CN106591130A - 一种土壤提取液的制备方法 - Google Patents

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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明涉及生物化工领域，尤其涉及一种土壤提取液的制备方法。它的主要步骤是土壤采集、土壤浸泡、初次浸提、反复浸提和抽滤除菌，整个过程没有使用刺激性有机溶剂，具有环保便宜、操作简单、设备要求低等优点，且该方法对土壤进行充分的浸提，最大限度地利用了资源。所制备成的土壤提取液用于微藻的培养，能显著提高微藻的生长速率，同时节省培养基成本。

Description

一种土壤提取液的制备方法
技术领域
本发明涉及生物化工领域，尤其涉及一种土壤提取液的制备方法。
背景技术
微量元素是指自然界中广泛存在的含量很低的化学元素。岩石、土壤、水、植物和动物中都含有微量元素。土壤中的无机部分已发现的微量元素共有90种，除了10种含量较高外，其余含量都介于万分之一到十万分之一之间。
在植物正常生长过程中，对微量元素的需求量很少，一般农作物体内的微量元素含量仅为总量的百万分之几到十万分之几，但它们的作用却不可忽视。它与生物分子蛋白质、多糖、核酸、维生素等密切相关，对植物的各种生理代谢过程的关键步骤起调控作用，可以影响到作物生长发育、产量以及农作物的品质等方面。
目前在微藻培养过程中广泛使用的培养基都包括微量元素溶液。其每种成分所需的含量极少，难以进行称量，加大了操作难度，同时价格又及其昂贵，既费力又费钱。因此，一些科学家尝试用土壤提取液来代替微量元素溶液，节省开支的同时又满足微藻生长的需要。但是现有的提取技术多采用有机溶剂萃取的方法，该方法采用具有较大刺激性的有机溶剂，容易对皮肤和眼睛产生刺激，且溶剂不能被微藻生长所吸收。
发明内容
为了解决当前技术存在的问题，我们提供一种土壤提取液的制备方法。
本发明的具体技术方案如下：
一种土壤提取液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一 土壤采集：取适量花园或山间未施过肥的土壤，挑拣并扔掉颗粒较大的石头、树枝等杂物；
步骤二 土壤浸泡：按土壤：自来水＝1:1的比例，向容器中添加水和土壤，搅拌均匀后加入pH调节剂调节pH为6～8，获得混合液1；
步骤三 初次浸提：轻轻用棉花塞住容器口，加热混合液1至100℃，煮沸1～2h，静置冷却后取上清得到滤液1，剩下的混合液再加入其一半体积的自来水，得到混合液2；
步骤四 反复浸提：对混合液2重复步骤三，取上清倒入滤液1中，剩下的混合液再加入其三分之一体积的自来水，得到混合液3，对混合液3再重复步骤三，取上清倒入滤液1中，剩下的混合液即可丢弃；
步骤五 抽滤除菌：将获得的滤液1在无菌室中用0.22μm的滤膜过滤除菌后即可使用。
在步骤一中，采集的最好是树下或花丛下，距地面2cm以上的肥沃土壤。
在步骤二中，pH调节剂为1M的氢氧化钠或1M的醋酸。
本发明的有益效果是：
提供了一种简单有效的土壤提取液的制备方法，该方法没有使用刺激性有机溶剂，具有环保便宜、操作简单、设备要求低等优点，且该方法对土壤进行充分的浸提，最大限度地利用了资源。所制备成的土壤提取液用于微藻的培养，能显著提高微藻的生长速率，同时节省培养基成本。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述：
该实例为优选方案，具体包括以下步骤：
步骤一 土壤采集：取适量花园或山间未施过肥的土壤，挑拣并扔掉颗粒较大的石头、树枝等杂物；
步骤二 土壤浸泡：按土壤：自来水＝1:1的比例，向容器中添加水和土壤，搅拌均匀后加入pH调节剂调节pH为7，获得混合液1；
步骤三 初次浸提：轻轻用棉花塞住容器口，加热混合液1至100℃，煮沸1.5h，静置冷却后取上清得到滤液1，剩下的混合液再加入其一半体积的自来水，得到混合液2；
步骤四 反复浸提：对混合液2重复步骤三，取上清倒入滤液1中，剩下的混合液再加入其三分之一体积的自来水，得到混合液3，对混合液3再重复步骤三，取上清倒入滤液1中，剩下的混合液即可丢弃；
步骤五 抽滤除菌：将获得的滤液1在无菌室中用0.22μm的滤膜过滤除菌后即可使用。
在步骤一中，采集的最好是树下或花丛下，距地面2cm以上的肥沃土壤。
在步骤二中，pH调节剂为1M的氢氧化钠或1M的醋酸。
以不含微量元素溶液的f/2培养基为空白组，以按10mL/L的剂量加入土壤提取液得到的f/2培养基为实验组，以含有微量元素溶液的f/2培养基为对照组，分别接种等量的小球藻，同等条件下培养，测定其生长速率。实验结果表明，实验组和对照组小球藻的生长速率远高于空白组小球藻，说明微量元素在微藻生长过程中起着重要的作用。将实验组和对照组相比，实验组的小球藻生长速率略高于对照组小球藻，但是其培养基成本却大大降低。
上述仅为本发明的一个具体实施方式，显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种土壤提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一土壤采集：取适量花园或山间未施过肥的土壤，挑拣并扔掉颗粒较大的石头、树枝等杂物；
步骤二土壤浸泡：按土壤：自来水＝1:1的比例，向容器中添加水和土壤，搅拌均匀后加入pH调节剂调节pH为6～8，获得混合液1；
步骤三初次浸提：轻轻用棉花塞住容器口，加热混合液1至100℃，煮沸1～2h，静置冷却后取上清得到滤液1，剩下的混合液再加入其一半体积的自来水，得到混合液2；
步骤四反复浸提：对混合液2重复步骤三，取上清倒入滤液1中，剩下的混合液再加入其三分之一体积的自来水，得到混合液3，对混合液3再重复步骤三，取上清倒入滤液1中，剩下的混合液即可丢弃；
步骤五抽滤除菌：将获得的滤液1在无菌室中用0.22μm的滤膜过滤除菌后即可使用。
2.根据权利要求1所述土壤提取液的制备方法，其特征在于，在步骤一中，采集的最好是位于树下或花丛下，距地面2cm以上的肥沃土壤。
3.根据权利要求1所述土壤提取液的制备方法，其特征在于，在步骤二中，pH调节剂为1M的氢氧化钠或1M的醋酸。
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