CN106608914A - 一种去除绒促性素中热原的方法 - Google Patents
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- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
Abstract
本发明公开了一种能够去除绒促性素中热原的方法。本发明的技术方法是将绒促性素干粉经产品溶解、预过滤、超滤、纳滤、冷冻干燥后得到绒促性素精品。该技术的优点在于在绒促性素生产过程中去除产品中的热原物质的污染，进一步对绒促性素进行了纯化。该方法得到的绒促性素细菌内毒素小于0.01EU/U，且精品的比活能够达到20000单位/mg以上。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及一种去除绒促性素中热原的方法。
背景技术
绒促性素（Chorionic Gonadotrophin）系自健康孕妇尿中提取、精制而成的一种天然促性腺激素，具有类似黄体生成素的功能。对女性可促进卵泡的成熟及排卵，并维持黄体的功能。对男性，能刺激睾丸间质细胞的发育，增加雄激素分泌，促使睾丸下降和男性第二性征发育。与尿促性素合用，可模拟生理性的促黄体生成素高峰，而触发排卵。临床上绒促性素至今仍是治疗月经失调、无排卵性不孕症、先兆流产和习惯性流产、隐睾症、男性性功能低下等的首选药物，应用前景十分广泛。
热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。当含有热原的物质进入人体以后，人体会产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。因此去热原是本品生产工序中不可缺少的一步。细菌内毒素法是常用的控制热原的检测方法之一。
本公司在提纯绒促性素粗品后，通过先后加入高盐、低盐溶液，在低温环境下，将绒促性素粗品进一步提纯。在此过程中，通过控制粗品溶液的pH 值，在偏酸性环境下，同时降低温度，使高低盐溶液能将绒促性素粗品溶液充分提纯，达到将绒促性素提纯的目的，在此基础上进一步通过简便有效的方法去除热原，而得比活较高、同时去除了热原的产品，使绒促性素的应用更加安全，同时更能满足临床和科研的需求。
发明内容
本发明的目的是提供了一种去除绒促性素中热原的方法。
本发明的技术方案是：绒促性素干粉经产品溶解、预过滤、超滤、纳滤、冷冻干燥后得到去除热原的绒促性素精品，包括如下步骤：
（1）磷酸盐缓冲液配制：用纯化水配制含磷酸二氢钠0.1-0.4mol/L与磷酸氢二钠0.01-0.2mol/L，pH为6.5-8.0的缓冲液。
（2）产品溶解：将绒促性素干粉按重量1:10-40（w/v）比例加入磷酸盐缓冲液，搅拌使完全溶解。
（3）预过滤：将溶解后的产品用0.22μm滤芯预过滤，压力为0.1-0.5Mpa。
（4）超滤：将预过滤后的液体用8-15KD超滤膜进行超滤浓缩，进口压力为0.05-0.2Mpa，浓缩体积至原体积的15%-20%。
（5）纳滤：将超滤后的液体用20nm的滤芯进行纳滤，压力为0.1-0.5Mpa。
（6）冷冻干燥：将纳滤后的液体放入真空干燥箱进行冷冻干燥，得到绒促性素成品。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。
实施例1
（1）磷酸盐缓冲液配制：用纯化水配制含磷酸二氢钠0.2mol/L与磷酸氢二钠0.05mol/L，pH为6.9的缓冲液。
（2）产品溶解：将绒促性素干粉按重量1:15（w/v）比例加入磷酸盐缓冲液，搅拌使完全溶解。
（3）预过滤：将溶解后的产品用0.22μm滤芯预过滤，压力为0.2Mpa。
（4）超滤：将预过滤后的液体用10KD超滤膜进行超滤浓缩，进口压力为0.05Mpa，浓缩体积至原体积的18%。
（5）纳滤：将超滤后的液体用20nm的滤芯进行纳滤，压力为0.2Mpa。
（6）冷冻干燥：将纳滤后的液体放入真空干燥箱进行冷冻干燥，得到绒促性素成品。
得到的绒促性素成品检测比活为10042单位/mg，细菌内毒素小于0.01EU/U。
实施例2
（1）磷酸盐缓冲液配制：用纯化水配制含磷酸二氢钠0.3mol/L与磷酸氢二钠0.15mol/L，pH为7.6的缓冲液。
（2）产品溶解：将绒促性素干粉按重量1:30（w/v）比例加入磷酸盐缓冲液，搅拌使完全溶解。
（3）预过滤：将溶解后的产品用0.22μm滤芯预过滤，压力为0.4Mpa。
（4）超滤：将预过滤后的液体用10KD超滤膜进行超滤浓缩，进口压力为0.1Mpa，浓缩体积至原体积的15%。
（5）纳滤：将超滤后的液体用20nm的滤芯进行纳滤，压力为0.4Mpa。
（6）冷冻干燥：将纳滤后的液体放入真空干燥箱进行冷冻干燥，得到绒促性素成品。
得到的绒促性素成品检测比活为11157单位/mg，细菌内毒素小于0.01EU/U。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (7)
1.一种去除绒促性素中热原的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：将绒促性素干粉经产品溶解、预过滤、超滤、纳滤、冷冻干燥后得到去除热原的绒促性素精品。
2.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于，所述的绒促性素是由苯甲酸钠吸附、高盐抽提、低盐抽提、柱分离、和冷冻干燥以得到的。
3.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于，所述的产品溶解是按绒促性素干粉重量1:10-40（w/v）比例加入磷酸盐缓冲液，搅拌使完全溶解。
4.根据权利要求3 所述的方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液是含磷酸二氢钠0.1-0.4mol/L与磷酸氢二钠0.01-0.2mol/L，pH为6.5-8.0的缓冲液。
5.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于，所述的预过滤是用0.22μm滤芯预过滤，压力为0.1-0.5Mpa。
6.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于，所述的超滤是将预过滤后的液体用5-15KD超滤膜进行超滤浓缩，进口压力为0.05-0.2Mpa，浓缩体积至原体积的15%-20%。
7.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于，所述的纳滤是将超滤后的液体用20nm的滤芯进行纳滤，压力为0.1-0.5Mpa。
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