CN106619605A - 补骨脂宁的医药用途 - Google Patents
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Classifications
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Abstract
本发明涉及补骨脂宁用于制备治疗或预防高脂血症、高血糖、非酒精性脂肪肝、2型糖尿病中任意一种或多种的组合物，组合物制成：药物、保健品、或功能性食品,赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。
Description
技术领域
本发明属于天然药物领域，公开了一种补骨脂宁医药用途，本发明公开了补骨脂宁预防或治疗高脂血症、高血糖、非酒精性脂肪肝、2型糖尿病的用途。
背景技术
糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷及(或)其生物学作用障碍引起的以高血糖为特征的代谢疾病，是在遗传基础上，有环境因素参与的遗传易感性疾病，是一种慢性全身性代谢疾病，严重危害人类健康，积极开展糖尿病的防治工作已成为主要的社会公共卫生问题。
西医目前常采用饮食、运动疗法磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、瑞格列奈、胰岛素等来治疗II型糖尿病，仅噻唑烷二酮类可改善胰岛素抵抗。病人在用西药治疗的同时，又不断地出现动脉硬化、冠心病和高血压等并发症，II型糖尿病的复杂机制及其导致的全身病变是西药治疗的薄弱环节。不论是磺脉类的促泌剂还是噻唑烷二酮类的增敏剂在实验和临床研究中都不具备明显的减肥功效，而肥胖是2型糖尿病乃至代谢综合征的重要病理基础。
II型糖尿病不仅是糖代谢紊乱疾病，还是脂肪代谢紊乱疾病。肥胖引起的II型糖尿病患者通常都有高糖和高脂饮食，并常伴有高脂血症。有研究表明提示血糖“正常”的肥胖患者己有β细胞分泌功能的异常。但是，大部分的肥胖者并不发展为糖尿病，说明机体的自身状况起重要作用。在同样的毒性作用下,易感人群很容易发展成II型糖尿病，而不敏感人群可能终身不发病，或者延迟发病。现代医学并不能够改变机体的易感性，但可以通过改变生活方式，减肥等手段来尽可能地减少早期的诱因，尽量的延长代偿期，从而延迟2型糖尿病的发生，甚至避免发病。
现代II型糖尿病的治疗观点已从已往的单纯控制血糖转为降糖、降脂、降压、改善胰岛素抵抗等多环节治疗。但是，对于II型糖尿病患者，药量需逐渐增加，投药种类也常由单一用药逐渐变为联合用药，这不可避免地要考虑药物代谢对肝肾的副作用。故从传统中药中寻找低毒、疗效肯定的天然药物来治疗是目前研糖尿病究热点之一。
补骨脂始载于《雷公炮炙论》，为豆科植物补骨脂的果实，性温，味辛，具补肾助阳之功效。补骨脂性辛、苦、温，归肾、脾经。有温肾助阳，纳气平喘，温肾止泻之功效。现代药理学研究表明补骨脂具有非常高的药用价值，具有扩张血管、增加心肌收缩力、抗菌、抗肿瘤、免疫调节等多种药理作用。补骨脂化学成分复杂,到目前为止国内外共从中分离出香豆素、黄酮、异黄酮、查耳酮和萜酚类等化合物四十余种。补骨脂宁为补骨脂有效成分之一。至今未见有关补骨脂宁治疗或预防高脂血症、高血糖、非酒精性脂肪肝、2型糖尿病的报道。
发明内容
本发明公开了补骨脂宁用于制备治疗或预防II型糖尿病的组合物。
本发明公开了补骨脂宁用于制备治疗或预防高脂血症的组合物。
本发明公开了补骨脂宁用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物。
本发明公开了的补骨脂宁组合物,为：
为市售或按已知方法制备的补骨脂宁或其药用盐、水合物或无水物；
其中补骨脂宁药用盐包括碱式盐、酸式盐、如钠盐、钾盐和钙盐，马来酸盐，柠檬酸盐；
组合物制成：药物、保健品、或功能性食品,赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。
本发明公开了补骨脂宁用于制备治疗或预防高脂血症、高血糖、非酒精性脂肪肝、2型糖尿病中任意一种或多种的组合物。
本发明公开了补骨脂宁用于制备的组合物,为：
用于制备治疗或预防II型糖尿病的组合物；或；
本发明公开了补骨脂宁用于制备的组合物，用于制备防治高脂血症、防治高血糖、或、非酒精性脂肪肝、2型糖尿病的组合物，补骨脂宁用量范围是15mg/kg-30mg/kg。
本发明公开了补骨脂宁用于制备的组合物，组合物制成：药物、保健品、或功能性食品,赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。
本发明公开了用于防治高脂血症的补骨脂宁,补骨脂宁的用量范围是15mg/kg-30mg/kg；
本发明公开了用于防治高血糖的补骨脂宁,补骨脂宁的用量范围是15mg/kg-30mg/kg；
本发明公开了用于防治2型糖尿病的补骨脂宁,补骨脂宁的用量范围是15mg/kg-30mg/kg；
本发明公开了用于防治非酒精性脂肪肝的补骨脂宁,补骨脂宁的用量范围是15mg/kg-30mg/kg。
为了便于理解，下面通过附图和具体实施例对本发明的用途进行详细的描述。需要特别指出的是，具体实施例和附图仅是为了说明，显然本领域的技术人员可以根据本文说明，对本发明进行各种修正或改变，这些修正和改变也将纳入本发明范围之内。
附图说明
图1.补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型体重变化曲线
图2.补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型进食量变化曲线
图3.补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型肝脏病理切片油红染色
图4.补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型肝脏病理切片HE染色
图5.补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型白色脂肪切片HE染色
图6.补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型棕色脂肪切片HE染色
图7补骨脂宁细胞活力统计图
本发明的数据记载于如下表格中:
表1.补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型进食量的影响
表2.血浆中甘油三酯含量
表3.血浆中总胆固醇含量
表4血浆中高密度脂蛋白含量
表5.血浆中低密度脂蛋白含量
表6.禁食血糖水平
表7.口服糖耐量线下面积值
表8.胰岛素耐受线下面值
表9.血清中ALT含量
表10 血清中AST含量
表11.肝脏重量
表12.肝脏中总胆固醇含量
表13.肝脏中甘油三酯含量
具体实施方式
实施例1
为了研究补骨脂宁对高脂诱导的小鼠模型的影响，使用C57BL小鼠，SPF级，雄性，体重(20±2)g，随机分成两组，第一组12只，为正常组，给与正常饲料，其余小鼠(40只)分为4组，给与高脂饲料(饲料热量19.4％蛋白质，20.6％碳水化合物，60％脂肪)自由摄食、饮水。分别给予基质、洛伐他汀组(30mg/kg)，补骨脂宁低浓度组(15mg/kg)、补骨脂宁高浓度组(30mg/kg)。连续喂养6周。
补骨脂宁的配置方法:用0.5％的CMC-Na溶液溶解。
观察指标：
a动物的一般情况
实验动物，光照12h黑夜12h，自由饮食饮水，实验期间动物状态正常。
b每周观测进食量、体重
表1.高脂诱导的小鼠模型进食量原始数据
如图1.所示模型组相比正常组体重显著升高，提示造模很成功，补骨脂宁治疗6周后体重显著降低。如图2.和表1.所示空白组和给药组进食量较高，提示该组模型体质吃多但是体重增加不明显，模型组进食量相对较高，同样提示造模成功给药有效。
实施例2
补骨脂宁对于高脂血动物模型的作用
实验动物及方法：
C57BL小鼠，SPF级，雄性，体重(20±2)g，随机分成两组，第一组12只，为正常组，给与正常饲料，其余小鼠(40只)分为4组，给与高脂饲料(饲料热量19.4％蛋白质，20.6％碳水化合物，60％脂肪)自由摄食、饮水。分别给予基质、洛伐他汀组(30mg/kg)，补骨脂宁低浓度药物(15mg/kg)、补骨脂宁高浓度组(30mg/kg)。连续喂养6周。采血、处死、取肝脏组织。
观察指标：
a动物的一般情况
实验动物在SPF动物房中饲养，12h光照12h黑夜，自由饮食饮水，实验期间动物状态正常。
b血脂相关指标：TC、TG、HDL、LDL
3、实验结果：
结果表明：补骨脂宁可明显降低血清中的总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)，升高高密度脂蛋白(HDL-C)，降低低密度脂蛋白(LDL-C)给药结束后测定小鼠、血脂水平。使用t检验进行统计学分析。结果显示，补骨脂宁对高脂改善作用效果明显，具有显著统计学差异。
表2.血清中甘油三酯含量 单位：mM
与高脂组比较，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表3.血清中总胆固醇含量，单位：mM
*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表4.血清中高密度脂蛋白含量 单位：mM
与高脂组比较，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表5.血清中低密度脂蛋白 单位：mM
与高脂组比较，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
造模后小鼠的血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)均显著升高，且具有显著的统计学差异，表明造模成功，给药TC,TG,LDL-C均显著性浓度依赖性的降低，具有显著的统计学差异，说明治疗效果显著。
HDL-C主要作用为将胆固醇从血液运输至肝脏中代谢，因此被称为"好"胆固醇，抗动脉粥样硬化的胆固醇，由于TC的升高造模组HDL-C显著升高，洛伐他汀组和给药组均能显著性的升高这一“好胆固醇”的含量，说明治疗效果显著。总之补骨脂宁能够有效的改善高脂血症，降低TG,TC,LDL-C，升高“好胆固醇”HDL-C的含量。
实施例3
补骨脂宁对于高血糖动物模型的作用
为了研究补骨脂宁对糖尿病的影响，本实验采用经典高脂诱导小鼠糖尿病模型，使用C57BL小鼠，SPF级，雄性，体重(20±2)g，随机分成两组，第一组12只，为正常组，给与正常饲料，其余小鼠(40只)分为4组，给与高脂饲料(饲料热量19.4％蛋白质，20.6％碳水化合物，60％脂肪)自由摄食、饮水。分别给予基质、洛伐他汀组(30mg/kg)，补骨脂宁低浓度药物(15mg/kg)、补骨脂宁高浓度组(30mg/kg)。连续喂养6周。给药结束后禁食过夜测定、空腹血糖、葡萄糖耐量和胰岛素耐量。糖耐量实验方法：小鼠禁食过夜，小鼠口服血糖2g/kg后分别在0，15，30，60，90，120min时，尾尖采血测定相应血糖，使用GraphPad Prism软件计算相应线下面积(AUC)。
胰岛素耐受实验方法：小鼠禁食过夜，小鼠腹腔注射胰岛素0.75IU/kg后分别在0，30，60，90，120，150min时，尾尖采血测定相应血糖，使用GraphPad Prism软件计算相应线下面积(AUC)。
所示，模型组相比正常对照组血糖约升高1倍，说明造模良好，给药后血糖有所降低，且高浓度相比低浓度具有更好的降血糖作用，且具有统计学差异。由于II型糖尿病主要特征为胰岛素抵抗，即机体对胰岛素不敏感，常用糖耐量和胰岛素耐量实验评估。糖耐量试验是一种口服葡萄糖负荷试验，用于了解机体对进食葡萄糖后的血糖调节能力。通过糖耐量试验，可以早期发现糖代谢异常，是目前公认的诊断糖尿病的金标准，在血糖增高但尚未达到糖尿病诊断标准时，为明确是否患糖尿病，可以采用OGTT进行鉴别诊断。正常情况下，机体有一套维持血糖的机制，口服葡萄糖，血糖短暂升高后迅速恢复正常，即糖耐量正常，相应的口服糖耐量曲线线下面积较小，糖尿病患者糖的利用障碍，口服葡萄糖后血糖迅速升高，血糖下降速度较慢，即糖耐量减退相应的线下面积较大，该实验中糖耐量减退，模拟禁食后机体血糖状态，所示，模型组在各个时间点的血糖均高于正常组，说明造模很成功，模型组呈现补骨脂宁治疗组和正常组的糖耐量曲线均在模型组曲线下，为了更好的定量这一现象使用GraphPad Prism软件计算相应线下面积(AUC)，，相应的线下面积也均低于模型组，且具有统计意义。说明了补骨脂宁整体降糖效果明显。
胰岛素耐量试验是反映机体对胰岛素敏感性的实验，主要模拟的是机体分泌胰岛素后糖水平的变化，高脂造模后，注射相同量的胰岛素后各个点的血糖值均高于正常组，其相应的线下面积也高于正常组，补骨脂宁治疗后各个时间点的血糖数值低于模型组，相应线下面积低于高脂诱导的模型组，说明降糖效果明显。结果表明补骨脂宁能够有效的增加胰岛素敏感性改善糖尿病。
以上数据表明补骨脂宁能够显著降低血液中葡萄糖含量(表6)显著提高糖耐受(表7)显著增加胰岛素敏感性(表8)。
表6.禁食血糖水平 单位：mM
*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表7.口服糖耐量线下面积值
与高脂组，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表8.胰岛素耐受线下面值
与高脂组，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
实施例4
补骨脂宁对高脂血症和非酒精性脂肪肝的治疗作用
实验动物及方法：
C57BL小鼠，SPF级，雄性，体重(20±2)g，随机分成两组，第一组12只，为正常组，给与正常饲料，其余小鼠(40只)分为4组，给与高脂饲料(饲料热量19.4％蛋白质，20.6％碳水化合物，60％脂肪)自由摄食、饮水。分为高脂组，高脂+洛伐他汀组(30mg/kg)、高脂+补骨脂宁低浓度组(15mg/kg)、高脂+补骨脂宁高浓度组(30mg/kg)。给药7周
观察指标：
a动物的一般情况
实验动物，12h光照12h黑夜，自由饮食饮水，实验期间动物状态正常。
b肝功能相关指标：血清ALT、AST
c血脂相关指标：TC、TG、HDL、LDL
d病理学检查：HE染色
e肝脏脂类蓄积相关指标：肝脏重量、肝脏中TG、肝脏中TC
给药结束后测定小鼠、血脂水平。使用t检验进行统计分析。
2.结果分析
造模后小鼠的血液中TC，TG，HDL-C，LDL-C均显著升高，且具有显著的统计学差异，表明造模成功，给药TC，TG，LDL-C均显著性浓度依赖性的降低，具有显著的统计学差异，说明治疗效果显著。
HDL-C主要作用为将胆固醇从血液运输至肝脏中代谢，因此被称为"好"胆固醇，抗动脉粥样硬化的胆固醇，由于TC的升高造模组HDL-C显著升高，洛伐他汀组和给药组均能显著性的升高这一“好胆固醇”的含量，说明治疗效果显著。
丙氨酸转氨酶又称谷丙转氨酶，简称GPT、ALT,丙氨酸转氨酶主要存在于肝细胞浆内，其细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。肝细胞会使血液中的丙氨酸转氨酶升高。1％的肝细胞损伤可以使血液中的丙氨酸转氨酶浓度升高一倍。因此，丙氨酸转氨酶是反映肝细胞受损程度最灵敏的指标，临床上是最为常用的肝功能检查指标。小鼠造模后AST，ALT约升高1.5倍，给药AST，ALT基本恢复正常，如病理结果显示，造模后小鼠肝脏中脂肪蓄积显著，肝细胞脂肪变性明显，纤维化增加，说明非酒精性脂肪肝造模成立，给予洛伐他汀和迷迭香石油醚部位，病理损伤显著逆转。此外高脂造模后肝脏重量显著增加，给药后一定程度逆转)结合血液中ALT,AST,TC，TG，LDL指标说明肝脏向硬化趋势发展，高剂量组肝脏重量逐渐恢复，且具有统计学差异。
数据显示肝脏中甘油三酯和胆固醇含量的结果显示，造模后肝脏中甘油三酯和胆固醇升高，说明肝脏中甘油三酯胆固醇蓄积显著，给予洛伐他汀和补骨脂宁基本恢复正常。综上所述，数据显示非酒精性脂肪肝造模成立，给药后治疗效果显著，具有统计学差异。
表9.血清中ALT含量 单位：IU/L
与高脂组，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表10.血清中AST含量 单位：IU/L
与高脂组，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表11.肝脏重量 单位：g
表12.肝脏中总胆固醇含量 单位：mg胆固醇/g新鲜肝脏组织
与高脂组，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表13.肝脏中甘油三酯含量，单位：mg胆固醇/g新鲜肝脏组织
与高脂组，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
实施例5
细胞的毒性的考察
细胞培养条件:取对数生长期的HL7702细胞，以2.5×105的密度种植于96孔板中，培养24h后，给药处理18h，给药浓度分别为0.5,1,2,4,6,8,16ug/ml，每孔加入含有浓度为0.5mg/mL MTT的培养基B溶液，培养4h，弃去培养基后，加入DMSO 100μL/孔，震摇10min后，490nm处测定吸光度，计算细胞活力值。
结果如图7，补骨脂宁梯度给药0.5,1,2,4,8,16ug/ml，MTT细胞毒性实验表明，补骨脂宁对细胞的毒性可以忽略不计。
实施例6
补骨脂宁纯化工艺
取补骨脂药材，粉碎，95乙醇10倍量体积回流提取3次，合并滤液，浓缩至无醇味，加水分散，乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，拌样用石油醚-乙酸乙酯体系(15:1):(12:1):(9:1):(6:1):(3:1):(1:1)梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯(9:1)部分，其与补骨脂宁标准品相对应斑点段，再次硅胶柱层析石油醚：丙酮＝(3:1)洗脱，收集补骨脂宁斑点浓缩至少量，放置过夜。有白色晶状物析出，过滤，固体用石油醚：丙酮(1:3)溶解结晶。过滤得补骨脂宁。
实施例7
补骨脂宁的制剂
补骨脂宁片剂：补骨脂宁10mg,淀粉88g,硬脂酸镁3g
制备工艺：取补骨脂宁过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。
补骨脂宁片剂：补骨脂宁10mg,淀粉88g,硬脂酸镁3g
制备工艺：取本发明实施例6的补骨脂宁过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。
补骨脂宁片剂用于制备治疗或预防II型糖尿病的组合物。
补骨脂宁片剂用于制备治疗或预防高脂血症的组合物。
补骨脂宁片剂用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物。
补骨脂宁胶囊：补骨脂宁10mg,淀粉88g,硬脂酸镁3g
制备工艺：取补骨脂宁过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。
补骨脂宁胶囊：补骨脂宁10mg,淀粉88g,硬脂酸镁3g
制备工艺：取本发明实施例6的补骨脂宁过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。
补骨脂宁胶囊用于制备治疗或预防II型糖尿病的组合物。
补骨脂宁胶囊用于制备治疗或预防高脂血症的组合物。
补骨脂宁胶囊用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物。
Claims (4)
1.补骨脂宁用于制备治疗或预防II型糖尿病的组合物。
2.补骨脂宁用于制备治疗或预防高脂血症的组合物。
3.骨脂宁用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的组合物。
4.补骨脂宁用于制备治疗或预防高脂血症、高血糖、非酒精性脂肪肝、2型糖尿病中任意一种或多种的组合物，其特征在于
为市售或按已知方法制备的补骨脂宁或其药用盐、水合物或无水物；
其中补骨脂宁药用盐包括碱式盐、酸式盐、如钠盐、钾盐和钙盐，马来酸盐，柠檬酸盐；
组合物制成：药物、保健品、或功能性食品,赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。
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| CN201710046042.2A CN106619605A (zh) | 2017-01-22 | 2017-01-22 | 补骨脂宁的医药用途 |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107412223A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-12-01 | 中国药科大学 | 一种含氧杂环化合物的医药用途 |
| CN108283635A (zh) * | 2018-04-19 | 2018-07-17 | 中国药科大学 | 补骨脂宁用作hsp90ab1抑制剂的医药用途 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105343051A (zh) * | 2015-08-07 | 2016-02-24 | 长庚大学 | 补骨脂宁于制备哺乳类sirt1活化剂、与其活化有关的疾病的药剂、延寿药剂的用途 |
-
2017
- 2017-01-22 CN CN201710046042.2A patent/CN106619605A/zh active Pending
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