CN106831952A - 一种用以形成药物复合物的自组装蛋白 - Google Patents

Abstract

本发明涉及的是一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，属于生物技术领域。所述自组装蛋白具有SEQ ID NO 1氨基酸残基序列，其通式为：QQCTTGQLQCCESTSTANDPATSELLGLIGVVISDVDA LVGLTCSPISVIGVGSGSACTANPVCCDSSPIGGLVSIGCVPVNV SEQ ID NO 1，基于该自组装蛋白的载剂及由该载剂制备的药物组合物能作为GLP‑1的口服给药载体用于2型糖尿病治疗。

Description

一种用以形成药物复合物的自组装蛋白

技术领域

本发明涉及药物辅料领域，具体而言，本发明涉及一种自组装蛋白及其制备方法和用途，该自组装蛋白具有与胰高血糖样素肽-1(GLP-1)形成复合物的能力，能够增加药物对生物体内降解因素的稳定性，使GLP-1能够口服吸收。

背景技术

生物技术药物(特别是核酸分子、蛋白质、多肽)作为药物的研究取得了快速发展，在2009年的一份调查报告中，324种生物技术药物(包括临床试验或者正在接受管理部门审查的药物)几乎覆盖了150种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病以及艾滋病等传染病。但是核酸分子、蛋白质和多肽也存在突出的问题，如给药系统的不完善，稳定性差，在体内半衰期短，生物利用率低等。通过修饰来优化生物药物的代谢动力学特性，以延长其半衰期是经常采用的方法，而修改过程中一些生物药物会部分或全部失活。所以，寻找一种简便的、稳定的药物载体将具有重要的意义。

发明内容

本发明涉及使用具有特殊理化性质的多肽与其他极性药物形成复合物，能够有效提高药物在血液中的半衰期及稳定性。

本发明的一个目的是针对GLP-1在体内存留时间较短，提供了一种能与GLP-1形成复合物的自组装蛋白，以增加GLP-1对生物体内降解因素的稳定性，达到口服GLP-1药物用于治疗2型糖尿病目的。

本发明的另一个目的是提供了包括所述自组装蛋白的载剂，及其在制备药物组合物中的应用。

本发明的另一个目的是提供了自组装蛋白与极性药物形成的复合物与药学上可接受的辅料(包括：载体材料、赋形剂、稳定剂或稀释剂等等)形成的药物组合物及其制备方法。

结合本发明的目的对本发明逐一加以描述：

一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述自组装蛋白具有SEQID NO 1氨基酸残基序列，其通式为：QQCTTGQLQCCESTSTANDPATSELLGLIGVVISDVDALVGLTCSPISVIGVGSGSACTANPVCCDSSPIGGLVSIGCVPVNV SEQ ID NO 1

序列1中的自组装蛋白的特点为人工发酵制备的83个氨基酸的蛋白，并且此蛋白具有自组装功能。

作为本发明的进一步方案，所述自组装蛋白与可接受盐、酯、醚、酰胺或其混合物形成药物复合物，用以制备药物载体。

本发明所述的药物组合物可以采用本领域公知的一般技术制备。

作为本发明的进一步方案，自组装蛋白与其他药物的分子摩尔比为10:1到1:100；优选地，所述摩尔比为10:1～1:50。

在本发明的一个实施方案中，将自组装蛋白能与其他药物制成不同比例的复合物，以摩尔计算，从25:1到1:50，不同的比例得到的复合物具有不同的释放特性。按照摩尔比例，称取适量的药物，溶于适量的生理盐水、纯水、PBS缓冲液、或含一定比例(20％以下)的有机溶剂的上述溶液中，称取适量的自组装蛋白，溶于适量的不同pH值的磷酸缓冲液中，在0－5℃温度下，超声混合1－15分钟，或者搅拌1－3小时，或者放置过夜，溶液可以直接加辅料做成制剂，也可以冷冻干燥后再与其他辅料一起制成制剂。

作为本发明的进一步方案，所述药物组合物的剂型为冻干粉。

作为本发明的进一步方案，提供了剂型为冻干粉的药物组合物的制备方法，其包括步骤：

1)取GLP-1和自组装蛋白溶液适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、滲透压调节剂等，加入注射用水适量，调节pH值至3或7使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0.1-0.5％活性炭，在0－10℃下搅拌10-20分钟，除去活性炭，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即得。

与现有技术相比，本发明的积极效果是：

本发明的载剂能延长药物在体内的浓度持续时间，保证GLP-1分子的口服稳定性；

附图说明

图1表示实施例2中GLP-1与自组装蛋白组合后具有口服降糖功能。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例仅为解释性的内容，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。

实施例1GLP-1多肽与自组装蛋白的复合物

称取90mg自组装蛋白冻干粉溶于溶于1ml pH 3.0的磷酸缓冲液中，然后称取0.3mg的GLP-1冻干粉，加入上述自组装蛋白的溶液中，充分混匀后，在4℃温度下，搅拌3小时，冷冻干燥得到复合物固体粉末。

实施例2GLP-1多肽与自组装蛋白的复合物

称取90mg自组装蛋白冻干粉溶于溶于1ml pH 7.0的磷酸缓冲液中，然后称取6mg的GLP-1冻干粉，加入上述自组装蛋白的溶液中，充分混匀后，在4℃温度下，搅拌3小时，冷冻干燥得到复合物固体粉末。

实施例3药物组合物的制备

将加泊洛沙姆0.05g，甘露醇0.2g、乳糖0.1g、注射用水3ml置于10ml的容器中，搅拌使溶解，加1mol/L的枸橼酸或氢氧化钠调节pH至3.0，冷却致5℃，取实施例3方法制备的复合物溶液5ml加入其中，继续调补pH至3.0，加水至10ml。加入10mg活性碳，在5℃下搅拌20分钟，过滤除去活性炭，采用微孔滤膜(Millipore,Inc)过滤除菌，滤液按每支0.2ml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥12小时,至样品温度到5℃后，再干燥2小时，制得白色疏松块状物，封口即得复合物的药物组合物，置于预充式的注射器中，规格为100ug/支，4℃以下保存。

实施例4自组装蛋白与GLP-1组合物的体内半衰期实验

本实施例使用SD大鼠5组，每组10只，其得自上海SLAC动物中心。

将大鼠血清与自组装蛋白—GLP-1的复合物(折合GLP-1为1000μg/kg，GLP-1与自组装蛋白的摩尔比例分别为10：1,1:1,1:10及1:25,分别于孵育后0.5、1、3、6、9、12、24、36、48、72及96小时后采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测大鼠血清中GLP-1的浓度，操作如下：血清与100mM的醋酸铵在室温赋予10分钟后，用GLP-1EIA试剂盒(PhoenixPharmaceuticals,INC)对鼠血浆中的GLP-1的浓度进行测定。试验方法参照公司说明书进行GLP-1浓度测定,并根据结果评价GLP-1稳定性。

GLP-1及其复合物的体内药代动力学结果见表1，结果显示本发明的GLP-1复合物在体内的半衰期较单独的GLP-1明显延长，具有长效特性。

表1GLP-1及其复合物在大鼠体内的半衰期

实施例6自组装蛋白与GLP-1复合物的口服降血糖实验

取自组装蛋白与GLP-1的复合物(摩尔比1：1和1：10)的样品，口服给药SD大鼠。大鼠每天口服葡萄糖(2g/kg)，在单次口服给药后每日测定血糖水平，结果见图1。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性的实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (8)

1.一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述自组装蛋白具有SEQ IDNO 1氨基酸残基序列，其通式为：

QQCTTGQLQCCESTSTANDPATSELLGLIGVVISDVDALVGLTCSPISVIGVGSGSACTANPVCCDSSPIGGLVSIGCVPVNV SEQ ID NO 1。

2.根据权利要求1所述的一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述自组装蛋白与可接受盐、酯、醚、酰胺或其混合物形成药物复合物，用以制备药物载体。

3.根据权利要求2所述的一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述药物复合物中自组装蛋白与可接受盐、酯、醚、酰胺或其混合物的摩尔比为10:1～1:100。

4.根据权利要求2或3所述的一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述药物复合物中自组装蛋白与可接受盐、酯、醚、酰胺或其混合物的摩尔比为10:1～1:50。

5.根据权利要求2所述的一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述药物载体为GLP-1。

6.根据权利要求1所述的一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述药物复合物的剂型为冻干粉或溶液口服剂型。

7.根据权利要求6所述的一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述溶液口服剂型中以多肽为载剂。

8.根据权利要求6所述的一种用以形成药物复合物的自组装蛋白，其特征在于，所述剂型为冻干粉的药物复合物，其制备方法如下：取GLP-1和自组装蛋白溶液适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、滲透压调节剂等，加入注射用水适量，调节pH值至3或7使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0.1-0.5％活性炭，在0－10℃下搅拌10-20分钟，除去活性炭，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即得。