CN106613964A - 一种铁皮石斛培养基及其制作方法 - Google Patents

一种铁皮石斛培养基及其制作方法 Download PDF

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倪石寿
吴应军
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Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛培养基及其制备方法，所述培养基主要由柠檬酸、蛋白胨、马铃薯、香蕉、琼脂、椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉制成。用本发明培养基培养铁皮石斛时，组培苗生长好，组培苗质量易保证，且生长值和增殖率高,且培养基中不含激素。

Description

一种铁皮石斛培养基及其制作方法
技术领域
本发明涉及一种用于培育铁皮石斛的培养基及其制作方法，特别是一种组培苗生长好的铁皮石斛培养基及其制作方法。
背景技术
铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。
铁皮石斛大多生长在炎热潮湿的热带、亚热带的岩石缝隙中，繁殖率很低，自然野生状态下繁殖率只有10％-17％；果实为蒴果，种子小而多，种内胚发育不全或不成熟，胚胎少胚乳,自然结实率低于5％，在自然条件下须与兰菌共生才能萌发，因此无法在大田或苗床上播种，很难生产足够的实生苗用于栽培。铁皮石斛对生长环境要求苛刻，成苗困难，采用传统的分株、扦插等人工繁殖方法进行繁殖，增殖速度非常低，目前组织培养是铁皮石斛增殖扩繁的主要方法。关于铁皮石斛的组织培养已有相关报道，但还存在组培苗质量难以保证等问题，极大地制约了铁皮石斛生产规模的扩大。
发明内容
本发明的目的，是提供一种铁皮石斛培养基及其制作方法，用本发明培养基培养铁皮石斛时，组培苗生长好，组培苗质量易保证，且生长值和增殖率高,且培养基中不含激素。
本发明是这样实现的。
一种铁皮石斛培养基，按重量份计算，主要由柠檬酸1-10份、蛋白胨10-20份、马铃薯50-60份、香蕉50-60份、琼脂20-30份、椿皮5-15份、琥珀10-20份、黄芩1-10份、杜仲1-10份和肉苁蓉1-8份制成。
前述的用于培育铁皮石斛的培养基，按重量份计算，主要由柠檬酸3-7份、蛋白胨13-17份、马铃薯53-57份、香蕉53-57份、琼脂23-27份、椿皮8-12份、琥珀13-17份、黄芩3-7份、杜仲3-7份和肉苁蓉3-5份制成。
前述的铁皮石斛培养基，按重量份计算，主要由柠檬酸5份、蛋白胨15份、马铃薯55份、香蕉55份、琼脂25份、椿皮10份、琥珀15份、黄芩5份、杜仲5份和肉苁蓉4份制成。
前述的铁皮石斛培养基的制作方法，包括下述步骤：
(1)取椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，粉碎成细颗粒后，加8-12倍量水煎煮2-3h，收集煎煮液，得A品；
(2)将柠檬酸和蛋白胨在室温下加入A品中，搅拌至溶解完全，得B品；
(3)将马铃薯加水煮熟后，绞碎成马铃薯泥，得C品；
(4)B品中加入C品，搅拌均匀，得D品；
(5)香蕉搅碎后加入D品中，搅拌均匀，得E品；
(6)琼脂在室温下加3-5倍量水，搅拌至完全溶解后，得F品；
(7)F品加入E品中，混匀，得G品；
(8)G品装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌20-30分钟，冷却凝固后即得。
前述的铁皮石斛培养基的制作方法，步骤(1)为：取椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，粉碎成细颗粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品。
前述的铁皮石斛培养基的制作方法，步骤(6)为：琼脂在室温下加4倍量水，搅拌至完全溶解后，得F品。
前述的铁皮石斛培养基的制作方法，步骤(8)为：G品装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌20-30分钟，冷却凝固后即得。
申请人对本发明进行了大量的实验研究，部分实验如下：
实验例1生长和增殖考察.
1材料与方法
1.1材料
1.1.1铁皮石斛T 4品种(原种采自于云南广南县)组培苗。
1.1.2本发明培养基：按实施例1进行制作；
1.1.3对比培养基：培养基原料中不含椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，其余制作方法同实施例1。
1.2方法
1.2.1培养试验
取轻度黄花扭曲的组培苗，去掉根兜后，每个培养基接种6瓶，每瓶接种15株，50d后观察，统计组培苗的生长情况。
1.2.2培养条件
各试验的培养物在白天温度(22士1)℃、夜间温度(18±1)℃、光照1800L x、光照时间14h/d及通风良好的组培培养室中培养。
1.2.3统计方法
生长值(cm)＝统计时平均株高-继代时平均株高；
增殖率(％)＝(统计时苗总数一继代时苗总数)/初始苗总数×100％。
3结果
3.1对铁皮石斛组培苗生长的影响
经50d培养后的生长情况见表1。
表1对组培苗生长的影响
培养基 生长值/cm 增殖率/％
对比培养基 1.40 225.6
本发明培养基 1.75 295.5
由表可知，本发明培养基组生长值和增值率均高于对比培养基组。
实施例2.壮苗生根及移栽成活率考察
1材料与方法
1.1材料
1.1.1铁皮石斛T 4品种(原种采自于云南广南县)组培苗。
1.1.2本发明培养基：按实施例1进行制作；
1.1.3对比培养基：培养基原料中不含椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，其余制作方法同实施例1。
1.2方法
1.2.1以上述培养基设2个处理，及本发明培养基组和对比培养基组，每处理接种20瓶，置于培养温度为(25±2)℃、光照度为1500～2000lx、光照时间12h/d条件下培养。培养30d后，统计组培苗的生根数、根长、株高等。
1.2.2选取在壮苗生根培养基中生长状况良好、株高4-5cm、根长4cm、具有5条长根的组培苗移栽。首先将组培苗移至室外通风处炼苗2周左右，炼苗温度为20-25℃，将组培瓶盖逐日拧松，移栽前2d揭盖，使组培苗逐渐适应自然环境。将培养基与小苗一起取出，先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗几遍。设2个处理，及本发明培养基组和对比培养基组，移栽后7、30d分别统计组培苗的成活率。
2结果
2.1组培苗的生根数、根长、株高结果见表2。
表2对铁皮石斛组培苗生根的影响
培养基 株高/cm 生根率/％ 根长/cm 根数/条 生长情况
对比培养基 3.8 96 2.4 3.5 ++++
本发明培养基 4.9 100 3.9 6.5 +++++
注：“++++”表示组培苗生长状况较好，交瘦弱，新根少但根长，叶片细长，呈浅绿色；“+++++”表示组培苗生长状况优良，交粗壮，根较粗且长，根较多，有部分气生根长出，叶片厚大，呈深绿色。
由表可知，接种30d后，对照组处理下组培苗平均根长为2.4cm，平均根数为3.5条，平均株高为3.8cm。本发明组处理下培苗平均根长为3.9m，平均根数为6.5条，平均株高为4.9cm，丛生芽较少且生根率较高，组培苗叶片增大，呈长椭圆形，叶片变厚，呈深绿色，部分组培苗还长出较长的气生根。由此可见，两种培养基中，组培苗在本发明培养基中生长状态最佳，生根率可达100％，根长、根数、叶片形态更适于移栽。
与现有技术相比，用本发明培养基培养铁皮石斛时，组培苗生长好，组培苗质量易保证，且生长值和增殖率高,且培养基中不含激素。
具体实施方式
实施例1。
配方：柠檬酸50kg、蛋白胨150kg、马铃薯550kg、香蕉550kg、琼脂250kg、椿皮100kg、琥珀150kg、黄芩50kg、杜仲50kg和肉苁蓉40kg。
制作工艺：
(1)取椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，粉碎成细颗粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；
(2)将柠檬酸和蛋白胨在室温下加入A品中，搅拌至溶解完全，得B品；
(3)将马铃薯加水煮熟后，绞碎成马铃薯泥，得C品；
(4)B品中加入C品，搅拌均匀，得D品；
(5)香蕉搅碎后加入D品中，搅拌均匀，得E品；
(6)琼脂在室温下加4倍量水，搅拌至完全溶解后，得F品；
(7)F品加入E品中，混匀，得G品；
(8)G品装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌25分钟，冷却凝固后即得。
实施例2.
配方：柠檬酸100kg、蛋白胨200kg、马铃薯600kg、香蕉600kg、琼脂300kg、椿皮150kg、琥珀200kg、黄芩100kg、杜仲100kg和肉苁蓉80kg。
制作工艺：
(1)取椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，粉碎成细颗粒后，加12倍量水煎煮3h，收集煎煮液，得A品；
(2)将柠檬酸和蛋白胨在室温下加入A品中，搅拌至溶解完全，得B品；
(3)将马铃薯加水煮熟后，绞碎成马铃薯泥，得C品；
(4)B品中加入C品，搅拌均匀，得D品；
(5)香蕉搅碎后加入D品中，搅拌均匀，得E品；
(6)琼脂在室温下加5倍量水，搅拌至完全溶解后，得F品；
(7)F品加入E品中，混匀，得G品；
(8)G品装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌30分钟，冷却凝固后即得。
实施例3.
配方：柠檬酸10kg、蛋白胨100kg、马铃薯500kg、香蕉500kg、琼脂200kg、椿皮50kg、琥珀100kg、黄芩10kg、杜仲10kg和肉苁蓉10kg。
制作工艺：
(1)取椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，粉碎成细颗粒后，加8倍量水煎煮2h，收集煎煮液，得A品；
(2)将柠檬酸和蛋白胨在室温下加入A品中，搅拌至溶解完全，得B品；
(3)将马铃薯加水煮熟后，绞碎成马铃薯泥，得C品；
(4)B品中加入C品，搅拌均匀，得D品；
(5)香蕉搅碎后加入D品中，搅拌均匀，得E品；
(6)琼脂在室温下加3倍量水，搅拌至完全溶解后，得F品；
(7)F品加入E品中，混匀，得G品；
(8)G品装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌20分钟，冷却凝固后即得。

Claims (7)

1.一种铁皮石斛培养基，其特征在于：按重量份计算，主要由柠檬酸1-10份、蛋白胨10-20份、马铃薯50-60份、香蕉50-60份、琼脂20-30份、椿皮5-15份、琥珀10-20份、黄芩1-10份、杜仲1-10份和肉苁蓉1-8份制成。
2.如权利要求1所述的铁皮石斛培养基，其特征在于：按重量份计算，主要由柠檬酸3-7份、蛋白胨13-17份、马铃薯53-57份、香蕉53-57份、琼脂23-27份、椿皮8-12份、琥珀13-17份、黄芩3-7份、杜仲3-7份和肉苁蓉3-5份制成。
3.如权利要求2所述的铁皮石斛培养基，其特征在于：按重量份计算，主要由柠檬酸5份、蛋白胨15份、马铃薯55份、香蕉55份、琼脂25份、椿皮10份、琥珀15份、黄芩5份、杜仲5份和肉苁蓉4份制成。
4.如权利要求1-3中任一项所述的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：包括下述步骤：
（1）取椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，粉碎成细颗粒后，加8-12倍量水煎煮2-3h，收集煎煮液，得A品；
（2）将柠檬酸和蛋白胨在室温下加入A品中，搅拌至溶解完全，得B品；
（3）将马铃薯加水煮熟后，绞碎成马铃薯泥，得C品；
（4）B品中加入C品，搅拌均匀，得D品；
（5）香蕉搅碎后加入D品中，搅拌均匀，得E品；
（6）琼脂在室温下加3-5倍量水，搅拌至完全溶解后，得F品；
（7）F品加入E品中，混匀，得G品；
（8）G品装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌20-30分钟，冷却凝固后即得。
5.如权利要求4所述的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：步骤（1）为：取椿皮、琥珀、黄芩、杜仲和肉苁蓉，粉碎成细颗粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品。
6.如权利要求4所述的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：步骤（6）为：琼脂在室温下加4倍量水，搅拌至完全溶解后，得F品。
7.如权利要求4所述的用于培育铁皮石斛的培养基的制作方法，其特征在于：步骤（8）为：G品装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌20-30分钟，冷却凝固后即得。
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