CN106620658A - 一种营养美白保健品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种营养美白保健品,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 40‑50,氯化钾1‑3,木糖醇5‑8,柠檬酸钠2‑4,胶原蛋白10‑30,活性组分B 11‑15,活性组分 C 9‑13,碳酸氢钠2‑6,蜂蜜0.3‑0.5,葡聚糖3‑5,水32‑65。本发明通过对营养美白保健品 富含活性成分及胶原蛋白,通过对各组分的配比,不仅提高营养美白保健品的美白效果,同时改善人体环境,提高各组分 在人体内的吸收率,从而达到提高皮肤活力、美白肌肤的效果,并有提高免疫力的功效。
Description
技术领域
本发明属于医药保健领域,具体涉及一种营养美白保健品。
背景技术
随着环境的恶化、岁月的流逝,粗糙、干燥、暗黄、皱纹、色斑、松弛、困倦等皮肤问题越来越引起人们的困扰,能够美容皮肤的功能性食品越来越受到人们的广泛关注。近年来各项研究表明,人体内胶原蛋白的减少是皮肤衰老的重要指示之一。
胶原蛋白是一种存在于细胞间质的结构蛋白质,它广泛分布于动物结缔组织中,胶原蛋白作为功能性生物大分子,具有多种特性,如没有细胞毒性、可调控的生物降解速度、能特异促进或抑制细胞 - 材料的相互作用等诸多优点。胶原蛋白在酸、碱、热、酶的作用下水解,会产生氨基酸组成相似的胶原蛋白水解产物。胶原及其水解物与人皮肤胶原的结构相似、相容性好,存在着离子键、氢键等相互作用,极易被人体的皮肤、毛发等所吸收和利用。人体的胶原蛋白处于不断合成和降解吸收中,其更新的速率随着年龄的增长而降低,皮肤中胶原蛋白的生成减少,而变形胶原蛋白的降解吸收也减慢,使皮肤结缔组织逐渐老化变质,补充新鲜的胶原蛋白能促进皮肤新陈代谢,激活胶原蛋白的合成与更新,延缓皮肤结构和机能的衰退。如果能及时补充皮肤胶原蛋白,一方面维持真皮层的厚度,阻挡紫外线的深层损伤 ;一方面促进胶原蛋白的合成和变性蛋白的降解清除,加速日晒后皮肤修复,则可有效防止老化现象,减少皱纹和色斑产生,保持皮肤光滑有弹性、柔嫩白皙。
目前市场上关于补充胶原蛋白的营养品琳琅满目,包括饮料、口服液、粉末、胶囊、片剂等等。据市场调查和研究资料表明,很多胶原蛋白类产品吸收率很低,虽然有一定的补充作用,但食用有很大的局限性,而且存在功能单一、大量服用反而造成肾脏负担加重等不良反应的缺陷,美容效果不明显。同时,人体环境对胶原蛋白营养品的吸收也很大的影响,如果人体的免疫力低下,胶原蛋白营养品对皮肤的修复作用就会很差 ;另外,胶原蛋白在体内被吸收,需要全面改善细胞的营养状况和微环境,才能重新组成人体所需的胶原蛋白,从而令肌肤重新焕发青春。
发明内容
有鉴于此,本发明通过对营养美白保健品 富含活性成分及胶原蛋白,通过对各组分的配比,不仅提高营养美白保健品的美白效果,同时改善人体环境,提高各组分 在人体内的吸收率,从而达到提高皮肤活力、美白肌肤的效果,并有提高免疫力的功效。
本发明的技术方案为:一种营养美白保健品,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 40-50,氯化钾1-3,木糖醇5-8,柠檬酸钠2-4,胶原蛋白10-30,活性组分B 11-15,活性组分 C 9-13,碳酸氢钠2-6,蜂蜜0.3-0.5,葡聚糖3-5,水32-65。
进一步的,所述的儿童,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 43,氯化钾2,木糖醇6,柠檬酸钠3,胶原蛋白14,活性组分B 13,活性组分 C 11,碳酸氢钠4,蜂蜜0.4,葡聚糖4,水 45。
进一步的,所述活性组分A为大比目鱼酶解产物,所述大比目鱼酶解产物的制备方法为:S1.取大比目鱼鱼糜,使料水比为1:2-1:8(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.0-3.5以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为1200-1500U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、100-130 r/min振荡酶解1.5-2.5 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.0-9.0,保持37℃酶解温度,复合酶添加量为4500-6000 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为4:1-6:1,所述料水比1:3-1:6,酶解时间为3-4.5 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过真空冷冻干燥,设置干燥条件为预冷温度-30℃,预冷时间2h,加热温度从-10℃开始18h后缓慢升温,达到25℃,并保持到干燥终点,得到大比目鱼酶解产物。
更进一步的,所述活性组分A为大比目鱼酶解产物,所述大比目鱼酶解产物的制备方法为:S1.取大比目鱼鱼糜,使料水比为1:3(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.5以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为1300 U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、110 r/min振荡酶解2 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.5,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为5200 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为5:1,所述料水比1:4.5,酶解时间为3.5 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过真空冷冻干燥,设置干燥条件为预冷温度-30℃,预冷时间2h,加热温度从-10℃开始18h后缓慢升温,达到25℃,并保持到干燥终点,得到大比目鱼酶解产物。
本发明中,所述金枪鱼下脚料包括鱼头,内脏,鳃,暗色肉和鱼皮。
进一步的,所述活性组分B为金枪鱼下脚料酶解产物,所述金枪鱼下脚料酶解产物的制备方法为:S1.取金枪鱼下脚料搅碎混合,使料水比为1:1-1:2(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.0以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为800-1000U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、75-105 r/min振荡酶解1-1.5 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.0-9.0,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为2500-3500 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为6:1-8:1,所述料水比1:2-1:4,酶解时间为2.5-3.5 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过喷雾干燥的方式,设置干燥条件为进风温度160℃,进样速度为50ml/min,离心雾化器转速为25000r/min,得到金枪鱼下脚料酶解产物。
更进一步的,所述活性组分B为金枪鱼下脚料酶解产物,所述金枪鱼下脚料酶解产物的制备方法为:S1.取金枪鱼下脚料搅碎混合,使料水比为1:1.5(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.0以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为880U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、85 r/min振荡酶解1.3 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.2,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为2900 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为7:1,所述料水比1:2.5,酶解时间为2.8 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过喷雾干燥的方式,设置干燥条件为进风温度160℃,进样速度为50ml/min,离心雾化器转速为25000r/min,得到金枪鱼下脚料酶解产物。
进一步的,所述活性组分C为独活菌体粗提物,所述独活菌体粗提物的制备方法为:取新鲜植物的根、茎、叶分别洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至 PDA(分离内生真菌)和高氏一号培养基(分离内生放线菌)上培养 5-7 d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有 100 mL 发酵培养基的锥形瓶中,置 30℃,150 r/min 摇床振荡培养3 d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取 3 次,合并有机相,45℃ 减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量 95%乙醇冷凝回流 3 次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为菌体粗提物。
上述技术方案中,所述的运动营养保健品的制备方法为 :按配比,将各组分混合,搅拌分散均匀后即可得成品。
本发明所述的营养美白保健品,配方合理,活性组分中富含胶原蛋白,并且各活性组分之间不易发生化学反应且具 有协同增效作用。与现有技术相比,本发明充分利用这些物质的相互作用全方位来提高胶原蛋白的吸收率,同时避免人体大量服用而造成肾脏负担加重等不良反应的发生,美容效 果更加明显。
另外,本发明经验证,长久食用可达到增强免疫力和美白的效果,基于本发明中主要活性组分采用模拟人体胃肠消化的方式制得,配合从植物体内提取出的活性菌体成分,活性菌体成分进入肠道内,一方面可以在肠道内定殖,维持肠道微生物菌群的平衡;另一方面是活性菌体成分与大比目鱼酶解产物以及金枪鱼下脚料酶解产物共同作用于宿主的免疫系统,诱发肠道免疫,并刺激胸腺,脾脏等免疫器官,促进巨噬细胞活性,通过增强B、T淋巴细胞对抗原刺激的反应性,发挥特异性免疫活性,从而增强机体的免疫功能,易于被人体吸收,条件98%低龄人群长期服用无不适症状。
具体实施方式
以下结合具体实施例来对本发明作进一步的描述。
实施例1
一种营养美白保健品,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 43,氯化钾2,木糖醇6,柠檬酸钠3,胶原蛋白14,活性组分B 13,活性组分 C 11,碳酸氢钠4,蜂蜜0.4,葡聚糖4,水 45。
进一步的,所述活性组分A为大比目鱼酶解产物,所述大比目鱼酶解产物的制备方法为:S1.取大比目鱼鱼糜,使料水比为1:3(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.5以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为1300 U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、110 r/min振荡酶解2 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.5,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为5200 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为5:1,所述料水比1:4.5,酶解时间为3.5 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过真空冷冻干燥,设置干燥条件为预冷温度-30℃,预冷时间2h,加热温度从-10℃开始18h后缓慢升温,达到25℃,并保持到干燥终点,得到大比目鱼酶解产物。
进一步的,所述活性组分B为金枪鱼下脚料酶解产物,所述金枪鱼下脚料酶解产物的制备方法为:S1.取金枪鱼下脚料搅碎混合,使料水比为1:1.5(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.0以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为880U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、85 r/min振荡酶解1.3 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.2,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为2900 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为7:1,所述料水比1:2.5,酶解时间为2.8 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过喷雾干燥的方式,设置干燥条件为进风温度160℃,进样速度为50ml/min,离心雾化器转速为25000r/min,得到金枪鱼下脚料酶解产物。
进一步的,所述活性组分C为独活菌体粗提物,所述独活菌体粗提物的制备方法为:取新鲜植物的根、茎、叶分别洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至 PDA(分离内生真菌)和高氏一号培养基(分离内生放线菌)上培养 5-7 d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有 100 mL 发酵培养基的锥形瓶中,置 30℃,150 r/min 摇床振荡培养3 d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取 3 次,合并有机相,45℃ 减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量 95%乙醇冷凝回流 3 次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为菌体粗提物。
实施例2
本实施例提供一种营养美白保健品,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 40,氯化钾2,木糖醇6,柠檬酸钠3,胶原蛋白14,活性组分B 11,活性组分 C 9,碳酸氢钠4,蜂蜜0.4,葡聚糖4,水 45。本实施例中活性组分A、活性组分B、活性组分C的成分及制备方式与实施例1一致。
实施例3
本实施例提供一种营养美白保健品,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 50,氯化钾2,木糖醇6,柠檬酸钠3,胶原蛋白14,活性组分B 15,活性组分 C 13,碳酸氢钠4,蜂蜜0.4,葡聚糖4,水 45。本实施例中活性组分A、活性组分B、活性组分C的成分及制备方式与实施例1一致。
实施例4
本实施例提供一种营养美白保健品,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 50,氯化钾2,木糖醇6,柠檬酸钠3,胶原蛋白14,活性组分B 15,活性组分 C 9,碳酸氢钠4,蜂蜜0.4,葡聚糖4,水 45。
本实施例中活性组分A、活性组分B、活性组分C的成分及制备方式与实施例1一致。
实施例5
本实施例提供一种营养美白保健品,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 40,氯化钾2,木糖醇6,柠檬酸钠3,胶原蛋白14,活性组分B 11,活性组分 C 13,碳酸氢钠4,蜂蜜0.4,葡聚糖4,水 45。
本实施例中活性组分A、活性组分B、活性组分C的成分及制备方式与实施例1一致。
效果实施例
1. 美白效果测试实验
小鼠脂质抗氧化实验
实验样品和方法
实验动物 :健康 12 月龄昆明种小鼠 60 只,雌性,体重 48-60g。将通过实施例1制得的营养美白保健品各组分混合,浓缩干燥后制备成粉末状,作为测试样品。
实验分组 :
实验小鼠按血中 MDA 水平随机分为 6 组,每组 10 只动物,分别为受试物低剂量组(实施例 1制备的产品 50mg/kg)、受试物中剂量组 (实施例1样品100mg/kg)、受试物高剂量组 (实施例1样品150mg/kg)、阳性对照组 (中国专利申请201110415844.9 中实施例 2提供的产品,即女性美白养颜的组合物,给药量为 100mg/kg) 和空白对照组。
实验方法 :
三个实验组、阳性对照组分别取实施例 2 所得粉剂、文献实施例 2 样品加温水稀释150 倍,空白对照组给予等量温水,按照分组进行灌胃给药,连续进行30天。
末次给予各组相应的处理30min后,取受试动物眼内眦静脉血,分别测定其全血谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-px) 活性、活性红细胞超氧化物歧化酶 (SOD) 活性和小鼠血中过氧化脂质丙二醛(MDA) 含量。
数据统计 :数据采用 SPSS 16.0 for windows 软件进行方差分析。
测试结果
全血 GSH-px 活性测定 :采用试剂盒法(南京建成生物工程研究所购买),见表1:
表 1受试样品对小鼠 GSH-px 活性的影响
注:表中P1为各组别与空白对照组相比的显著性分析结果, P2为受试物剂量组与阳性对照组的显著性分析结果。
活性红细胞 SOD 活性测定 :
采用试剂盒法(南京建成生物工程研究所购买)见表2 :
表2受试样品对小鼠红细胞 SOD 活性的影响
注:表中P1为各组别与空白对照组相比的显著性分析结果, P2为受试物剂量组与阳性对照组的显著性分析结果。
小鼠血中 MDA 含量测定 :采用试剂盒法(南京建成生物工程研究所购买),见 表3:
表 3受试样品对小鼠血中 MDA 含量的影响
组别(mg/kg·BW) | 动物数(只) | MDA(mmol/mL) | P1 | P2 |
空白对照组 | 10 | 11.3±2.3 | — | — |
阳性对照组 | 10 | 14.8±2.7 | P<0.05 | P<0.05 |
受试物低剂量组 | 10 | 11.5±2.1 | P<0.01 | P<0.01 |
受试物中剂量组 | 10 | 14.2±1.9 | P<0.01 | P<0.01 |
受试物高剂量组 | 10 | 15.9±3.2 | P1 | P2 |
注:表中P1为各组别与空白对照组相比的显著性分析结果, P2为受试物剂量组与阳性对照组的显著性分析结果。
同样,对其余实施例和本发明的实施例其余配比进行相同实验,结果与实施例1的效果类似。
2.增强免疫力效果实验
将通过实施例1制得的营养美白保健品各组分混合,浓缩干燥后制备成粉末状,作为测试样品。
对照品:天美健牌大豆肽蛋白粉;来源:北京同仁堂健康药业股份有限公司;成人临床推荐用量:0.167g.kg-1.d-1。
受试动物品系和级别:BALB/c小鼠,Hartley豚鼠,SPF级;数量及性别:BALB/c 小鼠60只,雄性; Hartley豚鼠6只,均可。购入体重BALB/c小鼠17-19g,Hartley豚鼠250-350g。由广东省医学实验动物中心提供,实验动物使用许可证号:SYXK(粤)2013-0002。实验期间,小鼠自由进食饮水,每天观察小鼠状态。
根据样品的基本情况进行剂量设计,样品低、中、高按成人临床用量的5倍、10倍、20倍设计剂量,分别为0.15g.kg-1.d-1、 0.30g.kg-1.d-1 、0.60g.kg-1.d-1;阳性对照组剂量按成人推荐剂量的5倍设计,为0.835g.kg-1.d-1。将60只雄性小鼠随机各分为5组(阴性对照组、阳性对照组、受试样品低、中、高剂量组),每组12只,其中2只作为备用动物。各组小鼠每天按0.1mL/10g体重灌胃相应样品液,阴性对照组给予等量纯净水,每天1次,连续给药30天。试验开始、试验结束均称量体重1次,试验期间每周称量体重1次。
小鼠淋巴细胞转化实验
末次给药1h,无菌取脾置于盛有RPMI-1640培养液的培养皿中,并放置200目筛网,用注射器活塞在其上方研磨制成脾细胞悬液,分装脾细胞悬液至加有淋巴细胞分离液的离心管中。400g,20℃下离心20min,离心完毕,取出离心管中淋巴细胞层离心管,加入RPMI-1640培养液洗涤数次,250g,4℃下离心10min。洗涤完毕后,弃去上清液,加入完全培养基,吹打均匀,用台盼兰染色计数保证95%以上活细胞率,将细胞浓度调整为3×106个/ml。
将每份脾细胞悬液分两孔加入48孔培养板中,每孔0.5ml,一孔加25 ul ConA液(相当于5ug/ml),另一孔作为对照,置于5%CO2,37℃CO2孵箱中培养48h后每孔轻轻吸去上清液0.3 ml,加入0.3 mlRPMI-1640培养液,同时加入CCK 8 试剂50 ul/孔,继续培养2 h。结束培养后,吹打均匀,然后分装到96孔培养板中,每孔作3个平行实验,用酶标仪测450 nm波长下的光密度值。淋巴细胞的增殖能力由加ConA孔的光密度值与不加ConA 孔的光密度值的差值表示。
小鼠体液免疫功能(血清溶血素)影响
给药25天,用生理盐水洗涤(2000r/min,10min)已脱纤维的羊血3次,在压积SRBC中加入生理盐水配成2%(v/v)的细胞悬液,每只小鼠腹腔注射0.2ml,第30天时,给药1h后,称重,所有小鼠摘除眼球取血0.8ml于离心管,静置1h,离心2000r/min,10min,收集血清。颈椎脱臼处死小鼠。用SA缓冲液稀释300倍的血清取1ml置试管内,再一次加入10%(v/v)SRBC0.5ml、用SA缓冲液稀释9倍的补体1ml,设置对照管(用SA代替血清),37℃恒温水浴20min,再冰浴,然后离心2000r/min,10min。取上清液1ml于新试管,加3.75ml都氏试剂、0.25ml10%(v/v)SRBC,充分混匀,静置10min,以对照管为空白,540nm处分别测定各管光密度值,溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示。
小鼠体液免疫(抗体生成细胞)的影响
给药25天,用生理盐水洗涤已脱纤维的羊血3次,每次离心2000r/min,10min,在压积SRBC中加入生理盐水配成2%(v/v)的细胞悬液,每只小鼠腹腔注射0.2ml,第30天时,给药1h后,称重。颈椎脱臼处死小鼠后,取出脾脏,置于放有Hank’s液平皿中,经过200目筛网过滤后,再用Hank’s液洗涤两次,加入到5mL RPMI-1640培养液中将细胞悬浮,计数细胞,且调整细胞浓度为5×106个/mL。
将1g琼脂糖加双蒸水至100mL形成的表层培养基加热溶解后,40-45℃水浴保温.与PH7.2-7.4、2倍Hank’s液等体积混合,摇匀,每管0.5mL分装不同的试管,继续向每管加入用SA缓冲液配制成的10%SRBC(v/v) 50ul和脾细胞悬液 20ul,快速混匀,倾倒于涂有一层薄薄的琼脂糖的薄片上,做平行片,等到琼脂糖凝固后,将薄片水平扣放在片架上,放入二氧化碳培养箱培养1-1.5h后,将用SA缓冲液稀释了9倍的补体加到玻片架的凹槽内,继续培养1-1.5h,然后计数溶血空斑数。
小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能及免疫器官影响的测定
末次给药1h,按体重从尾静脉注射用生理盐水1:3稀释的印度墨汁(10mL/kg),待墨汁注入,立即计时。注入墨汁后2、10min,分别从眼眶静脉丛采血20µL,并立即加到2mL 0.1%Na2CO3溶液中,以Na2CO3溶液作空白对照,用分光光度计在600nm波长处测定光密度值(OD),计算吞噬指数a。
小鼠采血后脱臼处死,解剖取肝脏、脾脏和胸腺,滤纸吸干脏器周围血液后,精密称重,计算脏器/体重比值。
NK细胞活性测定
末次给药1h,无菌取脾,无菌取脾置于盛有RPMI-1640培养液的培养皿中,并放置200目筛网,用注射器活塞在其上方研磨制成脾细胞悬液,分装脾细胞悬液至加有淋巴细胞分离液的离心管中。400g,20℃下离心20min,离心完毕,取出离心管中淋巴细胞层离心管,加入RPMI-1640培养液洗涤数次,250g,4℃下离心10min。洗涤完毕后,弃去上清液,加入完全培养基,吹打均匀,用台盼兰染色计数活细胞数(应在95%以上),最后用RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。
按比例将效应细胞和靶细胞(50:1)各100ul加入U型96孔板;靶细胞和培养液各100ul加入靶细胞自然释放孔;靶细胞和0.25%Triton各100ul加入靶细胞最大释放孔。每组均设3个平行孔,37℃,5%CO2培养箱培养4h后,离心1500rpm,5min。每孔吸取上清液100ul于平底96孔板,加入LDH基质液100ul/孔,反应3-10min,加入1mol/ml HCL 30ul/孔,酶标490nm测定光密度值。
所有数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析,测试结果如下表所示。
表4实施例样品与对照组对小鼠淋巴细胞转化的影响
注:采用方差分析方法进行统计分析,与阴性对照组比较,”a”: p<0.05;与阳性对照组比较, “b”: p<0.01
表5 实施例样品与对照组对小鼠抗体水平(血清溶血素)的影响
注:采用方差分析方法进行统计分析,与阴性对照组比较,”a”: p<0.05;与阳性对照组比较, “b”: p<0.01表6实施例样品与对照组对小鼠溶血空斑数的影响
注:采用方差分析方法进行统计分析,与阴性对照组比较,”a”: p<0.05;与阳性对照组比较, “b”: p<0.01 。
表7 实施例样品与对照组对小鼠吞噬指数的影响
注:采用方差分析方法进行统计分析,与阴性对照组比较,”a”: p<0.05;与阳性对照组比较, “b”: p<0.01 。
表8 实施例样品与对照组对小鼠NK细胞活性的影响
注:采用方差分析方法进行统计分析,与阴性对照组比较,”a”: p<0.05;与阳性对照组比较, “b”: p<0.01 。
同样,对其余实施例和本发明的实施例其余配比进行相同实验,结果与实施例1的效果类似。
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。对于本发明中所有未详尽描述的技术细节,均可通过本领域任一现有技术实现。
Claims (7)
1.一种营养美白保健品,其特征在于,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 40-50,氯化钾1-3,木糖醇5-8,柠檬酸钠2-4,胶原蛋白10-30,活性组分B 11-15,活性组分 C9-13,碳酸氢钠2-6,蜂蜜0.3-0.5,葡聚糖3-5,水32-65。
2.根据权利要求1所述的一种营养美白保健品,其特征在于,以重量份计,由以下组分组成:活性组分A 43,氯化钾2,木糖醇6,柠檬酸钠3,胶原蛋白14,活性组分B 13,活性组分C 11,碳酸氢钠4,蜂蜜0.4,葡聚糖4,水 45。
3.根据权利要求 1 所述的一种营养美白保健品,其特征在于,所述活性组分A为大比目鱼酶解产物,所述大比目鱼酶解产物的制备方法为:S1.取大比目鱼鱼糜,使料水比为1:2-1:8(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.0-3.5以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为1200-1500U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、100-130 r/min振荡酶解1.5-2.5 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.0-9.0,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为4500-6000 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为4:1-6:1,所述料水比1:3-1:6,酶解时间为3-4.5 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过真空冷冻干燥,设置干燥条件为预冷温度-30℃,预冷时间2h,加热温度从-10℃开始18h后缓慢升温,达到25℃,并保持到干燥终点,得到大比目鱼酶解产物。
4.根据权利要求 3所述的一种营养美白保健品,其特征在于,所述活性组分A为大比目鱼酶解产物,所述大比目鱼酶解产物的制备方法为:S1.取大比目鱼鱼糜,使料水比为1:3(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.5以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为1300U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、110 r/min振荡酶解2 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.5,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为5200 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为5:1,所述料水比1:4.5,酶解时间为3.5 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过真空冷冻干燥,设置干燥条件为预冷温度-30℃,预冷时间2h,加热温度从-10℃开始18h后缓慢升温,达到25℃,并保持到干燥终点,得到大比目鱼酶解产物。
5.根据权利要求 1所述的一种营养美白保健品,其特征在于,所述活性组分B为金枪鱼下脚料酶解产物,所述金枪鱼下脚料酶解产物的制备方法为:S1.取金枪鱼下脚料搅碎混合,使料水比为1:1-1:2(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.0以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为800-1000U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、75-105 r/min振荡酶解1-1.5 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.0-9.0,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为2500-3500 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为6:1-8:1,所述料水比1:2-1:4,酶解时间为2.5-3.5 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过喷雾干燥的方式,设置干燥条件为进风温度160℃,进样速度为50ml/min,离心雾化器转速为25000r/min,得到金枪鱼下脚料酶解产物。
6.根据权利要求 5所述的一种营养美白保健品,其特征在于,所述活性组分B为金枪鱼下脚料酶解产物,所述金枪鱼下脚料酶解产物的制备方法为:S1.取金枪鱼下脚料搅碎混合,使料水比为1:1.5(w/v),用2 mol/L盐酸将溶液pH值调至2.0以呈现胃部酸碱环境,以酶与底物浓度比为880U/g加入胃蛋白酶,在恒温水浴振荡器中保持37 ℃、85 r/min振荡酶解1.3 h,在此条件下获得经胃蛋白酶酶解的初产物;S2.用2 mol/L的氢氧化钠将经胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值调至8.2,保持37 ℃酶解温度,复合酶添加量为2900 U/g, 所述复合酶中胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的质量比为7:1,所述料水比1:2.5,酶解时间为2.8 h,酶解结束后,在100℃沸水浴中灭酶10min;将S2中的酶解产物通过喷雾干燥的方式,设置干燥条件为进风温度160℃,进样速度为50ml/min,离心雾化器转速为25000r/min,得到金枪鱼下脚料酶解产物。
7.根据权利要求 1所述的一种营养美白保健品,其特征在于,所述活性组分C为独活菌体粗提物,所述独活菌体粗提物的制备方法为:取新鲜植物的根、茎、叶分别洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至 PDA(分离内生真菌)和高氏一号培养基(分离内生放线菌)上培养 5-7 d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有 100 mL 发酵培养基的锥形瓶中,置 30℃,150 r/min 摇床振荡培养3 d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取 3 次,合并有机相,45 ℃ 减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量 95%乙醇冷凝回流 3 次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为菌体粗提物。
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CN107411086A (zh) * | 2017-05-19 | 2017-12-01 | 惠州嘉联生物科技开发有限公司 | 一种滇橄榄多酚制品 |
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