CN106800580B - 甾醇类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07J—STEROIDS
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Abstract
本发明公开了β‑谷甾醇、β‑豆甾醇以及胆固醇的甾醇类衍生物，如式VI表示。本发明还公开了该甾醇类衍生物的制备方法。本发明还公开了该甾醇类衍生物在制备促伤口愈合药物方面的应用。本发明从易得的天然产物出发，分别以β‑谷甾醇、β‑豆甾醇以及胆固醇为起始原料，合成方法简单，具有较好的可操作性和反应收率。制得的甾醇类衍生物具有明显的促伤口愈合活性，对L929成纤维细胞的增殖、迁移及胶原合成能力均明显高于原料和阳性对照药重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。本发明制得的甾醇类衍生物相比蛋白类药物(如bFGF)，其剂型和用药方式也更加多样化，为其在促伤口愈合领域中的应用提供参考。
Description
技术领域
本发明属于药物合成领域，涉及β-谷甾醇、β-豆甾醇、胆固醇的甾醇类衍生物及其制备方法，以及该类化合物在促进伤口愈合方面的应用。
背景技术
伤口愈合是指机体遭受外力作用，皮肤等组织出现离断或缺损后的愈复过程。它分为急性伤口(如穿透性损伤、烧伤等)、慢性伤口(如静脉溃疡、褥疮溃疡)、缺乏免疫力个体的伤口(如老年人或糖尿病及其他慢性疾病患者的脉管系统损伤等)。当脉管系统损伤不能愈合将会引发失明、神经损伤、肾衰竭、心脏病等慢性并发症，进而导致截肢甚至死亡；而中国人口学家最新研究预计，到2050年，中国65岁以上的老年人口将达到3.6亿，占总人口比重超1/4；根据IDF(国际糖尿病联盟)统计，2015年中国糖尿病患者约有1.09亿人(每11个人就有1人患有糖尿病)，预测到2040年，中国糖尿病患者将达到1.51亿，居世界首位。因此，介于人口老龄化问题加剧与糖尿病患者逐年增多，寻找提高愈合速率的药物，已经成为亟待解决的关键问题之一。
β-谷甾醇(β-sitosterol)和β-豆甾醇(Stigmasterol)是植物甾醇类成分，广泛存在于自然界的各种植物油、坚果等植物种子种，具有显著的抗氧化、抗肿瘤、抗心血管病等多种药理活性。胆固醇(Cholesterol)是动物甾醇类成分，广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富，其为动物体内所必须的胆酸、细胞膜、激素的重要原料，具有重要的生理地位。
介于β-谷甾醇、β-豆甾醇、胆固醇活性高、毒性低、应用广，其结构与强心甾类化合物具有相似之处，而且其衍生物作为促伤口愈合药物的应用方面的研究未见报道。因此，基于以上背景，本发明合成了一系列甾醇类衍生物，并进行了促进伤口愈合方面的研究和应用。
发明内容
本发明的目的是通过对β-谷甾醇、β-豆甾醇、胆固醇进行结构修饰，增强其促伤口愈合作用，提供一系列β-谷甾醇、β-豆甾醇、胆固醇类衍生物。
本发明的另一个目的是提供衍生物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供衍生物的用途。
本发明的目的是通过技术方案实现的：
如式VI所示的甾醇类衍生物：
其中，R1选自R2，R3相同或不同，各自独立的选自或R4选自C1-C10烷基、C3-C10环烷基、苄基、C3-C20烯基。
作为优选方案，R1选自R2，R3相同或不同，各自独立的选自或R4选自C1-C6烷基、C3-C6环烷基、R5选自氢、氟、氯、溴、氨基、硝基、C1-C5烷基、卤代C1-C5烷基、C1-C5烷氧基；n＝1～5的整数；R6，R7相同或不同，各自独立的选自H、C1-C5烷基。
作为进一步的优选方案，R1选自R2，R3相同或不同，各自独立的选自或R4选自C1-C6直链烷基以及C3-C5支链烷基、C3-C6环烷基、
其中，C1-C6直链烷基优选自以下基团：-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9；
C3-C5支链烷基优选自以下基团：
C3-C6环烷基优选自以下基团：
优选自以下基团：
优选自以下基团：
本发明所述的甾醇类衍生物优选自：(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-甲基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-甲基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-乙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β肟基-乙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-仲丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-仲丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-叔丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-叔丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-邻甲基苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-邻甲基苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间甲基苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间甲基苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-对甲基苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-对甲基苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氟苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氟苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间溴苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间溴苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氯苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氯苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-2’-丙烯基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-2’-丙烯基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-4-烯。
本发明所述的甾醇类衍生物的制备方法：
以β-谷甾醇或β-豆甾醇或胆固醇与二氯甲烷为原料，在氯铬酸吡啶鎓(PCC)催化下生成谷甾-4-烯-3，6-二酮或豆甾-4-烯-3，6-二酮或胆甾-4-烯-3，6-二酮，即式II化合物；其反应式为：
所述的R1选自所述的β-谷甾醇或β-豆甾醇或β-胆固醇与二氯甲烷摩尔比为1∶3。
所述的氧化剂为氯铬酸吡啶鎓。所述的β-谷甾醇或β-豆甾醇或胆固醇与氯铬酸吡啶鎓的摩尔比为1∶1.5；反应温度为25～35℃。
进一步的，反应结束后，反应液降至室温，用装有硅藻土的滤饼过滤，减压蒸干溶剂，得到的残留物经硅胶柱层析，洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯＝15∶1(V/V)，得到淡黄色晶体谷甾-4-烯-3，6-二酮或豆甾-4-烯-3，6-二酮或胆甾-4-烯-3，6-二酮。
本发明中优选β-谷甾醇与二氯甲烷为原料，以氯铬酸吡啶鎓为氧化剂，在温度为25～35℃下反应生成β-谷甾醇衍生物，即谷甾-4-烯-3，6-二酮。
当R4为选自C1-C10烷基、C3-C10环烷基、苄基、C3-C20烯基时，合成步骤包括：
1)以盐酸羟胺和乙酸乙酯为原料，在氢氧化钠水溶液催化下先反应生成乙酰羟肟酸；2)乙酰羟肟酸再进一步与溴代烷烃反应后得到一系列烷烃类肟基甲酯化合物；3)最后用浓盐酸水解烷烃类肟基甲酯得到一系列烷氧基胺盐酸盐，即式III化合物；其反应式为：
所述的C1-C10烷基优选自C1-C6烷基、C3-C5支链烷基。
最优选的，C1-C6直链烷基选自-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9。
最优选的，C3-C5支链烷基选自
所述的C3-C10环烷基优选自C3-C6环烷基。
最优选的，C3-C6环烷基选自：
所述的苄基优选自其中R5选自氢、氟、氯、溴、氨基、硝基、C1-C5烷基、卤代C1-C5烷基、C1-C5烷氧基。
最优选的，选自以下基团：
所述的C3-C20烯基优选自其中，n＝1～5的整数，R6，R7相同或不同，各自独立的选自H、C1-C5烷基。
最优选的，选自以下基团：
反应步骤1)中，反应温度为0℃，盐酸羟胺与乙酸乙酯、氢氧化钠的摩尔比为1∶1.75∶2.25。
反应步骤2)中，反应温度为0℃～50℃，乙酰羟肟酸与溴代烷的摩尔比为1∶1.5。
进一步的，反应结束后，反应液降至室温，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体，即一系列烷烃类肟基甲酯化合物。
反应步骤3)中，反应温度为65℃，烷烃类肟基甲酯与盐酸的摩尔比为1∶1。
进一步的，反应结束后，反应液降至室温，减压浓缩后得到淡黄色晶体，即一系列烷氧基胺盐酸盐。
最后，将式II化合物与式III化合物在乙醇中，以醋酸钠为催化剂反应得到式VI甾醇类衍生物，其反应式为：
所述的R1选自R2，R3相同或不同，各自独立的选自或R4选自C1-C6直链烷基以及C3-C5支链烷基、C3-C6环烷基、 R5选自氢、氟、氯、溴、氨基、硝基、C1-C5烷基、卤代C1-C5烷基、C1-C5烷氧基；n＝1～5的整数；R6，R7相同或不同，各自独立的选自H、C1-C5烷基。
所述反应在45℃条件下进行；式II化合物与式III化合物的摩尔比为1∶3。
进一步的，反应结束后，反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，得到式VI所示的甾醇类衍生物。
本发明提供的甾醇类衍生物的制备及改善伤口愈合疾病中的应用，所述的甾醇类衍生物具有明显的促伤口愈合作用。
经验证，本发明提供的甾醇类衍生物具有明显的细胞增殖活性，促进细胞迁移活性，促进可溶性胶原合成活性，对L929成纤维细胞的增殖、迁移、促胶原合成作用均明显高于原料及阳性药重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。本发明所述的甾醇类衍生物在25μM/L浓度下的促L929成纤维细胞增殖作用在14.7％～46.2％之间，最优化合物30的增殖活性达到为46.2％。本发明所述的甾醇类衍生物在对急性伤口疾病、慢性伤口疾病以及缺乏免疫力个体患有的慢性并发症具有非常好的改善效果。
具体的，所述伤口愈合疾病包括急性伤口疾病、慢性伤口疾病、缺乏免疫力个体患有的慢性并发症。
进一步的，所述的急性伤口疾病包括烧伤、烫伤、穿透性损伤；所述的慢性伤口疾病包括静脉溃疡、褥疮溃疡；所述的缺乏免疫力个体患有的慢性并发症包括糖尿病患者、老年人以及先天患有缺乏免疫力类疾病的人群因脉管系统损伤不能愈合引发的失明、神经损伤、肾衰竭、心脏病、截肢、死亡。
本发明提供的甾醇类衍生物作为促伤口愈合药物在改善伤口愈合疾病中的应用，所述药物包括以甾醇类衍生物为主要活性成分，或者以甾醇类衍生物为配料制成的药物。
进一步地，所述药物由所述甾醇类衍生物与采用药剂学上可接受的工艺和辅料制备而成的包合物、脂质体、微球、纳米材料或乳剂。
具体地，所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂中的任一种；所述丸剂包括滴丸剂和软胶丸剂。
此外，本发明提供的甾醇类衍生物除了制备成药物外，还可以制备成保健品或食品中。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1)本发明从易得的天然产物出发，以β-谷甾醇或β-豆甾醇或β-胆固醇为起始原料，合成了一系列3位及3、6位取代的甾醇类衍生物，合成方法简单，具有较好的可操作性和反应收率，以β-谷甾醇或β-豆甾醇或β-胆固醇为原料，首先将3位羟基和5位双键氧化，该步收率在80％以上，在此基础上与不同的烷氧基胺盐酸盐反应，合成了一系列甾醇类衍生物，该步收率至少在40％以上，总收率最高可达45.7％。
2)本发明提供的甾醇类衍生物具有明显的细胞增殖活性，促进细胞迁移活性，促进可溶性胶原合成活性，对L929成纤维细胞的增殖、迁移、促胶原合成作用均明显高于原料及阳性药重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。最优化合物30的增殖活性达到为46.2％。本发明所述的甾醇类衍生物在对急性伤口疾病、慢性伤口疾病以及缺乏免疫力个体患有的慢性并发症具有非常好的改善效果。
3)本发明提供的甾醇类衍生物作为伤口愈合药物在改善伤口愈合疾病中的应用，伤口愈合疾病包括急性伤口疾病、慢性伤口疾病、缺乏免疫力个体患有的慢性并发症；所述的急性伤口疾病包括烧伤、烫伤、穿透性损伤；所述的慢性伤口疾病包括静脉溃疡、褥疮溃疡；所述的缺乏免疫力个体患有的慢性并发症包括糖尿病患者、老年人以及先天患有缺乏免疫力类疾病的人群因脉管系统损伤不能愈合引发的失明、神经损伤、肾衰竭、心脏病、截肢、死亡。
4)本发明提供的甾醇类衍生物伤口愈合药物在改善伤口愈合疾病中的应用，相比蛋白类药物，其剂型和用药方式也更加多样化，并且可以制成保健品和食品，为甾醇类化合物在促伤口愈合领域中的应用提供参考。
附图说明
图1：目标化合物的体外划痕闭合对L929成纤维细胞迁移作用
图2：目标化合物对L929成纤维细胞的迁移率
具体实施方式
通过具体实施方式对本发明的技术方案作进一步的说明。
实施例1 谷甾-4-烯-3，6-二酮(化合物2)
称取β-谷甾醇(化合物1，1.0g)、氯铬酸吡啶翁(1.0g)，用200ml二氯甲烷溶解，常温反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后冷却至室温，用装有硅藻土的滤饼过滤，减压蒸干溶剂，得到的残留物经硅胶柱层析，洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯＝15∶1(V/V)，得到淡黄色晶体谷甾-4-烯-3，6-二酮(化合物2，854.8mg，产率是83.1％)
化合物2：淡黄色晶体，m.p.ESI-MS m/z：427.0[M+H].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.74(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.18(3H，s，19-H)，2.15-2.18(1H，m，2-Hβ)，2.51-2.57(2H，m，7α-H and 7-Hβ)，2.70(1H，dd，J＝3.0，15.0Hz，2-Hα)，6.19(1H，s，4-H).
实施例2 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-甲基-6-酮(化合物3)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-甲基-4-烯(化合物4)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴甲烷(114.1μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体甲氧基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体甲氧基胺盐酸盐(81.3mg，产率是69.3％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50.0mg)，甲氧基胺盐酸盐(29.1mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-甲基-6-酮(化合物3，22.9mg，产率是43.0％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-甲基-4-烯(化合物4，30.1mg，产率是53.1％)。
化合物3：白色粉末.ESI-MS m/z：478.0[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，2.22-2.30(1H，m，2-Hβ)，2.46-2.50(1H，m，7-Hα)，2.64(1H，dd，J＝3.0，15.6Hz，7-Hβ)，3.26(1H，dd，J＝3.0，16.2Hz，2-Hα)，3.92(3H，s，1’-H)，6.80(1H，s，4-H).
化合物4：白色粉末.ESI-MS m/z：506.0[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，2.03-2.08(1H，m，2-Hβ)，2.13-2.20(1H，m，7-Hα)，3.00(1H，dd，J＝3.0，15.6Hz，7-Hβ)，3.25(1H，dd，J＝3.0，16.2Hz，2-Hα)，3.92(6H，s，1”-H and 1’-H)，6.43(1H，s，4-H).
实施例3 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-乙基-6-酮(化合物5)和(E)-谷甾-3β，6β肟基-乙基-4-烯(化合物6)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴乙烷(155.2μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体乙氧基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体乙氧基胺盐酸盐(96.7mg，产率是71.2％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50.0mg)，乙氧基胺盐酸盐(34.0mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-乙基-6-酮(化合物5，22.6mg，产率是41.2％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-乙基-4-烯(化合物6，31.05mg，产率是51.8％)。
化合物5：淡黄色粉末.ESI-MS m/z：492.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.73(3H，s，18-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.92(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.05(3H，s，19-H)，1.29(3H，t，J＝6.0Hz，2’-H)，2.22-2.30(1H，m，2-Hβ)，2.46-2.50(1H，m，7-Hα)，2.64(1H，dd，J＝3.0，15.6Hz，7-Hβ)，3.26(1H，dd，J＝3.0，16.2Hz，2-Hα)，4.18(2H，q，J＝6.0Hz，1’-H)，6.79(1H，s，4-H).
化合物6：淡黄色粉末，m.p.还要查℃.ESI-MS m/z：535.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.70(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.93(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.27(3H，t，J＝6.0Hz，2”-H)，1.29(3H，t，J＝6.0Hz，2’-H)，2.02-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.12-2.23(1H，m，7-Hα)，3.02(1H，dd，J＝3.0，15.6Hz，7-Hβ)，3.26(1H，dd，J＝3.0，16.2Hz，2-Hα)，4.16(2H，q，J＝6.0Hz，1”-H)，4.17(2H，q，J＝6.0Hz，1’-H)，6.43(1H，s，4-H).
实施例4 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丙基-6-酮(化合物7)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丙基-4-烯(化合物8)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240.0μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴代正丙烷(191.6μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体正丙基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体正丙基氧基胺盐酸盐(102.4mg，产率是65.3％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50.0mg)，正丙基氧基胺盐酸盐(39.3mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丙基-6-酮(化合物7，24.2mg，产率是42.7％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丙基-4-烯(化合物8，32.3mg，产率是52.3％)。
化合物7：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：507.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.69(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.92(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，0.94(3H，t，J＝9.0Hz，3’-H)，1.03(3H，s，19-H)，1.70(2H，m，2’-H)，1.90-2.05(1H，m，2-Hβ)，2.36-2.41(2H，m，7-Hαand7-Hβ)，3.29(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.05(1H，t，J＝6.0Hz，1’-H)，6.84(1H，s，4-H).
化合物8：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：550.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.68(3H，s，18-H)，0.81(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.90(3H，t，J＝9.0Hz，3”-H)，0.92(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，0.94(3H，t，J＝9.0Hz，3’-H)，1.00(3H，s，19-H)，1.68(2H，m，2”-H)，1.70(2H，m，2’-H)，1.86-1.91(1H，m，2-Hβ)，2.10-2.1(1H，m，7-Hα)，3.00(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.24(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.03(1H，m，J＝6.0Hz，1”-H)，4.05(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.41(1H，s，4-H).
实施例5 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丙基-6-酮(化合物9)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丙基-4-烯(化合物10)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴代异丙烷(192.5μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体异丙基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体异丙基氧基胺盐酸盐(99.9mg，产率是63.7％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50.0mg)，异丙基氧基胺盐酸盐(39.3mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丙基-6-酮(化合物9，23.6mg，产率是41.6％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丙基-4-烯(化合物10，30.7mg，产率是49.8％)。
化合物9：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：507.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.79(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.15(3H，s，19-H)，1.24(6H，d，J＝6.0Hz，1”-H or 2’-H)，1.28(6H，d，J＝6.0Hz，2’-or 2”-H)，2.22-2.30(1H，m，2-Hβ)，2.46-2.50(1H，m，7-Hα)，2.64(1H，dd，J＝3.0，15.6Hz，7-Hβ)，3.76(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.79(1H，s，4-H).
化合物10：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：550.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.79(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.15(3H，s，19-H)，1.24(6H，d，J＝6.0Hz，1”-H or 1””-H)，1.28(6H，d，J＝6.0Hz，2’-or 2”-H)，1.93-2.05(1H，m，2-Hβ)，2.19-2.29(1H，m，7-Hα)，3.02(1H，dd，J＝3.0，15.6Hz，7-Hβ)，3.26(1H，dd，J＝3.0，16.2Hz，2-Hα)，3.76(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，3.76(1H，m，J＝6.0Hz，1”’-H)，6.32(1H，s，4-H).
实施例6 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丁基-6-酮(化合物11)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丁基-4-烯(化合物12)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240.0μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴代正丁烷(225.5μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体正丁基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体正丁基氧基胺盐酸盐(113.1mg，产率是64.1％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，正丁基氧基胺盐酸盐(44.2mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丁基-6-酮(化合物11，24.8mg，产率是42.5％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丁基-4-烯(化合物12，32.7mg，产率是51.7％)。
化合物11：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：521.1[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.69(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.91(3H，t，J＝6.0Hz，4’-H)，0.94(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，1.40(2H，m，3’-H)，1.66(2H，m，2’-H)，1.90-1.96(1H，m，2-Hβ)，2.36-2.41(2H，m，7-Hαand 7-Hβ)，3.28(1H，dd，J＝4.2，15.3Hz，2-Hα)，4.10(2H，t，J＝6.0Hz，1’-H)，6.84(1H，s，4-H).
化合物12：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：564.1[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.69(3H，s，18-H)，0.81(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.92(6H，t，J＝6.0Hz，4’-H and 4”-H)，0.94(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.00(3H，s，19-H)，1.35(2H，m，3”-H)，1.39(2H，m，3’-H)，1.64(2H，m，2”-H)，1.65(2H，m，2’-H)，1.86-1.91(1H，m，2-Hβ)，2.05-2.17(1H，m，7-Hα)，3.00(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.24(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.08(2H，t，J＝6.0Hz，1”-H)，4.09(2H，t，J＝6.0Hz，1’-H)，6.41(1H，s，4-H).
实施例7 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-仲丁基-6-酮(化合物13)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-仲丁基-4-烯(化合物14)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴代仲丁烷(227.1μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体仲丁基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体仲丁基氧基胺盐酸盐(110.4mg，产率是62.6％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，仲丁基氧基胺盐酸盐(44.2mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-仲丁基-6-酮(化合物13，23.8mg，产率是40.8％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-仲丁基-4-烯(化合物14，31.7mg，产率是50.1％)。
化合物13：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：521.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝9.0Hz，29-H)，0.91(3H，t，J＝6.0Hz，3’-H)，0.93(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，1.26(3H，d，1”-H)，1.64(2H，m，2’-H)，1.85-1.96(1H，m，2-Hβ)，2.05-2.12(1H，m，7-Hα)，2.62(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，2.98(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，3.72(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.79(1H，s，4-H).
化合物14：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：564.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.76(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.90(3H，t，J＝6.0Hz，3”-H)，0.91(3H，t，J＝6.0Hz，3’-H)，0.93(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.12(3H，s，19-H)，1.30(3H，d，1””-H)，1.33(3H，d，1”’-H)，1.68(2H，m，2”-H)，1.72(2H，m，2’-H)，1.97-2.08(1H，m，2-Hβ)，2.19-2.25(1H，m，7-Hα)，2.41(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，2.56(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，3.71(1H，m，J＝6.0Hz，1”-H)，3.763.71(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.30(1H，s，4-H).
实施例8 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丁基-6-酮(化合物15)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丁基-4-烯(化合物16)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴代异丁烷(227.6μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体异丁基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体异丁基氧基胺盐酸盐(109.0mg，产率是61.8％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，异丁基氧基胺盐酸盐(44.2mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丁基-6-酮(化合物15，24.0mg，产率是41.1％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丁基-4-烯(化合物16，32.5mg，产率是51.3％)。
化合物15：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：521.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.70(3H，s，18-H)，0.81(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.92(6H，d，J＝6.0Hz，3’-H and 1”-H)，0.93(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.27(1H，m，2’-H)，1.89-2.00(1H，m，2-Hβ)，2.42-2.46(1H，m，7-Hα)，2.61(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，2.98(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，3.91(1H，d，J＝6.0Hz，1’-H))，6.76(1H，s，4-H).
化合物16：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：564.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.74(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.91(6H，d，J＝6.0Hz，3”-H and 1””-H)，0.92(6H，d，J＝6.0Hz，3’-H and 1”’-H)，0.93(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，0.97(3H，s，19-H)，1.29(1H，m，2”-H)，1.31(1H，m，2’-H)，1.81-1.87(1H，m，2-Hβ)，1.99-2.05(1H，m，7-Hα)，2.30(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，2.98(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，3.87(2H，d，J＝6.0Hz，1”-H or 1’-H))，6.50(1H，s，4-H).
实施例9 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-叔丁基-6-酮(化合物17)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-叔丁基-4-烯(化合物18)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴代叔丁烷(235.7μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体叔丁基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体叔丁基氧基胺盐酸盐(112.6mg，产率是63.8％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，叔丁基氧基胺盐酸盐(44.2mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-叔丁基-6-酮(化合物17，24.3mg，产率是41.6％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-叔丁基-4-烯(化合物18，32.6mg，产率是51.4％)。
化合物17：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：521.2[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.77(3H，s，18-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.94(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.00(3H，s，19-H)，1.28(3H，s，2’-H)，1.32(3H，s，1”-H)，1.26(3H，s，1”’-H)，1.87-1.93(1H，m，2-Hβ)，2.25-2.33(1H，m，7-Hα)，2.66(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.06(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，6.78(1H，s，4-H).
化合物18：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：564.1[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.74(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.91(6H，d，J＝6.0Hz，2’-H and 2””-H)，0.92(6H，d，J＝6.0Hz，1”-H and 1””’-H)，0.93(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，0.97(3H，s，19-H)，1.29(3H，s，1”’-H)，1.31(3H，s，1”””-H)，1.81-1.87(1H，m，2-Hβ)，1.99-2.05(1H，m，7-Hα)，2.30(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，2.98(1H，d d，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，6.50(1H，s，4-H).
实施例10 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丙基-6-酮(化合物19)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丙基-4-烯(化合物20)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入环丙基溴(168.25μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体环丙基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体环丙基氧基胺盐酸盐(96.5mg，产率是62.7％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，环丙基氧基胺盐酸盐(38.6mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丙基-6-酮(化合物19，23.9mg，产率是42.4％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丙基-4-烯(化合物20，31.4mg，产率是51.1％)。
化合物19：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：505.2[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.69(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.92(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，1.43(2H，m，3’-H)，1.67(2H，m，2’-H)，2.00-2.05(1H，m，2-Hβ)，2.22-2.27(1H，m，7-Hα)，2.38(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.24(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.68(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.80(1H，s，4-H).
化合物20：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：548.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.68(3H，s，18-H)，0.81(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.92(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，0.99(3H，s，19-H)，1.31(4H，m，3”-H and 3’-H)，1.65(4H，m，2”-H and 2’-H)，1.83-1.90(1H，m，2-Hβ)，2.05-2.12(1H，m，7-Hα)，2.97(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.22(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.68(1H，m，J＝6.0Hz，1”-H)，4.69(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.42(1H，s，4-H).
实施例11 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丁基-6-酮(化合物21)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丁基-4-烯(化合物22)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴代环丁烷(197.7μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体环丁基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体环丁基氧基胺盐酸盐(106.4mg，产率是61.3％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，环丁基氧基胺盐酸盐(43.5mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丁基-6-酮(化合物21，25.03mg，产率是43.1％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丁基-4-烯(化合物22，32.4mg，产率是51.4％)。
化合物21：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：519.6[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.70(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.94(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.27(2H，m，4’-H)，1.38(2H，m，3’-H)，1.58(2H，m，2’-H)，2.00-2.05(1H，m，2-Hβ)，2.22-2.27(1H，m，7-Hα)，2.38(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.24(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.72(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.80(1H，s，4-H).
化合物22：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：562.6[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.70(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.94(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.27(4H，m，4”-H and 4’-H)，1.38(4H，m，3”-H and 3’-H)，1.58(4H，m，2”-H and 2’-H)，1.83-1.90(1H，m，2-Hβ)，2.03-2.13(1H，m，7-Hα)，3.00(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.23(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.71(1H，m，J＝6.0Hz，1”-H)，4.72(1H，m，J＝6.0Hz，1’-H)，6.44(1H，s，4-H).
实施例12 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-苄基-6-酮(化合物23)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-苄基-4-烯(化合物24)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入溴化苄(249.4μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体苄基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体苄基氧基胺盐酸盐(139.8mg，产率是62.4％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，苄基氧基胺盐酸盐(56.2mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-苄基-6-酮(化合物23，26.7mg，产率是42.9％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-苄基-4-烯(化合物24，34.3mg，产率是50.9％)。
化合物23：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：555.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.04(3H，s，19-H)，2.02-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.40-2.49(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(2H，s，1’-H)，6.91(1H，s，4-H)，7.20(1H，s，3”’-H)，7.28(2H，s，2”’-H and 4”’-H)，7.33(2H，s，1”’-H and 5”’-H)
化合物24.淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：598.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.88(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.83-1.89(1H，m，2-Hβ)，2.04-2.13(1H，m，7-Hα)，3.10(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(4H，s，1”-H and 1’-H)，6.44(1H，s，4-H)，7.35(2H，s，3””-H and 3”’-H)，7.36(4H，s，2””-H and 2”’-H and 4””-H and 4”’-H)，7.37(4H，s，1””-Hand 1”’-H and 5””-H and 5”’-H)
实施例13 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-邻甲基苄基-6-酮(化合物25)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-邻甲基苄基-4-烯(化合物26)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入邻甲基苄溴(281.6μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体邻甲基苄基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体邻甲基苄基氧基胺盐酸盐(149.4mg，产率是61.3％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，邻甲基苄基氧基胺盐酸盐(61.1mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-邻甲基苄基-6-酮(化合物25，27.6mg，产率是42.4％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-邻甲基苄基-4-烯(化合物26，35.2mg，产率是51.1％)。
化合物25：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：569.5[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.94(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.05(3H，s，19-H)，1.29(3H，s，1””’-H)，1.93-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.19-2.25(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.14(2H，s，1’-H)，6.90(1H，s，4-H)，7.21(2H，s，2”’-H 3”’-H)，7.32(1H，s，4”’-H)，7.34(4H，s，1”’-H)
化合物26：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：612.1[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.72(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.04(3H，s，19-H)，1.29(6H，s，1””’-H and 1”””-H)，2.05-2.09(1H，m，2-Hβ)，2.13-2.18(1H，m，7-Hα)，3.08(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.19(4H，s，1”-H and 1’-H)，6.47(1H，s，4-H)，7.23(4H，s，2””-H and 2”’-H and 3””-H and 3”’-H)，7.28(4H，s，4””-Hand4”’-H)，7.34(4H，s，1””-H and 1””-H).
实施例14 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间甲基苄基-6-酮(化合物27)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间甲基苄基-4-烯(化合物28)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入间甲基苄溴(294.8μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体间甲基苄基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体间甲基苄基氧基胺盐酸盐(148.2mg，产率是60.8％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，间甲基苄基氧基胺盐酸盐(61.1mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间甲基苄基-6-酮(化合物27，27.4mg，产率是42.8％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间甲基苄基-4-烯(化合物28，36.0mg，产率是52.2％)。
化合物27：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：569.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.72(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.04(3H，s，19-H)，1.29(3H，s，1”-H)，1.93-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.19-2.25(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.14(2H，s，1’-H)，6.90(1H，s，4-H)，7.21(2H，s，2”’-H 3”’-H)，7.32(1H，s，4”’-H)，7.34(4H，s，1”’-H)
化合物28：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：612.4[M+Na].1HNMR(300MHz，CDCl3)δ：0.72(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，1.29(6H，s，1””’-H and 1”””-H)，2.04-2.09(1H，m，2-Hβ)，2.14-2.18(1H，m，7-Hα)，3.10(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.19(4H，s，1”-H and 1’-H)，6.90(1H，s，4-H)，7.13(2H，s，4””-H and 4”’-H)，7.15(2H，s，2””-H and 2”’-H)，7.24(2H，s，3””-H and 3”’-H)，7.27(2H，s，1””-H and 1”’-H)
实施例15 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-对甲基苄基-6-酮(化合物29)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-对甲基苄基-4-烯(化合物30)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入对甲基苄溴(284..1μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体对甲基苄基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体对甲基苄基氧基胺盐酸盐(153.3mg，产率是62.9％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，对甲基苄基氧基胺盐酸盐(61.1mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-对甲基苄基-6-酮(化合物29，27.4mg，产率是42.9％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-对甲基苄基-4-烯(化合物30，37.8mg，产率是54.8％)。
化合物29：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：569.6[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.72(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，1.29(3H，s，1”’-H)，1.93-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.19-2.25(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.19(2H，s，1’-H)，6.45(1H，s，4-H)，7.13(1H，s，4”-H)，7.15(1H，s，2”-H)，7.24(1H，s，3”-H)，7.27(1H，s，1”-H)
化合物30：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：612.7[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.72(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.96(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.03(3H，s，19-H)，1.29(6H，s，1””’-H and 1”””-H)，2.04-2.09(1H，m，2-Hβ)，2.14-2.18(1H，m，7-Hα)，3.10(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.19(4H，s，1”-H and 1’-H)，6.45(1H，s，4-H)，7.13(2H，s，4””-H and 4”’-H)，7.15(2H，s，2””-H and 2”’-H)，7.24(4H，s，3””-H and 3”’-H)，7.27(4H，s，1””-H and 1”’-H).
实施例16 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氟苄基-6-酮(化合物31)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氟苄基-4-烯(化合物32)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入间氟溴苄(257.6μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体间氟苄基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体间氟苄基氧基胺盐酸盐(151.5mg，产率是60.8％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，间氟苄基氧基胺盐酸盐(62.5mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氟苄基-6-酮(化合物31，26.7mg，产率是41.5％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氟苄基-4-烯(化合物32，35.8mg，产率是51.5％)。
化合物31：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：573.6[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.04(3H，s，19-H)，2.02-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.40-2.49(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(2H，s，1’-H)，6.91(1H，s，4-H)，7.31(1H，s，5”’-H)，7.32(1H，s，6”’-H)，7.33(1H，s，2”’-H)，7.35(1H，s，4”’-H)
化合物32：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：616.6[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.88(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.83-1.89(1H，m，2-Hβ)，2.04-2.13(1H，m，7-Hα)，3.10(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(4H，s，1”-H and 1’-H)，6.44(1H，s，4-H)，7.34(2H，s，5””-H and 5”’-H)，7.35(2H，s，6””-H and 6”’-H)，7.36(2H，s，2””-H and 2”’-H)，7.37(2H，s，4””-H and 4”’-H)
实施例17 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间溴苄基-6-酮(化合物33)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间溴苄基-4-烯(化合物34)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入间溴溴苄(336.4μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体间溴苄基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体间溴苄基氧基胺盐酸盐(207.1mg，产率是61.9％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，间溴苄基氧基胺盐酸盐(83.9mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间溴苄基-6-酮(化合物33，29.9mg，产率是41.8％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间溴苄基-4-烯(化合物34，39.1mg，产率是51.1％)。
化合物33：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：634.2[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.04(3H，s，19-H)，2.02-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.40-2.49(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(2H，s，1’-H)，6.91(1H，s，4-H)，7.33(1H，s，5”’-H)，7.35(1H，s，6”’-H)，7.37(1H，s，2”’-H)，7.39(1H，s，4”’-H)
化合物34：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：677.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.88(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.83-1.89(1H，m，2-Hβ)，2.04-2.13(1H，m，7-Hα)，3.10(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(4H，s，1”-H and 1’-H)，6.44(1H，s，4-H)，7.38(2H，s，5””-H and 5”’-H)，7.39(2H，s，6””-H and 6”’-H)，7.41(2H，s，2””-H and 2”’-H)，7.42(2H，s，4””-H and 4”’-H)
实施例18 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氯苄基-6-酮(化合物35)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氯苄基-4-烯(化合物36)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入间氯溴苄(274.8μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体间氯苄基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体间氯苄基氧基胺盐酸盐(165.0mg，产率是60.6％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，间氯苄基氧基胺盐酸盐(68.3mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氯苄基-6-酮(化合物35，26.9mg，产率是40.6％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氯苄基-4-烯(化合物36，36.2mg，产率是50.7％)。
化合物35：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：589.8[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.04(3H，s，19-H)，2.02-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.40-2.49(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(2H，s，1’-H)，6.91(1H，s，4-H)，7.32(1H，s，5”’-H)，7.33(1H，s，6”’-H)，7.34(1H，s，2”’-H)，7.36(1H，s，4”’-H)
化合物36.淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：632.9[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.85(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.88(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.95(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.02(3H，s，19-H)，1.83-1.89(1H，m，2-Hβ)，2.04-2.13(1H，m，7-Hα)，3.10(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，5.17(4H，s，1”-H and 1’-H)，6.44(1H，s，4-H)，7.36(2H，s，5””-H and 5”’-H)，7.37(2H，s，6””-H and 6”’-H)，7.39(2H，s，2””-H and 2”’-H)，7.40(2H，s，4””-Hand 4”’-H)
实施例19 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-2’-丙烯基-6-酮(化合物37)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-2’-丙烯基-4-烯(化合物38)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入3-溴丙烯(181.3μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体2-丙烯甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体2-丙烯氧基胺盐酸盐(97.5mg，产率是63.3％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，2-丙烯氧基胺盐酸盐(38.6mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-2’-丙烯基-6-酮(化合物37，24.1mg，产率是42.7％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-2’-丙烯基-4-烯(化合物38，32.8mg，产率是53.4％)。
化合物37：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：505.3[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.69(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.92(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.01(3H，s，19-H)，1.93-2.07(1H，m，2-Hβ)，2.19-2.25(1H，m，7-Hα)，2.65(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.33(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.61(2H，d，J＝5.1Hz，1’-H)，5.20(1H，dd，J＝3.0，10.2Hz，3’-H)，5.28(1H，dd，J＝3.0，17.1Hz，4’-H)，6.00(1H，m，2’-H)，6.86(1H，s，4-H).
化合物38：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：548.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.69(3H，s，18-H)，0.82(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.92(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.01(3H，s，19-H)，2.01-2.05(1H，m，2-Hβ)，2.13-2.18(1H，m，7-Hα)，3.04(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.26(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.61(4H，d，J＝5.1Hz，1”-H and 1’-H)，5.20(2H，dd，J＝3.0，10.2Hz，3”-H and 3’-H)，5.28(2H，dd，J＝3.0，17.1Hz，4”-H and 4’-H)，6.00(2H，m，2”-Hand 2’-H)，6.42(1H，s，4-H).
实施例20 (E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-6-酮(化合物39)和(E)-谷甾-3β，6β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-4-烯(化合物40)
称取盐酸羟胺(100.0mg)、乙酸乙酯(240μl)、氢氧化钠(126.0mg)、用500μl无离子水溶解，冰浴条件下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后加入1-溴-3-甲基-2-丁烯(247.2μl)，冰浴反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，用石油醚萃取副产物后取下层溶液，用乙酸乙酯萃取三遍，取乙酸乙酯层，减压蒸干溶剂得到白色晶体3’-甲基-2’-丁烯基甲酰胺，再加入乙醇(10.0ml)、盐酸(15.0μl)，65℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后，蒸干溶剂得到淡黄色晶体3’-甲基-2’-丁烯基氧基胺盐酸盐(121.5mg，产率是62.9％)
以实施例1制得的化合物为原料，、称取谷甾-4-烯-3，6-二酮(50mg)，3’-甲基-2’-丁烯基氧基胺盐酸盐(48.1mg)、醋酸钠(10.0mg)，用10.0ml乙醇溶解，45℃下反应，TLC(薄层硅胶板)监测至反应完全。反应完毕后待反应液降至室温，用3％碳酸氢钠调PH值至7后减压蒸干溶剂，得到的粘稠物经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯＝10∶1(V/V)为洗脱液进行纯化，分别得到(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-6-酮(化合物39，25.4mg，产率是42.5％)与(E)-谷甾-3β，6β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-4-烯(化合物40，33.9mg，产率是52.3％)。
化合物39：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：533.2[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.71(3H，s，18-H)，0.84(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.86(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.94(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.06(3H，s，19-H)，1.74(3H，d，J＝5.1Hz，3’-H)，1.79(3H，d，J＝6.0Hz，4’-H)，1.93-1.97(1H，m，2-Hβ)，2.03-2.08(1H，m，7-Hα)，2.42(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.29(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.66(2H，m，1’-H)，5.46(1H，t，J＝6.0Hz，2’-H)，6.87(1H，s，4-H).
化合物40：淡黄色油状物，.ESI-MS m/z：576.4[M+Na].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.68(3H，s，18-H)，0.81(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.83(3H，d，J＝6.0Hz，26-or 27-H)，0.84(3H，t，J＝6.9Hz，29-H)，0.91(3H，d，J＝6.0Hz，21-H)，1.00(3H，s，19-H)，1.69(6H，d，J＝5.1Hz，3”-H)，1.76(6H，d，J＝5.1Hz，3’-H)，2.01-2.05(1H，m，2-Hβ)，2.11-2.18(1H，m，7-Hα)，3.00(1H，dd，J＝3.0，17.7Hz，7-Hβ)，3.24(1H，dd，J＝3.0，15.3Hz，2-Hα)，4.60(4H，d，J＝5.1Hz，1”-H and 1’-H)，5.43(2H，t，J＝6.0Hz，2”-H and 2’-H)，6.43(1H，s，4-H).
对参与伤口愈合的细胞类型的体外作用的实施例
实施例21 体外L929成纤维细胞毒活性筛选
1)L929成纤维细胞活度测定
L929成纤维细胞在含有10％FBS的DMEM中接种2×104细胞/ml置于96孔板中。设立阴性对照组、阳性组和实验组，24小时后，暴露细胞到不同浓度(1-25μM/L)的实验组、仅加入DMEM的阴性对照组和加入(1-25IU/ml)的重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)阳性对照组，然后在37℃在潮湿气氛中温育48小时含5％CO2。将MTT溶液(10ml，5mg/ml)直接加入每个孔中的培养基中，然后将板在37℃下孵育4小时。然后吸出所有培养基，并用DMSO替换，记录570nm处的吸光度。计算细胞活度的百分比，并与阴性对照进行比较。
细胞活度百分比＝A实验组/A阴性对照组×100％
计算各个浓度下的细胞活度，如果目标化合物浓度下的细胞活度大于阴性对照组(p＜0.05)，认为化合物具有细胞增殖活性。
2)目标化合物对L929成纤维细胞的增殖活性数据
表1 25μM/L浓度下化合物对L929成纤维细胞的增殖作用
注：所有值均为平均值，N＝3，
其中*代表P＜0.05，与阳性对照有显著不同；
**代表P＜0.01，与阳性对照有十分显著不同；
***代表P＜0.001，与阳性对照有非常显著不同。
表2 最优化合物对L929成纤维细胞的增殖作用
注：所有值均为平均值，N＝3，
其中*代表P＜0.05，与阴性对照有显著不同；
**代表P＜0.01，与阴性对照有十分显著不同；
***代表P＜0.001，与阴性对照有非常显著不同。
3)结论
实施例2-20值得的38个化合物均具有一定的伤口愈合活性，25μM/L浓度下的L929成纤维细胞增殖活性在14.7％～46.2％之间，对L929成纤维细胞增殖作用均明显高于β-谷甾醇、β-豆甾醇和胆固醇以及阳性对照药重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。
当3、6位均被肟醚基团取代时，化合物4、6、8、10相比于仅3位被肟醚取代的化合物3、5、7、9的促伤口愈合活性更强，可以初步判定，在β-谷甾醇中3、6位均引入肟醚片段比仅3位引入肟醚片段更能增强甾醇的促伤口愈合活性；当肟醚链为烷基链时，化合物的促伤口愈合活性随着烷基链的增长而稍微降低，其中化合物4的活性最好，其25μM/L浓度下的促细胞增殖率为42.1％。
进一步根据化合物25μM/L浓度下的L929成纤维细胞增殖活性可以发现，当肟醚链上引入环烷基片段时，环烷基的活性相比于直链与支链烷基更强，如化合物20(环丙基取代，增殖率为24.7％)较化合物8(正丙基取代，增殖率为18.0％)和化合物10(异丙基取代，增殖率为20.9％)的促伤口愈合活性更强；化合物22(环丁基取代，增殖率为21.9％)较化合物12(正丁基取代，增殖率为17.9％)、14(仲丁基取代，增殖率为17.6％)、16(异丁基取代，增殖率为17.1％)、18(叔丁基取代，增殖率为18.8％)的促伤口愈合活性更强
然而，根据化合物25μM/L浓度下的L929成纤维细胞增殖活性可以发现，当肟醚链上引入苄基片段时，化合物23、24、25、26、27、28、29、30相比于其他化合物的促伤口愈合活性更强，可以初步判定，在β-谷甾醇中引入苄基片段更能增强β-谷甾醇的促伤口愈合活性；而当苄基肟醚片段上引入甲基时，化合物25、26、27、28、29、30相比于其他苄基肟醚化合物的促伤口愈合活性更强；进一步根据结构式说明：若苯环取代基为甲基时，化合物的促伤口愈合活性较苯环上取代基为溴原子、氯原子、氟原子的甾醇衍生物更强，如化合物28(甲基取代，增殖率为37.3％)较化合物32(氟取代，增殖率为23.3％)、化合物34(溴取代，增殖率为25.0％)、化合物36(氯取代，增殖率为26.9％)的活性更强；当苯环甲基取代基的位置为对位时，化合物的促伤口愈合活性较苯环上甲基取代基在邻位和间位更强，如化合物30(对位取代，增殖率为46.2％)较化合物26(邻位取代，增殖率为39.3％)和28(间位取代，增殖率为37.3％)。
实施例33体外划痕闭合和L929成纤维细胞迁移
1)体外划痕闭合和L929成纤维细胞迁移活度测定
将L929细胞(5×104个细胞/ml)在DMEM中含有10％FBS接种到6孔板的每个孔中并在37℃和5％CO2下孵育。待细胞融合成单层后，用无菌移液管尖端水平刮擦在每个中产生线性划痕。通过用PBS洗涤除去任何细胞碎片，并用2ml新鲜含有25μM/L的测试样品的DMEM培养基、25IU/ml的重组人碱性成纤维细胞生长因子(阳性对照药)以及不含样品的纯DMEM培养基(阴性对照)替换培养液，并在37℃下与5％CO2下孵育。L929细胞的迁移照片分别于第24，48小时在每个孔的每个视图内使用显微照片仪(Olympus IX53，日本)于10X放大率下拍摄，使用计算软件(Image-Pro/Version 6.0.0.260)分析图像，根据封闭的面积百分比，计算迁移距离，并与先前获得的值进行比较进而计算迁移率。分别计算每个孔的两个划痕(左和右)6个点上的迁移距离和迁移率，并取平均值，之后重复3次实验，取3次实验迁移率的平均值进行记录，封闭面积百分比的减少表明细胞迁移。
迁移率＝(原有宽度-现有宽度)/原有宽度×100％
计算各个目标化合物浓度下的细胞迁移率，如果目标化合物的细胞迁移率大于阴性对照组(p＜0.05)，认为化合物具有细胞迁移活性。
2)目标化合物对L929成纤维细胞的迁移活性数据
表3 化合物对L929成纤维细胞的迁移作用
注：所有值均为平均值，N＝3，其中**代表P＜0.01，与阴性对照组有显著不同。
3)结论
优选的化合物4，26，30均具有L929成纤维细胞迁移活性，其中化合物4、30较阴性对照组具有十分显著的L929成纤维细胞迁移活性；根据表3可以发现，优选化合物4、26、30对L929成纤维细胞的迁移作用比β-谷甾醇以及阳性对照药重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)强。
实施例23可溶性胶原蛋白作用
1)可溶性胶原合成能力测定
将L929成纤维细胞细胞在含有10％FBS的DMEM中的溶液以2×104个细胞/ml的初始浓度接种在96孔板中。24小时后，培养基用含有测试各种浓度(1-25μM/L)的样品作为实验组、(1-25IU/ml的)重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组、没有测试的细胞样品作为阴性对照组，然后在37℃下用5％CO2孵育48小时。孵育48小时后，细胞产生可溶性胶原I型到培养基中，收集上清液(100μl)。使用Sircol Soluble Collagen Assay(Bicolor Life Science Assays，Northern Ireland，UK)测定I型可溶性胶原的总量。取上清液(50μl)加入500μl染料溶液在室温下混合30分钟。然后将样品4℃离心，12,000r.p.m.，10分钟，形成胶原颗粒。之后吸出上清液，加入325μl ice-cold Acid-Salt Wash Reagent清洗胶原颗粒，将样品4℃离心，12,000r.p.m.，10分钟，之后再将上清Acid-Salt WashReagent吸出，加入125μl碱试剂溶解胶原。此后，在5min内将100μl转移碱溶液加入96孔板中，记录570nm处的吸光度值。基于标准曲线计算胶原蛋白的量的可溶性胶原(大鼠尾I型胶原蛋白作为标准品)。
根据计算的可溶性胶原含量比较实验组与阴性对照组，当实验组的可溶性胶原含量大于对照组时(p＜0.05)，可认为该浓度下的化合物具有促可溶性胶原合成能力。
2)目标化合物对L929成纤维细胞的可溶性胶原合成活性数据
表4 目标化合物对L929成纤维细胞的可溶性胶原合成作用
注：所有值均为平均值，N＝3，
其中*代表P＜0.05，与阴性对照有显著不同；
**代表P＜0.01，与阴性对照有十分显著不同；
***代表P＜0.001，与阴性对照有非常显著不同。
3)结论
优选的化合物4，26，30均具有促L929成纤维细胞胶原合成作用，其中优选化合物4、30在25μM/L的浓度下对L929成纤维细胞具有非常显著的促胶原合成能力，培养基中可溶性胶原含量达到82.1μg/ml与89.9μg/ml；根据表4可以发现，优选化合物4、26、30对L929成纤维细胞的促胶原合成作用均比β-谷甾醇、β-豆甾醇、胆固醇以及阳性对照药重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)强。
药理实验表明，本发明的肟醚甾醇类衍生物具有开发为新型促伤口愈合药物的应用，相比于蛋白类药物(bFGF)，其剂型和用药方式也更加多样化，并且可以制成保健品和食品，为甾醇类化合物在促伤口愈合领域中的应用提供参考。
具体的，改善的伤口愈合疾病包括急性伤口疾病、慢性伤口疾病、缺乏免疫力个体患有的慢性并发症。
其中，急性伤口疾病包括烧伤、烫伤、穿透性损伤；慢性伤口疾病包括静脉溃疡、褥疮溃疡；缺乏免疫力个体患有的慢性并发症包括糖尿病患者、老年人以及先天患有缺乏免疫力类疾病的人群因脉管系统损伤不能愈合引发的失明、神经损伤、肾衰竭、心脏病、截肢、死亡。
进一步地，药物由所值得的甾醇衍生物与采用药剂学上可接受的工艺和辅料制备而成的包合物、脂质体、微球、纳米材料或乳剂。
具体地，所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂中的任一种；所述丸剂包括滴丸剂和软胶丸剂。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例作任何简单的修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.结构如式VI所示的甾醇类衍生物：
其中，R1选自R2，R3相同或不同，各自独立的选自但R2，R3不能同时选自R4选自C1-C10烷基、C3-C10环烷基、苄基、C3-C20烯基。
2.根据权利要求1所述的甾醇类衍生物，其特征在于：R1选自 R2，R3相同或不同，各自独立的选自但R2，R3不能同时选自R4选自C1-C6烷基、C3-C6环烷基、R5选自氢、氟、氯、溴、氨基、硝基、C1-C5烷基、卤代C1-C5烷基、C1-C5烷氧基；n＝1～5的整数；R6，R7相同或不同，选自各自独立的H、C1-C5烷基。
3.根据权利要求2所述的甾醇类衍生物，其特征在于：R1选自 R2，R3相同或不同，各自独立的选自但R2，R3不能同时选自R4选自C1-C6直链烷基以及C3-C5支链烷基、C3-C6环烷基、
其中，C1-C6直链烷基选自以下基团：-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9；
C3-C5支链烷基选自以下基团：
C3-C6环烷基选自以下基团：
选自以下基团：
选自以下基团：
4.根据权利要求3所述的甾醇类衍生物，其特征在于：所述的甾醇类衍生物选自：(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-甲基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-甲基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-乙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β肟基-乙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-正丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-正丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-仲丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-仲丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-异丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-异丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-叔丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-叔丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丙基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丙基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-环丁基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-环丁基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-邻甲基苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-邻甲基苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间甲基苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间甲基苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-对甲基苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-对甲基苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氟苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氟苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间溴苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间溴苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-间氯苄基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-间氯苄基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-2’-丙烯基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-2’-丙烯基-4-烯、(E)-谷甾-4-烯-3β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-6-酮、(E)-谷甾-3β，6β-肟基-3’-甲基-2’-丁烯基-4-烯。
5.权利要求1所述的甾醇类衍生物的制备方法，其特征在于：
首先，以β-谷甾醇、β-豆甾醇、胆固醇与二氯甲烷为原料，在氯铬酸吡啶鎓(PCC)催化下氧化生成谷甾-4-烯-3，6-二酮、豆甾-4-烯-3，6-二酮、胆甾-4-烯-3，6-二酮，即式II化合物；其反应式为：
所述的R1选自反应温度为25～35℃；β-谷甾醇或β-豆甾醇或胆固醇与氯铬酸吡啶鎓及二氯甲烷的摩尔比为1∶1.5∶3；
其次，当R4为选自C1-C10烷基、C3-C10环烷基、苄基、C3-C20烯基时，先以盐酸羟胺和乙酸乙酯为原料，在氢氧化钠水溶液催化下先反应生成乙酰羟肟酸；再进一步R4Br反应后得到一系列烷烃类肟基甲酯化合物；最后用浓盐酸水解烷烃类肟基甲酯得到一系列烷氧基胺盐酸盐，即式III化合物；其反应式为：
所述的第一步的反应温度为0℃，第二步的反应温度为0℃～50℃，第三步的反应温度为65℃；盐酸羟胺与乙酸乙酯、氢氧化钠、溴代烷的摩尔比为1∶1.75∶2.25∶1.5；
最后，将式II化合物与式III化合物在乙醇中反应得到式VI所示的甾醇类衍生物；其反应式为：
所述的R1选自R2，R3相同或不同，各自独立的选自但R2，R3不能同时选自反应温度为45℃；式II化合物与式III化合物的摩尔比为1∶3。
6.权利要求1-4所述的任一一项所述的甾醇类衍生物在制备促伤口愈合药物的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的应用是甾醇类衍生物在制备改善急性伤口疾病、慢性伤口疾病、缺乏免疫力个体患有的慢性并发症的伤口愈合疾病药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的急性伤口疾病包括烧伤、烫伤、穿透性损伤；所述的慢性伤口疾病包括静脉溃疡、褥疮溃疡；所述的缺乏免疫力个体患有的慢性并发症包括糖尿病患者、老年人以及先天患有缺乏免疫力类疾病的人群因脉管系统损伤不能愈合引发的失明、神经损伤、肾衰竭、心脏病、截肢、死亡。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述药物由所述甾醇类衍生物与采用药剂学上可接受的工艺和辅料制备而成；所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂中的任一种；所述丸剂包括滴丸剂和软胶丸剂。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物还包括含有所述甾醇类衍生物的保健品和食品。
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