CN106635828A - 兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基及其制作方法 - Google Patents

兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基及其制作方法 Download PDF

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刘娜
刘建钗
沈洁
张欣
史瑞雅
李博
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Abstract

本发明提供了兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，其特征在于：所述培养基包括角质蛋白和基质；其中基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.3~0.7重量份、磷酸二氢钾0.05~0.15重量份、硫酸亚铁0.005~0.015重量份、硫酸锌0.003~0.007重量份、磷酸二氢钠3~5重量份、磷酸氢二钠2.5~5重量份、蒸馏水1000重量份。本发明原料获取简单易得且成本低，制作方法简单、可控，操作强。

Description

兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基及其制作方法
技术领域
本发明属于生物培养基领域，涉及一种角质蛋白培养基，具体的涉及兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基及其制作方法。
背景技术
兔须癣毛癣菌专一侵害人皮肤、指甲、毛发以及动物的皮肤、角、蹄和毛发，是引起人和兔等动物皮肤真菌病最常见病原之一。为了有效的防控兔须癣毛癣菌，常常需建立动物模型，或培养皮肤组织进行模拟体内生长试验，不仅费用高，且技术难度大，用动物作模型也违背动物福利。因此，如何研制模拟体内组织环境生长的培养基，是研究者们一直探索的课题。
发明内容
本发明为解决现有技术问题，提供了一种利用动物屠宰的废弃——猪蹄为原料，制作以角质蛋白为唯一氮源和碳源角质蛋白培养基。
本发明采用的技术方案为：兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，所述培养基包括角质蛋白和基质；其中基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.3~0.7重量份、磷酸二氢钾0.05~0.15重量份、硫酸亚铁0.005~0.015重量份、硫酸锌0.003~0.007重量份、磷酸二氢钠3~5重量份、磷酸氢二钠2.5~5重量份、蒸馏水1000重量份。
进一步地，所述基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.5重量份、磷酸二氢钾0.1重量份、硫酸亚铁0.01重量份、硫酸锌0.005重量份、磷酸二氢钠3.86重量份、磷酸氢二钠3.97重量份、蒸馏水1000重量份。
进一步地，所述角质蛋白的制作方法为：将猪蹄匣洗净除去杂物和粘附物，再剔除角质底和角质球、保留角质壁纯角质，然后切成碎块、烘干、粉碎，最后过200目筛，干燥保存备用。
进一步地，所述角质蛋白培养基分为角质蛋白液体培养基和角质蛋白琼脂培养基。
进一步地，将角蛋白与基质按重量比1:1000装入三角瓶中，加热溶解，然后在121℃下高压灭菌20min，冷却，即得角质蛋白液体培养基。
进一步地，按重量比将角质蛋白：基质：细菌培养琼脂为1：100：15配置后，加热溶解，121℃下高压灭菌20min，得到混合液；当做斜面试管培养基时，将混合液趁热倒入试管中，使之有形成坡度，凝固后即得角质蛋白琼脂培养基；当做平皿培养基时，将混合液冷却到50~60℃，在超净工作台内，将其倒入灭菌平皿中，且每平皿含有琼脂10~15mL，凝固后即得角质蛋白琼脂培养基。
进一步地，所述粘附物为肉蹄和残留的皮肤组织。
进一步地，所述角质蛋白培养基的保存温度为4℃。
本发明获得的有益效果为：本发明原料获取简单易得且成本低，制作方法简单、可控，操作强。角质蛋白来自猪屠宰后废弃物——蹄匣，猪蹄匣剔除角质底和角质球，用角质壁制成角质蛋白粉，以此为唯一氮源和碳源，制作角蛋白琼脂培养基和角质蛋白液体培养基，模拟人体或动物体内组织环境，接种兔须癣毛癣菌，分别在角蛋白琼脂培养基和角质蛋白液体培养基生长出菌落和菌丝，该角质蛋白培养基制作成功为兔须癣毛癣菌发病机理及有效防治奠定基础。
附图说明
图1为本发明兔须癣毛癣菌在角质蛋白琼脂培养基中的菌落正面图。
图2为本发明兔须癣毛癣菌在角质蛋白琼脂培养基中的菌落背面图。
图3为本发明兔须癣毛癣菌在角质蛋白液体培养基中的菌丝球图。
具体实施方式
下面结合附图的具体实施例对本发明做进一步详细说明
实施例1
角质蛋白的制作方法为：将猪蹄匣洗净除去杂物、肉蹄和残留的皮肤组织，再剔除角质底和角质球、保留角质壁纯角质，然后切成碎块、烘干、粉碎，最后过200目筛，干燥保存备用。
基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.3重量份、磷酸二氢钾0.05重量份、硫酸亚铁0.005重量份、硫酸锌0.003重量份、磷酸二氢钠3重量份、磷酸氢二钠2.5重量份、蒸馏水1000重量份。
角质蛋白液体培养基的制作方法，将角蛋白1g与基质1000mL装入三角瓶中，加热溶解，然后在121℃下高压灭菌20min，冷却，即得角质蛋白液体培养基，4℃保存。
实施例2
角质蛋白的制作方法为：将猪蹄匣洗净除去杂物、肉蹄和残留的皮肤组织，再剔除角质底和角质球、保留角质壁纯角质，然后切成碎块、烘干、粉碎，最后过200目筛，干燥保存备用。
基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.5重量份、磷酸二氢钾0.1重量份、硫酸亚铁0.01重量份、硫酸锌0.005重量份、磷酸二氢钠3.86重量份、磷酸氢二钠3.97重量份、蒸馏水1000重量份。
角质蛋白液体培养基的制作方法，将角蛋白1g与基质1000mL装入三角瓶中，加热溶解，然后在121℃下高压灭菌20min，冷却，即得角质蛋白液体培养基，4℃保存。
实施例3
角质蛋白的制作方法为：将猪蹄匣洗净除去杂物、肉蹄和残留的皮肤组织，再剔除角质底和角质球、保留角质壁纯角质，然后切成碎块、烘干、粉碎，最后过200目筛，干燥保存备用。
基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.5重量份、磷酸二氢钾0.1重量份、硫酸亚铁0.01重量份、硫酸锌0.005重量份、磷酸二氢钠3.86重量份、磷酸氢二钠3.97重量份、蒸馏水1000重量份。
角质蛋白琼脂培养基的制作方法，将角蛋白1g，基质100mL，细菌培养琼脂15g加热溶解，121℃下高压灭菌20min，得到混合液；斜面试管培养基，将混合液趁热倒入试管中，使之有形成坡度，凝固后即得角质蛋白琼脂培养基，4℃保存。
实施例4
角质蛋白的制作方法为：将猪蹄匣洗净除去杂物、肉蹄和残留的皮肤组织，再剔除角质底和角质球、保留角质壁纯角质，然后切成碎块、烘干、粉碎，最后过200目筛，干燥保存备用。
基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.7重量份、磷酸二氢钾0.15重量份、硫酸亚铁0.015重量份、硫酸锌0.007重量份、磷酸二氢钠5重量份、磷酸氢二钠5重量份、蒸馏水1000重量份。
角质蛋白琼脂培养基的制作方法，将角蛋白1g，基质100mL，细菌培养琼脂15g加热溶解，121℃下高压灭菌20min，得到混合液；将混合液冷却到50~60℃，在超净工作台内，将其倒入灭菌平皿中，且每平皿含有琼脂10~15mL，凝固后即得角质蛋白琼脂培养基，4℃保存。
实施例5
角质蛋白的制作方法为：将猪蹄匣洗净除去杂物、肉蹄和残留的皮肤组织，再剔除角质底和角质球、保留角质壁纯角质，然后切成碎块、烘干、粉碎，最后过200目筛，干燥保存备用。
基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.6重量份、磷酸二氢钾0.10重量份、硫酸亚铁0.012重量份、硫酸锌0.005重量份、磷酸二氢钠4重量份、磷酸氢二钠4.5重量份、蒸馏水1000重量份。
角质蛋白琼脂培养基的制作方法，将角蛋白1g，基质100mL，细菌培养琼脂15g加热溶解，121℃下高压灭菌20min，得到混合液；将混合液冷却到50~60℃，在超净工作台内，将其倒入灭菌平皿中，且每平皿含有琼脂10~15mL，凝固后即得角质蛋白琼脂培养基，4℃保存。
实验1：以实施例2所得培养基为例研究兔须癣毛癣菌在角质蛋白液体培养基生长情况
将保存兔须癣毛癣菌接种在沙保弱培养基（Sabourand′sagar culture medium），放入28℃真菌培养箱培养10天，观察菌落生长情况。用接种针挑取菌落中部新生菌丝，接种于角质蛋白液体培养基，放入摇床培养，28℃，120转/分，培养10-20天，即可观察到成团的菌丝球，如图3所示。
实验2：以实施例3所得培养基为例研究兔须癣毛癣菌在角质蛋白琼脂培养基生长情况
将保存兔须癣毛癣菌接种在沙保弱培养基（Sabourand′sagar culture medium），放入28℃真菌培养箱培养10天，观察菌落生长情况。用接种针挑取菌落中部新生菌丝，接种于角蛋白琼脂培养基，为防止水分蒸发，用封口膜密封平皿，置湿盒内，放入28℃真菌培养箱培养，15-30天。
培养15天可观察到菌丝生长，菌落正面为白色粉末状，圆形，较疏松如图1所示；菌落背面有色素沉着，菌落中央色素较深，为黄褐色，周围为浅黄色，如图2所示。随着时间的延长，菌落增大，色素产量增多，由黄色变成褐色。

Claims (8)

1.兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，其特征在于：所述培养基包括角质蛋白和基质；其中基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.3~0.7重量份、磷酸二氢钾0.05~0.15重量份、硫酸亚铁0.005~0.015重量份、硫酸锌0.003~0.007重量份、磷酸二氢钠3~5重量份、磷酸氢二钠2.5~5重量份、蒸馏水1000重量份。
2.根据权利要求1所述兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，其特征在于：所述基质所含成分按重量份数比包括：硫酸镁0.5重量份、磷酸二氢钾0.1重量份、硫酸亚铁0.01重量份、硫酸锌0.005重量份、磷酸二氢钠3.86重量份、磷酸氢二钠3.97重量份、蒸馏水1000重量份。
3.根据权利要求1所述兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，其特征在于：所述角质蛋白的制作方法为：将猪蹄匣洗净除去杂物和粘附物，再剔除角质底和角质球、保留角质壁纯角质，然后切成碎块、烘干、粉碎，最后过200目筛，干燥保存备用。
4.根据权利要求1所述兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，其特征在于：所述角质蛋白培养基分为角质蛋白液体培养基和角质蛋白琼脂培养基。
5.如权利要求4所述角质蛋白液体培养基的制作方法，其特征在于：将角蛋白与基质按重量比1:1000装入三角瓶中，加热溶解，然后在121℃下高压灭菌20min，冷却，即得角质蛋白液体培养基。
6.如权利要求4所述角质蛋白琼脂培养基的制作方法，其特征在于：按重量比将角质蛋白：基质：细菌培养琼脂为1：100：15配置后，加热溶解，121℃下高压灭菌20min，得到混合液；当做斜面试管培养基时，将混合液趁热倒入试管中，使之有形成坡度，凝固后即得角质蛋白琼脂培养基；当做平皿培养基时，将混合液冷却到50~60℃，在超净工作台内，将其倒入灭菌平皿中，且每平皿含有琼脂10~15mL，凝固后即得角质蛋白琼脂培养基。
7.根据权利要求3所述兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，其特征在于：所述粘附物为肉蹄和残留的皮肤组织。
8.根据权利要求1所述兔须癣毛癣菌角质蛋白培养基，其特征在于：所述角质蛋白培养基的保存温度为4℃。
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