CN106667595B - 一种蚕丝蛋白种植牙及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种蚕丝蛋白种植牙及其制备方法,包括如下步骤:首先制备蚕丝蛋白溶液;然后通过冷冻干燥工艺将所述蚕丝蛋白溶液转变为无水蚕丝蛋白;接着将所述无水蚕丝蛋白溶解于六氟异丙醇中,获得蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液;接着将所述蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液注入模具中,通过甲醇处理和风干工艺制成蚕丝蛋白棒材;再将所述蚕丝蛋白棒材切削成种植牙,还可以在种植牙表面粘接高硬度牙冠。通过控制蚕丝蛋白溶液制备参数、干燥固化等参数以及掺杂固相增强颗粒,可以控制蚕丝蛋白种植牙的力学性能,获得与人体骨骼力学参数、牙齿咬合匹配且与人体生物组织兼容性好的种植牙。
Description
技术领域
本发明属于生物医药材料技术领域,涉及一种蚕丝蛋白种植牙及其制备方法。
背景技术
种植牙也称为人类的第三副牙齿,是一种以植入骨组织内的下部结构为基础来支持、固位上部牙修复体的缺牙修复方式。它包括下部的支持种植体和上部的牙修复体两部分。采用人工材料(如金属、陶瓷等)制成种植体(一般类似牙根形态),经手术方法植入组织内(通常是上下颌)并获得骨组织牢固的固位支持,通过特殊的装置和方式连接支持上部的牙修复体。种植牙可以获得与天然牙功能、结构以及美观效果十分相似的修复效果,已经成为越来越多缺牙患者的首选修复方式。
钛及钛合金目前应用较为广泛,具有良好的生物相容性,但无生物活性。为了提高钛合金的生物活性,须在其表面制备羟基磷灰石等生物活性涂层。烤瓷牙是一种在真空条件下,通过高温将陶瓷粉熔融并结合到经过特殊处理过的金属表面上而制作成的修复体,从结构上分内冠和釉面瓷层,从质地上分为金属内冠、和全瓷内冠烤瓷。由于烤瓷牙冠边缘的不密合,会容易导致牙龈的炎症,长期发炎还会导致牙周疾病的发生。树脂修复是指因龋齿、楔状缺损、外伤等造成牙体组织缺损者,使用复合树脂材料进行修补,以恢复其外形和功能。如今,牙修复粘接技术和复合树脂材料已能够达到牢固美观的临床使用要求,但在树脂强度和人体组织兼容性方面仍需进一步提高。
蚕丝是熟蚕结茧时分泌液凝固而成的连续长纤维,蚕丝蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白,含量约占蚕丝的70%~80%,含有18种氨基酸。蚕丝蛋白本身具有良好的机械性能和理化性质,并且与人体有极好的生物相容性,蚕丝蛋白材料在人体降解之后是氨基酸和多肽,对人体无毒害作用,所以蚕丝蛋白被广泛应用于生物医学研究领域。
发明内容
鉴于以上情况,本发明的目的在于提供一种蚕丝蛋白种植牙及其制备方法,用于解决现有技术中种植牙强度不够、和人体组织兼容性较低的问题。
为实现上述目的及其他相关目的,本发明提供一种蚕丝蛋白种植牙的制备方法,所述制备方法包括:
制备蚕丝蛋白溶液;
通过冷冻干燥工艺将所述蚕丝蛋白溶液转变为无水蚕丝蛋白;
将所述无水蚕丝蛋白溶解于六氟异丙醇或者水中,获得蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液或者蚕丝蛋白的水溶液;
将所述蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液或者蚕丝蛋白的水溶液注入模具中,通过甲醇处理和风干工艺制成蚕丝蛋白棒材;
将所述蚕丝蛋白棒材切削成种植牙。
优选地,所述制备蚕丝蛋白溶液的方法为:
1)将蚕茧置于碳酸钠溶液中加热,进行脱胶,形成蚕丝;
2)将所述蚕丝置于超纯水中洗涤,重复数次,进行干燥;
3)将干燥后的所述蚕丝浸没于溴化锂溶液中并充分混合,保温一定时间,得到蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液;
4) 将所述蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液装入透析袋中,置于超纯水中透析;
5)透析后,将所述透析袋中的溶液进行离心分离,收集上层清液,最终得到所需的蚕丝蛋白溶液。
优选地,所述步骤1)中,碳酸钠溶液的浓度为0~100g/L,蚕茧质量和碳酸钠溶液体积比为10:(1~100)g/L。
优选地,所述步骤1)中,加热方式为电炉加热或高压锅加热,加热温度为50~120℃,加热压强为0.5~1MPa,加热时间为1s~1000h。
优选地,所述步骤2)中,洗涤方式为搅拌洗涤或静置浸泡,其中,搅拌洗涤的搅拌方式为机械搅拌或磁力搅拌,磁力搅拌速度为1~2000r/min;单次洗涤过程中,蚕丝和水质量比为1:(10~1000),时间为1s~200h,每次洗涤后取出蚕丝并挤干,洗涤重复次数为1~50 次。
优选地,所述步骤2)中,进行干燥的方式为自然风干或加热通风干燥,其中,加热通风干燥的加热温度为40~100℃,干燥时间为0.1~100h。
优选地,所述步骤3)中,溴化锂溶液浓度为0.01~2g/mL,干燥的蚕丝质量和溴化锂溶液体积比为(1~100):100g/mL。
优选地,所述步骤3)中,保温温度为20~100℃,保温时间为0.1~100h。
优选地,所述步骤4)中,透析袋规格为10~10000000Da,透析方式为静置透析或磁力搅拌透析,其中,磁力搅拌透析的搅拌速度为1~2000r/min,透析过程中换水的时间间隔为 0.1~100h,每次所换超纯水的体积为1mL~1000L。
优选地,所述步骤5)中,离心分离的转速为1~40000r/min,时间为1s~10h,离心时的温度为-3~10℃。
优选地,所述冷冻干燥工艺的过程包括:将所述蚕丝蛋白溶液先在-80~0℃的环境中冷冻,然后在冷冻干燥机中真空冷冻处理1~500小时,所述冷冻干燥机的真空压强为0.001~1 mBar,温度为-80~0℃。
优选地,在形成无水蚕丝蛋白和蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液的步骤之间,还包括对所述无水蚕丝蛋白进行固相增强颗粒掺杂的步骤,其中,掺杂的所述固相增强颗粒为陶瓷粉末、金属粉末或者聚合物粉末,所述固相增强颗粒与无水蚕丝蛋白的质量比为1:100~100:1,所述无水蚕丝蛋白和固相增强颗粒混合粉末的总质量与六氟异丙醇的质量比为1:(1~10),溶解温度范围为5℃~50℃。
优选地,所述无水蚕丝蛋白和六氟异丙醇质量比为1:(1~10),温度范围为5℃~50℃。
优选地,溶解所述无水蚕丝蛋白时,所述无水蚕丝蛋白和水质量比为1:(1~10),温度范围为5℃~50℃。优选地,将含有蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液或者蚕丝蛋白的水溶液的模具浸没于液态甲醇中,并每隔1~50小时更换一次甲醇溶液,换液次数包括1~50次;然后将蚕丝蛋白固体从模具中取出并继续使用甲醇浸泡,并每隔1~50小时更换一次甲醇溶液,换液次数包括1~50次。
优选地,所述风干工艺是在通风环境下使蚕丝蛋白中的甲醇挥发并风干,通风环境温度为10~50℃,处理时间为1天~200天。
优选地,所述种植牙为含有牙根的种植牙或不含牙根的种植牙,所述含有牙根的种植牙直接塞入患者牙床内部,所述不含牙根的种植牙通过金属牙钉与患者面部骨骼结合。
优选地,制备形成所述种植牙后,在所述种植牙上粘接金属或陶瓷牙冠。
本发明还公开一种蚕丝蛋白种植牙,由上述方法制备获得。
如上所述,本发明的一种蚕丝蛋白种植牙及其制备方法,具有以下有益效果:
1、蚕丝蛋白是一种人体亲和性好、无免疫排斥反应的生物材料,在人体组织具有良好的兼容性,对人体无毒害作用。
2、通过控制蚕丝蛋白溶液制备参数、干燥固化参数和对蚕丝蛋白棒材进行后处理,可以控制蚕丝蛋白种植牙的力学性能,获得与人体骨骼力学参数、牙齿咬合匹配的优良性能种植牙。
附图说明
图1为本发明制备方法的工艺流程图。
图2~图7为本发明制备蚕丝蛋白种植牙的结构流程图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用,本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用,在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
请参阅附图。需要说明的是,本实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本发明的基本构想,遂图式中仅显示与本发明中有关的组件而非按照实际实施时的组件数目、形状及尺寸绘制,其实际实施时各组件的型态、数量及比例可为一种随意的改变,且其组件布局型态也可能更为复杂。
实施例一
如图1所示,本发明提供一种蚕丝蛋白基胶囊的制备方法,具体制备步骤为:
首先执行步骤S1,制备蚕丝蛋白溶液。
制备所述蚕丝蛋白微针的具体方法为:
1)将蚕茧置于碳酸钠溶液中加热,进行脱胶,形成蚕丝。
作为示例,所述碳酸钠溶液的浓度为0~100g/L,加入的蚕茧质量和碳酸钠溶液体积比为 10:(1~100)g/L。加热方式为电炉加热或高压锅加热,加热温度为50~120℃,加热时间为 1s~1000h。通过调节脱胶过程的工艺参数,可以控制蚕丝蛋白的分子量。
2)将所述蚕丝置于超纯水中洗涤,重复数次,进行干燥。
作为示例,本步骤所述洗涤可以是搅拌洗涤或者静置浸泡。其中,搅拌洗涤可以是机械搅拌或磁力搅拌。若采用磁力搅拌,则磁力搅拌速度为1r/min~2000r/min。单次洗涤过程中,蚕丝和水质量比为1:(10~1000),时间为1s~200h,每次洗涤后取出蚕丝并挤干,洗涤重复次数为1~50次。干燥的方式为自然风干或加热通风干燥,其中,加热通风干燥的加热温度为 40~100℃,干燥时间为0.1~100h。
3)将干燥后的所述蚕丝浸没于溴化锂溶液中,保温一定时间,得到蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液。
作为示例,所述溴化锂溶液的浓度为0.01~2g/mL,干燥的蚕丝质量和溴化锂溶液体积为 (1~100):100g/mL,保温温度为温度为20~100℃,保温时间为0.1~100h。
4)将所述蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液装入透析袋中,置于超纯水中透析。
作为示例,所述透析袋规格为10~10000000Da(道尔顿),透析方式为静置透析或磁力搅拌透析,其中,磁力搅拌透析的搅拌速度为1~2000r/min,透析过程中换所述超纯水的时间间隔为0.1~100h,每次所换超纯水的体积为1mL~1000L。
5)透析后,将所述透析袋中的溶液进行离心分离,收集上层清液,最终得到所需的蚕丝蛋白溶液。
作为示例,所述离心分离的转速为1r/min~40000r/min,时间为1s~10h,离心时的温度为-3℃~10℃。
然后制备步骤S2,通过冷冻干燥工艺将所述蚕丝蛋白溶液转变为无水蚕丝蛋白。
具体为:将所述蚕丝蛋白溶液先在-80~0℃的环境中冷冻,然后在冷冻干燥机中真空冷冻处理1~500小时,所述冷冻干燥机的真空压强为0.001~1mBar,温度为-80~0℃。
在本步骤之后中,作为可选的方案,还可以在所述无水蚕丝蛋白中掺杂固相增强颗粒,使所述固相增强颗粒和无水蚕丝蛋白混合,以进一步调节蚕丝蛋白种植牙的硬度和其它力学性能。其中,掺杂的所述固相增强颗粒为陶瓷粉末、金属粉末或者聚合物粉末,所述固相增强颗粒与无水蚕丝蛋白的质量比为1:100~100:1。接着执行步骤S3,将所述无水蚕丝蛋白溶解于六氟异丙醇或者水中,获得蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液或者蚕丝蛋白的水溶液。
本步骤中,所述无水蚕丝蛋白和六氟异丙醇质量比为1:(1~10),溶解的温度范围为5℃~50℃。
若添加固体增强颗粒,则所述无水蚕丝蛋白和固相增强颗粒混合粉末的总质量与六氟异丙醇的质量比为1:(1~10),溶解温度范围为5℃~50℃。
若溶解在水中,则溶解所述无水蚕丝蛋白时,所述无水蚕丝蛋白和水质量比为1:(1~10),温度范围为5℃~50℃。
接着执行步骤S4,将所述蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液或者蚕丝蛋白的水溶液注入模具中,通过甲醇处理和风干工艺制成蚕丝蛋白棒材。
具体地,所述甲醇处理的过程为:将含有蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液或者蚕丝蛋白的水溶液的模具浸没于液态甲醇中,并每隔1~50小时更换一次甲醇溶液,换液次数包括1~50次;然后将蚕丝蛋白固体从模具中取出并继续使用甲醇浸泡,并每隔1~50小时更换一次甲醇溶液,换液次数包括1~50次。通过甲醇处理,将六氟异丙醇或者水置换出来。
所述风干工艺是在通风环境下使蚕丝蛋白中的甲醇挥发并风干,通风环境温度为10~50℃,处理时间为1天~200天。
最后执行步骤S5,将所述蚕丝蛋白棒材切削成种植牙。
根据具体的牙修复临床要求,将所述蚕丝蛋白棒材切削成种植牙。所述种植牙为含有牙根的种植牙或不含牙根的种植牙,所述含有牙根的种植牙直接塞入患者牙床内部,所述不含牙根的种植牙通过金属牙钉与患者面部骨骼结合。
作为可选方案,制备形成所述种植牙后,在对蚕丝蛋白种植牙的表面硬度作特殊要求的情况下制备相应的金属或陶瓷牙冠,并通过粘固剂粘结在所述蚕丝蛋白种植牙上。
实施例二
本实施例制备的是蚕丝蛋白种植牙。
如图2~图7所示,1为蚕丝蛋白溶液,2为无水蚕丝蛋白,3为蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液,4为蚕丝蛋白棒材,5为蚕丝蛋白种植牙体,6为包含陶瓷牙冠的蚕丝蛋白种植牙。具体的实施步骤包括:
首先执行步骤S1:如图2所示,制备蚕丝蛋白溶液1。
具体的,在本实施例中,首先,每份10g蚕茧剪碎置于4L浓度为2g/L的碳酸钠溶液中,用电炉加热沸腾并磁力搅拌,转速为200r/min,加热时间为0.5h。
然后,将每份煮过的蚕丝置于2L超纯水中搅拌洗涤捏干,重复6次,再进行干燥,搅拌速度为200r/min,搅拌时间20min,每次所换超纯水的体积为2L,干燥方式为25℃、常压(0.1MPa)下干燥。
接着,将干燥的蚕丝浸没于浓度为0.98g/mL的溴化锂溶液中,溴化锂溶液的体积与干燥后蚕丝的关系为4mL:1g,在60℃保温4h,得到蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液。
接着,将蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液装入截留分子量为3500Da透析袋中,置于4L 超纯水中透析,间隔0.5h换一次超纯水,每次换水体积4L,透析总共48h。
最后,透析过的蚕丝蛋白溶液在4℃下离心分离,转速12000r/min,离心时间30min,收集上层清液,最终得到所需的蚕丝蛋白溶液1。
然后执行步骤S2,如图3所示,通过冷冻干燥工艺将所述蚕丝蛋白溶液1转变为无水蚕丝蛋白2。
具体的,本实施例中,将获得的蚕丝蛋白溶液1先在-20℃环境下预冷冻24小时,在-80℃温度、0.001mBar真空环境下处理120小时获得无水蚕丝蛋白2。
接着执行步骤S3,如图4所示,将所述无水蚕丝蛋白2溶解于六氟异丙醇中,获得蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液3。
本实施例中,将获得的无水蚕丝蛋白2按质量比1:3溶解于六氟异丙醇(HFIP),并静置 24小时获得浓度为25%的蚕丝蛋白六氟异丙醇溶液3。
接着执行步骤S4,如图5所示,将所述蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液3注入模具中,通过甲醇处理和风干工艺制成蚕丝蛋白棒材4。
本实施例中,将蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液注入特定的模具中,并置于液态甲醇中,并每隔24小时更换一次甲醇溶液,换液次数为5次获得蚕丝蛋白固体,再将蚕丝蛋白固体从模具中取出并继续使用甲醇浸泡,并每隔24小时更换一次甲醇溶液,更换5次,然后在通风柜中静置60天使其风干并切削获得蚕丝蛋白棒材4。
接着执行步骤S5,如图6所示,根据具体的牙修复临床要求,将所述蚕丝蛋白棒材切削成种植牙5。
本实施例中,如图7所示,使用陶瓷等制成牙冠,用粘固剂粘着在蚕丝蛋白种植牙体上,获得包含陶瓷牙冠的蚕丝蛋白种植牙6。
实施例三
本实施例与实施例一的区别是,本实施例的步骤S2中,在形成无水蚕丝蛋白后,在所述无水蚕丝蛋白中加入二氧化锆陶瓷粉,形成无水蚕丝蛋白与固相增强颗粒混合粉末。
接着,将无水蚕丝蛋白与固相增强颗粒混合粉末溶于六氟异丙醇。最后形成的蚕丝蛋白棒材为蚕丝蛋白与固相增强颗粒复合材料棒材。
综上所述,本发明提供一种蚕丝蛋白种植牙及其制备方法,包括如下步骤:首先制备蚕丝蛋白溶液;然后通过冷冻干燥工艺将所述蚕丝蛋白溶液转变为无水蚕丝蛋白;接着将所述无水蚕丝蛋白溶解于六氟异丙醇中,获得蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液;接着将所述蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液注入模具中,通过甲醇处理和风干工艺制成蚕丝蛋白棒材;再将所述蚕丝蛋白棒材切削成种植牙,还可以在种植牙表面粘接高硬度牙冠。通过控制蚕丝蛋白溶液制备参数、干燥固化等参数以及掺杂固相增强颗粒,可以控制蚕丝蛋白种植牙的力学性能,获得与人体骨骼力学参数、牙齿咬合匹配的优良性能种植牙。
所以,本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (4)
1.一种蚕丝蛋白种植牙的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括:
制备蚕丝蛋白溶液;
通过冷冻干燥工艺将所述蚕丝蛋白溶液转变为无水蚕丝蛋白,包括:将所述蚕丝蛋白溶液先在-20℃的环境中冷冻,然后在冷冻干燥机中真空冷冻处理120 小时,所述冷冻干燥机的真空压强为0.001mBar,温度为-80℃;
将所述无水蚕丝蛋白溶解于六氟异丙醇中,所述无水蚕丝蛋白和六氟异丙醇质量比为1 :3,获得蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液;
将所述蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液注入模具中,通过甲醇处理和风干工艺制成蚕丝蛋白棒材,所述甲醇处理的过程为:将含有蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液的模具浸没于液态甲醇中,并每隔24 小时更换一次甲醇溶液,换液次数包括5次;然后将蚕丝蛋白固体从模具中取出并继续使用甲醇浸泡,并每隔24小时更换一次甲醇溶液,换液次数包括5次;所述风干工艺是在通风环境下使蚕丝蛋白中的甲醇挥发并风干,处理时间为60 天;
将所述蚕丝蛋白棒材切削成种植牙;
所述制备蚕丝蛋白溶液的方法为:
1) 将蚕茧置于碳酸钠溶液中加热,进行脱胶,形成蚕丝;
2) 将所述蚕丝置于超纯水中洗涤,重复数次,进行干燥;
3) 将干燥后的所述蚕丝浸没于溴化锂溶液中并充分混合,保温一定时间,得到蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液;
4) 将所述蚕丝蛋白与溴化锂的混合溶液装入透析袋中,置于超纯水中透析;
5) 透析后,将所述透析袋中的溶液进行离心分离,收集上层清液,最终得到所需的蚕丝蛋白溶液;
其中,所述步骤1) 中,碳酸钠溶液的浓度为2g/L,蚕茧质量和碳酸钠溶液体积比为10 :4g/L;加热方式为电炉加热沸腾,加热时间为0.5h;
所述步骤2) 中,洗涤方式为搅拌洗涤,其中,搅拌速度为200r/min ;单次洗涤过程中,蚕丝和水质量比为1 :200,时间为20min,每次洗涤后取出蚕丝并挤干,洗涤重复次数为6次;
所述步骤3) 中,溴化锂溶液浓度为0.98g/mL,干燥的蚕丝质量和溴化锂溶液体积比为1:4g/mL;保温温度为60℃,保温时间为4h;
所述步骤4) 中,透析袋规格为3500Da,透析方式为静置透析,透析过程中换水的时间间隔为0.5h,每次所换超纯水的体积为4L;
所述步骤5) 中,离心分离的转速为12000r/min,时间为30min,离心时的温度为4℃;
在形成无水蚕丝蛋白和蚕丝蛋白的六氟异丙醇溶液的步骤之间,还包括对所述无水蚕丝蛋白进行固相增强颗粒掺杂的步骤,其中,掺杂的所述固相增强颗粒为二氧化锆陶瓷粉末,溶解所述无水蚕丝蛋白时,所述无水蚕丝蛋白和固相增强颗粒混合粉末的总质量与六氟异丙醇的质量比为1:(1 ~10),溶解温度范围5℃~50℃。
2.根据权利要求1 所述的蚕丝蛋白种植牙的制备方法,其特征在于,所述种植牙为含有牙根的种植牙或不含牙根的种植牙,所述含有牙根的种植牙直接塞入患者牙床内部,所述不含牙根的种植牙通过金属牙钉与患者面部骨骼结合。
3.根据权利要求1 所述的蚕丝蛋白种植牙的制备方法,其特征在于,制备形成所述种植牙后,在所述种植牙上粘接金属或陶瓷牙冠。
4.一种蚕丝蛋白种植牙,由权利要求1 ~3任一项所述的制备方法制备获得。
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