CN106794231A

CN106794231A - 用于慢性淋巴细胞性白血病（cll）的治疗

Info

Publication number: CN106794231A
Application number: CN201580032587.7A
Authority: CN
Inventors: P·福斯特; J·伯德
Original assignee: Xencor Inc
Current assignee: Xencor Inc
Priority date: 2014-06-16
Filing date: 2015-06-15
Publication date: 2017-05-31
Also published as: US20180037653A1; AU2015277516A1; CA2951427A1; JP2017519757A; EP3157553A4; US20170137516A1; EP3157553A1; WO2015195498A1

Abstract

本公开涉及慢性淋巴细胞性白血病的治疗。当以某些给药方案将单克隆抗体XmAb5574施用于患者时是有效的。另外公开了方案，其包括将所述抗体在至少八周内每周施用至少一次；和/或所述抗体以以下水平施用：实现14,500μg*天/mL或更多的对所述患者的总暴露量，所述总暴露量通过曲线下面积(AUG)测量。

Description

用于慢性淋巴细胞性白血病(CLL)的治疗

交叉引用

本申请要求2014年6月16日提交的美国临时申请序列号62/012,423的权益，其全文内容通过引用并入本文。

背景技术

慢性淋巴细胞性白血病(CLL)是B细胞恶性肿瘤和成人白血病最普遍的形式。目前，除了异基因干细胞移植之外，该疾病是不可医治的。诊断患有或进展为晚期疾病的患者的平均生存时间为18个月至3年。不幸的是，患有晚期疾病的这些患者对常规治疗也更难治。

在CLL的治疗中已经取得进展，诸如嘌呤核苷类似物和CD20单克隆抗体利妥昔单抗的引入。然而，使用单药剂利妥昔单抗治疗完全有效(CR)和延长缓解期是罕见的。这可以通过将利妥昔单抗与传统细胞毒性剂诸如氟达拉滨或氟达拉滨和环磷酰胺组合来改善。也使用或测试其它CD20特异性抗体，诸如奥法木单抗和奥妥珠单抗，用于CLL的治疗。已经评估的其它靶标包括CD52。对CD52特异性的抗体的阿仑单抗已在复发性或未经治疗的(treatment-naive)CLL中示出功效，但其使用受到显著的感染毒性的限制。

用于CLL的治疗的另一抗体靶标分子是CD19。CD19是含有两个细胞外免疫球蛋白样结构域和广泛的胞质尾区的免疫球蛋白超家族的95-kDa跨膜糖蛋白。该蛋白是泛B(pan-B)淋巴细胞表面受体，并且从前B(pre-B)细胞发育的最早阶段起普遍表达，直到其在终末分化成浆细胞期间下调。它是B淋巴细胞谱系特异性的，并且不在造血干细胞和其它免疫细胞上表达，除了一些滤泡树突细胞。CD19作为B细胞受体(BCR)信号传导的正调节物起作用，并且对B细胞活化和增殖以及体液免疫应答的开发是重要的。其作为与CD21和CD81结合的共刺激分子，并且对于对T细胞依赖性抗原的B细胞应答是至关重要的。在配体结合时，CD19的胞质尾区与经由蛋白酪氨酸激酶的src家族触发下游信号传导途径的酪氨酸激酶家族物理缔合。CD19是淋巴来源的癌症的有吸引力的靶标，因为其在几乎所有慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)以及包括急性淋巴细胞性白血病(ALL)和毛细胞白血病(HCL)的许多其它不同类型的白血病中高度表达。

CD19定向抗体的临床开发以前受CD19抗原内在化的限制，然而，改善的抗体修饰技术已经恢复了该潜在的治疗靶标。XmAb5574(aka MOR00208)是结合CD19的Fc工程化人源化单克隆抗体。XmAb5574已经使用Xencor公司的专有技术进行优化，该技术应用了使人序列含量最大化、增强对抗原的亲和力并且工程化Fc区以增加对各种Fcγ受体(FcγR)的结合亲和力的人源化的新方法。特别地，相对于XmAb5574的非工程化IgG1类似物，与FcγRIIIa的人V158多态变体的结合增加了37倍，并且与FcγRIIIa的人F158多态变体的结合增加了137倍。所得抗体相对于鼠mAb 4G7或非工程化的嵌合4G7抗-CD19抗体具有显著增加的肿瘤细胞毒性的可变模式。由于XmAb工程化突变，所以在XmAb5574Fc与FcγR的结合中的增加显著增强了体外抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)，以及相对于未修饰的抗体对肿瘤的直接细胞毒性效应(凋亡)。XmAb5574未示出介导补体依赖性细胞毒性。

发明内容

本发明涉及在患有复发性或难治性CLL的患者中用Fc工程化CD19单克隆抗体XmAb5574的第一次人临床试验中观察到的某些令人惊讶的发现。

在CLL中研究XmAb5574(aka MOR00208)的临床试验已经完成。参见Woyach等人的“2894 Final Results of a Phase I Study of the Fc Engineered CD19 AntibodyXmAb5574(MOR00208)in Patients with Relapsed or Refractory Chronic LymphocyticLeukemia(CLL)or Small Lymphocytic Lymphoma(SLL)”,54th ASH Annual Meeting andExposition,2012年12月9日。据报道，应答发生在6mg/kg、9mg/kg和12mg/kg的剂量水平。

为了确定进一步研究的适当剂量，完成了pK数据和临床应答的彻底评估。令人惊讶地，在患者的无进展生存时间和9mg/kg或更多的给药之间观察到统计学上显著的相关性。

因此，可以基于此类发现对患者选择适当的剂量选择。

附图说明

图1示出本研究的患者的淋巴细胞计数离基线的最佳百分比变化。在大多数患者中的血液病得到清除，其中绝对淋巴细胞计数离基线的中值减少90.8％。

图2示出所有患者的最佳淋巴结减少。变化如通过身体检查(图片A)或如通过CT所评价(图片B)的淋巴结的产物直径的总和所示。

图3示出所有患者(图片A)、在所有剂量水平上接受多达9个剂量的那些患者(图片B)和包括在延长给药组(图片C)中的那些患者的无进展生存时间。

图4示出抗体XmAb5574的可变结构域的氨基酸序列。

图5示出抗体XmAb5574的重链和轻链Fc区的氨基酸序列。

图6示出与接受9mg/kg或更多的剂量的患者相比，接受小于9mg/kg的剂量的患者的无进展生存时间之间的比较。

本发明的某些实施方式

在某些实施方式中，本公开涉及对CD19特异性的抗体，所述抗体用于慢性淋巴细胞性白血病的治疗，所述抗体与包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、序列NPYNDG(SEQID NO:2)的HCDR2区、序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区、序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和序列MQHLEYPIT(SEQID NO:6)的LCDR3区的抗体交叉竞争，所述抗体以9mg/kg或更多的剂量施用。

在某些实施方式中，本公开涉及治疗慢性淋巴细胞性白血病的方法，其包括施用对CD19特异性的抗体，所述抗体与包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区、序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区、序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区的抗体交叉竞争，所述抗体以9mg/kg或更多的剂量施用。

在某些实施方式中，所述抗体包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区、序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区、序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区。

在某些实施方式中，所述抗体包含序列EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)的可变重链和序列DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK(SEQ ID NO:8)的可变轻链。

在某些实施方式中，所述抗体包含序列ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:9)的重链恒定结构域。

在某些实施方式中，所述抗体以如下水平施用：实现对所述患者的总暴露量为14,500μg*天/mL或更多，所述总暴露量通过曲线下面积(AUC)测量的。

在某些实施方案中，所述抗体在至少八周内每周施用至少一次。

在某些实施方案中，所述抗体通过静脉或皮下施用。

具体实施方式

术语“抗体”意指单克隆抗体，包括任何同种型，诸如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。IgG抗体由通过二硫键连接的两条相同的重链和两条相同的轻链组成。每条重链和轻链含有恒定区和可变区。每个可变区含有称为“互补决定区”(“CDR”)或“高变区”的三个区段，其主要负责结合抗原的表位。它们被称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端顺序编号。CDR外部的可变区的更高度保守部分称为“框架区”。“抗体片段”意指Fv、scFv、dsFv、Fab、Fab'F(ab')2片段或其它片段，其含有各自具有CDR和框架区的至少一个可变重链或可变轻链。

“VH”是指抗体或抗体片段的免疫球蛋白重链的可变区。“VL”是指抗体或抗体片段的免疫球蛋白轻链的可变区。

本文的“CDR”由Chothia等人或Kabat等人定义。参见Chothia C、Lesk AM.(1987),Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins,J MolBiol.,196(4):901-17，其全文内容通过引用并入本文。参见Kabat E.A,Wu T.T.,PerryH.M.,Gottesman K.S.和Foeller C.(1991年),Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版，NIH出版号91-3242,华盛顿特区的美国卫生及公共服务部(US Dept.of Health and Human Services，Washington，DC)。

术语“CD19”是指被称为CD19的蛋白质，其具有以下同义词：B4、B-淋巴细胞抗原CD19、B-淋巴细胞表面抗原B4、CVID3、分化抗原CD19、MGC12802和T-细胞表面抗原Leu-12。

人CD19具有以下氨基酸序列：

MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGP DPAWGGGGRMGTWSTR.(SEQ ID NO:10)。

“MOR00208”是抗-CD19抗体，可变结构域的氨基酸序列提供于图4中。MOR00208的重链和轻链Fc区的氨基酸序列提供于图5中。“MOR208”、“MOR00208”和“XmAb5574”用作同义词，以描述图4和图5中所示的抗体。MOR00208抗体描述于美国专利申请序列号12/377,251中，其全文内容通过引用并入本文。XmAb5574的CDR区如下：

HCDR1序列：SYVMH(SEQ ID NO:1)，

HCDR2序列：NPYNDG(SEQ ID NO:2)，

HCDR3序列：GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)，

LCDR1序列：RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)，

LCDR2序列：RMSNLNS(SEQ ID NO:5)，以及

LCDR3序列：MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)。

药物组合物包括活性剂，例如，用在人体中治疗用途的抗体。药物组合物可另外包括药学上可接受的载体或赋形剂。

“施用的”或“施用”是指通过可注射形式，诸如，例如静脉内、肌内、皮内或皮下途径或粘膜途径递送药品组合物，例如，作为用于吸入的鼻用喷雾剂或气雾剂或者作为可摄入溶液、胶囊或片剂。

根据本公开施用的抗体以治疗有效量施用于患者。“治疗有效量”是指足以治愈、减轻或部分阻止给定疾病或病症(即CLL)及其并发症的临床表现的量。本公开令人惊讶地发现，XmAb5574能够以低至9mg/kg(mg抗体每千克体重)的剂量治疗CCL。因此，在某些实施方式中，本公开的抗体以9mg/kg施用。在替代实施方式中，本公开的抗体以12mg/kg施用。在其它实施方案中，本公开的抗体以15mg/kg或更多施用。

“Cmax”是指在采样间隔内观察到的抗体的最高血浆浓度。

“AUC”或“曲线下面积”是指在整个样品收集间隔期间通过梯形法则计算进行分析的分子(例如药物)的血浆或血清浓度-时间曲线下的面积。

引起治疗效果的药物剂量也可以依据通过曲线下面积测量的对患者的总暴露量来描述。

在本公开的抗体的某些实施方式中，抗体以以下水平施用：实现14,500μg*天/mL或更多的对所述患者的总暴露量，所述总暴露量通过曲线下面积(AUC)测量。在本公开的抗体的替代实施方案中，抗体以以下水平施用：实现17,500μg*天/mL或更多的对所述患者的总暴露量，所述总暴露量通过曲线下面积(AUC)测量。

对特定治疗目的有效的量将取决于疾病或损伤的严重性以及受试者的重量和一般状态。应当理解，可以使用常规的实验，通过构建值矩阵并测试矩阵中的不同点来实现适当给药量的确定，所有这些都在受过训练的医生或临床科学家的普通技能范围内。

本公开的抗体可以在不同的时间点施用，并且治疗周期可以具有不同的长度。抗体可以每天、每隔一天、每周三次、每周或每两周施用。抗体还可以在至少四周内、在至少五周内、在至少六周内、在至少七周内、在至少八周内、在至少九周内、在至少十周内、在至少十一周内或在至少十二周内施用。在本公开的某些实施方式中，抗体在至少八周内每周施用至少一次。

“施用的”或“施用”包括但不限于通过可注射形式，诸如，例如静脉内、肌内、皮内或皮下途径或粘膜途径递送，例如，作为用于吸入的鼻用喷雾剂或气雾剂或作为可摄入溶液、胶囊或片剂。在某些实施方式中，抗体通过静脉施用。在其它实施方案中，抗体为皮下施用。

本文所用的“慢性淋巴细胞性白血病”或“CLL”是指白细胞淋巴细胞系的癌症，包括Rai和Binnet分类亚型亚类。与“急性”淋巴细胞性白血病相比，“慢性”淋巴细胞性白血病中的疾病进展是渐进的。CLL是成人中最常见的白血病形式，占所有白血病的25％(在美国(US)每年约有10,000例新CLL病例)。SLL(小淋巴细胞性淋巴瘤)是某种形式的CLL，其主要存在于淋巴结中。CLL和SLL被认为是相同的原发疾病，只是具有不同的表现。在本公开的某些实施方式中，所述CLL是复发性CLL。在本公开的其它实施方式中，所述CLL是难治性CLL。

“交叉竞争”意指抗体或另一结合剂在标准竞争性结合测定中干扰其它抗体或结合剂与CD19的结合的能力。抗体或其它结合剂能够干扰另一抗体或结合分子与CD19的结合的能力或程度，因此其是否可以被称为根据本发明的交叉竞争，可以使用标准竞争结合测定来确定。一种合适的测定包括使用Biacore技术(例如，通过使用BlAcore3000仪器(瑞典乌普萨拉的Biacore公司))，其可以使用表面等离子体共振技术测量相互作用的程度。用于测量交叉竞争的另一测定使用基于ELISA的方法。对于“表位分级(epitope binning)”抗体基于其交叉竞争的高通量过程描述于国际专利申请号WO 2003/48731中。

术语“表位”包括能够特异性结合抗体或以其他方式与分子相互作用的任何蛋白质决定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团(诸如氨基酸或碳水化合物或糖侧链)组成，并且可以具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是“线性”或“构象”的。术语“线性表位”是指具有蛋白质和相互作用分子(诸如抗体)之间的所有相互作用点的表位，所述点沿着蛋白质的一级氨基酸序列(连续)线性地发生。术语“构象表位”是指其中不连续氨基酸以三维构象聚集在一起的表位。在构象表位中，在蛋白质上彼此分离的氨基酸残基上发生相互作用点。

“结合与……相同的表位”意指抗体或其它结合剂结合CD19并具有与示例性抗体相同的表位的能力。示例性抗体和其它抗体对CD19的表位可以使用标准表位映射技术来确定。本领域熟知的表位映射技术包括在分子生物学中的方法中的表位映射协议(EpitopeMapping Protocols in Methods in Molecular Biology)，第66卷(Glenn E.Morris编辑，1996)，新泽西州托托华的胡马纳出版社(Humana Press，Totowa，New Jersey)。例如，可以通过例如在固体支持物上同时合成大量肽，该肽对应于蛋白质分子的部分，并且在肽仍然连接到支持物上时，使肽与抗体反应而确定线性表位。此类技术是本领域已知的，并且描述于以下专利中：例如，美国专利第4,708,871号；Geysen等人，(1984),Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 8:3998-4002；Geysen等人，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.,USA82:178-182；Geysen等人，(1986)Mol.Immunol..23:709-715。类似地，通过确定氨基酸的空间构象，诸如通过例如氢/氘交换、x射线晶体学和二维核磁共振，容易地识别构象表位。参见例如，见上文的表位映射协议(Epitope Mapping Protocols)。蛋白质的抗原区也可以使用标准抗原性和亲水性图来识别，所述图为诸如使用例如购自牛津分子集团(Oxford Molecular Group)的Omiga 1.0版软件程序计算的那些。该计算机程序采用Hopp/Woods方法，Hopp等人，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:3824-3828；用于确定抗原性分布图(profile)，以及Kyte-Doolittle技术，Kyte等人，(1982)J Mol Biol.157:105-132；用于亲水性图。

实施例

实施例1：患者选择

该研究是多中心、开放标签、单臂I期剂量递增研究。如果患者>18岁，根据IWCLL2008指南(Hallek等人，Blood(2008)111,5446-5456)满足CLL或SLL的诊断标准，具有活动性疾病需要治疗，并且具有在至少一种含有嘌呤类似物的方案(或如果存在相对于嘌呤类似物治疗的禁忌症的替代方案)之后的复发性或难治性疾病，那么患者有资格参与研究。患者需要具有足够的肾和肝功能。如果白细胞计数(WBC)<50,000/mm³，那么血小板计数不可<50,000/mm³，并且需要绝对中性粒细胞计数(ANC)≥1,000/mm³。在具有WBC≥50000/mm³的患者中，对于ANC不存在限制。排除以前用替代CD19抗体治疗剂治疗的患者。

在提供书面知情同意书后，在2010年11月30日和2012年4月17日期间，将27名患有复发性或难治性CLL/SLL的患者招募到根据赫尔辛基宣言原则进行的本机构审查委员会批准的研究中。这些患者中的每个接受至少1个剂量的治疗。患者的人口统计资料列于表1中。患者一般为高风险的，其中14名(52％)患有Rai期高危疾病，并且24名(89％)患有IGHV未突变疾病。在FISH分析中，8名(30％)具有del(11q22.3)并且10名(37％)具有del(17p13.1)。患者的先前治疗的中值为4，其范围为1-13。

表1：本研究中治疗的患者的人口统计学

实施例2：研究设计

患者最初以加速方式招募到该剂量递增研究中，以限制潜在暴露于亚治疗剂量的患者的数量。在加速剂量递增期间，将一名患者招募到每组，并且如果不存在剂量限制性毒性(DLT)或2级治疗相关的毒性，那么在该患者完成第1周期之后可发生剂量递增。如果达到DLT或2级毒性，或以3mg/kg的剂量水平开始，那么剂量递增策略将回复到标准3×3设计。在该设计中，3名患者最初招募到每组，并且如果0名患者具有DLT，那么将发生递增。如果1名患者经历DLT，那么将发生扩增至6名患者，并且如果没有患者经历DLT，那么将发生剂量递增。如果组中的2名患者经历DLT，那么下一个较低剂量将被扩大并被认为是MTD或推荐的2期剂量。

患者接受总共9次XmAb5574的输注：第1周期的第1、4、8、15和22天，以及第2周期的第1、8、15和22天。一旦前5名患者已经在最大计划组中治疗，在该剂量水平招募的在2个周期后具有至少稳定的疾病的额外患者就被给予继续每28天接受额外4次输注XmAb5574的选项。

实施例3：相关实验室研究

招募到该研究的所有患者如前所述在基线处执行的刺激细胞遗传学、FISH和IGHV突变状态(Byrd等人,J Clin Oncol(2006)24,437-43；Woyach等人,Br J Haematol(2010)148,754-9)。在基线和指定时间点处执行流式细胞术。在生存能力评价之后，借助直接结合的单克隆抗体板(panel)，使用五色全血染色技术，使用PrepPlus2自动染色系统(贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))对样品进行染色。在黑暗中在室温下孵育30分钟之后，使用TQ-prep仪器和ImmunoPrep试剂(均来自贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))根据制造商的推荐对红细胞进行裂解。在配备有2.1版本的CXP软件(贝克曼库尔特公司(BeckmanCoulter))的FC5OO流式细胞计数器(贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))上分析样品。借助基于CD45染色和允许淋巴细胞、单核细胞和骨髓细胞群的良好分离的光侧向散射特征的门控策略执行多参数分析。使用Prism图算法(贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))执行淋巴细胞门的详细免疫表型表征。在CD24抗原表达作为CLL中的替代泛B细胞标记的背景下执行B细胞的计数，因为施用XmAb5574使CD19不可检测。因此，CLL B细胞的评估是基于表达其它CLL抗原(诸如CD5、CD43和CD79b)的CD24阳性B细胞的计数。

使用经验证的方法，通过Prevalere生命科学(Prevalere Life Sciences，ICONDevelopment Solutions,LLC(Whitesboro,New York,USA)的分部)测定血清样品的XmAb5574。Prevalere使用经验证的ELISA方法实行PK测试用于定量人血清中的XmAb5574。检测下限为0.2ng/mL。

包括最大浓度(Cmax)、Cmax的时间(Tmax)、末期半衰期(t1/2)、时间从零到无穷大的血清浓度-时间曲线下面积(AUC∞)、清除率(CL)以及分布体积(V)的药代动力学参数使用非隔室方法或隔室方法来估计，无论哪个都最佳地描述了观察到的数据。所有PK参数均使用对PK取样事件和给药事件开始和停止的实际消逝时间来计算，相对于第一次输注给药开始进行计算。用于计算PK参数的剂量是在输注持续时间期间递送的实际剂量。跨剂量水平的剂量比例通过以Cmax和AUC∞对剂量进行作图来表征。类似地，跨剂量水平的动力学参数终末半衰期、Tmax、CL和V通过这些参数对剂量的曲线图表征。在软件WinNonlin Phoenix中使用PK模型10通过将两室IV输注模型与每个患者的时间浓度分布图拟合来得到药代动力学参数。

血清人抗人抗体(HAHA)的分析由Prevalere生命科学(Prevalere LifeSciences)执行。利用具有钌化(Ruthenylated)(磺基标记的)XmAb5574和生物素化(Biotinylated)XmAb5574的MSD技术、使用电化学发光免疫测定方法在人血清中测量针对XmAb5574的抗体。产生的信号与存在的抗-XmAb5574抗体的量成比例。在测定切割点或以上处有应答的研究样品被认为是潜在阳性的。在低于测定切割点处有应答的研究样品被认为是阴性的。

实施例4：毒性和应答评价

在患者接受治疗的同时每周执行安全性评价，然后额外地在十二周内的每4周执行一次。根据IWCLL 2008标准17版对血液学毒性进行分级，并且由国立癌症中心研究所不良事件的常见术语标准4.0版(National Cancer Center Institute Common TerminologyCriteria for Adverse Events version 4.0)对非血液学毒性进行分级。

根据IWCLL 2008指南(Hallek等人,Blood(2008)111,5446-545)来确定应答，其并入身体检查和临床实验室数据以及对于CLL的CT扫描数据，以及根据用于SLL的2007IWG应答标准(Cheson等人,J Clin Oncol(2007)25,579-86页)。在第2周期第1天、第2周期结束和第2周期结束后第4、8和12周时评估应答。从第1周期第1天到由于任何原因记录再发性或进展性疾病或死亡的第一日期来测量无进展生存时间。如果患者失去随访或选择不提供未来信息，则在最后随访日期时对患者进行检查。

实施例5：施用治疗

一名患者各自积累到0.3mg/kg和1mg/kg剂量组。三名患者各自积累到3mg/kg、6mg/kg和9mg/kg剂量组。16名患者(包括扩增组)积累到所评估的最大剂量12mg/kg。所有27名招募的患者接受至少1剂量的XmAb5574，其中22名患者接受所有9个最初计划剂量的治疗。在未接受所有9个剂量的5名患者中，2名经历疾病进展，1名经历不可接受的不良事件(4级中性粒细胞减少症DLT)，1名由治疗医生从研究中去除，并且1名完成研究但由于不良事件(3级血小板减少症)导致错过一个剂量。在试验期间没有患者减少剂量。5名患者由于不良事件延迟至少1次剂量。18名患者由于输注反应输注暂停至少一次。

八名患者参与维持组，以评价其安全性，用于未来调查。一名患者仅接受3次额外输注，并且其他7名患者接受所有4次计划的额外输注。

实施例6：不良事件

XmAb5574一般耐受性良好，其中仅1名患者由于毒性而中止治疗。所有治疗相关的不良事件概述于表2中。在12mg/kg剂量下观察到4级中性粒细胞减少症(持续≥7天)的剂量限制性毒性(DLT)的一个案例。5名患者经历了3或4级治疗相关的不良事件，其包括中性粒细胞减少症(3名患者)、血小板减少症(2名患者)、增加的天门冬氨酸氨基转移酶(AST；1名患者)、发热性中性粒细胞减少症(1名患者)以及肿瘤溶解综合征(1名患者)。

表2：至少可能归因于XmAb5574的不良事件

发生在超过10％的患者中被评价为可能与XmAb5574相关的1级和2级毒性包括输注反应、增加的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、增加的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、中性粒细胞减少症、血小板减少症、发热、发冷和周围神经病变。输注反应是发生在67％的患者中的最常见毒性，然而，未见到3级或4级输注反应。一般来说，在输注的早期发生该反应，其中大多数发生在前15分钟内，并且对输注速率的减慢或给药的暂停快速响应。所有输注反应发生在第一次输注期间并对治疗响应。II期患者完成第1天的输注，并且仅一个患者在第1天期间再发输注症状。对任何患者而言在随后的输注期间不发生输注反应。

总之，在所检查的剂量水平中没有达到MTD(最大耐受剂量)，并且药物耐受性良好。虽然输注反应是常见的，但是在所有有支持性护理的情况下都是可控的，并且通常在随后的给药期间不再发。3级和4级毒性主要是血液学的，并且在大多数情况下不需要中止治疗。感染毒性尤其低，其中仅在一名患者中发生发热性中性粒细胞减少症。一名患者确实患了TLS(肿瘤溶解综合征)，其需要拉布立酶和静脉注射液，然而，耐受随后的输注而没有事故。值得注意的是，该患者在接受XmAb5574之前没有接受过先前化疗。因此，观察到的不良事件是可控的，并且对于XmAb5574的进一步临床开发是令人鼓舞的。

实施例7：HAHA分析

在27名患者中，总计8名患者被评估测试为HAHA抗体阳性。然而，所有这些患者在预治疗时具有阳性HAHA，并且没有患者的HAHA滴定度从前剂量水平增加。因此，非常重要的是，没有观察到免疫原性的证据。

实施例8：对治疗的应答

可对27名患者进行应答评估。在大多数患者中的血液病清除，其中绝对淋巴细胞计数离基线的中值减少90.8％(图1)。仅基于身体检查和实验室研究，18名患者(66.7％)实现部分应答(PR)，并且其余9名患者(33.3％)实现稳定的疾病(SD)。对于所有患者的最佳淋巴结减少见图2。使用CT标准以及检查和实验室数据，8名患者(29.6％)实现了PR，同时另外的16名患者(59.3％)实现了SD。两名患者根据CT标准具有进展性疾病。没有给药低于3mg/kg的患者具有客观应答。仅评估在12mg/kg剂量水平的16名患者，该剂量是推荐的II期剂量，12名患者(75％)根据身体检查标准具有PR，并且6名患者(37.5％)根据CT标准具有PR。通过身体检查标准应答的患者倾向于快速这样做，其中14/18患者在第一应答评估(第2周期第1天)时实现PR。CT应答稍微滞后，其中3/8患者在第2周期第28天实现PR，3名患者在第4周随访时间点实现PR，并且扩增组中的2名患者分别在第5周期和第7周期实现PR。

当查看与根据身体检查或CT标准的应答相关的基线特征时，基线淋巴结大小看起来与应答相关联，其中具有最大淋巴结≤5cm(n＝18)的患者的PR率根据检查标准为77.8％并且根据CT标准为38.9％，其中具有最大淋巴结>5cm(n＝9)的那些患者的PR率根据检查为44.4％并且根据CT为11.1％。根据FISH的细胞遗传学异常，包括del(17p13.1)看起来与应答并不相关联，其中60％的具有del(17p13.1)的患者(10名患者中的6名)根据检查标准实现PR并且30％的患者根据CT标准实现PR。

在XmAb5574的第2周期第28天后评估12周，5名患者(18.5％)根据CT标准具有进展，并且8名患者(29.6％)根据身体检查标准具有进展。在治疗期间或在该12周观察期期间没有患者死亡。无进展生存时间(PFS)定义为从第一次给药时间到进展或死亡时间，取其先到者。对于包括延长治疗组中的那些患者的所有患者的PFS为199天(图3A；95％的CI：168-299天)。对于接受9个剂量或更少剂量的所有剂量水平上的所有患者，PFS为189天(图3B)，并且对于单独延长治疗组的患者，PFS为420天(图3C；95％的CI：168天-不可评估)。

由于I期临床试验未设计为显示功效的任何结论性迹象，所以用某些浓度的XmAb5574观察到的结果是非常令人鼓舞和令人惊讶的。当用XmAb5574作为单药剂抗体治疗时，67％的患者通过临床标准实现PR。这些应答与每周计划给予的利妥昔单抗(Huhn等人,Blood(2001)98,1326-31；Itala等人,Eur J Haematol(2002)69,129-34)以及奥法木单抗(Wierda等人,J Clin Oncol(2010)28,1749-55)的结果相比是有利的。

观察到的功效在接受9mg/kg或更多的剂量的患者中特别显著。这反映在绝对淋巴细胞计数(参见图1)和淋巴结减少(见图2)的减少中。对XmAb5574的应答也相当持久。那些接受维持治疗的患者中的应答持续时间延长。无进展生存时间是该疾病的治疗期间和之后患者带病生存但不会更加恶化的时间长度。这是临床试验的重要终点，并且是在患者中的有效性的指标。

无进展生存时间在图6中所示。图6是基于计算机断层扫描(CT)的无进展生存时间(PFS)的卡普兰-梅耶(Kaplan-Meier)曲线图。符号仅突出显示被审查的事件。对于PFS的计算，仅考虑给药第1周期和第2周期。从数据分析中排除组6中的一名患者，因为患者仅接受9次输注中的2次，并在第8天离开临床研究。

图6所示的数据的统计分析示于表3。

表3

以Graph Pad Prism5.02版执行统计测试。

在图6中所示的患者以0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、9mg/kg或12mg/kg给药。之前，已有报道在6mg/kg、9mg/kg和12mg/kg发生应答。

令人惊讶的是，与接受较低剂量诸如6mg/kg的患者相比，以9mg/kg或更多给药的患者在无进展生存时间(PFS)中显示统计学上的显著增加。这是令人惊讶的，并且无法基于在6mg/kg、9mg/kg和12mg/kg的剂量水平存在应答而预测。

因此，可以预期，与较低剂量相比，9mg/kg或更多的剂量产生更好的临床有效性。这通过表4中的临床应答的综述进一步支持。

表4

在表4中，示出使用IWCLL 2008指南，用9mg/kg或更多的MOR00208治疗的患者未示出进展性疾病。而用较低剂量治疗的一些患者观察到进展性疾病。

实施例9：药代动力学分析

在27名患者中，这些患者中的25名的PK参数符合2室模型。无论是以0.3mg/kg或1mg/kg招募的患者均符合预期的PK模型，并且呈现的所有PK数据将来自3mg/kg和以上组。如假设仅单剂量的MOR00208所评估的关键PK参数由组汇总在表3中。值得注意的是，清除率和分布体积与其它全长单克隆抗体类似，并且分布限于体循环，如通过估计的分布体积所证明。Cmax以略小于剂量比例的方式增加，且AUC以剂量比例的方式增加。清除率和半衰期示出无剂量依赖性。借助每次输注观察到浓度中累计的趋势，并且XmAb5574的血清浓度达到平台暗示了在输注9次或之前时的平稳状态。跨3mg/kg-12mg/kg的剂量范围，半衰期平均为13.5天，支持1周-3周的给药间隔。表5：假设仅单剂量的MOR00208的关键药代动力学参数。

当患者在八周时间间隔内每周以抗体MOR00208给药一次(包括第4天研究额外负荷剂量)时，在整个时间段内计算AUC(累积AUC)并与临床应答进行比较。在八周内显示累积AUC为至少14,500μg*天/mL(仅对应于剂量水平9mg/kg和12mg/kg)的所有患者具有如表4所示的更好的总体临床应答，以及显著增加的PFS(参见图6)。

Claims

1.一种对CD19特异性的抗体，其中所述抗体用于慢性淋巴细胞性白血病的治疗中，所述抗体与包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区、序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区、序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区的抗体交叉竞争，其中所述抗体以9mg/kg或更多的剂量施用。

2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体以如下水平施用：在至少八周达到14,500μg*天/mL或更多的对所述患者的总暴露量，所述总暴露量通过曲线下面积(AUC)测量。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述抗体在至少八周每周施用至少一次。

4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体通过静脉施用。

5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含序列SYVMH(SEQ ID NO:1)的HCDR1区、序列NPYNDG(SEQ ID NO:2)的HCDR2区、序列GTYYYGTRVFDY(SEQ ID NO:3)的HCDR3区、序列RSSKSLQNVNGNTYLY(SEQ ID NO:4)的LCDR1区、序列RMSNLNS(SEQ ID NO:5)的LCDR2区和序列MQHLEYPIT(SEQ ID NO:6)的LCDR3区。

6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含序列EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)的可变重链和所述序列DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK(SEQ ID NO:8)的可变轻链。

7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述抗体包含序列ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:9)的重链恒定结构域。