CN106769275A - 一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法 - Google Patents

一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106769275A
CN106769275A CN201610994136.8A CN201610994136A CN106769275A CN 106769275 A CN106769275 A CN 106769275A CN 201610994136 A CN201610994136 A CN 201610994136A CN 106769275 A CN106769275 A CN 106769275A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
parashorea
cathayensis
precooling
precipitation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610994136.8A
Other languages
English (en)
Inventor
杨梅
韩吉思
叶绍明
马松亚
吴道念
刘世男
程飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi University
Original Assignee
Guangxi University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi University filed Critical Guangxi University
Priority to CN201610994136.8A priority Critical patent/CN106769275A/zh
Publication of CN106769275A publication Critical patent/CN106769275A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
    • G01N2001/386—Other diluting or mixing processes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，包括以下步骤：取望天树叶片用液氮冷却后研磨成粉末放入离心管，加入预冷TCA‑丙酮溶液，混匀、离心后保留沉淀，加入预冷的乙酸铵－甲醇溶液，离心，向沉淀中加入Tris平衡酚和SDS缓冲液，离心后吸取上层酚层到新的离心管中，加入预冷乙酸铵－甲醇溶液，于‑20℃静止1h，离心，将沉淀用预冷的甲醇和80％丙酮各洗涤和离心2次，置于‑20℃下干燥得到蛋白干粉；向粉末中加入裂解液，离心，取上清液，测定提取液中蛋白质浓度。本发明适用于珍贵树种望天树叶片蛋白质的提取，能够提高样品的蛋白质得率，有效去除多酚和色素等杂质，适用于蛋白质组分析。

Description

一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法
技术领域
本发明涉及一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，尤其适用于制备望天树叶片双向电泳总蛋白样品。
背景技术
望天树(Parashorea chinensis Wang Hsie)为龙脑香科(Dipterocarpaceae)柳桉属(Parashorea)乔木，属国家一级保护植物。望天树生长迅速，树体高大，寿命长，干形圆满，材质坚硬，耐腐性强，纹理较直，结构均匀，而且创切面光洁，加工性能良好，适宜作建筑、造船、高级家具和人造板等用材，用途非常广泛，具有较高的开发与推广价值。由于近年来人类的生产经营活动频繁，自然生境破坏等原因，自然分布范围变得极其狭窄，数量稀少，局部已受不同程度的毁坏，以至陷入濒危的境地，亟待进行相关的研究以加强保护利用。目前，国内对望天树在分类学、形态学、生态学、引种繁殖、资源利用等方面进行了一定的研究，但对望天树环境的适应性及代谢调控机理的研究尚未见报道。
差异蛋白质组学是蛋白质组学研究的一个重要内容，主要是筛选和鉴定不同种类或状态下各样本之间蛋白质组的不同与变化，实现对体系内代谢调控的动态监测，揭示细胞对外界环境刺激的反应途径以及调控机制，同时获得对某些关键蛋白的定性和功能分析，从而揭示机体对内外界环境变化产生的反应。双向电泳是研究蛋白质组学一个重要技术手段，目前珍贵树种蛋白质组学方面的研究很少。建立一种简便、快速和高效提取望天树叶片蛋白质、获得蛋白质点的双向电泳图谱，对开展环境变化下望天树关键差异蛋白质的鉴定，揭示望天树差异蛋白的代谢调控功能和途径具有重要意义，从而为望天树种质资源的抗逆性和迁地保护提供科学依据。
发明内容
为了获得望天树叶片的总蛋白质及双向电泳图谱，本发明提供一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，采用该方法蛋白质提取效率高、双向电泳图谱清晰，对望天树叶片总蛋白质的提取和检测方法进行了优化。
本发明通过以下技术方案达到上述目的，一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取新鲜望天树幼苗叶片液氮冷却5min后,研磨成泛白的粉末，将粉末转移到预冷离心管中并加入预冷的TCA-丙酮溶液，在快速混匀机上涡旋混合均匀，
(2)离心后保留沉淀，加入预冷的乙酸铵－甲醇溶液，混匀后离心，保留沉淀，干燥以去除残留的丙酮；
(3)向沉淀中加入Tris平衡酚和SDS缓冲液，混合均匀后离心；
(4)吸取上层酚层到新的离心管中，加入预冷的乙酸铵－甲醇溶液，混匀后于-20℃静止1h，离心，保留沉淀；
(5)再将沉淀用预冷的甲醇和80％的丙酮各洗涤2次，离心二次，即得到蛋白样品；
(6)置于-20℃下干燥得到的蛋白干粉；
(7)向粉末中加入裂解液，在快速混匀机上涡旋均匀后，离心，取上清液，计算蛋白体积，分装保存，测定提取液中蛋白质浓度。
一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，具体步骤为：
(1)取望天树新鲜叶片3.0g，放入液氮中冷却5min，然后再放入研钵中加入液氮磨成泛白的粉末，将粉末转移到预冷的50ml的离心管中，再加入-20℃预冷的10％TCA-丙酮溶液，在快速混匀机上涡旋混合均匀，4℃18000rpm离心13min；
(2)离心后保留沉淀，并在沉淀中加入预冷的0.1mol/l乙酸铵80％的甲醇溶液，混合均匀，4℃18000rpm离心13min，保留沉淀，超净工作台上干燥30min，去除残留的丙酮；
(3)沉淀中加入Tris平衡酚(Solarbio公司试剂盒)和SDS缓冲液，二种试剂比例为1：1，混合均匀，超净工作台上放置5min，4℃18000rpm离心13min；
(4)吸取上层酚层到新的50ml离心管中，并加入5倍体积的预冷0.1mol/l乙酸铵80％的甲醇溶液，混合均匀，-20℃静止1h，4℃20000rpm离心15min，保留沉淀；
(5)再将沉淀用预冷的甲醇和80％的丙酮各洗涤2次，即得到蛋白样品；
(6)将蛋白样品转移至1.5ml离心管中，然后置于-20℃下干燥，最后将得到的蛋白干粉置于-80℃超低温冰箱中保存待用；
(7)从冰箱中取出蛋白质干粉，进行蛋白质定量，向蛋白干粉中加入裂解液，在快速混匀机上涡旋均匀后，放在37℃恒温水浴锅中30min，常温下12000rpm离心10min，吸取上清到1.5ml离心管，利用Solarbio公司的Bradford蛋白浓度测定试剂盒用Brafford法测定样品中蛋白质含量，建立标准曲线；
(8)采用GE公司的Ettan IPGphor3进行第一向等电聚焦、Ettan DALT six进行第二向SDS垂直电泳，电泳仪为EPS601，获得望天树叶片总蛋白的双向电泳凝胶；
(9)电泳结束后，剥下胶板，放入染色液中于室温摇床，用考马斯亮兰法染色2h后，用30％乙醇+10％乙酸进行脱色至背景清晰，脱色后的凝胶用蒸馏水冲洗3次，获得望天树叶片总蛋白双向电泳凝胶，采用Amersham Imager600获得双向电泳图谱，观察蛋白质点制备质量。
采用本发明能够提高望天树叶片蛋白质提取效率，可获得蛋白点清晰、数目较多、分布均匀、背景清楚的高质量双向电泳凝胶图谱。
附图说明
图1是本发明所述的望天树叶片总蛋白的双向电泳图谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
对比酚-甲醇/乙酸铵沉淀法、TCA-丙酮沉淀法法提取望天树叶片总蛋白的提取效率。
1.酚-甲醇/乙酸铵沉淀法
取望天树新鲜叶片3.0g，放入液氮中冷却5min，然后再放入研钵中加入液氮磨成泛白的粉末，将粉末转移到预冷的50ml的离心管中，再加入-20℃预冷的10％TCA-丙酮溶液，在快速混匀机上涡旋混合均匀，4℃18000rpm离心13min；离心后保留沉淀，并在沉淀中加入预冷的0.1mol/l乙酸铵80％的甲醇溶液，混合均匀，4℃18000rpm离心13min，保留沉淀；超净工作台上干燥30min，去除残留的丙酮；沉淀中加入Tris平衡酚(Solarbio公司试剂盒)和SDS缓冲液，二种试剂比例为1：1。混合均匀，超净工作台上放置5min，4℃18000rpm离心13min；吸取上层酚层到新的50ml离心管中，并加入5倍体积的预冷0.1mol/l乙酸铵80％的甲醇溶液，混合均匀，-20℃静止1h，4℃20000rpm离心15min，保留沉淀；再将沉淀用预冷的甲醇和80％的丙酮各洗涤2次，即得到蛋白样品；将蛋白样品转移至1.5ml离心管中，然后置于-20℃下干燥，最后将得到的蛋白干粉置于-80℃超低温冰箱中保存待用。
2.TCA-丙酮沉淀法
取新鲜望天树叶片3.0g，先用锡箔纸包好，放入液氮中5min，然后再放入研钵中加入0.1g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和0.4g二流苏糖醇(DTT)，液氮研磨成泛白的粉末，将粉末转移到预冷的50ml的离心管中，加入10ml-20℃10％TCA-丙酮溶液(-20℃保存)，混合均匀，-20℃静置过夜，4℃18000rpm离心8min，保存沉淀；沉淀中再加入15ml预冷丙酮，-20℃静置1h,4℃20000rpm离心15min，重复3次，即得到蛋白样品；将蛋白样品转移至1.5ml离心管中，然后置于-20℃下干燥，最后将得到的蛋白干粉置于-80℃超低温冰箱中保存待用。
3.蛋白定量
对上述2种方法提取的望天树叶片总蛋白定量。配制的裂解液成份为7M尿素、2M硫脲、2％(w/v)CHAPS、40mM DTT、5mM EDTA-Na2、1％(w/v)IPG buffer、蛋白酶抑制剂。从冰箱中取出蛋白质干粉，在提取的蛋白干粉中加入裂解液，在快速混匀机上涡旋均匀后，放在37℃恒温水浴锅中30min，常温下12000rpm离心10min，吸取上清到1.5ml离心管，-80℃保存。利用Solarbio公司的Bradford蛋白浓度测定试剂盒对蛋白质进行浓度测定。酚-甲醇/乙酸铵法是TCA-丙酮沉淀法提取量的1.9倍。检测结果见表1。
表1不同提取方法望天树叶片总蛋白质含量 单位：μg/μL
提取方法 重复一 重复二 重复三 平均值
酚-甲醇/乙酸铵法 12.101 11.843 11.326 11.757
TCA-丙酮沉淀法 6.011 7.676 5.164 6.284
实施例2
对酚-甲醇/乙酸铵法提取的蛋白质样品，进行双向电泳，脱色后获后凝胶图谱。
1.采用GE公司的Ettan IPGphor3进行第一向等电聚焦、Ettan DALT six进行第二向SDS垂直电泳，电泳仪为EPS601，获得望天树叶片总蛋白的双向电泳凝胶。
(1)采用pH3-10NL(13cm)的非线性胶条进行第一向等电聚焦，上样量为250μL，蛋白含量650μg。
(2)第一向等电聚集的程序设置：最大电流0.05mA/胶条，电压和时间设置顺序为：50V，0.5hr；100V，0.5hr；300V，1hr；500V，1hr；1000V，1hr；5000V，3hr；5000V－30000V，1hr；1000V，不超过24h。
(3)第二向SDS-PAGE电泳，分离胶浓度为13％。先将电泳仪功率设为1W，1h后设功率为12W，待溴酚蓝到达凝胶底部结束电泳。
(4)第二向SDS-PAGE电泳结束后，剥下胶板，放入染色液中于室温摇床，用考马斯亮兰法染色2h后，用30％乙醇+10％乙酸进行脱色至背景清晰。脱色后的凝胶用蒸馏水冲洗3次，获得望天树叶片总蛋白双向电泳凝胶，采用Amersham Imager600成像仪获得双向电泳图谱，观察蛋白质点制备质量。望天树叶片总蛋白的双向电泳图谱见图1。

Claims (5)

1.一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取新鲜望天树幼苗叶片液氮冷却5min后,研磨成泛白的粉末，将粉末转移到预冷离心管中并加入预冷的TCA-丙酮溶液，在快速混匀机上涡旋混合均匀，
(2)离心后保留沉淀，加入预冷的乙酸铵－甲醇溶液，混匀后离心，保留沉淀，干燥以去除残留的丙酮；
(3)向沉淀中加入Tris平衡酚和SDS缓冲液，混合均匀后离心；
(4)吸取上层酚层到新的离心管中，加入预冷的乙酸铵－甲醇溶液，混匀后于-20℃静止1h，离心，保留沉淀；
(5)再将沉淀用预冷的甲醇和80％的丙酮各洗涤2次，离心二次，即得到蛋白样品；
(6)置于-20℃下干燥得到的蛋白干粉；
(7)向粉末中加入裂解液，在快速混匀机上涡旋均匀后，离心，取上清液，计算蛋白体积，分装保存，测定提取液中蛋白质浓度。
2.根据权利要求1所述的望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
(1)取望天树新鲜叶片3.0g，放入液氮中冷却5min，然后再放入研钵中加入液氮磨成泛白的粉末，将粉末转移到预冷的50ml的离心管中，再加入-20℃预冷的10％TCA-丙酮溶液，在快速混匀机上涡旋混合均匀，4℃18000rpm离心13min；
(2)离心后保留沉淀，并在沉淀中加入预冷的0.1mol/l乙酸铵80％的甲醇溶液，混合均匀，4℃18000rpm离心13min，保留沉淀，超净工作台上干燥30min，去除残留的丙酮；
(3)沉淀中加入Tris平衡酚(Solarbio公司试剂盒)和SDS缓冲液，二种试剂比例为1：1，混合均匀，超净工作台上放置5min，4℃18000rpm离心13min；
(4)吸取上层酚层到新的50ml离心管中，并加入5倍体积的预冷0.1mol/l乙酸铵80％的甲醇溶液，混合均匀，置于-20℃静止1h，4℃20000rpm离心15min，保留沉淀；
(5)再将沉淀用预冷的甲醇和80％的丙酮各洗涤2次，即得到蛋白样品；
(6)将蛋白样品转移至1.5ml离心管中，然后置于-20℃下干燥，最后将得到的蛋白干粉置于-80℃超低温冰箱中保存待用。
3.根据权利要求1所述的望天树叶片蛋白质组分析样品的双向电泳图谱，其特征在于，该双向电泳图谱获取的步骤为：
(1)从冰箱中取出蛋白质干粉，进行蛋白质定量，向蛋白干粉中加入裂解液，在快速混匀机上涡旋均匀后，放在37℃恒温水浴锅中30min，常温下12000rpm离心10min，吸取上清到1.5ml离心管，利用Solarbio公司的Bradford蛋白浓度测定试剂盒用Brafford法测定样品中蛋白质含量，建立标准曲线；
(2)采用GE公司的Ettan IPGphor3进行第一向等电聚焦、Ettan DALT six进行第二向SDS垂直电泳，电泳仪为EPS601，获得望天树叶片总蛋白的双向电泳凝胶；
(3)电泳结束后，剥下胶板，放入染色液中于室温摇床，用考马斯亮兰法染色2h后，用30％乙醇+10％乙酸进行脱色至背景清晰，脱色后的凝胶用蒸馏水冲洗3次，获得望天树叶片总蛋白双向电泳凝胶，采用Amersham Imager600获得双向电泳图谱，观察蛋白质点制备质量。
4.根据权利要求3所述的望天树叶片蛋白质组分析样品的双向电泳图谱，其特征在于，该双向电泳图谱获取的具体步骤为：
(1)采用pH3-10NL(13cm)的非线性胶条进行第一向等电聚焦，上样量为250μL，蛋白含量650μg，
(2)第一向等电聚集的程序设置：最大电流0.05mA/胶条，电压和时间设置顺序为：50V，0.5hr；100V，0.5hr；300V，1hr；500V，1hr；1000V，1hr；5000V，3hr；5000V－30000V，1hr；1000V，不超过24h，
(3)第二向SDS-PAGE电泳，分离胶浓度为13％，先将电泳仪功率设为1W，1h后设功率为12W，待溴酚蓝到达凝胶底部结束电泳，
(4)第二向SDS-PAGE电泳结束后，剥下胶板，放入染色液中于室温摇床，用考马斯亮兰法染色2h后，用30％乙醇+10％乙酸进行脱色至背景清晰，脱色后的凝胶用蒸馏水冲洗3次，获得望天树叶片总蛋白双向电泳凝胶，采用Amersham Imager600成像仪获得双向电泳图谱，观察蛋白质点制备质量。
5.根据权利要求1或2所述的望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法，其特征在于，所述的裂解液成份为7M尿素、2M硫脲、2％(w/v)CHAPS、40mM DTT、5mM EDTA-Na2、1％(w/v)IPG buffer以及蛋白酶抑制剂。
CN201610994136.8A 2016-11-11 2016-11-11 一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法 Pending CN106769275A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610994136.8A CN106769275A (zh) 2016-11-11 2016-11-11 一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610994136.8A CN106769275A (zh) 2016-11-11 2016-11-11 一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106769275A true CN106769275A (zh) 2017-05-31

Family

ID=58973235

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610994136.8A Pending CN106769275A (zh) 2016-11-11 2016-11-11 一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106769275A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105241720A (zh) * 2015-10-20 2016-01-13 中国科学院南海海洋研究所 一种适合双向电泳的红树植物秋茄叶片总蛋白提取方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105241720A (zh) * 2015-10-20 2016-01-13 中国科学院南海海洋研究所 一种适合双向电泳的红树植物秋茄叶片总蛋白提取方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WEI WANG ET AL: "A universal and rapid protocol for protein extraction from recalcitrant plant tissues for proteomic analysis", 《ELECTROPHORESIS》 *
于冯等: "红树植物秋茄叶片双向电泳技术体系的建立及优化", 《热带亚热带植物学报》 *
周琼琼: "茶树总蛋白质提取方法及双向电泳体系的建立", 《热带作物学报》 *
李红兵等: "适于小麦叶片蛋白质组分析的样品提取方法研究", 《西北植物学报》 *
牛屹东等: "《蛋白质双向电泳实验手册》", 31 January 2006 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104630760B (zh) 一种黄铜表面制备紫色化学转化膜的制备方法
CN105289773A (zh) 一种用于植物代谢组分析的样品前处理方法
Li et al. Ultrasonic extraction of oil from Caesalpinia spinosa (Tara) seeds
CN104531679A (zh) 从干燥杏叶片中提取dna的方法
CN106584622A (zh) 木材软化剂及制备法、木材软化方法和制作木材切片方法
CN102241730A (zh) 香蒲假茎总蛋白质的提取和双向电泳分析方法
CN108287097A (zh) 一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用
CN106769275A (zh) 一种望天树叶片蛋白质组分析样品的制备方法
CN108998445A (zh) 一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒及其方法
CN108531546A (zh) 高效便捷提取水稻dna的方法
CN106544386A (zh) 一种核桃油和核桃蛋白肽的高效制取方法
CN108982192A (zh) 一种适于枣染色体倍性测定的细胞核悬浮液快速制备方法
CN110907257A (zh) 一种苏木素染液及其制备方法、应用方法
CN106187978A (zh) 一种提取火龙果皮中原花青素的方法
CN113768151B (zh) 一种白沙绿茶中茶多酚的制备方法及其检测方法
CN104478987B (zh) 一种油棕叶片总蛋白质的专用提取液及提取方法
CN102584972B (zh) 一种去除西瓜叶片Rubisco酶干扰,分离剩余低丰度蛋白质的电泳方法
CN104596826A (zh) 一种泌尿系结石内蛋白的提取方法
CN109848834A (zh) 一种提高钛合金表面质量的组合式加工方法
CN107474031B (zh) 一种利用响应面法优化提取莲蓬原花青素的方法及应用
CN104359738A (zh) 一种适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法
CN103966198B (zh) 一种植物dna的快速提取方法
HAN et al. A simple improved method for protein extraction from
CN103222536A (zh) 一种工业化去除小麦籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法
CN105410593A (zh) 一种针对不同超标程度的镉污染稻米的降镉处理方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170531