CN106692273B - 补骨脂种皮提取物及其提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明实施例提供了一种补骨脂种皮提取物，含有补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素和异补骨脂素；且补骨脂苷和异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.38％，补骨脂素和异补骨脂素的质量百分比含量之和为3.9％～7.8％。本发明实施例还提供了一种补骨脂种皮提取物的提取方法，包括以下步骤：将补骨脂的种皮和种仁分离，取种皮，将种皮研磨成粉末，用醇进行提取，然后固液分离，将分离后的液体进行溶剂回收，获得所述补骨脂种皮提取物。本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物，其中具有潜在肝脏毒性物质的含量较低，因此本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物可降低肝脏毒性风险。

Description

补骨脂种皮提取物及其提取方法
技术领域
本发明涉及中药制剂技术领域，特别是涉及补骨脂种皮提取物及其提取方法。
背景技术
补骨脂为豆科植物补骨脂的果实，是我国传统中药，临床应用广泛。补骨脂具有温肾助阳、纳气平喘、温脾止泻的功效，内用治疗腰膝冷痛、滑精、遗尿、虚寒咳嗽，外用治疗白癜风。现代药理研究表明，补骨脂具有增加心肌收缩力、增强免疫、扩张血管、抗菌、抗肿瘤、雌激素样作用。
文献报道补骨脂中含有100多种化合物，主要包括香豆素、黄酮、单萜酚类化合物。香豆素类化合物主要包括补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂定等；黄酮类化合物主要有补骨脂甲素、补骨脂乙素、新补骨脂异黄酮、巴库查尔酮、补骨脂宁、Corylifol A、Corylifol C等；单萜酚类化合物主要为补骨脂酚。
虽然补骨脂具有多种功效，但是研究发现补骨脂同时也具有一定的肝脏毒性。研究表明，补骨脂中具有肝脏毒性的化合物主要为补骨脂素和异补骨脂素；当补骨脂素或异补骨脂素的浓度较高时，长期服用易导致肝损伤。研究还发现，补骨脂苷和异补骨脂苷在人体肠道菌群作用下会转化为补骨脂素和异补骨脂素，使得补骨脂素和异补骨脂素在人体中被大量吸收，从而导致肝损伤。
发明内容
发明人经过广泛的研究，出人意料的发现，补骨脂中的补骨脂苷和异补骨脂苷主要存在于补骨脂的种仁中，而黄酮类化合物和单萜酚类化合物主要存在于补骨脂的种皮中，将补骨脂中的种仁除去，留下种皮，可去除大量的补骨脂苷和异补骨脂苷，保留黄酮类化合物和单萜酚类化合物，从而降低肝脏毒性风险。基于此，本发明实施例的第一目的在于提供一种补骨脂种皮提取物，以降低肝脏毒性风险。具体技术方案如下：
一种补骨脂种皮提取物，所述补骨脂种皮提取物含有补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素和异补骨脂素；且所述补骨脂苷和所述异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.38％，所述补骨脂素和所述异补骨脂素的质量百分比含量之和为3.9％～7.8％。
在本发明的一种优选实施方式中，所述补骨脂素和所述异补骨脂素的质量百分比含量之和为5％～7％。
在本发明的一种更为优选实施方式中，所述补骨脂种皮提取物还含有质量百分比含量为0.10％～0.93％的补骨脂香豆雌烷B，质量百分比含量为0.25％～2.21％的Corylifol C，质量百分比含量为0.11％～1.02％的巴库查尔酮，质量百分比含量为0.34％～3.09％的补骨脂甲素，质量百分比含量为0.77％～6.92％的新补骨脂异黄酮，质量百分比含量为0.82％～7.40％的补骨脂乙素，质量百分比含量为0.48％～4.33％的CorylifolA，质量百分比含量为0.17％～1.55％的补骨脂查尔酮，质量百分比含量为11.14％～80％的补骨脂酚。
本发明实施例的第二目的在于提供一种补骨脂种皮提取物的提取方法，包括以下步骤：
将补骨脂的种皮和种仁分离，取种皮，将种皮研磨成粉末，用醇进行提取，然后固液分离，将分离后的液体进行溶剂回收，获得所述补骨脂种皮提取物；
其中，补骨脂种皮与所述醇的质量体积比为0.01g/mL～0.1g/mL。
在本发明的一种优选实施方式中，将补骨脂加水浸泡12小时后，剥取种皮，并将种皮晾干，然后将晾干的种皮研磨成粉末。
在本发明的一种更为优选实施方式中，所述醇为乙醇。
在本发明的一种更为优选实施方式中，所述提取为加热回流提取。
在本发明的一种更为优选实施方式中，
用醇加热回流提取1小时～3小时后，放置至室温，固液分离，分离得到的液体为第一提取液；
将分离得到的固体用醇再加热回流提取1小时～3小时后，放置至室温，固液分离，分离得到的液体为第二提取液；
将所述第一提取液和所述第二提取液混合后进行溶剂回收，获得所述补骨脂种皮提取物。
在本发明的一种更为优选实施方式中，采用减压回收溶剂法对分离后的液体进行溶剂回收。
本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物，其中补骨脂苷和异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.38％，补骨脂素和异补骨脂素的质量百分比含量之和为3.9％～7.8％，由此可见，具有潜在肝脏毒性物质的含量是较低的，因此本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物可降低肝脏毒性风险。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例中第一混合标准品溶液的超高效液相色谱图；
图2为本发明实施例1中样品1的种皮供试品溶液的超高效液相色谱图；
图3为本发明实施例1中样品1的种仁供试品溶液的超高效液相色谱图；
图4为本发明实施例2中补骨脂种皮提取物的供试品溶液的超高效液相色谱图；
图5为本发明实施例中第二混合标准品溶液的超高效液相色谱图；
图6为本发明实施例3中补骨脂种皮提取物的供试品溶液的超高效液相色谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供了一种补骨脂种皮提取物，其含有补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素和异补骨脂素；且基于该补骨脂种皮提取物的总质量，补骨脂苷和异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.38％，补骨脂素和异补骨脂素的质量百分比含量之和为3.9％～7.8％，优选为5％～7％。优选的，上述补骨脂种皮提取物还含有质量百分比含量为0.10％～0.93％的补骨脂香豆雌烷B，质量百分比含量为0.25％～2.21％的Corylifol C，质量百分比含量为0.11％～1.02％的巴库查尔酮，质量百分比含量为0.34％～3.09％的补骨脂甲素，质量百分比含量为0.77％～6.92％的新补骨脂异黄酮，质量百分比含量为0.82％～7.40％的补骨脂乙素，质量百分比含量为0.48％～4.33％的Corylifol A，质量百分比含量为0.17％～1.55％的补骨脂查尔酮，质量百分比含量为11.14％～80％的补骨脂酚。需要说明的是，Corylifol C的结构式如下所示：
Figure GDA0002942746510000041
Corylifol A的结构式如下所示：
Figure GDA0002942746510000042
本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物，其中补骨脂苷和异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.38％，补骨脂素和异补骨脂素的质量百分比含量之和为3.9％～7.8％，由此可见，具有潜在肝脏毒性物质的含量是较低的，因此本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物可降低肝脏毒性风险。
本发明实施例还提供了一种补骨脂种皮提取物的提取方法，包括以下步骤：
将补骨脂的种皮和种仁分离，取种皮，将种皮研磨成粉末，用醇进行提取，然后固液分离，将分离后的液体进行溶剂回收，获得所述补骨脂种皮提取物。其中，补骨脂种皮与所述醇的质量体积比为0.01g/mL～0.1g/mL。
在操作过程中，本领域技术人员可以使用刀片等工具将补骨脂的种皮和种仁分离，也可以先将补骨脂进行浸泡，然后采用镊子等工具将种皮和种仁分离，具体采用何种方法将补骨脂的种皮和种仁分离，本发明实施例在此不进行限定。优选的，将补骨脂加水浸泡12小时后，剥取种皮，并将种皮晾干，然后将晾干的种皮研磨成粉末。
提取所用的醇可以为甲醇、乙醇等，从安全无毒考虑，优选为乙醇。提取方法可以采用加热回流提取，也可以采用超声提取；优选的，采用加热回流提取；更优选的，可以采用以下方式进行提取：用醇加热回流提取1小时～3小时后，放置至室温，固液分离，分离得到的液体为第一提取液，将分离得到的固体用醇再加热回流提取1小时～3小时后，放置至室温，固液分离，分离得到的液体为第二提取液，将上述第一提取液和上述第二提取液混合后进行溶剂回收，获得补骨脂种皮提取物。上述提取过程中，优选采用减压回收溶剂法对分离后的液体进行溶剂回收。
下面将通过具体实施例，对本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物及其提取方法进行详细说明。实施例中所用的试剂均市售可得。
实施例1～3中的各供试品溶液以及本发明实施例中的第一混合标准品溶液和第二混合标准品溶液，均采用超高效液相色谱进行测定，且所采用的色谱条件均相同，色谱条件具体如下：
仪器：Waters ACQUITY UPLCTM system超高效液相色谱仪；
色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18(其中色谱柱中的填料粒径为1.7μm，色谱柱内径为2.1mm，柱长为50mm)；
柱温：60℃，流速：0.3mL/分钟，检测波长：246nm，进样量：2μL
流动相：0.1％甲酸水溶液-甲醇，梯度洗脱，洗脱程序见表1。
表1超高效液相色谱的梯度洗脱程序
Figure GDA0002942746510000061
第一混合标准品溶液的配制及测定
(a)第一混合标准品溶液的配制
取补骨脂苷1.02mg，异补骨脂苷1.03mg，补骨脂素1.06mg，异补骨脂素1.04mg，补骨脂香豆雌烷B 0.98mg，Corylifol C 1.12mg，巴库查尔酮1.03mg，补骨脂甲素1.01mg，新补骨脂异黄酮0.99mg，补骨脂宁1.21mg，补骨脂乙素1.13mg，补骨脂定1.08mg，4″,5″-去氢异补骨脂定1.04mg，Corylifol A1.06mg，补骨脂查尔酮1.01mg，补骨脂酚1.00mg，精密称定，分别置于1mL容量瓶中，用甲醇(体积百分比浓度为100％的甲醇)溶解并定容至刻度，分别获得浓度为1.02mg/mL的补骨脂苷储备液、1.03mg/mL的异补骨脂苷储备液、1.06mg/mL的第一补骨脂素储备液、1.04mg/mL的第一异补骨脂素储备液、0.98mg/mL的第一补骨脂香豆雌烷B的储备液、1.12mg/mL第一Corylifol C的储备液、1.03mg/mL的第一巴库查尔酮储备液、1.01mg/mL的第一补骨脂甲素储备液、0.99mg/mL的第一新补骨脂异黄酮储备液、1.21mg/mL的补骨脂宁储备液、1.13mg/mL的第一补骨脂乙素储备液、1.08mg/mL的第一补骨脂定储备液、1.04mg/mL的第一4″,5″-去氢异补骨脂定储备液、1.06mg/mL的第一CorylifolA储备液、1.01mg/mL的第一补骨脂查尔酮储备液、1.00mg/mL的第一补骨脂酚储备液，备用。分别取补骨脂苷储备液400μL、异补骨脂苷储备液400μL、第一补骨脂素储备液1000μL、第一异补骨脂素储备液1000μL，置于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得混合储备液，备用。取第一补骨脂香豆雌烷B、第一Corylifol C、第一巴库查尔酮、第一补骨脂甲素、第一新补骨脂异黄酮储备液、补骨脂宁、第一补骨脂乙素、第一补骨脂定、第一4″,5″-去氢异补骨脂定、第一Corylifol A、第一补骨脂查尔酮、第一补骨脂酚储备液各100μL，与上述混合储备液1200μL，混匀，即得第一混合标准品溶液。第一混合标准品溶液中浓度分别为补骨脂苷40.8μg/mL、异补骨脂苷41.2μg/mL、补骨脂素106.00μg/mL、异补骨脂素104.00μg/mL、补骨脂香豆雌烷B 40.83μg/mL、Corylifol C 46.67μg/mL、巴库查尔酮42.92μg/mL、补骨脂甲素42.08μg/mL、新补骨脂异黄酮41.25μg/mL、补骨脂宁50.42μg/mL、补骨脂乙素47.08μg/mL、补骨脂定45.00μg/mL、4″,5″-去氢异补骨脂定43.33μg/mL、Corylifol A 44.17μg/mL、补骨脂查尔酮42.08μg/mL、补骨脂酚41.67μg/mL。
(b)第一混合标准品溶液的测定
采用超高效液相色谱对上述第一混合标准品溶液进行测定，得到的超高效液相色谱图如图1所示。对图1中的各种化合物的色谱峰进行标记，标记为1～16的色谱峰依次为补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂香豆雌烷B、Corylifol C、巴库查尔酮、补骨脂甲素、新补骨脂异黄酮、补骨脂宁、补骨脂乙素、补骨脂定、4″,5″-去氢异补骨脂定、Corylifol A、补骨脂查尔酮、补骨脂酚的色谱峰。其中，补骨脂定和4″,5″-去氢异补骨脂定的峰在本发明实施例的色谱条件下难以分离，因此色谱图中表现为同一个峰。
实施例1用刀片分离补骨脂的种皮和种仁后，测定种皮和种仁中的化合物
(a)分离种皮和种仁
取4种补骨脂样品，用刀片将补骨脂的种皮和种仁分离，然后分别称重，结果见表2。
表2 4种补骨脂样品的种仁和种皮的质量
样品号 1 2 3 4
产地 广西 河北 河北 河南
种仁质量(g) 1.38 2.21 2.27 1.71
种皮质量(g) 0.69 1.63 1.91 1.44
总质量(g) 2.07 3.84 4.18 3.15
种皮占总质量的百分比(％) 33.29 42.47 45.69 45.77
(b)分别制备种皮和种仁的供试品溶液
取上述样品1的种皮，用研钵研碎，得样品1的种皮粉末；取上述样品1的种皮粉末0.3g，精密称定，置于100mL的容量瓶中，加适量甲醇，超声提取0.5小时，放置至室温，定容至刻度，摇匀，14000rpm离心10分钟，取上清液1mL，然后加入1mL体积百分比浓度为30％的甲醇水溶液，混匀，即得样品1的种皮供试品溶液。
取上述样品1的种仁，用研钵研碎，得样品1的种仁粉末；取上述样品1的种仁粉末0.25g，精密称定，置于100mL的容量瓶中，加适量甲醇，超声提取0.5小时，放置至室温，定容至刻度，摇匀，14000rpm离心10分钟，取上清液1mL，然后加入1mL体积百分比浓度为30％的甲醇水溶液，混匀，即得样品1的种仁供试品溶液。
按照上述步骤分别制备样品2～4的种皮供试品溶液和种仁供试品溶液。
(c)对各样品的种皮和种仁供试品溶液进行测定
分别采用超高效液相色谱对上述样品1～4的种皮供试品溶液和种仁供试品溶液进行测定，共得到8张超高效液相色谱图。
图2为样品1的种皮供试品溶液的超高效液相色谱图，图3为样品1的种仁供试品溶液的超高效液相色谱图。图2和图3中的小图为图中虚线所示区域的放大图。通过与图1进行对比，对图2和图3中的色谱峰进行标记，图2和图3中标记为1～16的色谱峰依次为补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂香豆雌烷B、Corylifol C、巴库查尔酮、补骨脂甲素、新补骨脂异黄酮、补骨脂宁、补骨脂乙素、补骨脂定、4″,5″-去氢异补骨脂定、Corylifol A、补骨脂查尔酮、补骨脂酚的色谱峰。分别从图2和图3中读取各化合物的峰面积，按照下式计算样品1中各化合物的Pi(％)和Pi＇(％)：
Figure GDA0002942746510000091
Pi'＝1-Pi
其中，i代表某种化合物，Pi为化合物i在种皮中的质量占该化合物总量的百分比；Pi＇为化合物i在种仁中的质量占该化合物总量的百分比，M为样品1的种皮质量；M＇为样品1的种仁质量；A为图2中化合物i的峰面积；A＇为图3中化合物i的峰面积；m为制备种皮供试品溶液时精密称定的种皮的质量；m＇为制备种仁供试品溶液时精密称定的种仁的质量。
按照上述步骤计算获得样品2～4中各化合物的Pi和Pi＇。计算结果具体见表3。
表3样品1～4中各化合物的Pi和Pi＇
Figure GDA0002942746510000101
由表3可以发现，用刀片分离补骨脂的种皮和种仁后，获得的种仁中含有大部分的补骨脂苷和异补骨脂苷，部分补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂定和4″,5″-去氢异补骨脂定，以及少量的黄酮和单萜酚类化合物；而大部分的黄酮和单萜酚类化合物存在于种皮中。
由实施例1可见，补骨脂中的补骨脂苷和异补骨脂苷主要存在于补骨脂的种仁中，而黄酮类化合物和单萜酚类化合物主要存在于补骨脂的种皮中，因此将补骨脂中的种仁除去，留下种皮，可去除大量的补骨脂苷和异补骨脂苷，保留黄酮类化合物和单萜酚类化合物，从而降低肝脏毒性风险。
实施例2补骨脂种皮提取物的提取及测定
(a)提取补骨脂种皮提取物
取补骨脂，加水浸泡12小时，剥取种皮，晾干，得补骨脂种皮36.2595g(种仁40.0672g)。将上述补骨脂种皮用研钵研碎，获得补骨脂种皮粉末。取上述补骨脂种皮粉末15.0298g，置于250mL的圆底烧瓶中，加入150mL的乙醇，加热回流提取1小时，放置至室温，过滤，该滤液为第一提取液；将过滤得到的固体再置于250mL的圆底烧瓶中，加入150mL的乙醇，加热回流提取1小时，放置至室温，过滤，该滤液为第二提取液。将第一提取液和第二提取液混合，得到混合液，对上述混合液采用减压回收溶剂法进行溶剂回收后获得浸膏状的补骨脂种皮提取物5.8071g。
(b)对补骨脂种皮提取物进行测定
取上述补骨脂种皮提取物0.2g，精密称定，置于25mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。然后取该溶液1mL，置于25mL的容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即得补骨脂种皮提取物的供试品溶液。
对上述补骨脂种皮提取物的供试品溶液，采用超高效液相色谱进行测定，得到的超高效液相色谱图如图4所示。通过与图1对比，发现未检测到补骨脂苷和异补骨脂苷的峰，这说明补骨脂苷和异补骨脂苷的含量低于该超高效液相色谱的检测限，该超高效液相色谱对于补骨脂苷的检测限为0.09μg/mL，对于异补骨脂苷的检测限为0.10μg/mL，由此可以得知上述补骨脂种皮提取物中补骨脂苷和异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.059％。此外，通过与图1对比，对图4中的色谱峰进行标记，图4中标记为3～9、11、14～16的色谱峰依次为补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂香豆雌烷B、Corylifol C、巴库查尔酮、补骨脂甲素、新补骨脂异黄酮、补骨脂乙素、Corylifol A、补骨脂查尔酮、补骨脂酚的色谱峰。
为了对上述补骨脂种皮提取物中各种化合物的含量进行精确测定，发明人配制了第二混合标准品溶液，并对其进行了测定。
(c)第二混合标准品溶液的配制
取补骨脂素1.06mg，异补骨脂素1.04mg，补骨脂香豆雌烷B1.00mg，Corylifol C1.00mg，巴库查尔酮1.01mg，补骨脂甲素1.03mg，新补骨脂异黄酮0.99mg，补骨脂乙素1.00mg，补骨脂定1.04mg，4″,5″-去氢异补骨脂定1.03mg，Corylifol A1.00mg，补骨脂查尔酮1.01mg，补骨脂酚8.87mg，精密称定，分别置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分别获得浓度为0.106mg/mL的第二补骨脂素储备液、0.104mg/mL的第二异补骨脂素储备液、0.100mg/mL的第二补骨脂香豆雌烷B的储备液、0.100mg/mL第二Corylifol C的储备液、0.101mg/mL的第二巴库查尔酮储备液、0.103mg/mL的第二补骨脂甲素储备液、0.099mg/mL的第二新补骨脂异黄酮储备液、0.100mg/mL的第二补骨脂乙素储备液、0.104mg/mL的第二补骨脂定储备液、0.103mg/mL的第二4″,5″-去氢异补骨脂定储备液、0.100mg/mL的第二Corylifol A储备液、0.101mg/mL的第二补骨脂查尔酮储备液、0.887mg/mL的第二补骨脂酚储备液，备用。分别取第二补骨脂素储备液960μL、第二异补骨脂素储备液836μL、第二补骨脂香豆雌烷B储备液98μL、第二Corylifol C储备液225μL、第二巴库查尔酮储备液37μL、第二补骨脂甲素储备液318μL、第二新补骨脂异黄酮储备液677μL、第二补骨脂乙素储备液546μL、第二补骨脂定储备液280μL、第二4″,5″-去氢异补骨脂定储备液320μL、第二CorylifolA储备液440μL、第二补骨脂查尔酮储备液44μL、第二补骨脂酚储备液1000μL，置于同一10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得第二混合标准品溶液。第二混合标准品溶液中浓度分别为补骨脂素10.18μg/mL、异补骨脂素8.69μg/mL、补骨脂香豆雌烷B 0.98μg/mL、Corylifol C 2.25μg/mL、巴库查尔酮0.37μg/mL、补骨脂甲素3.28μg/mL、新补骨脂异黄酮6.70μg/mL、补骨脂乙素5.46μg/mL、补骨脂定2.91μg/mL、4″,5″-去氢异补骨脂定3.30μg/mL、Corylifol A 4.40μg/mL、补骨脂查尔酮0.44μg/mL、补骨脂酚88.7μg/mL。
(d)第二混合标准品溶液的测定
采用超高效液相色谱对上述第二混合标准品溶液进行测定，得到的超高效液相色谱图如图5所示。对图5中的各种化合物的色谱峰进行标记，标记为3～9、11～16的色谱峰依次为补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂香豆雌烷B、Corylifol C、巴库查尔酮、补骨脂甲素、新补骨脂异黄酮、补骨脂乙素、补骨脂定、4″,5″-去氢异补骨脂定、Corylifol A、补骨脂查尔酮、补骨脂酚的色谱峰。其中，补骨脂定和4″,5″-去氢异补骨脂定的峰在本发明实施例的色谱条件下难以分离，因此色谱图中表现为同一个峰。
(e)计算各化合物在补骨脂种皮提取物中的质量百分比含量
从图4、图5中分别读取各化合物的峰面积，按照下式计算得到补骨脂种皮提取物的供试品溶液中化合物i的浓度Ci(μg/mL)：
Ci＝(C标*Ai)/A标
其中，C标为第二混合标准品溶液中化合物i的浓度(μg/mL)，Ai为图4中化合物i的峰面积，A标为图5中化合物i的峰面积。
然后再按照下式将上述浓度Ci换算成质量百分比含量Ci＇(％)：
Ci＇＝(Ci*25*25*10-6*100％)/m1
其中，m1为在制备补骨脂种皮提取物的供试品溶液时精密称定的补骨脂种皮提取物的质量。
通过上述计算得到各化合物在补骨脂种皮提取物中的质量百分比含量Ci＇具体如下：补骨脂素的质量百分比含量为3.146％、异补骨脂素的质量百分比含量为3.043％、补骨脂香豆雌烷B的质量百分比含量为0.312％、Corylifol C的质量百分比含量为0.715％、巴库查尔酮的质量百分比含量为0.337％、补骨脂甲素的质量百分比含量为1.031％、新补骨脂异黄酮的质量百分比含量为2.299％、补骨脂乙素的质量百分比含量为2.469％、Corylifol A的质量百分比含量为1.441％、补骨脂查尔酮的质量百分比含量为0.486％、补骨脂酚的质量百分比含量为33.464％。
实施例3补骨脂种皮提取物的提取及测定
(a)提取补骨脂种皮提取物
取补骨脂，加水浸泡12小时，剥取种皮，晾干，得补骨脂种皮36.2595g(种仁40.0672g)。将上述补骨脂种皮用研钵研碎，获得补骨脂种皮粉末。取上述补骨脂种皮粉末15.0362g，置于250mL的圆底烧瓶中，加入150mL的乙醇，加热回流提取1小时，放置至室温，过滤，该滤液为第一提取液；将过滤得到的固体再置于250mL的圆底烧瓶中，加入150mL的乙醇，加热回流提取1小时，放置至室温，过滤，该滤液为第二提取液。将第一提取液和第二提取液混合，得到混合液，对上述混合液采用减压回收溶剂法进行溶剂回收后获得浸膏状的补骨脂种皮提取物5.5711g。
(b)对补骨脂种皮提取物进行测定
取上述补骨脂种皮提取物0.2g，精密称定，置于25mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。然后取该溶液1mL，置于25mL的容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即得补骨脂种皮提取物的供试品溶液。
对上述补骨脂种皮提取物的供试品溶液，采用超高效液相色谱进行测定，得到的超高效液相色谱图如图6所示。通过与图1对比，发现未检测到补骨脂苷和异补骨脂苷的峰，这说明补骨脂苷和异补骨脂苷的含量低于该超高效液相色谱的检测限，由此可以得知上述补骨脂种皮提取物中补骨脂苷和异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.059％。此外，通过与图1对比，对图6中的色谱峰进行标记，图6中标记为3～9、11、14～16的色谱峰依次为补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂香豆雌烷B、Corylifol C、巴库查尔酮、补骨脂甲素、新补骨脂异黄酮、补骨脂乙素、Corylifol A、补骨脂查尔酮、补骨脂酚的色谱峰。
从图5、图6中分别读取各化合物的峰面积，按照上述Ci的计算公式计算得到补骨脂种皮提取物的供试品溶液中化合物i的浓度Ci，然后再按照上述Ci＇的计算公式将Ci换算成质量百分比含量Ci＇。
计算得到各化合物在补骨脂种皮提取物中的质量百分比含量Ci＇具体如下：补骨脂素的质量百分比含量为3.129％、异补骨脂素的质量百分比含量为3.037％、补骨脂香豆雌烷B的质量百分比含量为0.312％、Corylifol C的质量百分比含量为0.759％、巴库查尔酮的质量百分比含量为0.342％、补骨脂甲素的质量百分比含量为1.031％、新补骨脂异黄酮的质量百分比含量为2.312％、补骨脂乙素的质量百分比含量为2.464％、Corylifol A的质量百分比含量为1.444％、补骨脂查尔酮的质量百分比含量为0.550％、补骨脂酚的质量百分比含量为33.365％。
由实施例2和实施例3可以发现，本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物中，补骨脂苷和异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.38％，补骨脂素和异补骨脂素的质量百分比含量之和为3.9％～7.8％，也就是说，具有潜在肝脏毒性物质的含量是较低的，因此本发明实施例提供的一种补骨脂种皮提取物可降低肝脏毒性风险。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
本说明书中的各个实施例均采用相关的方式描述，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处。尤其，对于系统实施例而言，由于其基本相似于方法实施例，所以描述的比较简单，相关之处参见方法实施例的部分说明即可。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种补骨脂种皮提取物，其特征在于，所述补骨脂种皮提取物含有补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素和异补骨脂素；且所述补骨脂苷和所述异补骨脂苷的质量百分比含量之和小于0.38％，所述补骨脂素和所述异补骨脂素的质量百分比含量之和为5％～7％；
所述补骨脂种皮提取物还含有质量百分比含量为0.10％～0.93％的补骨脂香豆雌烷B，质量百分比含量为0.25％～2.21％的Corylifol C，质量百分比含量为0.11％～1.02％的巴库查尔酮，质量百分比含量为0.34％～3.09％的补骨脂甲素，质量百分比含量为0.77％～6.92％的新补骨脂异黄酮，质量百分比含量为0.82％～7.40％的补骨脂乙素，质量百分比含量为0.48％～4.33％的CorylifolA，质量百分比含量为0.17％～1.55％的补骨脂查尔酮，质量百分比含量为11.14％～80％的补骨脂酚；
所述的补骨脂种皮提取物的提取方法包括以下步骤：
将补骨脂的种皮和种仁分离，取种皮，将种皮研磨成粉末，用乙醇进行加热回流提取，然后固液分离，将分离后的液体进行溶剂回收，获得所述补骨脂种皮提取物；
其中，补骨脂种皮与所述乙醇的质量体积比为0.01g/mL～0.1g/mL。
2.如权利要求1所述的补骨脂种皮提取物，其特征在于，将补骨脂加水浸泡12小时后，剥取种皮，并将种皮晾干，然后将晾干的种皮研磨成粉末。
3.如权利要求1所述的补骨脂种皮提取物，其特征在于，采用减压回收溶剂法对分离后的液体进行溶剂回收。
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