CN106718932A - 一种海风藤离体快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海风藤离体快速繁殖方法,涉及植物组织培养技术领域。该方法具体步骤包括:(1)外植体预处理、选取和消毒;(2)海风藤腋芽诱导培养;(3)海风藤不定芽的增殖培养;(4)海风藤不定芽的增殖壮苗培养;(5)海风藤不定芽的生根培养。本发明所述海风藤高效离体快繁方法,其增殖率高及试管苗品质优良,能满足海风藤人工栽培的规模化生产需求,以解决野生海风藤资源日渐稀少而市场上供不应求的现状。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及一种海风藤离体快速繁殖方法。
背景技术
海风藤别名满坑香、老藤、大风藤、岩胡椒,为双子叶植物药胡椒科植物细叶青蒌藤的藤茎,性味归经为辛、苦,微温。海风藤始载于《开宝本草》,又名风藤,具有祛风湿,通经络,理气,治风寒湿痹、关节疼痛、筋脉拘挛、跌打损伤、哮喘、久咳等功效。
海风藤是我国常用大宗中药材,还是沙县小吃传统药膳调味秘方的重要成分。据统计,分布全国各地的沙县小吃店对海风藤干品每年消耗量在100吨以上。然而,随着小吃业快速发展,对海风藤的需求量越来越大,其价格也水涨船高。野生海风藤资源经频繁采挖,日渐稀少,已远不能满足市场需要,人工栽培是解决其问题的主要途径,而大规模优质种苗成为人工栽培的瓶颈。因此建立和完善海风藤繁育体系,是保护和持续利用野生种质资源的主要措施之一。目前,国内外对海风藤人工繁殖的研究较少。
三明市农业科学研究院对海风藤试管苗的快速繁殖方法进行研究,通过组织培养,可使原先主要依赖野生采摘和扦插繁殖的海风藤种苗产量大幅提升。该方法可提高海风藤增殖系数和瓶苗质量,是一种试管苗高效快繁方法,可满足海风藤的规模化种植要求。
发明内容
本发明所解决的技术问题是一种繁殖率高、试管苗品质优良,能大规模繁育海风藤种苗的海风藤离体快速繁殖方法,应用该方法能满足海风藤人工栽培的规模化种植需求,以解决野生海风藤资源日渐稀少而市场上供不应求的现状。
本发明所采用的技术方案是:一种海风藤离体快速繁殖方法,具体步骤如下:
①外植体的预处理、选取和消毒
选择长势旺盛的健康海风藤,喷施30%代森锰锌悬浮液800倍液,每周喷施一次,连续3次;然后剪取海风藤新长出的前5节藤茎,将其藤茎剪成3~5cm的带芽茎,用洗洁精水溶液清洗干净,晾干备用;在超净工作台上用72%乙醇溶液浸泡30~35秒,再用无菌水冲洗2~3次,用无菌滤纸吸干;再用0.1%升汞溶液消毒,前2节嫩茎消毒7~9min,后3节藤茎消毒10~12min,再用无菌水清洗3~4遍,然后用无菌滤纸吸干后备用;
②海风藤腋芽诱导培养
将步骤①处理后的外植体转接到腋芽诱导培养基上,进行诱导培养30~40天,诱导出高为3~5cm的腋芽;所述腋芽诱导培养基的配方为:1/2MS+5.5g/L琼脂+20g/L白糖,PH值为5.8;
③海风藤不定芽的增殖培养
将步骤②诱导培养后的腋芽转接到不定芽增殖培养基上,进行增殖培养30~40天,再将腋芽分切成一节节带芽部分并将其转接到不定芽增殖培养基上,如此循环操作,可获得大量海风藤不定芽;所述不定芽增殖培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
④海风藤不定芽的增殖壮苗培养
将步骤③增殖培养后的不定芽转接到增殖壮苗培养基上,进行壮苗培养30~40天,使植株长高长壮并产生若干丛生苗;所述增殖壮苗培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+1.0mg/L KT+10mg/L多效唑+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
⑤海风藤不定芽的生根培养
将经步骤④壮苗培养后的丛生苗转接到生根培养基上,进行生根培养30~40天,使幼苗基部长出3条以上根系,即可进行海风藤组培苗的驯化和移栽;所述生根培养基的配方为:MS+0.3mg/L KT+5.5g/L琼脂+30g/L白糖+0.2%活性炭,PH值为5.8。
所述步骤②、③、④、⑤中的培养条件为:培养温度为25±2℃,散光光照时间为12小时/天,光照强度为2000lx。
步骤①中所述剪取海风藤新长出的前5节藤茎为可常年剪取。所述30%代森锰锌悬浮液、72%乙醇溶液、0.1%升汞溶液均为质量百分含量。
所述MS即MS培养基。
所述1/2MS即1/2MS培养基,是指将MS配方中大量元素减半,其它不变而配置的培养基。
所述6-BA即6-苄氨基腺嘌呤,所述KT即激动素。
本发明的有益效果是:1、本发明通过采用离体快速繁殖,增殖系数和种苗质量高,可用于大规模繁育海风藤优质种苗,能满足海风藤的规模化生产要求和市场需要,且有利于保护野生海风藤资源和生态环境;2、本发明通过采用科学配方的腋芽诱导培养基、不定芽增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基,不定芽体的增殖率每个培养周期可达3.5倍以上,生根率达100%,种苗健壮;3、本发明通过采用对海风藤外植体进行喷施30%代森锰锌悬浮液800倍液的预处理,在诱导培养阶段采用散光培养,有效地降低诱导的消毒污染率,消毒成功率可达80%以上;4、本发明通过采用在不定芽增殖壮苗培养基中添加多效唑,有效的诱导出健壮的丛生苗,大大的提升海风藤试管苗的品质。
具体实施方式
下面结具体实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1
一种海风藤离体快速繁殖方法,具体步骤如下:
①外植体的预处理、选取和消毒
选择长势旺盛的健康海风藤,喷施30%代森锰锌悬浮液800倍液,每周喷施一次,连续3次;然后剪取海风藤新长出的前5节藤茎,将其藤茎剪成3~5cm的带芽茎,用洗洁精水溶液清洗干净,晾干备用;在超净工作台上用72%乙醇溶液浸泡30秒,再用无菌水冲洗2次,用无菌滤纸吸干;再用0.1%升汞溶液消毒,前2节嫩茎消毒7min,后3节藤茎消毒10min,再用无菌水清洗3遍,然后用无菌滤纸吸干后备用;
②海风藤腋芽诱导培养
将步骤①处理后的外植体转接到腋芽诱导培养基上,进行诱导培养30天,诱导出高为3~5cm的腋芽;所述腋芽诱导培养基的配方为:1/2MS+5.5g/L琼脂+20g/L白糖,PH值为5.8;
③海风藤不定芽的增殖培养
将步骤②诱导培养后的腋芽转接到不定芽增殖培养基上,进行增殖培养30天,再将腋芽分切成一节节带芽部分并将其转接到不定芽增殖培养基上,如此循环操作,可获得大量海风藤不定芽;所述不定芽增殖培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
④海风藤不定芽的增殖壮苗培养
将步骤③增殖培养后的不定芽转接到增殖壮苗培养基上,进行壮苗培养30天,使植株长高长壮并产生若干丛生苗;所述增殖壮苗培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+1.0mg/L KT+10mg/L多效唑+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
⑤海风藤不定芽的生根培养
将经步骤④壮苗培养后的丛生苗转接到生根培养基上,进行生根培养30天,使幼苗基部长出3条以上根系,即可进行海风藤组培苗的驯化和移栽;所述生根培养基的配方为:MS+0.3mg/L KT+5.5g/L琼脂+30g/L白糖+0.2%活性炭,PH值为5.8。
所述步骤②、③、④、⑤中的培养条件为:培养温度为25±2℃,散光光照时间为12小时/天,光照强度为2000lx。
步骤①中所述剪取海风藤新长出的前5节藤茎为可常年剪取。所述30%代森锰锌悬浮液、72%乙醇溶液、0.1%升汞溶液均为质量百分含量。
所述MS即MS培养基。
所述1/2MS即1/2MS培养基,是指将MS配方中大量元素减半,其它不变而配置的培养基。
所述6-BA即6-苄氨基腺嘌呤,所述KT即激动素。
实施例2
一种海风藤离体快速繁殖方法,具体步骤如下:
①外植体的预处理、选取和消毒
选择长势旺盛的健康海风藤,喷施30%代森锰锌悬浮液800倍液,每周喷施一次,连续3次;然后剪取海风藤新长出的前5节藤茎,将其藤茎剪成3~5cm的带芽茎,用洗洁精水溶液清洗干净,晾干备用;在超净工作台上用72%乙醇溶液浸泡35秒,再用无菌水冲洗3次,用无菌滤纸吸干;再用0.1%升汞溶液消毒,前2节嫩茎消毒9min,后3节藤茎消毒12min,再用无菌水清洗4遍,然后用无菌滤纸吸干后备用;
②海风藤腋芽诱导培养
将步骤①处理后的外植体转接到腋芽诱导培养基上,进行诱导培养40天,诱导出高为3~5cm的腋芽;所述腋芽诱导培养基的配方为:1/2MS+5.5g/L琼脂+20g/L白糖,PH值为5.8;
③海风藤不定芽的增殖培养
将步骤②诱导培养后的腋芽转接到不定芽增殖培养基上,进行增殖培养40天,再将腋芽分切成一节节带芽部分并将其转接到不定芽增殖培养基上,如此循环操作,可获得大量海风藤不定芽;所述不定芽增殖培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
④海风藤不定芽的增殖壮苗培养
将步骤③增殖培养后的不定芽转接到增殖壮苗培养基上,进行壮苗培养40天,使植株长高长壮并产生若干丛生苗;所述增殖壮苗培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+1.0mg/L KT+10mg/L多效唑+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
⑤海风藤不定芽的生根培养
将经步骤④壮苗培养后的丛生苗转接到生根培养基上,进行生根培养40天,使幼苗基部长出3条以上根系,即可进行海风藤组培苗的驯化和移栽;所述生根培养基的配方为:MS+0.3mg/L KT+5.5g/L琼脂+30g/L白糖+0.2%活性炭,PH值为5.8。
所述步骤②、③、④、⑤中的培养条件为:培养温度为25±2℃,散光光照时间为12小时/天,光照强度为2000lx。
步骤①中所述剪取海风藤新长出的前5节藤茎为可常年剪取。所述30%代森锰锌悬浮液、72%乙醇溶液、0.1%升汞溶液均为质量百分含量。
所述MS即MS培养基。
所述1/2MS即1/2MS培养基,是指将MS配方中大量元素减半,其它不变而配置的培养基。
所述6-BA即6-苄氨基腺嘌呤,所述KT即激动素。
实施例3
一种海风藤离体快速繁殖方法,具体步骤如下:
①外植体的预处理、选取和消毒
选择长势旺盛的健康海风藤,喷施30%代森锰锌悬浮液800倍液,每周喷施一次,连续3次;然后剪取海风藤新长出的前5节藤茎,将其藤茎剪成3~5cm的带芽茎,用洗洁精水溶液清洗干净,晾干备用;在超净工作台上用72%乙醇溶液浸泡32秒,再用无菌水冲洗2次,用无菌滤纸吸干;再用0.1%升汞溶液消毒,前2节嫩茎消毒8min,后3节藤茎消毒108min,再用无菌水清洗3遍,然后用无菌滤纸吸干后备用;
②海风藤腋芽诱导培养
将步骤①处理后的外植体转接到腋芽诱导培养基上,进行诱导培养35天,诱导出高为3~5cm的腋芽;所述腋芽诱导培养基的配方为:1/2MS+5.5g/L琼脂+20g/L白糖,PH值为5.8;
③海风藤不定芽的增殖培养
将步骤②诱导培养后的腋芽转接到不定芽增殖培养基上,进行增殖培养35天,再将腋芽分切成一节节带芽部分并将其转接到不定芽增殖培养基上,如此循环操作,可获得大量海风藤不定芽;所述不定芽增殖培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
④海风藤不定芽的增殖壮苗培养
将步骤③增殖培养后的不定芽转接到增殖壮苗培养基上,进行壮苗培养35天,使植株长高长壮并产生若干丛生苗;所述增殖壮苗培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+1.0mg/L KT+10mg/L多效唑+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
⑤海风藤不定芽的生根培养
将经步骤④壮苗培养后的丛生苗转接到生根培养基上,进行生根培养35天,使幼苗基部长出3条以上根系,即可进行海风藤组培苗的驯化和移栽;所述生根培养基的配方为:MS+0.3mg/L KT+5.5g/L琼脂+30g/L白糖+0.2%活性炭,PH值为5.8。
所述步骤②、③、④、⑤中的培养条件为:培养温度为25±2℃,散光光照时间为12小时/天,光照强度为2000lx。
步骤①中所述剪取海风藤新长出的前5节藤茎为可常年剪取。所述30%代森锰锌悬浮液、72%乙醇溶液、0.1%升汞溶液均为质量百分含量。
所述MS即MS培养基。
所述1/2MS即1/2MS培养基,是指将MS配方中大量元素减半,其它不变而配置的培养基。
所述6-BA即6-苄氨基腺嘌呤,所述KT即激动素。
上述实施例仅为本发明的具体实施方式,但本发明的设计构思并不局限于此,凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动,均应属于本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种海风藤离体快速繁殖方法,其特征在于,具体步骤如下:
①外植体的预处理、选取和消毒
选择长势旺盛的健康海风藤,喷施30%代森锰锌悬浮液800倍液,每周喷施一次,连续3次;然后剪取海风藤新长出的前5节藤茎,将其藤茎剪成3~5cm的带芽茎,用洗洁精水溶液清洗干净,晾干备用;在超净工作台上用72%乙醇溶液浸泡30~35秒,再用无菌水冲洗2~3次,用无菌滤纸吸干;再用0.1%升汞溶液消毒,前2节嫩茎消毒7~9min,后3节藤茎消毒10~12min,再用无菌水清洗3~4遍,然后用无菌滤纸吸干后备用;
②海风藤腋芽诱导培养
将步骤①处理后的外植体转接到腋芽诱导培养基上,进行诱导培养30~40天,诱导出高为3~5cm的腋芽;所述腋芽诱导培养基的配方为:1/2MS+5.5g/L琼脂+20g/L白糖,PH值为5.8;
③海风藤不定芽的增殖培养
将步骤②诱导培养后的腋芽转接到不定芽增殖培养基上,进行增殖培养30~40天,再将腋芽分切成一节节带芽部分并将其转接到不定芽增殖培养基上,如此循环操作,可获得大量海风藤不定芽;所述不定芽增殖培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
④海风藤不定芽的增殖壮苗培养
将步骤③增殖培养后的不定芽转接到增殖壮苗培养基上,进行壮苗培养30~40天,使植株长高长壮并产生若干丛生苗;所述增殖壮苗培养基的配方为:MS+0.2mg/L 6-BA+1.0mg/L KT+10mg/L多效唑+5.5g/L琼脂+30g/L白糖,PH值为5.8;
⑤海风藤不定芽的生根培养
将经步骤④壮苗培养后的丛生苗转接到生根培养基上,进行生根培养30~40天,使幼苗基部长出3条以上根系,即可进行海风藤组培苗的驯化和移栽;所述生根培养基的配方为:MS+0.3mg/L KT+5.5g/L琼脂+30g/L白糖+0.2%活性炭,PH值为5.8。
2.根据权利要求1所述一种海风藤离体快速繁殖方法,其特征在于:所述步骤②、③、④、⑤中的培养条件为:培养温度为25±2℃,散光光照时间为12小时/天,光照强度为2000lx。
3.根据权利要求1所述一种海风藤离体快速繁殖方法,其特征在于:步骤①中所述剪取海风藤新长出的前5节藤茎为可常年剪取。
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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