CN106591135A - 海水微藻通用培养基及培养方法 - Google Patents

海水微藻通用培养基及培养方法 Download PDF

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柴英辉
周文礼
高金伟
窦勇
贾旭颖
孙金辉
李霞
孙朦朦
于宏
刘胜男
宋虹
张文慧
薄香兰
刁瑛娇
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Abstract

本发明创造提供一种海水微藻通用培养基，包括f/2培养基配方，还包括：可溶性钙盐，以钙元素计，为f/2培养基重量的(3.5±0.5)‰；可溶性镁盐，以镁元素计，为f/2培养基重量的(13.6±0.5)‰；赤霉素，为f/2培养基重量的0.42‰‑0.85‰。本发明创造能够显著提高微藻的增长速度。

Description

海水微藻通用培养基及培养方法
技术领域
本发明属于微藻培养技术领域，尤其是涉及一种新式海水通用培养基及用其进行微藻养殖的方法。
背景技术
微藻作为海洋生态系统中的主要初级生产力，构成了海洋食物链中的基础环节。它们能够利用光能把摄取的无机碳转化为有机物供自身生长需要，也为海洋中其它的生物提供必需的有机物质。无论是经济价值还是研究开发价值，微藻都有极其重要的价值。微藻具有独特的代谢方式，可以通过光合作用来调节、改善经济水产鱼、虾、贝等的养殖水质，但是一些具有重要价值的藻类仍存在增长缓慢、密度提升空间不足以及藻液浓度不足等问题。若藻类达到理想密度时间较长，必然影响后续实验或者养殖的进行，因此如何解决微藻增长缓慢的问题制约着饵料微藻养殖业以及水产养殖业的发展，成为亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明创造提供了海水微藻通用培养基及培养方法，能够显著提高微藻的增长速度。
本发明创造提供的海水微藻通用培养基，包括f/2培养基配方，还包括：
可溶性钙盐，以钙元素计，为f/2培养基重量的(3.5±0.5)‰；优选为氯化钙；
可溶性镁盐，以镁元素计，为f/2培养基重量的(13.6±0.5)‰；优选为六水氯化镁；
赤霉素，为f/2培养基重量的0.42‰-0.85‰。
上述配方中，f/2培养基为微藻培养中的常用培养基，优选的，以重量计，包括如下组分：硝酸钠75份、磷酸二氢钠5份、硅酸钠30份、硫酸锌0.023份、硫酸铜0.01份、氯化锰0.012份、氯化铁3.16份、钼酸钠0.07份、乙二铵四乙酸钠4.36份、氯化钴0.012份、维生素B120.5份、维生素H 0.5份、维生素B10.1份。在f/2培养基中加入赤霉素，能够对微藻起到刺激生长的作用，以实现海水微藻的快速增长及密度的提升；镁离子是叶绿素的必须成分，钙离子是限制微藻生命活动的一个重要离子，钙镁离子的增加，保证了微藻的生命活动以及光合作用的有序进行，有效提高了海水微藻中叶绿素的含量(能够增加3％-10％)，达到促进藻类细胞的物质交换及藻液的稳定性的目的。
其中，上述配方中还包括有可溶性碳酸氢盐，以碳酸氢根计，为f/2培养基重量的(30.6±5)‰；优选为碳酸氢钠。可溶性碳酸氢盐能够与赤霉素产生协同作用，使得海水微藻的生长速度加倍提高，经测试，同时添加碳酸氢钠和赤霉素比单独添加碳酸氢钠或赤霉素时，微藻细胞浓度达到106个/ml时的时间分别缩短了20小时和10小时左右。
本发明创造还提供了一种海水微藻的培养方法，包括下述步骤：将上述配方中的f/2培养基配方、可溶性钙盐、可溶性镁盐与海水混合配制后，接种微藻，微藻接种(24±12)h后均匀添加所述赤霉素，然后继续在适宜环境下养殖即可。
其中，所述微藻的接种量以体积分数计，为15％～20％。
其中，所述f/2培养基配方、可溶性钙盐和可溶性镁盐在海水中的总添加量优选为(138.6±30)mg/L。
其中，所述海水中还按照计量比添加有可溶性碳酸氢盐，即以碳酸氢根计，可溶性碳酸氢盐为f/2培养基重量的(30.6±5)‰。
其中，所述海水为盐度为(30±5)‰的海水。
其中，所述微藻的养殖环境为：温度23-26℃；湿度15～20％，白炽灯的光照强度500～2000Lux，溶氧量4～8mg/L；优选的，温度24-26℃；湿度20％，白炽灯的光照强度800Lux；溶氧量4～8mg/L。
本发明创造中所述的微藻包括小球藻、等鞭金藻、塔胞藻、杜氏盐藻等海水微藻。
相对于现有技术，本发明创造解决了微藻生长缓慢的问题，能够实现海水微藻的快速增长及密度的提升，通过平衡营养元素的加入，在缩短微藻培养时间的同时也保证了藻液的稳定性。可溶性碳酸氢盐的复配使用能够进一步提高海水微藻的生长速度，特别适用于大规模海水微藻的养殖过程。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明创造。
实施例1
采用盐度为30‰的海水配制养殖液，每升海水中含有以下组分，硝酸钠(NaNO3)75mg、磷酸二氢钠(NaH2PO4)5mg、硅酸钠(Na2SiO3)30mg、硫酸锌(ZnSO4.4H2O)0.023mg、硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.01mg、氯化锰(MnCl2·4H2O)0.012mg、氯化铁(FeCl3·6H2O)3.16mg、钼酸钠(NaMoO4·2H2O)0.07mg、乙二铵四乙酸钠(Na2EDTA)4.36mg、氯化钴(CoCl2·6H2O)0.012mg、维生素B120.5mg、维生素H(生物素)0.5mg、维生素B10.1mg、氯化钙1.15mg、六水氯化镁13.66mg、碳酸氢钠5mg。
配制完成后，按体积分数15％接种海水小球藻，接种培养24h后添加按照0.1mg/L的用量添加赤霉素。
海水小球藻养殖环境为温度为25℃；湿度为20％；白炽灯的光照强度为800Lux；溶氧量为4.05mg/L。
当藻的密度达到106个细胞/ml时，比正常f/2培养基缩短28小时左右。
实施例2
采用盐度为30‰的海水配制养殖液，每升海水中含有以下组分，硝酸钠(NaNO3)75mg、磷酸二氢钠(NaH2PO4)5mg、硅酸钠(Na2SiO3)30mg、硫酸锌(ZnSO4.4H2O)0.023mg、硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.01mg、氯化锰(MnCl2·4H2O)0.012mg、氯化铁(FeCl3·6H2O)3.16mg、钼酸钠(NaMoO4·2H2O)0.07mg、乙二铵四乙酸钠(Na2EDTA)4.36mg、氯化钴(CoCl2·6H2O)0.012mg、维生素B120.5mg、维生素H(生物素)0.5mg、维生素B10.1mg、氯化钙1.15mg、六水氯化镁13.66mg、碳酸氢钠5mg。
配制完成后，按体积分数15％接种杜氏盐藻，接种培养24h后添加按照0.15mg/L的用量添加赤霉素。
杜氏盐藻养殖环境为温度为27℃；湿度为20％；白炽灯的光照强度为900Lux；溶氧量为4.21mg/L。
当藻的密度达到5*106个细胞/ml时，比正常f/2培养基缩短26小时左右。
实施例3
采用盐度为30‰的海水配制养殖液，每升海水中含有以下组分，硝酸钠(NaNO3)75mg、磷酸二氢钠(NaH2PO4)5mg、硅酸钠(Na2SiO3)30mg、硫酸锌(ZnSO4.4H2O)0.023mg、硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.01mg、氯化锰(MnCl2·4H2O)0.012mg、氯化铁(FeCl3·6H2O)3.16mg、钼酸钠(NaMoO4·2H2O)0.07mg、乙二铵四乙酸钠(Na2EDTA)4.36mg、氯化钴(CoCl2·6H2O)0.012mg、维生素B120.5mg、维生素H(生物素)0.5mg、维生素B10.1mg、氯化钙1.15mg、六水氯化镁13.66mg。
配制完成后，按体积分数15％接种海水小球藻，接种培养24h后添加按照0.1mg/L的用量添加赤霉素。
海水小球藻养殖环境为温度为25℃；湿度为20％；白炽灯的光照强度为800Lux；溶氧量为4.05mg/L。
当藻的密度达到106个细胞/ml时，比配方中同时添加赤霉素和碳酸氢钠延长了6个小时左右。
实施例4
采用盐度为30‰的海水配制养殖液，每升海水中含有以下组分，硝酸钠(NaNO3)75mg、磷酸二氢钠(NaH2PO4)5mg、硅酸钠(Na2SiO3)30mg、硫酸锌(ZnSO4.4H2O)0.023mg、硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.01mg、氯化锰(MnCl2·4H2O)0.012mg、氯化铁(FeCl3·6H2O)3.16mg、钼酸钠(NaMoO4·2H2O)0.07mg、乙二铵四乙酸钠(Na2EDTA)4.36mg、氯化钴(CoCl2·6H2O)0.012mg、维生素B120.5mg、维生素H(生物素)0.5mg、维生素B10.1mg、氯化钙1.15mg、六水氯化镁13.66mg。
配制完成后，按体积分数15％接种海水小球藻，不添加赤霉素。
海水小球藻养殖环境为温度为25℃；湿度为20％；白炽灯的光照强度为800Lux；溶氧量为4.05mg/L。
当藻的密度达到106个细胞/ml时，比配方中同时添加赤霉素和碳酸氢钠延长了13个小时左右。
由实例三和实例四与实例一相比较，单用赤霉素或者碳酸氢钠对藻类的生长具有促进作用，但是将两者相结合作用大大优于两者单独使用，推断赤霉素和碳酸氢钠组合对藻类细胞的增加具有协同作用。
以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种海水微藻通用培养基，包括f/2培养基配方，还包括：
可溶性钙盐，以钙元素计，为f/2培养基重量的(3.5±0.5)‰；优选为氯化钙；
可溶性镁盐，以镁元素计，为f/2培养基重量的(13.6±0.5)‰；优选为六水氯化镁；
赤霉素，为f/2培养基重量的0.42‰-0.85‰。
2.根据权利要求1所述的海水微藻通用培养基，其特征在于，所述f/2培养基以重量计，包括如下组分：硝酸钠75份、磷酸二氢钠5份、硅酸钠30份、硫酸锌0.023份、硫酸铜0.01份、氯化锰0.012份、氯化铁3.16份、钼酸钠0.07份、乙二铵四乙酸钠4.36份、氯化钴0.012份、维生素B12 0.5份、维生素H 0.5份、维生素B1 0.1份。
3.根据权利要求1所述的海水微藻通用培养基，其特征在于，还包括有可溶性碳酸氢盐，以碳酸氢根计，为f/2培养基重量的(30.6±5)‰；优选为碳酸氢钠。
4.一种海水微藻的培养方法，包括下述步骤：将f/2培养基配方、可溶性钙盐、可溶性镁盐与海水混合配制后，接种微藻，微藻接种(24±12)h后均匀添加赤霉素，然后继续在适宜环境下养殖即可；
可溶性钙盐，以钙元素计，为f/2培养基重量的(3.5±0.5)‰；优选为氯化钙；
可溶性镁盐，以镁元素计，为f/2培养基重量的(13.6±0.5)‰；优选为六水氯化镁；
赤霉素，为f/2培养基重量的0.42‰-0.85‰。
5.根据权利要求4所述的海水微藻的培养方法，其特征在于，所述微藻的接种量以体积分数计，为15％～20％。
6.根据权利要求4所述的海水微藻的培养方法，其特征在于，所述f/2培养基配方、可溶性钙盐和可溶性镁盐在海水中的总添加量优选为(138.6±30)mg/L。
7.根据权利要求4所述的海水微藻的培养方法，其特征在于，所述海水中还添加有可溶性碳酸氢盐，以碳酸氢根计，可溶性碳酸氢盐为f/2培养基重量的(30.6±5)‰；优选为碳酸氢钠。
8.根据权利要求4所述的海水微藻的培养方法，其特征在于，所述海水为盐度为(30±5)‰的海水。
9.根据权利要求4所述的海水微藻的培养方法，其特征在于，所述微藻的养殖环境为：温度23-26℃；湿度15～20％，白炽灯的光照强度500～2000Lux，溶氧量4～8mg/L；优选的，温度24-26℃；湿度20％，白炽灯的光照强度800Lux；溶氧量4～8mg/L。
10.根据权利要求4所述的海水微藻的培养方法，其特征在于，所述f/2培养基以重量计，包括如下组分：硝酸钠75份、磷酸二氢钠5份、硅酸钠30份、硫酸锌0.023份、硫酸铜0.01份、氯化锰0.012份、氯化铁3.16份、钼酸钠0.07份、乙二铵四乙酸钠4.36份、氯化钴0.012份、维生素B12 0.5份、维生素H 0.5份、维生素B 10.1份。
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