8.0；d)将c)中pH值为7.0-8.0的奥曲肽溶液注入非极性柱中，用乙腈水溶液洗脱，合并洗脱液，加入适量冰醋酸，得醋酸奥曲肽，如需要，所得醋酸奥曲肽经冷冻干燥，得醋酸奥曲肽干粉。
CN1490330A(专利申请号02137521.6)公开了一种醋酸奥曲肽生产工艺，其特征在于：由下列工艺步骤组成，取Boc-Thr(Ac)-Wang树脂装入反应容器中，加入TFA与二氯甲烷的混合液反应，洗涤后加三乙胺与二氯甲烷混合液反应，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，卡氏法检测氨基为阳性用接肽试剂补接后至卡氏法检测氨基为阴性，加入封头试剂、脱帽试剂，洗涤，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，溶解，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，接肽试剂溶解，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，加入反应容器，洗涤抽干，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，干燥得八肽树脂，八肽树脂中加入脱侧链试剂，乙醇，硼氢化钠和乙醇溶液，乙醇洗涤，加醋酸及滴加NHOH至pH值7.8，用冰醋酸调至pH值5.5，滤液分批经纯化后冻干得白色疏松块状成品。据信该发明的优点利用硼氢化钠还原取代价格昂贵的L-Thr(ol)，可大大降低醋酸奥曲肽生产合成的成本。
CN1569890A(专利申请号200410010833.2)公开了一种醋酸奥曲肽的固相合成方法，过程是：合成八肽；将八肽制成水溶液在空气中自然氧化后制成奥曲肽；向奥曲肽水溶液中加入冰醋酸后冻干，制成醋酸奥曲肽冻干粉；其特征在于，所说的合成八肽的过程是：将芴甲氧羰基苏胺醇与对羧基苯甲醛反应生成芴甲氧羰基苏胺醇对羧基苯缩醛，将其键合在高分子树脂载体上，然后按顺序与保护氨基酸残基依次键合后得到八肽树脂，将八肽从树脂上切落。据信该发明合成工艺简单，容易操作，工艺时间缩短，反应配比小，节约原料，降低了成本，而且产率和纯度提高，副反应和副产物少，便于纯化，有益于大批量生产。
CN1810829A(专利申请号200510002874.1)公开了一种醋酸奥曲肽的制备方法，该方法，包括以下步骤：1)用固相合成法合成具有D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr氨基酸残基序列的直链八肽；2)氧化直链八肽，得到氧化型奥曲肽；3)将氧化型奥曲肽在醋酸盐溶液中经转盐和纯化后，得到醋酸奥曲肽。本发明的醋酸奥曲肽的制备方法中，全部采用DMF，HOBT/HBTU和DIEA进行接肽反应，具有操作简便，副反应少的优点，用此方法可达到最小保护策略，并可进行大量的合成。据信该发明具有成本低，收率高的优点，在醋酸奥曲肽的工业化生产中将具有广阔的应用前景。
CN1923849A(专利申请号200510029221.2)公开了一种固相多肽合成奥曲肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：以2-氯-三苯甲基树脂、三苯甲基树脂作树脂、4-甲基三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU或HBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，得保护的还原型八肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得还原型奥曲肽，并在pH7-11的条件下用空气氧化，获得奥曲肽粗品，再经C18(或C8)柱分离纯化，冷冻干燥后，制得奥曲肽精品。据信该发明的方法，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅材料来源方便，生产周期短，收率高，质量稳定，生产成本低，接肽收率高，避免使用氟化氢等剧毒试剂，三废污染少，采用C18(或C8)柱进行分离纯化。
CN103351426A(专利申请号201310333598.1)公开了一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，其特征在于，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。据信该发明方法不采用苏氨醇、Fmoc-苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。
CN106543269A(专利申请号201610938844.X)公开了一种奥曲肽工业化生产的合成方法，其特征在于：该合成方法依次包括以下步骤：第一步，以氨甲基树脂为起始树脂，将原料Fmoc-Thr-x利用缩合试剂HOBT与DIC偶联到树脂上，生成Fmoc-Thr-x-AM Resin，其中，所述氨甲基树脂的替代度为0.55～0.65mmol/g，投入的所述Fmoc-Thr-x、HOBT以及DIC的摩尔量均为所需合成的奥曲肽的摩尔量的2～3倍；然后按照顺序依次将氨基酸Cys、Thr、Lys、D-Trp、Phe、Cys、D-Phe逐个偶联到Fmoc-Thr-x-AM Resin上，得到奥曲肽肽树脂；所述Fmoc-Thr-x的化学结构式为；第二步，向所述奥曲肽肽树脂中加入裂解液，搅拌均匀裂解2～3h，其中，奥曲肽肽树脂与裂解液的配比为向每1g奥曲肽肽树脂中加入10ml裂解液；裂解完成后，过滤，将滤液缓慢加入预先冰冻的无水乙醚中沉降20～40min后离心得到奥曲肽线性粗肽；第三步，将所述奥曲肽线性粗肽溶解到TFA/水混合溶液中，然后放入35℃～38℃的水浴或加热套中加热2～3h，使得奥曲肽线性粗肽在HPLC图谱中的峰型单一，其中，所述奥曲肽线性粗肽与TFA/水混合溶液的配比为向每1g奥曲肽线性粗肽中加入300ml的TFA/水混合溶液，TFA/水混合溶液中TFA的体积百分含量为5‰；第四步，向所述第三步加热后的溶解有奥曲肽线性粗肽的TFA/水混合溶液中加入DMSO后氧化1～1.5h，加入的DMSO的体积占溶解有奥曲肽线性粗肽的TFA/水混合溶液的总体积5～8％，然后，HPLC检测环化终点，纯化分离得到奥曲肽精制品。
另外，有一些文献公开了醋酸奥曲肽药物组合物的制备方法。例如，
CN104667258A A(专利申请号201510124285.4)公开了一种醋酸奥曲肽片剂及其制备方法，其由醋酸奥曲肽纳米粒与药学上可接受的片剂辅料制成，所述醋酸奥曲肽纳米粒中包含醋酸奥曲肽、酶抑制剂以及高分子材料。本发明的醋酸奥曲肽片剂可以显著的延长药物作用时间、且相对于注射剂型其用药方便，提高了患者的顺应性，同时由于包覆了高分子化合物并以固体形式存在，醋酸奥曲肽的保质期限显著延长。
CN102525927A(专利申请号201110456620.2)公开了一种醋酸奥曲肽脂质体前体及制备方法。该前体脂质体中含有醋酸奥曲肽、负电磷脂、冻干保护剂，尚可以含有适量其它脂质，包括磷脂酰胆碱、胆固醇，也可以根据需要加入抗氧剂、pH调节剂等成分醋酸奥曲肽与负电磷脂的摩尔比小于1∶1，负电磷脂与冻干保护剂的质量之比为1∶1～1：10。发明所采用的工艺为叔丁醇-水共溶剂冷冻干燥法。将冻干品水化后得到的醋酸奥曲肽脂质体/胶束的包封率可达50％以上，并且冻干品和水化所得的醋酸奥曲肽脂质体/胶束都具有良好的稳定性，解决了蛋白质多肽类药物在制备成脂质体/胶束制剂时难以包载的问题。据信该制备方法简单易行，适合工业化大生产。
CN101647773A(专利申请号200910074427.5)公开了一种醋酸奥曲肽注射液，含有醋酸奥曲肽、甘露醇、吐温-80和柠檬酸,其中醋酸奥曲肽、甘露醇、吐温-80和柠檬酸的用量按重量比为1.2∶8～12∶0.001～0.0015∶0.1～0.5。据信该发明公开的醋酸奥曲肽注射液具有稳定性好的优点,可以在常温下放置6个月，不需避光。
CN102526700A(专利申请号201110458284.5)公开了一种注射用醋酸奥曲肽冻干组合物，包括醋酸奥曲肽、甘露醇和适量的缓冲物质，所述醋酸奥曲肽、甘露醇的质量比为1：450-500。所述的缓冲物质为乳酸和碳酸氢钠也可以为酒石酸和酒石酸钠。本发明还提供该组合物的制备方法。本发明提供的组合物采用无菌技术生产，通过药液配置过程最佳pH范围以及配制最佳温度的技术攻关提高了产品稳定性，最后制备为冻干品，采用速冻方式进行预冻，成品有关物质含量低、复溶性好、室温保存时间长达2个月，冷藏有效期2年，方便产品运输配送，临床配伍使用溶液稳定性好，局部注射刺激性低，为临床提供了安全、有效、质量优质可控的供注射用醋酸奥曲肽冻干组合物。
CN104689297A(专利申请号201510124765.0)公开了一种醋酸奥曲肽冻干粉针剂及其制备方法。所述醋酸奥曲肽冻干粉针剂由醋酸奥曲肽、叔丁醇、甘露醇、右旋糖苷以及维生素C制成。其制备方法包括如下步骤：1)将维生素C、甘露醇、右旋糖酐、叔丁醇以及醋酸奥曲肽依次加入纯化水中，搅拌使其完全溶解；2)将制得的药液灌装于安瓿瓶中，冻干。本发明获得的醋酸奥曲肽冻干粉针剂的保质期大大延长，稳定性增高，制备方法简单。
CN102416001A(专利申请号201110409545.4)公开了注射用醋酸奥曲肽冻干粉针剂，其由醋酸奥曲肽为活性成分，甘露醇为冻干赋形剂，柠檬酸为调节剂，其特征在于，所述注射用醋酸奥曲肽冻干粉针剂的pH值为5.5～5.7。据信该发明制备的醋酸奥曲肽冻干粉针剂能够迅速溶解，溶解度好。
CN103932996A(专利申请号201410206599.4)公开了一种注射用醋酸醋酸奥曲肽冻干组合物及其制备方法，所述的冻干组合物中含有醋酸奥曲肽、氨丁三醇和马来酸；制备方法为：称取醋酸奥曲肽、氨丁三醇，加入冷至10-20℃的注射用水中，搅拌溶解，采用马来酸调节药液pH＝4.0～5.0，过滤，灌装，冻干。与现有技术相比，本发明质量稳定，辅料种类少，制备工艺简单。
在国内上市的醋酸奥曲肽注射液原研产品是诺华的 其药品说明书上记载的组成成分为醋酸奥曲肽、乳酸、甘露醇、碳酸氢钠、注射用水，以例如CN102526700B所载实施例6配方制成溶液型注射液。
然而，已经发现，在奥曲肽产品制备过程中仍然存在一些期待解决的问题。
发明内容
本发明目的在于提供一种制备醋酸奥曲肽或其注射液药物组合物的方法并能够克服现有技术存在的相关技术问题。本发明的另一目的在于提供一种制备醋酸奥曲肽药物组合物的方法。已经出人意料的发现，使用本发明方法和配方制备得到的本发明醋酸奥曲肽及其药物组合物，能够满意的实现上述目的。
为此，本发明第一方面提供了一种制备醋酸奥曲肽的方法，包括如下步骤：
以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应；
用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽；
在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品；
奥曲肽粗品经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。
根据本发明第一方面任一实施方案所述方法，其中二硫键成环的操作步骤为：将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9，室温通空气24-36小时使二硫键成环，加冰醋酸，加活性碳，过滤，得奥曲肽粗品。
根据本发明第一方面任一实施方案所述方法，其中在进行二硫键成环的过程中，所用的空气预先依次通过饱和氢氧化钙溶液和2.5M硫酸溶液处理。
根据本发明第一方面任一实施方案所述方法，其中，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：
(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
使Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物为Boc-Thr(tBu)-OCs；[在本步骤的一个实施方案中，碳酸铯的摩尔数为Boc-Thr(tBu)-OH的1～5倍]
(2)Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs和DMF使进行反应；过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂[在本步骤的一个实施方案中，Boc-Thr(tBu)-OCs的摩尔数为树脂的1～3倍；在一个实施方案中，氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时]；
(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：
在步骤(2)的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10％三乙胺的DCM溶液(体积比)反应，抽干，DCM洗涤；加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(3)的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(5)Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(4)的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(6)Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(5)的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-D-Trp-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(7)Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(6)的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(7)的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(9)Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Fmoc-D-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(10)Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
在步骤(9)的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干；再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]。
根据本发明第一方面任一实施方案所述方法，其中，用钯/碳，氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽(即D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol)，其方法包括如下步骤：
取所述八肽树脂加无水甲醇、5％钯/碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，使反应，减压浓缩至油状物，DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品[在一个实施方案中，5％钯/碳用量为树脂的1/10至5/10(质量比)]。
根据本发明第一方面任一实施方案所述方法，其中，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，其方法具体实现为：
将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9，室温通空气24-36小时使二硫键成环，加冰醋酸，加活性碳，过滤，得奥曲肽粗品。
根据本发明第一方面任一实施方案所述方法，其中在进行二硫键成环的过程中，所用的空气预先依次通过饱和氢氧化钙溶液和2.5M硫酸溶液处理。
根据本发明第一方面任一实施方案所述方法，其中，粗品经C18柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25-0.5mol/L醋酸钾：乙腈＝7-8：3-2；流速为：600-1000ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。
进一步的，本发明第二方面涉及一种醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。该注射液每瓶装量可以是1ml。
根据本发明第二方面任一实施方案所述的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其中所述醋酸奥曲肽是本发明第一方面任一实施方案所述方法制备得到的。
根据本发明第二方面任一实施方案所述的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其是照包括如下步骤的方法制备得到的：
取处方量的甘露醇、7/10处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至30℃，加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7例如4.0，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽和余量的乳酸，加30℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7例如4.0；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至3.7～4.7例如4.0，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
再进一步的，本发明第三方面提供了一种醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇40～50g、乳酸3～4g、蔗糖1～3g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。该注射液每瓶装量可以是1ml。
根据本发明第三方面任一实施方案所述的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇42～48g、乳酸3.2～3.6g、蔗糖1.5～2.5g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。
根据本发明第三方面任一实施方案所述的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、蔗糖2g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。
根据本发明第二方面任一实施方案所述的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其是照包括如下步骤的方法制备得到的：
取处方量的甘露醇、2/3～3/4处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至15～30℃，加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽、蔗糖和余量的乳酸，加15～30℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至3.7～4.7，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。已经出人意料的发现，在特定的操作步骤中添加适量蔗糖，能够避免活性药物的过滤损失。
本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明采用氯甲基树脂为固相载体，将第一个氨基酸Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，以DIC，HOBT为缩合剂，逐个接上保护的氨基酸，最后一个肽链采用Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，不采用苏氨醇、Fmoc-苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用钯/碳加氢还原，同时将肽链切落切肽，条件温和，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。
在本发明的具体实例中，制备各物料的投料量是示意性的，其可以按比例的放大或者增加操作次数。在本发明的具体实例中，采用的原料均是可通过商业途径获得的，例如，使用的部分原料及其来源如下：
Boc-Thr(tBu)-OH，吉尔生化(上海)公司
Boc-Cys(Trt)-OH，吉尔生化(上海)公司
Boc-Thr(tBu)-OH，吉尔生化(上海)公司
Boc-Lys(Fmoc)-OH，吉尔生化(上海)公司
Boc-D-Trp-OH，吉尔生化(上海)公司
Boc-Phe-OH，吉尔生化(上海)公司
Fmoc-D-Phe-OH，吉尔生化(上海)公司
HOBt(N-Hydroxybenzotriazole)，吉尔生化(上海)公司
下文中使用的2mol/L HCl/异丙醇(氯化氢/异丙醇)溶液制备方法如下：将工业用的浓硫酸滴入食用粗盐(已烘干)中，产生HCl气体，通过二个硫酸洗气瓶，通至盛有1000毫升(约重1050克)异丙醇吸收瓶中(先称好毛重和净重)，待其重量增加至1123克左右即停止，装入试剂瓶内，盖紧内塞放入冰箱。
实施例1：醋酸奥曲肽的制备
一、合成肽链
(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
取Boc-Thr(tBu)-OH(FW：275.3，110mmol)30.3g，溶于250ml甲醇与250ml水中，pH2.5。另取24g碳酸铯(147mmol)加水100ml溶解至澄清，搅拌下缓缓加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，有二氧化碳气体产生。溶液pH7.5。40-50℃水溶减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs，计54.2g。
(2)Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
取氯甲基树脂100克(100-200目，1.0mmol/g，100mmol)，用DMF浸泡30分钟，使树脂充分溶胀，加入步骤(1)所得糖浆状残留物107g以及700ml的DMF，50-55℃反应48小时。
过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤20次，无水乙醇洗涤6次。50-55℃减压干燥，得124.4g的Boc-Thr(tBu)-O-树脂。
(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
上一步骤所得树脂加入350ml的2mol/L HCl/异丙醇溶液与350ml的DCM，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加700ml的10％三乙胺的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加入Boc-Cys(Trt)-OH(MW：463.6，200mmol)92.7g、DIC(MW：126.2，200mmol)25.2g，HOBT(MW：153，200mmol)30.6g，DMF 600ml，将混合物于25℃反应3小时。抽干。DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得。
(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
上一步骤所得树脂加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml(2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3.5倍)与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10％三乙胺700ml的DCM溶液，25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加55.1g(FW：275.3，200mmol)Boc-Thr(tBu)-OH、DIC(MW：126.2，200mmol)25.2g，HOBT(MW：153，200mmol)30.6g，DMF600ml，将混合物25℃反应3小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得。
(5)Fmoc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
上一步骤所得树脂加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml(2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的4倍)与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10％三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加93.7g(FW：468.6，200mmol)Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC(MW：126.2，200mmol)25.2g，HOBT(MW：153，200mmol)30.6g，600mlDMF，将混合物25℃反应1小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得。
(6)Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
上一步骤所得树脂加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml(2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的5.5倍)与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10％三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加60.9g(FW：304.4，200mmol)Boc-D-Trp-OH、DIC(MW：126.2，200mmol)25.2g，HOBT(MW：153，200mmol)30.6g，600mlDMF，将混合物25℃反应1小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得。
(7)Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-脂的制备
上一步骤所得树脂加入2mol/L HCl/异丙醇315ml(2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3倍)与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10％三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加53.1g(FW：265.3，200mmol)Boc-Phe-OH、DIC(MW：126.2，200mmol)25.2g，HOBT(MW：153，200mmol)30.6g，600mlDMF，将混合物25℃反应l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得。
(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
上一步骤所得树脂加入2mol/L HCl/异丙醇315ml(2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3.5倍)与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10％三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加92.7g(FW：463.6，200mmol)Boc-Cys(Trt)-OH、DIC(MW：126.2，200mmol)25.2g，HOBT(MW：153，200mmol)30.6g，600mlDMF，将混合物25℃反应l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
(9)Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
上一步骤所得树脂加入2mol/L HCl/异丙醇315ml(2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3倍)与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10％三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加53.1g(FW：265.3，200mmol)Fmoc-D-Phe-OH、DIC(MW：126.2，200mmol)25.2g，HOBT(MW：153，200mmol)30.6g，600ml DMF，将混合物25℃反应l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
(10)Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
上一步骤所得树脂加入2mol/L HCl/异丙醇630ml(2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的4.5倍)与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃搅拌30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。
再用无水甲醇洗涤十次。抽干后，放入真空干燥器中干燥，称重，得八肽树脂约190.7g，接肽总收率约为84％。
(11)还原型奥曲肽D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制备
取190g八肽树脂加无水甲醇，加10克5％钯/碳，通入氢气，密闭，25℃搅拌4小时以上。过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤三次，减压浓缩至油状物。加入300毫升20％的六氢吡啶的无水甲醇溶液(体积比)，25℃反应30分钟。减压浓缩至油状物。DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得92g还原型奥曲肽粗品。
二、二硫键成环
将90g还原型奥曲肽粗品溶于90L水，在搅拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8，室温下向该溶液中通入空气，以使二硫键进行成环反应约24-36小时(已经发现，此成环反应在24～36小时范围内对于醋酸奥曲肽成品的收率没有明显影响，成品摩尔收率均在31～33％范围内)，加冰醋酸调至pH5.5，加活性碳搅拌30分钟，过滤。
三、分离纯化
二硫键成环时所得全部滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25mol/L醋酸钾：乙腈(7.2：2.8)；流速为：800ml/min；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，检测波长为：280nm；样品峰合并后，去盐、冻干，白色疏松块状物为醋酸奥曲肽成品，从还原型奥曲肽到醋酸奥曲肽成品的收率为31.2～32.7％(以摩尔百分数计，涉及二硫键成环以及分离纯化两部分操作中的不同操作条件例如二硫键成环时的成环反应时间约24-36小时的收率范围，下同)。
实施例2：醋酸奥曲肽的制备
一、合成肽链
同实施例1。
二、二硫键成环
将90g还原型奥曲肽粗品溶于90L水，在搅拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8，室温下向该溶液中通入空气(所用的空气预先依次通过饱和氢氧化钙溶液和2.5M硫酸溶液)，以使二硫键进行成环反应约24-36小时，加冰醋酸调至pH5.5，加活性碳搅拌30分钟，过滤。
三、分离纯化
二硫键成环时所得全部滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25mol/L醋酸钾：乙腈(7.2：2.8)；流速为：800ml/min；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，检测波长为：280nm；样品峰合并后，去盐、冻干，白色疏松块状物为醋酸奥曲肽成品，从还原型奥曲肽到醋酸奥曲肽成品的收率为57.7～59.4％(以摩尔百分数计)。
实施例3：醋酸奥曲肽的制备
一、合成肽链
同实施例1。
二、二硫键成环
将90g还原型奥曲肽粗品溶于90L水，在搅拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8，室温下向该溶液中通入空气(所用的空气预先依次通过2.5M硫酸溶液和饱和氢氧化钙溶液)，以使二硫键进行成环反应约24-36小时，加冰醋酸调至pH5.5，加活性碳搅拌30分钟，过滤。
三、分离纯化
二硫键成环时所得全部滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25mol/L醋酸钾：乙腈(7.2：2.8)；流速为：800ml/min；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，检测波长为：280nm；样品峰合并后，去盐、冻干，白色疏松块状物为醋酸奥曲肽成品，从还原型奥曲肽到醋酸奥曲肽成品的收率为29.6～31.2％(以摩尔百分数计)。
实施例4：醋酸奥曲肽的制备
一、合成肽链
同实施例1。
二、二硫键成环
将90g还原型奥曲肽粗品溶于90L水，在搅拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8，室温下向该溶液中通入空气(所用的空气通过2.5M硫酸溶液)，以使二硫键进行成环反应约24-36小时，加冰醋酸调至pH5.5，加活性碳搅拌30分钟，过滤。
三、分离纯化
二硫键成环时所得全部滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25mol/L醋酸钾：乙腈(7.2：2.8)；流速为：800ml/min；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，检测波长为：280nm；样品峰合并后，去盐、冻干，白色疏松块状物为醋酸奥曲肽成品，从还原型奥曲肽到醋酸奥曲肽成品的收率为25.2～27.3％(以摩尔百分数计)。
实施例5：醋酸奥曲肽的制备
一、合成肽链
同实施例1。
二、二硫键成环
将90g还原型奥曲肽粗品溶于90L水，在搅拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8，室温下向该溶液中通入空气(所用的空气通过饱和氢氧化钙溶液)，以使二硫键进行成环反应约24-36小时，加冰醋酸调至pH5.5，加活性碳搅拌30分钟，过滤。
三、分离纯化
二硫键成环时所得全部滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25mol/L醋酸钾：乙腈(7.2：2.8)；流速为：800ml/min；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，检测波长为：280nm；样品峰合并后，去盐、冻干，白色疏松块状物为醋酸奥曲肽成品，从还原型奥曲肽到醋酸奥曲肽成品的收率为29.3～29.8％(以摩尔百分数计)。
以下各组合物例用实施例2所得醋酸奥曲肽作为原料药。
组合物例1：醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制备
醋酸奥曲肽注射液处方：
醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、
甘露醇45g、
乳酸3.4g、
碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、
注射用水适量加至1000ml。
制法：
取处方量的甘露醇、7/10处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至30℃，加入碳酸氢钠调pH至4.0，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽和余量的乳酸，加30℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至4.0；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至4.0，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
在本组合物例1的补充试验中，已经发现，用碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7的整个范围内，例如pH至3.7、pH至4.2、pH至4.6时，所得注射液在检测例2中的结果与上述组合物例1注射液相同。
组合物例2：醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制备
醋酸奥曲肽注射液处方：
醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、
甘露醇45g、
乳酸3.4g、
碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、
注射用水适量加至1000ml。
制法：
取处方量的甘露醇和乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至30℃，加入碳酸氢钠调pH至4.0，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽加30℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至4.0；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至4.0，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
组合物例3：醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制备(#700BE6)
醋酸奥曲肽注射液处方：
醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、
甘露醇45g、
乳酸3.4g、
碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、
注射用水适量加至1000ml。
制法：
取处方量的甘露醇、乳酸加注射用水800ml，搅拌溶解后，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至15℃，加入处方量的醋酸奥曲肽，搅拌溶解后，加入碳酸氢钠调pH至4.6，加注射用水至1000ml。经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
在本组合物例3的补充试验中，已经发现，用碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7的整个范围内，例如pH至3.7、pH至4.0时，所得注射液在检测例2中的结果与上述组合物例3注射液相同。
组合物例11：醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制备
醋酸奥曲肽注射液处方：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、蔗糖2g、碳酸氢钠适量调pH至4.0、注射用水适量加至1000ml。
方法制备得到的：
取处方量的甘露醇、7/10处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至25℃，加入碳酸氢钠调pH至4.0，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽、蔗糖和余量的乳酸，加25℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至4.0；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至4.0，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
组合物例12：醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制备
醋酸奥曲肽注射液处方：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇40g、乳酸4g、蔗糖1g、碳酸氢钠适量调pH至3.7、注射用水适量加至1000ml。
方法制备得到的：
取处方量的甘露醇、2/3处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至30℃，加入碳酸氢钠调pH至3.7，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽、蔗糖和余量的乳酸，加30℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至3.7；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至3.7，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
组合物例13：醋酸奥曲肽注射液药物组合物的制备
醋酸奥曲肽注射液处方：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇50g、乳酸3g、蔗糖3g、碳酸氢钠适量调pH至4.7、注射用水适量加至1000ml。
方法制备得到的：
取处方量的甘露醇、3/4处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至15℃，加入碳酸氢钠调pH至4.7，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽、蔗糖和余量的乳酸，加15℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至4.7；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至4.7，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
对于以上组合物例1、组合物例2、组合物例11、组合物例12、组合物例13，测定其第二步骤即醋酸奥曲肽与乳酸等混合并经炭处理前后活性成分的损失情况，即醋酸奥曲肽与乳酸等混合物经针用炭处理并经脱炭后所得混合液除以理论投料量再乘以100％所得百分数，作为活性成分残余百分数，此残余百分数越大表示活性成分在炭处理过程中的损失越小。
经测定，组合物例1、组合物例2以及组合物例1在不同pH值设计的补充试验所得组合物注射液，它们的残余百分数均在92.2～93.6％范围内，显示有明显的药物损失，这种损失是由于炭吸附造成的(原因在于，经考察，在本发明各种组合物例中，在未经炭吸附处理的情况下药液经钛棒或者微孔滤膜过滤时的药物损失均小于0.5％即残余百分数均大于99.5％，例如组合物例3活性成分未与炭一起处理所得注射液的残余百分数为99.7％)；
组合物例11、组合物例12、组合物例13所得各组合物注射液，它们的残余百分数均在99.4～100.1％范围内，显示这些实例中无活性成分的损失。
补充试验例：参照组合物例1，不同的是将小部分甘露醇即2g甘露醇在第二步骤中添加与活性药物一起与炭处理，结果显示此时残余百分数为93.3％，表明甘露醇不能获得蔗糖的效果。
检测例1：对醋酸奥曲肽进行质量检测
照《中国药典》2015年版二部第1544页所收载的醋酸奥曲肽中的有关物质检查方法和含量测定方法以及其它检测指标，测定本发明实施例1-5所得终产物醋酸奥曲肽成品。经测定，实施例1-5所得五批醋酸奥曲肽成品：
比旋度均在-69.4°～-73.2°范围内，各样品无明显区别且均符合标准规定；
各氨基酸的相对比值分别在如下范围内：半胱氨酸1.93～2.10，苏氨酸0.88～1.06，苯丙氨酸1.92～2.10，赖氨酸0.95～1.03，且均能检出苏氨醇，各样品无明显区别且均符合标准规定；
醋酸含量均在7.7％～9.2％范围内，各样品无明显区别且均符合标准规定；
有关物质检查结果显示，单个杂质均在0.17～0.28％范围内，总杂质均在0.66～0.75％范围内，各样品无明显区别且均符合标准规定；
含量测定结果显示，按无水、无醋酸物计，含醋酸奥曲肽以奥曲肽(C49H66N10O10S2)计均在97.7～100.3％范围内，各样品无明显区别且均符合标准规定。
检测例2：注射液药物组合物的性质考察：
使组合物例1-3和组合物例11-13所得6批注射液照《中国药典》2015年版二部第1545页所收载的醋酸奥曲肽注射液项下的各项检测方法进行检测，结果显示全部注射液均匀符合标准规定。并且全部注射液的澄明度(其照《中国药典》2015年版二部第1544页所收载的醋酸奥曲肽原料药的溶液的澄清度与颜色项下的方法检查)均匀符合规定，均为无色澄明液体。
使组合物例1-3和组合物例11-13所得6批注射液置4℃温度环境下放置7天、再在28℃温度环境下放置7天，如此完成一个循环；进行四个此循环共56天，在第0天以及第56天各注射液照《中国药典》2015年版二部第1545页所收载的醋酸奥曲肽注射液项下的各项检测方法进行检测，以考察药物在高低温交替条件下的物理稳定性。结果显示，全部注射液的含量和有关物质在0天和56天均符合标准规定，除了澄明度外的其它各项指标在0天和56天亦均符合标准规定。但是注射液在56天的澄明度出现不同的变化，即，组合物例1和组合物例11-13注射液在56天的澄明度符合标准规定，为无色澄明液体；而组合物例2和组合物例3注射液在56天的澄明度均不符合标准规定，均呈现白色混浊物。这表明，即使采用相同处方，不同方法制得的注射液呈现不同的物理稳定性。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (10)

1.醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇40～50g、乳酸3～4g、蔗糖1～3g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。
2.根据权利要求1的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇42～48g、乳酸3.2～3.6g、蔗糖1.5～2.5g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。
3.根据权利要求1的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、蔗糖2g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。
4.根据权利要求1的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其是照包括如下步骤的方法制备得到的：
取处方量的甘露醇、2/3～3/4处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至15～30℃，加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽、蔗糖和余量的乳酸，加15～30℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至3.7～4.7，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
5.制备醋酸奥曲肽的方法，包括如下步骤：
以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应；
用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽；
将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9，室温通空气24-36小时使二硫键成环，加冰醋酸，加活性碳，过滤，得奥曲肽粗品；
奥曲肽粗品经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。
6.根据权利要求5的方法，其中在进行二硫键成环的过程中，所用的空气预先依次通过饱和氢氧化钙溶液和2.5M硫酸溶液处理。
7.根据权利要求5的方法，其中，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：
(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
使Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物为Boc-Thr(tBu)-OCs；[在本步骤的一个实施方案中，碳酸铯的摩尔数为Boc-Thr(tBu)-OH的1～5倍]
(2)Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs和DMF使进行反应；过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂[在本步骤的一个实施方案中，Boc-Thr(tBu)-OCs的摩尔数为树脂的1～3倍；在一个实施方案中，氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时]；
(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：
在步骤(2)的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10％三乙胺的DCM溶液(体积比)反应，抽干，DCM洗涤；加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(3)的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(5)Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(4)的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(6)Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(5)的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-D-Trp-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(7)Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(6)的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(7)的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(9)Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10％三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Fmoc-D-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干，即得[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]；
(10)Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
在步骤(9)的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干；再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂[在一个实施方案中，脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L～9mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的2～8倍，例如2.5～5.5倍]。
8.根据权利要求5的方法，其中，
用钯/碳，氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，其包括如下步骤：取所述八肽树脂加无水甲醇、5％钯/碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，使反应，减压浓缩至油状物，DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品[在一个实施方案中，5％钯/碳用量为树脂的1/10至5/10(质量比)]；和/或
粗品经C18柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25-0.5mol/L醋酸钾：乙腈＝7-8：3-2；流速为：600-1000ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。
9.一种醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其组成为：醋酸奥曲肽以奥曲肽计0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、碳酸氢钠适量调pH至3.7～4.7、注射用水适量加至1000ml。
10.根据权利要求9的醋酸奥曲肽注射液药物组合物，其是照包括如下步骤的方法制备得到的：
取处方量的甘露醇、7/10处方量的乳酸加注射用水700ml，搅拌溶解，加0.1％活性炭，加热至80℃搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液冷却至30℃，加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7例如4.0，备用；
另取处方量的醋酸奥曲肽和余量的乳酸，加30℃注射用水100ml，加0.1％活性炭搅拌30分钟，经钛棒循环脱炭，滤液加入碳酸氢钠调pH至3.7～4.7例如4.0；
使两种滤液合并，必要时用碳酸氢钠调pH至3.7～4.7例如4.0，加注射用水至1000ml；经蠕动泵送至无菌室中，经0.22μm的微孔滤膜过滤至澄明并除菌，按每瓶1ml的装量灌装于玻璃瓶中，密封，即得醋酸奥曲肽注射液药物组合物。
CN201710259895.4A 2017-04-20 2017-04-20 醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽 Active CN106860854B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710259895.4A CN106860854B (zh) 2017-04-20 2017-04-20 醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710259895.4A CN106860854B (zh) 2017-04-20 2017-04-20 醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106860854A true CN106860854A (zh) 2017-06-20
CN106860854B CN106860854B (zh) 2021-02-26

Family

ID=59162757

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710259895.4A Active CN106860854B (zh) 2017-04-20 2017-04-20 醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106860854B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109432394A (zh) * 2018-10-18 2019-03-08 成都天台山制药有限公司 醋酸奥曲肽注射液药物组合物及其用途
CN111346214A (zh) * 2020-05-13 2020-06-30 吉林吉力生物技术研究有限公司 一种动物注射用醋酸奥曲肽冻干粉针剂及其制备方法和应用
CN114146054A (zh) * 2020-09-07 2022-03-08 深圳市健元医药科技有限公司 一种醋酸奥曲肽注射液的制备工艺

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102526700A (zh) * 2011-12-31 2012-07-04 江苏奥赛康药业股份有限公司 一种注射用醋酸奥曲肽冻干组合物及其制备方法
CN103351426A (zh) * 2013-08-02 2013-10-16 上海苏豪逸明制药有限公司 一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法
CN106543269A (zh) * 2016-11-01 2017-03-29 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 一种奥曲肽工业化生产的合成方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102526700A (zh) * 2011-12-31 2012-07-04 江苏奥赛康药业股份有限公司 一种注射用醋酸奥曲肽冻干组合物及其制备方法
CN103351426A (zh) * 2013-08-02 2013-10-16 上海苏豪逸明制药有限公司 一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法
CN106543269A (zh) * 2016-11-01 2017-03-29 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 一种奥曲肽工业化生产的合成方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
熊野娟: "《药物制剂技术》", 30 September 2015, 复旦大学出版社 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109432394A (zh) * 2018-10-18 2019-03-08 成都天台山制药有限公司 醋酸奥曲肽注射液药物组合物及其用途
CN109432394B (zh) * 2018-10-18 2022-02-01 成都天台山制药有限公司 醋酸奥曲肽注射液药物组合物及其用途
CN111346214A (zh) * 2020-05-13 2020-06-30 吉林吉力生物技术研究有限公司 一种动物注射用醋酸奥曲肽冻干粉针剂及其制备方法和应用
CN114146054A (zh) * 2020-09-07 2022-03-08 深圳市健元医药科技有限公司 一种醋酸奥曲肽注射液的制备工艺
CN114146054B (zh) * 2020-09-07 2022-12-02 深圳市健元医药科技有限公司 一种醋酸奥曲肽注射液的制备工艺

Also Published As

Publication number Publication date
CN106860854B (zh) 2021-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106866788A (zh) 醋酸奥曲肽制备和醋酸奥曲肽注射液药物组合物
DK172456B1 (da) Lægemidler indeholdende insulinderivater til behandling af diabetes mellitus
CN100411683C (zh) 含有生长素释放肽的药物组合物
KR101087859B1 (ko) 인슐린친화성 펩타이드 합성법
CN103443122B (zh) 人胰岛素类似物及其酰化衍生物
EP2894168A1 (en) Glucagon-like peptide-1 analogue monomer and dimer, preparation method therefor and application thereof
CN101463081B (zh) 一种glp-1衍生物
PT98124A (pt) Processo para a preparacao de novos analogos de insulina com accao prolongada e de composicoes farmaceuticas que os contem
JPS61293997A (ja) 生活性リジン含有オクタペプチド及びその調整方法
CN108271356A (zh) 肠降血糖素-胰岛素缀合物
CN102321170B (zh) 利拉鲁肽变构体及其缀合物
CN104114575B (zh) 具有降血糖作用的化合物、组合物及其用途
CN102532301A (zh) 一类新型的Exendin-4类似物及其制备方法
CN110317258A (zh) 一种索玛鲁肽的新多肽片段及其制备方法
CN106860854A (zh) 醋酸奥曲肽注射液药物组合物和醋酸奥曲肽
EP0155786B1 (en) New peptide, and production and use thereof
CN109432394B (zh) 醋酸奥曲肽注射液药物组合物及其用途
CN106986924A (zh) 胃泌酸调节素（oxm）类似物及其应用
CN107266557A (zh) 一种聚乙二醇修饰的胰高血糖素样肽‑1类似物
KR20230038187A (ko) 아프라글루타이드의 제조, 제형화 및 투여
US6346601B1 (en) Procedure for obtaining the somatostatin analog, octreotide
CN108676084B (zh) 艾塞那肽的修饰物及其应用
CN104844693A (zh) 一种合成利那洛肽的方法
CN110862448A (zh) 两性离子多肽修饰的glp-1衍生物及其制备方法和应用
CN109187804B (zh) 制备醋酸奥曲肽的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 611531 Tiantaishan Pharmaceutical Co., Ltd., 88 Tianxing Avenue, Qionglai City, Chengdu City, Sichuan Province

Patentee after: Chengdu Tiantaishan Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 611531 Tiantaishan Pharmaceutical Co., Ltd., 88 Tianxing Avenue, Qionglai City, Chengdu City, Sichuan Province

Patentee before: CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.