CN106565706A - 一种磺酰胺衍生物及其在药学中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种磺酰胺衍生物以及包含所述化合物的药物组合物，以及该磺酰胺衍生物及其药物组合物作为制备药物的用途，特别是作为用于制备BCL‑2家族蛋白拮抗剂的药物的用途和用于治疗癌症的用途。

Description

一种磺酰胺衍生物及其在药学中的应用
发明领域
本发明属于药物领域，具体涉及一种磺酰胺衍生物、其药物组合物，及其作为制备药物的用途，特别是作为用于制备BCL-2家族蛋白拮抗剂的药物的用途和用于治疗癌症的用途。
背景技术
细胞凋亡(某些情况下又可称为细胞程序性死亡)是一种去除衰老细胞或异常细胞的正常死亡机制，该机制的紊乱与多种疾病的发生有直接的关系。研究表明在多种肿瘤细胞中凋亡机制被抑制，肿瘤细胞因而得以过度增生。
在与细胞凋亡有关的药物靶点中，Bcl2(B-cell lymphoma2)相关蛋白是研究较早的一类。该类蛋白可分为三个家族：Bcl-2家族，Bax家族和BH3-only家族。其中，Bcl-2家族成员包括：Bcl-2，Bcl-XL，Mcl-1，Bcl-w，等，起着抗细胞凋亡的作用，后两个家族的成员起着促细胞凋亡的作用。目前人们认为Bcl-2相关蛋白主要是在细胞凋亡的线粒体途径中发挥作用。其中经活化的Bax家族蛋白(Bax、Bak等)可以结合在线粒体膜上使得细胞色素C从线粒体中释放出来从而最终导致凋亡的发生；而Bcl-2、Bcl-xL等抗凋亡蛋白则能够与Bax和Bak相结合，使其不能发挥作用；另外，一些BH3-only家族成员(Bim,Bad,Bid,Bik等)又能够与Bcl-2家族成员相结合，抑制其抗凋亡作用。因此，Bcl-2相关蛋白之间的平衡与否对细胞凋亡起着至关重要的调控作用。使用有机小分子拮抗这些蛋白的功能有望恢复肿瘤细胞中的凋亡机制，从而达到消除肿瘤的目的(Huan,Z.Curr.Opin.DrugDiscov.Discov.Devel.2000,3,565-574；Cory,S.；Adams,J.M.Nat.Rcv,Cancor 2002,2,647-656).通过抑制肿瘤细胞中过度表达的抗细胞凋亡成员的抗凋亡作用，恢复其正常的凋亡通路及增加其对化疗放疗的敏感性是治疗肿瘤的新策略。Bcl-2家族蛋白的抑制剂已经报道于WO 2005049593和WO 2005049594。近十年来，针对抗凋亡蛋白的小分子抑制剂不断涌现，其中，venetoclax已经上市，有些已进入临床研究阶段，如AT-101、BCL-201。
本发明的目的在于提供能够选择性抑制Bcl-2蛋白家族抗细胞凋亡成员(如Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1等)，恢复肿瘤细胞正常的凋亡通路的化合物。
发明内容
本发明提供一种磺酰胺衍生物或其药物组合物，可以有效治疗与BCL-2家族蛋白拮抗剂相关的癌症。
本发明化合物优选地具有改善的药理学特性；更优选地具有更高的BCL2抑制活性和更好的选择性；和/或优选地具有以下优势和改善的特性，但不限于，药学特性(如溶解度、渗透性和对持续释放配方的适应性)、剂量需求(如较低的剂量和/或一天一次的剂量)、降低以峰谷表征的血液浓度的因素(如清除率和/或分布体积)、增加活性药物浓度的因素(如蛋白结合、分布体积)、降低临床药物间相互作用的倾向的因素(如细胞色素P450酶抑制或诱导)、降低不利副作用的可能性的因素(如丝氨酸蛋白酶之外的药理学选择性、可能的化学或代谢反应性、以及有限的CNS渗透性)和改善生产成本或者可行性的因素(如合成的难度、手性中心的数目、化学稳定性以及操作的简便性)。
一方面，本发明提供一种化合物，其为通式(I)化合物，或通式(I)化合物的立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
其中，
R1为6-12元亚螺环基或4-7元亚单杂环基，其中，6-12元亚螺环基或4-7元亚单杂环基各独立任选地被氢，氘，C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代；
M为共价键、-O-、-N(R3)-、-O-(CH2)n-O-、-P(＝O)(OH)-(CH2)n-、-(CH2)n-P(＝O)(OH)-、-C≡C-(CH2)n-O-、-O-(CH2)n-C≡C-，且当R1为4-7元亚单杂环基时，M为-P(＝O)(OH)-(CH2)n-、-(CH2)n-P(＝O)(OH)-、-C≡C-(CH2)n-O-或-O-(CH2)n-C≡C-；其中，-O-(CH2)n-O-、-P(＝O)(OH)-(CH2)n-、-(CH2)n-P(＝O)(OH)-、-C≡C-(CH2)n-O-和-O-(CH2)n-C≡C-各独立任选地被氢、氘、C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基或氨基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代；
R3为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基；其中，甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基各独立任选地被氢、氘、烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基或氨基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代；
各n独立地为1、2或3；和
R2为氢、4-7元杂环基或4-7元杂环基(C＝O)-，其中，4-7元杂环基和4-7元杂环基(C＝O)-各独立任选地被氢，氘，C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明提供的化合物，其中，
R1为如下子结构式：
以上R1的子结构式各独立任选地被氢，氘，甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明提供的化合物，其中，R2为H、四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基(C＝O)-、吗啉基(C＝O)-、哌啶基(C＝O)-、四氢呋喃基(C＝O)-、吡咯烷基(C＝O)-，其中，四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基(C＝O)-、吗啉基(C＝O)-、哌啶基(C＝O)-、四氢呋喃基(C＝O)-、吡咯烷基(C＝O)-各独立任选地被氢，氘，C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代。
在一些实施方案中，本发明提供的化合物为通式(II-1)化合物，或其立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
其中，
M1为共价键、-NH-或-O-；
M2为共价键或-C(＝O)-；
Q1为CH或N；
Q2为-O-或-NH-；
R4为H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基；和
p、q和q’各自独立为0、1或2。
在一些实施方案中，本发明提供的化合物为通式(II-2)化合物，或其立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
其中，M1、Q1、M2、p、q和R4具有本发明所述的定义。
在一些实施方案中，本发明提供的化合物为通式(II-3)化合物，或其立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
其中，
M3为共价键、-O-或-O(CH2)nO-；
n独立地为1、2或3；
r为0、1、2或3；
t为0、1或2；和
s为1或2。
在一些实施方案中，本发明提供的化合物具有如下其中之一的结构：
或所述结构的立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，包含本发明所述的化合物，及其药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明提供本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物在制备用于预防或治疗癌症的药物中的用途。
本发明包含本发明化合物及其药学上可接受的盐的应用，用于生产医药产品治疗患者与BCL-2家族蛋白拮抗剂有关的疾病，包括那些本发明所描述的疾病。本发明包含药物组合物，该药物组合物包括式(I)所代表的化合物与至少一种药学上可接受的赋形剂结合所需的有效治疗量。
本发明同样包含治疗或减轻癌症性疾病，或对此病症敏感的方法，该方法包含使用式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)所代表化合物的治疗有效量对患者进行治疗。
本发明所癌症为膀胱癌、脑癌、乳腺癌、骨髓癌、宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病、结肠直肠癌、食道癌、肝细胞癌、原始淋巴细胞性(lymphoblastic)白血病、滤泡性淋巴瘤，T细胞或B细胞源的淋巴恶性肿瘤、黑素瘤、粒细胞性白血病、骨髓瘤、口腔癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌或脾癌。
除非其他方面表明，本发明的化合物所有的立体异构体，几何异构体，互变异构体，氮氧化物，水合物，溶剂化物，代谢产物，盐和药学上可接受的前药都属于本发明的范围。
具体地说，盐是药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”包括物质或组合物必须是适合化学或毒理学地，与组成制剂的其他组分和用于治疗的哺乳动物有关。
本发明的化合物的盐还包括用于制备或纯化式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)所示化合物的中间体或式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)所示化合物分离的对映异构体的盐，但不一定是药学上可接受的盐。
如果本发明的化合物是碱性的，则想得到的盐可以通过文献上提供的任何合适的方法制备得到，例如，使用无机酸，如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸和磷酸等等。或者使用有机酸，如乙酸，马来酸，琥珀酸，扁桃酸，富马酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，羟乙酸和水杨酸；吡喃糖酸，如葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸；α-羟酸，如柠檬酸和酒石酸；氨基酸，如天门冬氨酸和谷氨酸；芳香族酸，如苯甲酸和肉桂酸；磺酸，如对甲苯磺酸，乙磺酸，等等。
如果本发明的化合物是酸性的，则想得到的盐可以通过合适的方法制备得到，如，使用无机碱或有机碱，如氨(伯氨，仲氨，叔氨)，碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，等等。合适的盐包括，但并不限于，从氨基酸得到的有机盐，如甘氨酸和精氨酸，氨，如伯氨、仲氨和叔氨，和环状氨，如哌啶，吗啉和哌嗪等，和从钠，钙，钾，镁，锰，铁，铜，锌，铝和锂得到无机盐。
另一方面，本发明涉及式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)所示的化合物的制备、分离和纯化的方法。
前面所述内容只概述了本发明的某些方面，但并不限于这些方面。这些方面及其他方面的内容将在下面作更加具体完整的描述。
具体实施方式
定义和一般术语
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。
除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。
除非另外说明，应当应用本文所使用的下列定义。出于本发明的目的，化学元素与元素周期表CAS版，和《化学和物理手册》，第75版，1994一致。此外，有机化学一般原理可参考“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999,和“March's Advanced Organic Chemistry”by Michael B.Smith and Jerry March,JohnWiley&Sons,New York:2007中的描述，其全部内容通过引用并入本文。
本发明所使用的术语“患者”是指人(包括成人和儿童)或者其他动物。在一些实施方案中，“患者”是指人。
术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。
本发明所使用的立体化学定义和规则一般遵循：S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；andEliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994.本发明的化合物可以包含不对称中心或手性中心，因此存在不同的立体异构体。本发明的化合物所有的立体异构形式，包括但绝不限于，非对映体，对映异构体，阻转异构体，和它们的混合物，如外消旋混合物，组成了本发明的一部分。很多有机化合物都以光学活性形式存在，即它们有能力旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀D、L或R、S用来表示分子手性中心的绝对构型。前缀d、l或(+)、(-)用来命名化合物平面偏振光旋转的符号，(-)或l是指化合物是左旋的，前缀(+)或d是指化合物是右旋的。这些立体异构体的化学结构是相同的，但是它们的立体结构不一样。特定的立体异构体可以是对映体，异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。50:50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，这可能导致化学反应过程中没有立体选择性或立体定向性。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指等摩尔的两个对映异构体的混合物，缺乏光学活性。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情形可以但不一定出现，并且该描述包括其中所述事件或情形出现的情况以及其中它不出现的情况。例如，“任选的键”是指该键可以存在或可以不存在，并且该描述包括单键、双键或三键。
术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
术语“不饱和”或“不饱和的”表示部分含有一个或多个不饱和度。
像本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子、子类和本发明所包含的一类化合物。应了解“任选取代的”这个术语与“取代或未取代的”这个术语可以交换使用。一般而言，术语“取代”或“取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。其中所述的取代基可以是，但并不限于，氢、氘、烷基、烷氧基、氟、氯、溴、羟基、羧基、氰基或氨基，等。
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“各…独立地为”与“…各自独立地为”和“…独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
在本发明的各部分，描述了连接取代基。当该结构清楚地需要连接基团时，针对该基团所列举的马库什变量应理解为连接基团。例如，如果该结构需要连接基团并且针对该变量的马库什基团定义列举了“烷基”或“芳基”，则应该理解，该“烷基”或“芳基”分别代表连接的亚烷基基团或亚芳基基团。
除非本发明另有定义，对于在本发明描述的任意取代基或化合物或任意通式结构中出现超过一次的任意变量，它每次出现时的定义与它在其他任何地方出现的定义是相互独立的，互不影响。此外，取代基和/或变量的组合仅在此类组合形成稳定化合物时是容许的。稳定的化合物是从反应混合物中能够分离得到的具有一定有用纯度的化合物。
本发明使用的术语“烷基”或“烷基基团”，表示含有1至20个碳原子，饱和的直链或支链一价烃基基团，其中，所述烷基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。在一些实施方案中，烷基基团含有1-12个碳原子；在另一实施方案中，烷基基团含有1-6个碳原子；在又一实施方案中，烷基基团含有1-4个碳原子；在又一实施方案中，烷基基团含有1-3个碳原子。烷基基团的实例包含，但并不限于，甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、正丙基(n-Pr、-CH2CH2CH3)、异丙基(i-Pr、-CH(CH3)2)、正丁基(n-Bu、-CH2CH2CH2CH3)、异丁基(i-Bu、-CH2CH(CH3)2)、仲丁基(s-Bu、-CH(CH3)CH2CH3)、叔丁基(t-Bu、-C(CH3)3)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、正庚基、正辛基，等等。
术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另外详细说明，所述烷氧基基团含有1-12个碳原子。在一实施方案中，烷氧基基团含有1-6个碳原子；在另一实施方案中，烷氧基基团含有1-4个碳原子；在又一实施方案中，烷氧基基团含有1-3个碳原子。烷氧基基团的实例包括，但并不限于，甲氧基(MeO、-OCH3)，乙氧基(EtO、-OCH2CH3)，1-丙氧基(n-PrO、n-丙氧基、-OCH2CH2CH3)，2-丙氧基(i-PrO、i-丙氧基、-OCH(CH3)2)，1-丁氧基(n-BuO、n-丁氧基、-OCH2CH2CH2CH3)，2-甲基-l-丙氧基(i-BuO、i-丁氧基、-OCH2CH(CH3)2)，2-丁氧基(s-BuO、s-丁氧基、-OCH(CH3)CH2CH3)，2-甲基-2-丙氧基(t-BuO、t-丁氧基、-OC(CH3)3)，1-戊氧基(n-戊氧基、-OCH2CH2CH2CH2CH3)，2-戊氧基(-OCH(CH3)CH2CH2CH3)，3-戊氧基(-OCH(CH2CH3)2)，2-甲基-2-丁氧基(-OC(CH3)2CH2CH3)，3-甲基-2-丁氧基(-OCH(CH3)CH(CH3)2)，3-甲基-l-丁氧基(-OCH2CH2CH(CH3)2)，2-甲基-l-丁氧基(-OCH2CH(CH3)CH2CH3)，等等。
术语“螺环基”，“螺环”，“螺双环基”，“螺双环”表示一个环起源于另一个环上特殊的环状碳。例如，像下面式y所描述的，一个饱和的桥环体系(环B和B')被称为“稠合双环”，反之环A’和环B在两个饱和的环体系中共享一个碳原子，则被称为“螺环”。螺环里面的每一个环要么是碳环要么是杂脂环族，且环碳原子可以被氧化形成-C(＝O)-，视结构而定，“螺环基”，“螺环”，“螺双环基”，“螺双环”可为单价基团或二价基团，即在本发明的某些实施例中，可以替代或做为亚螺双环基使用。“螺环基”，“螺环”，“螺双环基”或“螺双环”体系可以在任何环杂原子或者环碳原子上连接到主结构上从而形成稳定的化合物。在一些实施方案中，螺环基为6-12元的螺环基。这样的实例包括，但并不限于，螺[2.4]庚烷-5-基，螺[4.4]壬烷基，4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷基,2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基,2-氮杂螺[3.3]庚烷基,螺[3.3]庚烷基,螺[3.4]辛烷基,2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷基,3-氮杂螺[5.5]十一烷基,3,9-二氮杂螺[5.5]十一辛烷基,4-氧杂螺[2.4]庚烷基,7-氧杂螺[4.5]癸烷基,2-氧杂螺[4.5]癸烷基,8-氮杂螺[4.5]癸烷基,2-氮杂螺[4.4]壬烷基等。
术语“亚螺环基”为“螺环”的二价基团，即从螺环化合物上去掉两个H原子形成的二价螺环基团，螺环里面的每一个环要么是碳环要么是杂脂环族，且环碳原子可以被氧化形成-C(＝O)-，其中“螺环”具有本发明所述的定义。“亚螺环基”体系可以在任何环杂原子或者环碳原子上连接到主结构上从而形成稳定的化合物。在一些实施方案中，亚螺环基为6-12元的螺环基。这样的实例包括，但并不限于，螺[4.4]亚壬烷基，4,7-二氮杂螺[2.5]亚辛烷基,2,6-二氮杂螺[3.3]亚庚烷基,2-氮杂螺[3.3]亚庚烷基,螺[3.3]亚庚烷基,螺[3.4]亚辛烷基,2,6-二氮杂螺[3.4]亚辛烷基,3-氮杂螺[5.5]亚十一烷基,3,9-二氮杂螺[5.5]亚十一辛烷基,4-氧杂螺[2.4]亚庚烷基,7-氧杂螺[4.5]亚癸烷基,2-氧杂螺[4.5]亚癸烷基,8-氮杂螺[4.5]亚癸烷基,2-氮杂螺[4.4]亚壬烷基等。亚螺环基基团可以独立任选地被本发明所述的取代基所取代。
术语“杂环基”和“杂环”在此处可交换使用，都是指包含3-12个环原子的饱和或部分不饱和的的单环、双环或三环，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子，环可以是完全饱和的或包含一个或多个不饱和度，但绝不是芳香族类。除非另外说明，杂环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。视结构而定，“杂环基”，“杂环”，“杂脂环族”可为单价基团或二价基团，即在本发明的某些实施例中，可以替代或做为亚杂环基使用。杂环体系可以在任何环杂原子或者环碳原子上连接到主结构上从而形成稳定的化合物。一个或多个环上的氢原子独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物。环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。其中一些实施例是，杂环基为3-8元的杂环基；另外一些实施例是，杂环基为4-7元的杂环基。杂环基的实例包括，但不限于，四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、四氢呋喃基、吡咯烷基、N-哌啶基、哌啶-4-基、哌嗪-4-基、N-吡咯烷基、吡咯烷-3-基、吡咯烷-2-基、四氢呋喃基、恶唑烷基、环氧乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、1,3-二氧环戊基、二硫环戊基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二噁烷基、二噻烷基、噻噁烷基、高哌嗪基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂基、二氮杂基、硫氮杂基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、1,3-苯并二噁茂基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基。杂环基中-CH2-基团被-C(O)-取代的实例包括，但不限于，2-氧代吡咯烷基、3-氧代-吗啉-4-基、氧代-1,3-噻唑烷基、2-哌啶酮基、3,5-二氧代哌啶基和嘧啶二酮基。杂环基中硫原子被氧化的实例包括，但不限于，环丁砜基、1,1-二氧代硫代吗啉基。杂环基基团可以独立任选地被本发明所述的取代基所取代。
术语“杂单环基”和“杂单环”在此处可交换使用，都是指包含3-7个环原子的饱和或部分不饱和的的单环，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子，环可以是完全饱和的或包含一个或多个不饱和度，但绝不是芳香族类。除非另外说明，杂单环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被-C(O)-替代。视结构而定，“单杂环基”或“单杂环”可为单价基团或二价基团，即在本发明的某些实施例中，可以替代或做为亚单杂环基使用。杂单环体系可以在任何环杂原子或者环碳原子上连接到主结构上从而形成稳定的化合物。环上的氢原子独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物。环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。其中一些实施例是，杂单环基为3-7元的杂环基；另外一些实施例是，杂单环基为4-7元的杂环基。杂单环基的实例包括，但不限于，四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、四氢呋喃基、吡咯烷基、N-哌啶基、哌啶-4-基、哌嗪-4-基、N-吡咯烷基、吡咯烷-3-基、吡咯烷-2-基、四氢呋喃基、恶唑烷基、环氧乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、1,3-二氧环戊基、二硫环戊基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二噁烷基、二噻烷基、噻噁烷基、高哌嗪基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂基、二氮杂基、硫氮杂基、吲哚啉基，等等。
术语“亚杂单环基”为“杂单环”的二价基团，即从杂单环化合物上去掉两个H原子形成的二价杂单环基团，杂环体系可以在任何环杂原子或者环碳原子上连接到主结构上从而形成稳定的化合物。环上的氢原子独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物。环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。其中一些实施例是，亚杂单环基为3-7元的杂环基；另外一些实施例是，亚杂单环基为4-7元的杂环基。亚杂环基的实例包括，但不限于，亚四氢吡喃基(四氢吡喃-2,4-二基、四氢吡喃-3,4-二基、四氢吡喃-2,3-二基、四氢吡喃-2,5-二基、四氢吡喃-2,6-二基、四氢吡喃-3,5-二基、四氢吡喃-3,6-二基)、亚吗啉基、亚哌啶基、亚四氢呋喃基、亚吡咯烷基、亚哌啶基(哌啶-1,4-二基、哌啶-1,2-二基、哌啶-1,3-二基、哌啶-2,4-二基、哌啶-2,3-二基、哌啶-2,6-二基、哌啶-2,5-二基、哌啶-3,5-二基、哌啶-3,6-二基)、亚四氢呋喃基、亚恶唑烷基、亚环氧乙烷基、亚氮杂环丁基、亚氧杂环丁基、亚硫杂环丁基，等等。亚杂单环基基团可以独立任选地被本发明所述的取代基所取代。
像本发明所描述的，环C上有两个连接点可与分子其余部分相连，例如，如式j所示，表示既可以是E”端也可以是E’端与分子的其余部分相连，即两端的连接方式可以互换。
如本发明所描述，附着点可以在环上任何可连接的位置与分子其余部分连接。例如，式k代表D环或B环上任何可能被连接的位置均可作为连接的点。
如本发明所描述的，除非另外详细说明，环取代基可以在环上任何可连接的位置与分子其余部分相连。例如，哌啶基包含哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基；哌嗪基包含哌嗪-1-基、哌嗪-2-基、哌嗪-3-基、哌嗪-4-基；吡咯烷基包含吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基；吗啉基包含吗啉-2基、吗啉-3基；四氢吡喃基包含四氢吡喃-2基、四氢吡喃-3-基、四氢吡喃-4-基；亚四氢吡喃基包含四氢吡喃-2,4-二基、四氢吡喃-3,4-二基、四氢吡喃-2,3-二基、四氢吡喃-2,5-二基、四氢吡喃-2,6-二基、四氢吡喃-3,5-二基、四氢吡喃-3,6-二基；2-氮杂螺[3.3]亚庚烷基包含2-氮杂螺[3.3]亚庚烷-2,6-二基、2-氮杂螺[3.3]亚庚烷-2,5-二基、2-氮杂螺[3.3]亚庚烷-1,2-二基、2-氮杂螺[3.3]亚庚烷-1,3-二基、2-氮杂螺[3.3]亚庚烷-1,5-二基、2-氮杂螺[3.3]亚庚烷-1,6-二基；等等。
术语“杂环基(C＝O)-”表示杂环基与羰基(-(C＝O)-)相连的情况，即杂环化合物被一个羰基取代所得到的基团。其中“杂环基”具有本发明所述的定义。在一些实施方案中，“杂环基(C＝O)-”为“4-7元杂环基(C＝O)-”，具体的实施例包括但不限于四氢吡喃基(C＝O)-、吗啉基(C＝O)-、哌啶基(C＝O)-、四氢呋喃基(C＝O)-、吡咯烷基(C＝O)-，等。
术语“共价键”为“-”，即表示一个单键。
术语“羟基”表示“-OH”。
术语“氨基”表示“-NH2”。
术语“氰基”表示“-CN”。
术语“羧基”表示“-COOH”。
本发明化合物的各种药学上可接受的盐形式都是有用的。术语“药学上可接受的盐”是指那些盐形式对于制药化学家而言是显而易见的，即它们基本上无毒并能提供所需的药代动力学性质、适口性、吸收、分布、代谢或排泄。其他因素，在性质上更加实用，对于选择也很重要，这些是：原材料的成本、结晶的容易、产率、稳定性、吸湿性和结果原料药的流动性。简单地讲，药物组合物可以通过有效成分与药学上可接受的载体制备得到。
本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Berge et al.,describepharmaceutically acceptable salts in detail in J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19,1977.所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐有盐酸盐，氢溴酸盐，磷酸盐，硫酸盐，高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐，草酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐，2-羟基丙酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，重硫酸盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，反丁烯二酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，葡萄糖酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢碘酸盐，2-羟基-乙磺酸盐，乳糖醛酸盐，乳酸盐，月桂酸盐，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，特戊酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一酸盐，戊酸盐，等等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属，碱土金属，铵和N+(C1-4烷基)4的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠，锂，钾，钙，镁，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。胺盐，例如但不限于N,N’-二苄基乙二胺，氯普鲁卡因，胆碱，氨，二乙醇胺和其它羟烷基胺，乙二胺，N-甲基还原葡糖胺，普鲁卡因，N-苄基苯乙胺，1-对-氯苄基-2-吡咯烷-1’-基甲基-苯并咪唑，二乙胺和其它烷基胺，哌嗪和三(羟甲基)氨基甲烷；碱土金属盐，例如但不限于钡，钙和镁；过渡金属盐，例如但不限于锌。
另外，本发明公开的化合物、包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它们的结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂化物；因此，本发明旨在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。
本发明给出的任何结构式也意欲表示这些化合物未被同位素富集的形式以及同位素富集的形式。同位素富集的化合物具有本发明给出的通式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换。可引入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，如2H，3H，11C，13C，14C，15N，17O，18O，18F，31P，32P，35S，36Cl和125I。
在本说明书中，如果在化学名称和化学结构间存在任何差异，结构是占优的。
本发明所使用的任何缩写，除非另有说明，都以它们通常使用的、公认的缩写为准，或参照IUPAC-IUB Jiont Commission on Biochemical Nomenclature(参见Biochem.1972，11：942-944)。
如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。
术语“防止”或“预防”指获病或障碍的风险的减少(即：使疾病的至少一种临床症状在主体内停止发展，该主体可能面对或预先倾向面对这种疾病，但还没有经历或表现出疾病的症状)。
药物组合物、组合疗法、制剂和给药
根据另一方面，本发明的药物组合物的特点包括式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)所示的化合物，本发明所列出的化合物，或实施例化合物，和药学上可接受的赋形剂。本发明的组合物中化合物的量能有效地治疗或减轻患者的Bcl2蛋白相关的疾病。
像本发明所描述的，本发明药学上可接受的组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂，这些像本发明所应用的，包括任何溶剂，稀释剂，或其他液体赋形剂，分散剂或悬浮剂，表面活性剂，等渗剂，增稠剂，乳化剂，防腐剂，固体粘合剂或润滑剂，等等，适合于特有的目标剂型。如以下文献所描述的：In Remington:The Science and Practice ofPharmacy,21st edition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrickand J.C.Boylan,1988-1999,Marcel Dekker,New York,综合此处文献的内容，表明不同的赋形剂可应用于药学上可接受的组合物的制剂和它们公知的制备方法。除了任何常规的赋形剂与本发明的化合物不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本发明所考虑的范围。
本发明的化合物或其药物组合物还可用于制备治疗下列疾病的药物：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、骨髓癌、宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病、结肠直肠癌、食道癌、肝细胞癌、原始淋巴细胞性(lymphoblastic)白血病、滤泡性淋巴瘤，T细胞或B细胞源的淋巴恶性肿瘤、黑素瘤、粒细胞性白血病、骨髓瘤、口腔癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌或脾癌，等。
另一个实施方案涉及治疗疾病的组合物，在该疾病期间，抗凋亡Bcl-2蛋白被表达，所述组合物包含赋形剂和治疗有效量的具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)的化合物和治疗有效量的一种或多种额外治疗剂。
可以给予具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)的化合物或其药物组合物，例如，经颊、眼部、口服、渗透、胃肠外(肌肉内，腹膜内，胸骨内，静脉内，皮下)、直肠、局部、透皮或阴道给予。
本发明所述的“有效量”或“有效剂量”是指：对于治疗或者减轻一种或多种前述的紊乱有效的量。根据本发明公开的化合物或者组合物，可以使用任何有效的数量和任何有效的给药途径治疗治疗或者减轻紊乱或者疾病的严重性。所需的确切量将根据不同的主题而不同，根据物种、年龄和主题的一般情况、感染的严重程度、特殊制剂、给药方式等。化合物或组合物还可以与一种或多种其他药物一起给予，如上所述。
具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)的化合物的治疗有效量取决于所治疗的接受者、所治疗的病症和其严重程度、含有化合物的组合物、给药时间、给药途径、治疗持续期间、化合物效能、其清除率和是否共同给予另一种药物。用于制备以单剂量或分开剂量形式每日给对象施用的组合物的具有式(I)的本发明化合物的量是大约0.0001至大约1000mg/kg体重，或者大约0.01至大约500mg/kg体重，或者大约0.1至大约300mg/kg体重。单剂量组合物含有这些数量或其次多剂量的组合。
可以调节剂量方案以提供最佳期望响应(例如治疗或预防响应)。例如，可以给予单次剂量(bolus),可以经时间给予几次分开的剂量或按照治疗位置障碍表示的成比例地降低或升高剂量。特别有利的是为了容易给药和剂量均匀而配制剂量单元形式的肠胃外组合物。本文使用的剂量单元形式是指适合作为单一剂量用于待治疗的哺乳动物对象的物理离散单元；含有计算以产生需要的治疗效果的预定量的活性化合物与需要的药物载体一起的每个单元。通过并直接根据如下执行本发明的剂量单元形式的说明书(a)活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗或预防效果，和(b)配混用于治疗个体的敏感性的此类活性化合物的领域中固有的限制。
具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)的化合物可以在有或者没有赋形剂的条件下给予。赋形剂包括，例如，封入胶囊的物质或添加剂，例如吸收促进剂，抗氧化剂，粘合剂，缓冲剂，包覆剂，着色剂，稀释剂，崩解剂，乳化剂，膨胀剂，填料，调味剂，保湿剂，润滑剂，香料，防腐剂，推进剂，防粘剂，杀菌剂，甜味剂，增溶剂，湿润剂和其混合物。
制备包含具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)化合物的以固体剂型口服给予的组合物的赋形剂包括，例如，琼脂，海藻酸，氢氧化铝，苯甲醇，苯甲酸苄酯，1,3-丁二醇，卡波姆，蓖麻油，纤维素，醋酸纤维素，可可脂，玉米淀粉，玉米油，棉籽油，交联聚维酮，甘油二酯，乙醇，乙基纤维素，月桂酸乙酯，油酸乙酯，脂肪酸酯，明胶，胚芽油，葡萄糖，甘油，花生油，羟基丙基甲基纤维素，异丙醇，等渗盐水，乳糖，氢氧化镁，硬脂酸镁，麦芽，甘露糖醇，甘油一酯，橄榄油，花生油，磷酸钾盐，马铃薯淀粉，聚维酮，丙二醇，林格溶液，红花油，芝麻油，羧甲基纤维素钠，磷酸钠盐，月桂基磺酸钠，山梨糖醇钠，大豆油，硬脂酸，十八烷基富马酸盐，蔗糖，表面活性剂，滑石粉，黄芪胶，四氢糠醇，甘油三酯，水和其混合物。制备包含具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)的本发明化合物的、以液体剂型通过眼部或口服给予的组合物的赋形剂包括，例如，1,3-丁二醇，蓖麻油，玉米油，棉籽油，乙醇，脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，胚芽油，花生油，甘油，异丙醇，橄榄油，聚乙二醇类，丙二醇，芝麻油，水和其混合物。制备包含具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)的本发明化合物的、以渗透形式给药的组合物的赋形剂包括，例如，氯氟代烃，乙醇，水和其混合物。制备包含具有式(I)的本发明化合物的、胃肠外给药的组合物的赋形剂包括，例如，1,3-丁二醇，蓖麻油，玉米油，棉籽油，右旋糖，胚芽油，花生油，脂质体，油酸，橄榄油，花生油，林格溶液，红花油，芝麻油，大豆油，U.S.P.或等渗氯化钠溶液，水和其混合物。制备包含具有式(I)的本发明化合物的、以直肠或阴道形式给药的组合物的赋形剂包括，例如，可可脂，聚乙二醇，蜡和其混合物。
本发明的化合物可以单独或者，如需要，与其它的活性化合物结合使用。当与下列一起使用时，认为具有式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)的化合物是有效的：烷基化剂，血管生成抑制剂，抗体，代谢拮抗剂，抗有丝分裂剂，抗增殖剂，抗病毒剂，极光激酶抑制剂，其它细胞程序死亡促进剂(例如，Bcl-xL，Bcl-w和Bfl-1)抑制剂，死亡受体途径的活化剂，Bcr-Abl激酶抑制剂，BiTE(Bi特异性T细胞接合器(Engager))抗体，抗体药物共轭物，生物反应改性剂，依赖细胞周期蛋白的激酶抑制剂，细胞周期抑制剂，环加氧酶-2抑制剂，DVDs，白血病病毒癌基因同系物(ErbB2)受体抑制剂，生长因子抑制剂，热休克蛋白(HSP)-90抑制剂，组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂，激素疗法，免疫，细胞程序死亡蛋白的抑制剂(IAPs)，插入抗生素，激酶抑制剂，驱动蛋白抑制剂，Jak2抑制剂，雷帕霉素抑制剂的温血动物靶向，微小RNA，分裂素-活化的胞外信号调节激酶抑制剂，多价结合蛋白，非甾体抗炎症的药物(NSAIDs)，聚ADP(腺苷二磷酸)-核糖聚合酶(PARP)抑制剂，铂化学治疗，polo样激酶(Plk)抑制剂，磷酸肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂，蛋白体抑制剂，嘌呤类似物，嘧啶类似物，受体酪氨酸激酶抑制剂，酒石酸麦角胺生物碱(etinoids)/三棱(deltoids)植物生物碱，小的抑制性核醣核酸(siRNAs)，局部异构酶抑制剂，泛素连接酶抑制剂，等，和一或多种这些药剂的组合。
在一些实施方案中，还提供联合疗法，其治疗或预防与癌症和癌症相关的疾病的症状、或与癌症和癌症相关的疾病的并发症，该疗法包括向有此种需要的个体给予一种本发明所公开的化合物或组合物、或其药学上可接受的衍生物，和一或多种其它活性药物。
预期由于本发明化合物结合至Bcl-2，它们还会用作与对Bcl-2具有紧密结构同源性的抗细胞凋亡蛋白，例如抗细胞凋亡Bcl-XL,Bcl-w,Mcl-1和Bf1-1/Al蛋白的结合剂。
本发明化合物的一般合成方法
一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式(I)、(II-1)、(II-2)或(II-3)或所示。下面的反应方案和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。
所属领域的技术人员将认识到：本发明所描述的化学反应可以用来合适地制备许多本发明的其他化合物，且用于制备本发明的化合物的其它方法都被认为是在本发明的范围之内。例如，根据本发明那些非例证的化合物的合成可以成功地被所属领域的技术人员通过修饰方法完成，如适当的保护干扰基团，通过利用其他已知的试剂除了本发明所描述的，或将反应条件做一些常规的修改。另外，本发明所公开的反应或已知的反应条件也公认地适用于本发明其他化合物的制备。
下面所描述的实施例，除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。试剂购买于商品供应商如凌凯医药，Aldrich Chemical Company,Inc.,Arco Chemical Company和AlfaChemical Company，使用时都没有经过进一步纯化，除非其他方面表明。一般的试剂从汕头西陇化工厂，广东光华化学试剂厂，广州化学试剂厂，天津好寓宇化学品有限公司，青岛腾龙化学试剂有限公司，和青岛海洋化工厂购买得到。
以下反应一般是在氮气或氩气正压下或在无水溶剂上套一干燥管(除非其他方面表明)，反应瓶都塞上合适的橡皮塞，底物通过注射器打入。玻璃器皿都是干燥过的。
实施例中无特殊说明，反应温度为室温；室温为最适应的反应温度，为20℃-30℃。
色谱柱是使用硅胶柱。硅胶(300-400目)购于青岛海洋化工厂。核磁共振光谱以CDC13或DMSO-d6为溶剂(报导以ppm为单位)，用TMS(0ppm)或氯仿(7.25ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰)，d(doublet，双峰)，t(triplet，三重峰)，q(quartet，三重峰)，m(multiplet，多重峰)，br(broadened，宽峰)，dd(doublet of doublets，双二重峰)，dt(doublet of triplets，双三重峰)。偶合常数，用赫兹(Hz)表示。
低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1312A二元泵和G1316A TCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6320系列LC-MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315B DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC-MS光谱仪。
低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1311A四元泵和G1316A TCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6120系列LC-MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315D DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC-MS光谱仪。
以上两种光谱仪都配备了Agilent Zorbax SB-C18柱，规格为2.1×30mm，5μm。注射体积是通过样品浓度来确定；流速为0.6mL/min；HPLC的峰值是通过在210nm和254nm处的UV-Vis波长来记录读取的。流动相为0.1％的甲酸乙腈溶液(相A)和0.1％的甲酸超纯水溶液(相B)。梯度洗脱条件如表1所示：
表1
时间(min) A(CH3CN，0.1％HCOOH) B(H2O，0.1％HCOOH)
0-3 5-100 95-0
3-6 100 0
6-6.1 100-5 0-95
6.1-8 5 95
化合物纯化是通过Agilent 1100系列高效液相色谱(HPLC)来评价的，其中UV检测在210nm和254nm处，Zorbax SB-C18柱，规格为2.1×30mm，4μm，10分钟，流速为0.6mL/min，5-95％的(0.1％甲酸乙腈溶液)的(0.1％甲酸水溶液)，柱温保持在40℃。
下面简写词的使用贯穿本发明：
PPTS：对甲苯磺酸吡啶鎓
EDCI：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
DMAP,4-DMAP：4-N,N-二甲氨基吡啶
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2：1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物
CH3COONa：乙酸钠
PdCl2(PPh3)2：双(三苯基膦)二氯化钯(II)
Na2SO4：硫酸钠
HCl aq.：盐酸水溶液
HCl：盐酸
THF：四氢呋喃
Boc,t-Boc：叔丁氧羰基
PE：石油醚
EA,EtOAc：乙酸乙酯
DCM：二氯甲烷
MeOH：甲醇
Pd/C：钯/碳
min：分钟
eq：当量
g：克
mg：毫克
mmol：毫摩尔
DMSO：二甲亚砜
mL：毫升
℃,℃：摄氏度
TLC：薄层色谱法
下列合成方案描述了制备本发明公开化合物的步骤。
合成方案1：
式(I)化合物可以由合成方案4的描述得到，其中M、R1、R2具有本发明所述的定义。式(I-1)化合物与式(I-5)化合物在DMAP和EDCI的作用下，在适当的溶剂(例如二氯甲烷)中发生缩合反应得到式(I)化合物。
合成方案2：
当R2为氢，且当R1中含有环N原子，同时Boc基团可以保护该N原子时，式(I)化合物可以由合成方案2的描述得到，其中M具有本发明所述的定义。式(I-1)化合物与式(I-2)化合物在DMAP和EDCI的作用下，在适当的溶剂(例如二氯甲烷)中发生缩合反应得到式(I-3)化合物；式(I-3)化合物在酸性条件下(例如三氟乙酸)脱Boc基团得到式(I)化合物。
合成方案3：
当R2为杂环基，且R1中的一个环N原子连接R2时，式(I)化合物可以由合成方案3的描述得到，其中M具有本发明所述的定义。式(I-4)化合物与R2’化合物(R2’化合物为R2H被一个氧代取代后的产物)在乙酸钠和三乙酰基硼氢化钠作用下，在合适的溶剂(例如二氯甲烷和甲醇的混合溶剂)中得到式(I)化合物。
合成方案4：
当R2为4-7元杂环基(C＝O)-，且R1中的一个环N原子连接R2时，式(I)化合物可以由合成方案4的描述得到，其中M具有本发明所述的定义，X为氯、溴。式(I-4)化合物与R2-X化合物在碱(如三乙胺)作用下，在合适的溶剂(例如二氯甲烷)中得到式(I)化合物。
合成方案5：
且当R1为4-7元亚单杂环基时，M为-O-(CH2)n-C≡C-(该基团在式(I)中右边连接苯环，左边连接R1)时，式(I)化合物可以由合成方案5的描述得到，其中n、R2具有本发明所述的定义。式(I-1)化合物与式(I-6)化合物在DMAP和EDCI的作用下，在适当的溶剂(例如二氯甲烷)中发生缩合反应得到式(I-7)化合物；式(I-7)化合物与化合物R2-R1-M-H在双(三苯基膦)二氯化钯(II)，碘化亚铜和三乙胺的作用下，在合适的溶剂(例如DMF)中发生缩合反应得到式(I)化合物。
以下结合实施例对本发明提供的化合物、药物组合物及其应用进行进一步说明。
实施例
实施例1：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺
步骤1：叔丁基-3-甲基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将氢化钠(2.0g,50.0mmol,1.9eq)加入到55mL THF中，再分批加入甲基三苯基溴化磷(16.0g,44.8mmol,1.7eq)，升温到50℃反应，5min内溶液变成黄色，反应2h。再滴加1-Boc-3-亚甲基氮杂环丁烷(4.5g,26.0mmol,1.0eq)的5mL THF溶液。滴加时，溶液黄色慢慢退去，退去时停止滴加，一会儿又变成深黄色，再继续滴加，滴加时间2.5h。滴完再反应2小时。冷却后倒入50mL水中，DCM(30mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析，PE/EA(v/v)＝15/1作为洗脱剂，得无色液体产品3.28g，产率73.2％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):5.04–4.97(m,2H),4.50(t,J＝2.4Hz,4H),1.47(s,9H).
步骤2：叔丁基-5,5-二氯-6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
将叔丁基-3-甲基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.0g,12.0mmol,1eq)加入到新处理的1,4-二氧六环(25mL)中，再加入活化的锌粉(1.5g,26.8mmol,2.3eq)，氮气保护下，水浴(25℃)缓慢滴加三氯乙酰氯(3.2g,17.6mmol,1.5eq)。滴加时，溶液慢慢变淡黄色，滴加2h。一定要慢，严格控制温度不超过30℃。再过夜反应。核磁送样，反应一半，直接处理，滤出锌粉，滤液倒入水(30mL)中，EA(30mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，得橙红色液体混合产品3.5g。核磁检测，产品氢比例49.6％，旋干直接用于下一步反应，收率为核磁收率。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.47(d,J＝9.8Hz,2H),3.96(d,J＝9.7Hz,2H),3.60(s,2H),1.49(s,9H).步骤3：叔丁基-6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
将叔丁基-5,5-二氯-6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(1.65g,5.89mmol,1.0eq)，锌粉(0.85g,15.0mmol,2.6eq)，氯化铵(1.2g,22.0mmol,3.8eq)，加入到甲醇(30mL)中，氮气保护下室温反应18h，反应完全后加入水(40mL)，EA(30mL×2)萃取，干燥，旋干，PE:EA(v/v)＝5:1柱层析，得白色固体产物0.8g，产率66.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.15(s,4H),3.31(s,4H),1.47(s,9H).
步骤4：叔丁基-6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
将叔丁基-6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.23g,1.1mmol,1eq)加入到甲醇(8mL)中，再分批加入硼氢化钠(0.12g,3.2mmol,2.9eq)，再室温反应1h，反应结束后加入水(20mL)，再用EA(20mL×2)萃取，有机相用硫酸钠干燥，减压旋蒸，得到白色固体0.21g，产率95％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.21(p,J＝7.1Hz,1H),3.90(d,J＝6.8Hz,4H),2.63–2.50(m,2H),2.16–2.02(m,2H),1.44(s,9H).
步骤5：6-(2-硝基-4-氨磺酰苯氧基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
将叔丁基-6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.21g,0.98mmol,1.0eq)加入到无水THF(10mL)中，再加入NaH(50mg,1.25mmol,1.3eq)，室温反应半小时，再在0℃滴加4-氟-3-硝基-苯磺酰胺(0.41g,0.98mmol,1.0eq)的THF(5mL)溶液，滴完后室温反应6h，将反应液倒入水(20mL)中，用EA(15mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，得黄色固体，用5mL DCM和20mL PE打浆。再抽滤，得黄色固体产品0.39g，收率100％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.29(d,J＝2.2Hz,1H),8.02(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.50(s,2H),7.37(d,J＝8.9Hz,1H),4.92(dd,J＝13.3,6.6Hz,1H),3.88(d,J＝27.1Hz,4H),2.87–2.72(m,2H),2.34–2.20(m,2H),1.36(s,9H).
步骤6：2-(4-氯苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷
将对氯碘苯(30.0g,125.8mmol,1eq)加入到350mL DMSO中，再加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(0.8g,1.0mmol,0.008eq)，再加入醋酸钾(25.0g,255mmol,2.02eq)，联频哪醇硼酸酯(33.8g,133mmol,1.06eq)，氮气保护下，95℃反应10h。停止反应，TLC点板分析原料全部反应完全。将反应液倒入300mL水中，用DCM(100mL×3)萃取，有机相用水(200mL×2)洗两次，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，过柱，PE做洗脱剂，再用PE/EA(v/v)＝50/1做洗脱剂，得产淡黄色固体产品15.5g，未分开的再过一次柱子，得产品8.0g，收率78.1％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.75(d,J＝8.2Hz,2H),7.36(d,J＝8.3Hz,2H),1.36(s,12H).
步骤7：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-氟苯甲酸甲酯
将1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-醇(1.20g,8.95mmol,1.03eq)和2,4-二氟苯甲酸甲酯(1.5g,8.71mmol,1.0eq)加入到20mL二甘醇二甲醚中，再加入七水合磷酸钾(3.5g,14.0mmol,1.6eq)，氮气保护下115℃反应过夜。TLC点板分析，还有原料，大部分都生成了邻位产品。TLC点板分析，还有原料，补加0.3g 2,4-二氟苯甲酸甲酯和0.5g七水合磷酸钾，继续反应过夜。再TLC点板分析，效果不是很好，还有原料。直接处理，反应液倒入水100mL中，EA(30mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干过柱，PE/EA(v/v)＝3/1过柱，得白色固体525mg。收率22.2％.
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):10.91(s,1H),8.24(d,J＝2.5Hz,1H),7.99(dd,J＝8.8,6.6Hz,1H),7.70(d,J＝2.5Hz,1H),7.49–7.41(m,1H),6.83(ddd,J＝8.8,7.6,2.4Hz,1H),6.53(ddd,J＝6.9,5.4,2.2Hz,2H),3.93(s,3H).
步骤8：4,4-二甲基-2-氧代环己烷甲酸甲酯
在15mL无水THF中加入氢化钠(1.25g,31.3mmol,2.0eq)和碳酸二甲酯(6.5g,72.0mmol,4.6eq)，氮气保护下回流，在回流时滴加8mL 3,3-二甲基环己酮(2.0g,16.0mmol,1.0eq)的THF溶液。滴完回流反应4h。向反应液中加入5mL甲醇，再加入40mL水，DCM(30mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干过柱，PE/EA(v/v)＝100/1，得无色液体产品2.8g,收率92.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):12.13(s,1H),3.78(s,3H),2.27(t,J＝6.5Hz,2H),2.07(s,2H),1.40(t,J＝6.5Hz,2H),0.97(d,J＝6.1Hz,6H).
步骤9：4,4-二甲基-2-(((三氟甲基)磺酰)氧基)环己-1-烯甲酸甲酯
将氢化钠(5.4g,140mmol,1.8eq)加入到DCM(180mL)中，0℃滴加4,4-二甲基-2-氧代环己烷甲酸甲酯(13.8g,74.9mmol,1.0eq)，滴加20min，滴完反应半小时，在移到-78℃滴加三氟甲磺酸酐(23.4g,82.9mmol,1.11eq)。滴完室温反应过夜。停止反应，将反应液缓慢倒入到2M的50mL的氯化铵溶液中，有机相用水洗(60mL×2)，用无水硫酸钠干燥，旋干，过柱，PE/EA(v/v)＝100/1做洗脱剂。得淡黄色液体产品17.1g。收率71.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):3.83(s,3H),2.58–2.48(m,2H),2.20(t,J＝2.4Hz,2H),1.46(t,J＝6.4Hz,2H),1.03(s,6H).
步骤10：4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-甲酸甲酯
将对氯苯硼酸(7.45g,31.2mmol,0.99eq)和4,4-二甲基-2-(((三氟甲基)磺酰)氧基)环己-1-烯甲酸甲酯(10.0g,31.6mmol,0.99eq)加入到80mL DME和40mL MeOH,再加入四三苯基磷钯(500mg,0.43mmol,0.013eq)和氟化钾(4.5g,77.0mmol,2.4eq)，氮气保护下，在65℃反应16h。将反应液倒入150mL水中，用DCM(60mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干过柱，PE/EA(v/v)＝40/1做洗脱剂，得无色液体产品8.24g，收率95.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.30–7.28(m,2H),7.05(d,J＝8.4Hz,2H),3.48(s,3H),2.51–2.43(m,2H),2.14(t,J＝2.2Hz,2H),1.50(t,J＝6.5Hz,2H),1.02(s,6H).
步骤11：(4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲醇
将4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-甲酸甲酯(7.10g,25.5mmol,1.0eq)加入到THF(40mL)中，再分批加入四氢铝锂(1.5g,47.0mmol,1.84eq)，加完后，氮气保护下，室温反应4h。再加1M的HCl(10mL)淬灭反应，DCM(40mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得淡黄色液体产品6.4g，收率100％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.30(d,J＝8.3Hz,2H),7.08(d,J＝8.3Hz,2H),3.96(s,2H),2.31(t,J＝6.4Hz,2H),2.06(d,J＝3.7Hz,2H),1.60(s,1H),1.51(t,J＝6.5Hz,2H),1.00(s,6H).
步骤12：1-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪
将(4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲醇(1.0g,4.0mmol,1.0eq)溶到15mL二氯甲烷中，再加入2mL三乙胺，在0℃滴加甲基磺酰氯(0.35mL,4.5mmol,1.1eq)，产生大量固体，加完后，反应三分钟，再将反应液缓慢滴加到0℃的20mL的哌嗪(1.0g,12.0mmol,3.0eq)DCM溶液中。反应一天。停止反应，点板分析，原料基本反应完，反应液倒入50mL水中，洗去三乙胺，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，过柱，洗脱剂PE/EA(v/v)＝3/1。得白色固体产品0.71g，产率55.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.27(d,J＝8.8Hz,2H),6.98(d,J＝8.3Hz,2H),2.81–2.72(m,2H),2.32(d,J＝82.5Hz,10H),2.00(s,2H),1.68(s,1H),1.51–1.39(m,2H),0.97(s,6H).
步骤13：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯
在25mL DMSO中加入1-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪(1.62g,5.08mmol,1.12eq)，化合物7(1.30g,4.54mmol,1.0eq)和磷酸氢二钾(2.0g,13.0mmol,2.8eq)，氮气保护下140℃反应一晚上。将反应液倒入水100mL中，EA(40mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干过柱，PE/EA(v/v)＝3/1做洗脱剂，得橙黄色油状物1.4g，收率51.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.43(s,1H),8.18(d,J＝2.3Hz,1H),7.90(d,J＝8.9Hz,1H),7.54(d,J＝2.4Hz,1H),7.39–7.34(m,1H),7.27(d,J＝8.5Hz,2H),6.96(d,J＝8.3Hz,2H),6.60(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),6.46(d,J＝2.0Hz,1H),6.29(d,J＝2.1Hz,1H),3.81(s,3H),3.20–3.09(m,4H),2.82(s,2H),2.30–2.24(m,6H),2.00(s,2H),1.45(t,J＝6.3Hz,2H),0.97(s,6H).
步骤14：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(1.65g,2.82mmol,1.0eq)加入到THF(30mL)和甲醇(10mL)中，再加入氢氧化钠(0.60g,15.0mmol,5.5eq)和水(6mL)，45℃反应过夜。点半分析，原料已经反应完全。停止反应，冷却后倒入100mL水中，用2M的盐酸调节PH＝2，再用DCM(30mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，再加入5mL DCM和100mLPE搅拌10min，抽滤得白色固体产品1.56g，收率96.9％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.81(s,1H),8.22(d,J＝2.5Hz,1H),8.03(d,J＝9.0Hz,1H),7.64(d,J＝2.4Hz,1H),7.37(s,1H),7.26(d,J＝8.3Hz,2H),6.95(d,J＝8.3Hz,2H),6.64(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),6.47(d,J＝2.2Hz,1H),6.21(d,J＝2.1Hz,1H),3.20–3.09(m,4H),2.80(s,2H),2.37–2.24(m,4H),2.22(d,J＝6.2Hz,2H),2.00(s,2H),1.44(t,J＝6.4Hz,2H),0.97(s,6H).
步骤15：6-(4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰)-2-硝基苯氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(160mg,0.28mmol,1.05eq)和6-(2-硝基-4-氨磺酰苯氧基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(110mg,0.27mmol,1.0eq)加入到DCM(10mL)中，再加入EDCI(80mg,0.42mmol,1.57eq)和4-DMAP(40mg,0.33mmol,1.23eq)，室温反应16h。反应后颜色变深，成深黄色。TLC点板分析，在两个原料中间有新点，磺胺原料还有一点点。停止反应，将反应液倒入水(40mL)中，用DCM(15mL×3)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，过柱，EA/EtOH(v/v)＝20/1过柱，得白色固体产品200mg。收率77.07％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):10.19(s,1H),9.41(s,1H),8.55(d,J＝2.2Hz,1H),8.34(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),8.23(d,J＝2.5Hz,1H),7.96(d,J＝9.1Hz,1H),7.72(d,J＝2.5Hz,1H),7.51–7.45(m,1H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),6.95(dd,J＝17.0,8.6Hz,3H),6.56(d,J＝9.8Hz,2H),6.00(s,1H),4.84–4.75(m,1H),4.00(d,J＝13.2Hz,4H),3.09(s,4H),2.85–2.72(m,4H),2.53–2.42(m,2H),2.20(d,J＝18.1Hz,6H),1.98(s,2H),1.46(s,9H),1.42(d,J＝6.5Hz,2H),0.95(s,6H).MS-ESI,m/z:967.50[M+H]+。
步骤16：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺
将6-(4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰)-2-硝基苯氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(114mg,0.11mmol,1.0eq)加入到8mL DCM溶液中，再加入1.5mL三氟乙酸，室温搅拌3h。TLC点板分析，原料反应完全。直接旋干，得黄色油状物95mg，收率92.9％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):9.39(s,1H),8.64(s,1H),8.41(d,J＝2.3Hz,1H),8.10(dd,J＝9.0,2.3Hz,1H),8.05(d,J＝2.5Hz,1H),7.63–7.49(m,3H),7.40(d,J＝8.3Hz,2H),7.26(d,J＝9.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.3Hz,2H),6.72(d,J＝7.3Hz,1H),6.46–6.38(m,1H),6.26(s,1H),4.92–4.83(m,1H),4.06–4.02(m,2H),3.99(d,J＝5.7Hz,2H),3.58(s,4H),3.34–3.22(m,2H),3.02(dd,J＝18.1,5.3Hz,2H),2.89–2.80(m,2H),2.74(dd,J＝11.8,5.1Hz,2H),2.38–2.31(m,2H),2.19(s,2H),2.02(s,2H),1.49–1.42(m,2H),0.95(s,6H).
步骤17：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-((2-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氧基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(96mg,0.11mmol,1.0eq)加入到5mL DCM和2.5mL甲醇中，溶解后加入四氢吡喃-4-酮(32mg,0.30mmol,2.73eq)，室温反应15min，再加入乙酸钠(53mg,0.67mmol,2.16eq)和三乙酰基硼氢化钠(50mg,0.24mmol,6.12eq)，室温反应一晚上。TLC点板反应完全，反应液倒入水(30mL)中，用DCM萃取(30mL×3)，有机相旋干过柱，DCM/MeOH(v/v)＝4/1过柱。得白色固体产品85mg，收率80.7％，送HPLC显示纯度94.97％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.76(s,1H),8.55(s,1H),8.17(dd,J＝9.4,4.0Hz,2H),7.93(d,J＝9.0Hz,1H),7.70(d,J＝6.5Hz,1H),7.47(s,1H),7.24(d,J＝8.2Hz,2H),6.93(d,J＝8.2Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.56(d,J＝10.3Hz,2H),6.02(s,1H),4.83–4.70(m,1H),4.03(d,J＝10.6Hz,2H),3.71(s,4H),3.36(t,J＝11.5Hz,2H),3.10(s,4H),2.80(d,J＝19.5Hz,4H),2.63(s,1H),2.49(dd,J＝7.9,4.7Hz,2H),2.21(d,J＝23.9Hz,6H),1.98(s,2H),1.79–1.69(m,2H),1.62–1.50(m,2H),1.43(t,J＝6.2Hz,2H),0.95(s,6H)；MS-ESI,m/z:949.50[M]+.
实施例2：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-((2-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
步骤1：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-氟-3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺
将4-氟-3-硝基苯磺酰胺(235mg,1.06mmol,1.00eq)和2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(600mg,1.06mmol,1.0eq)(见实施例1步骤14)加入到6mL三氯氧磷中，85℃反应5h。将反应液倒入20mL冰水中，用EA(10mL×3)萃取，分出有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，过柱，PE/EA(v/v)＝2/1和DCM/EtOH(v/v)＝10/1做洗脱剂，得白色固体产品830mg，收率100％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):12.07(s,1H),11.72(s,1H),10.22(s,1H),8.58(dd,J＝6.9,2.3Hz,1H),8.24(dd,J＝5.2,2.6Hz,1H),8.01(d,J＝2.6Hz,1H),7.70(dd,J＝10.8,9.0Hz,1H),7.53(dd,J＝14.1,5.7Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.3Hz,2H),6.81–6.69(m,1H),6.43–6.34(m,1H),6.32(d,J＝1.9Hz,1H),3.68(d,J＝12.8Hz,2H),3.56(s,2H),3.25(dd,J＝21.1,11.6Hz,4H),2.73(s,2H),2.31(s,2H),2.02(s,2H),1.45(t,J＝6.1Hz,2H),0.95(s,6H)；MS-ESI,m/z:773.60[M+H]+。
步骤2：6-((4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5，5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰)-2-硝基苯基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-氟-3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺(82mg,0.38mmol,1.0eq)和化合物17(300mg,0.38mmol,1.0eq)加入到5mL THF和1mL三乙胺中，室温反应一晚上。将反应液倒入水(20mL)中，用DCM萃取(10mL×3)，旋干，过柱，PE/EA(v/v)＝1/1做洗脱剂，得产品0.23g，收率60.9％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):10.13(s,1H),9.17(s,1H),8.90(d,J＝2.1Hz,1H),8.43(d,J＝5.3Hz,1H),8.20(dd,J＝14.3,5.7Hz,2H),7.97(d,J＝9.1Hz,1H),7.72(d,J＝2.4Hz,1H),7.49–7.45(m,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(d,J＝8.3Hz,2H),6.75(d,J＝9.2Hz,1H),6.56(d,J＝10.2Hz,2H),6.00(d,J＝1.9Hz,1H),4.08–3.98(m,3H),3.95(s,2H),3.08(s,4H),2.87–2.78(m,2H),2.76(s,2H),2.33–2.15(m,8H),1.98(s,2H),1.64(d,J＝6.8Hz,2H),1.47(s,9H),0.96(s,6H)；MS-ESI,m/z:965.90[M+H]+。
步骤3：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺
将6-((4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5，5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰)-2-硝基苯基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.23g，0.24mmol，1.0eq)加入到8mL DCM溶液中，再加入1.5mL三氟乙酸，室温搅拌过夜。将反应液旋干，加入碳酸钠水溶液，再用DCM萃取(10mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，再用11mL(PE/DCM(v/v)＝10/1)溶剂室温打浆2h，抽滤得黄色固体产品185mg，收率90.0％。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm):11.50(s,1H),8.36(d,J＝1.9Hz,1H),8.06(d,J＝5.8Hz,1H),7.90(d,J＝2.5Hz,1H),7.73(dd,J＝5.7,3.3Hz,1H),7.63(dd,J＝8.9,1.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.7Hz,1H),7.44–7.39(m,1H),7.35(d,J＝8.3Hz,2H),7.23(d,J＝2.4Hz,1H),7.06(d,J＝8.3Hz,2H),6.67–6.57(m,2H),6.34–6.23(m,2H),4.05(s,2H),3.97(dt,J＝21.4,7.2Hz,1H),3.91(s,2H),3.00(s,4H),2.75(dd,J＝11.5,8.9Hz,4H),2.30–2.22(m,2H),2.18(d,J＝24.0Hz,6H),1.96(s,2H),1.39(dd,J＝10.6,6.8Hz,2H),0.93(s,6H)；MS-ESI,m/z:865.80[M+H]+.
步骤4：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-((2-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(96mg,0.11mmol,1.0eq)加入到5mL DCM和2.5mL甲醇中，溶解后加入四氢吡喃酮(32mg,0.33mmol,3.0eq)，室温反应15min，再加入乙酸钠(53mg,0.67mmol)和三乙酰基硼氢化钠(50mg,0.24mmol)，室温反应一晚上。将反应液倒入水中(30mL)，用DCM萃取(30mL×3)，有机相旋干过柱，DCM/MeOH(v/v)＝4/1做洗脱剂，得黄色固体产品60mg，收率56.96％。送HPLC显示纯度94.58％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.06(s,1H),8.90(d,J＝2.2Hz,1H),8.44(d,J＝5.0Hz,1H),8.21(d,J＝2.5Hz,1H),8.14(d,J＝7.3Hz,1H),7.97(d,J＝9.1Hz,1H),7.71(d,J＝2.3Hz,1H),7.46(d,J＝3.0Hz,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(d,J＝8.3Hz,2H),6.73(d,J＝9.3Hz,1H),6.56(d,J＝7.2Hz,2H),6.00(s,1H),4.33(t,J＝6.7Hz,1H),4.00(t,J＝12.7Hz,3H),3.45–3.30(m,4H),3.25(s,2H),3.08(s,4H),2.78(d,J＝16.6Hz,4H),2.27–2.14(m,8H),1.98(s,2H),1.65(d,J＝10.6Hz,4H),1.43(t,J＝6.3Hz,2H),0.96(s,6H)；MS-ESI,m/z:949.80[M+H]+.
实施例3：4-(6-((4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰)-2-硝基苯基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)四氢-2H-吡喃-3-甲酸
步骤1：4-羟基-5,6-二氢-2H-吡喃-3-甲酸甲酯
在无水THF中加入氢化钠(0.88g,22mmol,1.1eq)和碳酸二甲酯(9.0g,100mmol,5.0eq)，氮气保护下回流，在回流时滴加四氢吡喃酮(2.0g,20mmol,1.0eq)的THF溶液。滴完回流反应2h.冷却后倒入水中，EA萃取，旋干，过柱，PE/EA(v/v)＝10/1做洗脱剂，得无色液体产品0.7g。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):11.79(s,1H),4.29(s,2H),3.87(t,J＝5.7Hz,2H),3.78(s,3H),2.41(t,J＝5.7Hz,2H).
步骤2：4-(6-((4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰基)-2-硝基苯基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)四氢-2H-吡喃-3-甲酸甲酯
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(80mg,0.092mmol,1.0eq)(见实施例2步骤3)加入到5mL DCM和5mL甲醇中，溶解后加入4-羟基-5,6-二氢-2H-吡喃-3-甲酸甲酯(43mg,0.28mmol,3.0eq)，室温反应15min，再加入乙酸钠(151mg,1.84mmol,20eq)和三乙酰基硼氢化钠(195mg,0.92mmol,10eq)，室温5h。将反应液倒入水中，DCM萃取，旋干，过柱，DCM/MeOH(v/v)＝4/1过柱。得黄色固体产品37mg。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):9.55(s,1H),8.89(d,J＝2.1Hz,1H),8.43(d,J＝5.0Hz,1H),8.20(d,J＝2.1Hz,1H),8.13(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(d,J＝9.2Hz,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.53–7.46(m,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(d,J＝8.3Hz,2H),6.72(d,J＝9.2Hz,1H),6.56(dd,J＝9.1,1.9Hz,2H),6.00(d,J＝2.0Hz,1H),4.12(dd,J＝11.6,6.1Hz,1H),4.03–3.89(m,2H),3.73(s,3H),3.66(dd,J＝11.7,3.3Hz,1H),3.56–3.46(m,2H),3.32(s,2H),3.22(d,J＝16.4Hz,2H),3.09(s,4H),2.75(dd,J＝13.6,6.0Hz,4H),2.67(s,1H),2.18(dd,J＝25.8,21.9Hz,7H),1.98(s,2H),1.65–1.55(m,2H),1.45–1.42(m,2H),0.95(s,6H)；MS-ESI,m/z:1007.50[M+H]+。
步骤3：4-(6-((4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰)-2-硝基苯基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)四氢-2H-吡喃-3-甲酸
将4-(6-((4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰基)-2-硝基苯基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)四氢-2H-吡喃-3-甲酸甲酯(62mg,0.061mmol,1.0eq)加入到2mLTHF和4mL甲醇，3mL氢氧化锂混合液中，45℃反应2h。原料反应完全，倒入水中，调节PH到2，DCM/MeOH(v/v)＝10/1萃取，干燥，旋干过柱，用DCM/MeOH(v/v)＝10/1做洗脱剂，得黄色固体产品31mg。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):11.62(s,1H),8.47(s,1H),8.23(s,1H),7.97(s,1H),7.73(d,J＝8.7Hz,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),7.47(s,1H),7.41(s,1H),7.34(d,J＝8.2Hz,2H),7.04(d,J＝8.2Hz,2H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),6.66(d,J＝8.8Hz,1H),6.35(s,1H),6.22(s,1H).4.12(dd,J＝11.6,6.1Hz,1H),4.03–3.89(m,2H),3.66(dd,J＝11.7,3.3Hz,1H),3.56–3.46(m,2H),3.32(s,2H),3.22(d,J＝16.4Hz,2H),3.09(s,4H),2.75(dd,J＝13.6,6.0Hz,4H),2.67(s,1H),2.18(dd,J＝25.8,21.9Hz,7H),1.98(s,2H),1.65–1.55(m,2H),1.45–1.42(m,2H),0.95(s,6H)；MS-ESI,m/z:993.30[M+H]+.
实施例4：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-((2-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氧基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
步骤1：四氢-2H-吡喃-4-羰基氯
将原料四氢吡喃-4-甲酸(0.5g,4mmol,1.0eq)加入到10mL DCM中，加入催化量的DMF，再在0℃滴加0.4mL氯化亚砜。滴完室温反应1h。将溶剂和过量的氯化亚砜真空抽干，得无色液体0.6g，直接用于下一步反应。
步骤2：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-((2-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氧基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(100mg,0.115mmol,1.0eq)加入到7mL DCM和3mL三乙胺中，室温滴加四氢-2H-吡喃-4-羰基氯(17mg，0.115mmol，1.0eq)的DCM溶液，再室温反应1h。将反应液倒入水中，DCM萃取，旋干，过柱，DCM/MeOH＝15/1做洗脱剂，得白色固体产品38mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):10.11(s,1H),8.61–8.48(m,1H),8.32(t,J＝8.9Hz,1H),8.20(s,1H),7.94(d,J＝9.1Hz,1H),7.75(d,J＝2.1Hz,1H),7.52(d,J＝18.6Hz,1H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),6.96(dt,J＝15.7,11.8Hz,3H),6.57(d,J＝8.9Hz,2H),5.99(s,1H),4.91–4.78(m,1H),4.25(d,J＝11.7Hz,2H),4.05(dd,J＝18.6,8.5Hz,4H),3.44(dd,J＝11.7,10.1Hz,2H),3.10(s,4H),2.89–2.72(m,4H),2.61–2.52(m,1H),2.48–2.34(m,2H),2.19(dd,J＝17.8,12.4Hz,6H),2.13(s,2H),1.98(s,2H),1.89(dd,J＝14.4,10.1Hz,2H),1.59(d,J＝15.2Hz,2H),0.95(s,6H)；MS-ESI,m/z:978.50[M+H]+.
实施例5：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯基)黄酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺
步骤1：4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)二氢呋喃-2(3H)酮
将4-羟基二氢呋喃-2(3H)-酮(10g,97.95mmol,1eq)，3,4-二氢吡喃(9.88g,117.54mmol,1.2eq)溶于100mL二氯甲烷中，在搅拌下分批加入PPTS(2.5g,9.80mmol,0.1eq)，室温搅拌反应8小时，TLC监测反应过程，反应完全后，加入20mL水萃取反应，分出有机相，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析PE:EA(v/v)＝3：1得到无色油状物12.1g，收率66％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.74–4.54(m,2H),4.47–4.27(m,2H),3.89–3.73(m,1H),3.61–3.42(m,1H),2.85–2.49(m,2H),1.88–1.45(m,6H).
步骤2：1-(3-羟基-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)环丙醇
将4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)二氢呋喃-2(3H)酮(1.8g,9.67mmol,1eq)，钛酸异丙酯(1.37g,4.83mmol,0.5eq)加入到10mLTHF中，氮气保护下降温至0℃，缓慢滴加乙基溴化镁(70mL,3M,2.2eq)的乙醚溶液，加完后至15℃下继续反应2小时，TLC监测反应，反应完全后加入5mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，抽滤，滤液再用EA(10mL×2)萃取，有机相水洗，干燥，PE:EA(v/v)＝1：1柱层析得无色油状物1.2g，收率57.4％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.66(dd,J＝25.0,4.7Hz,1H),4.12–3.94(m,2H),3.66–3.42(m,3H),1.92–1.70(m,3H),1.68–1.42(m,5H),0.72(ddd,J＝13.7,10.0,5.2Hz,2H),0.53–0.30(m,2H).
步骤3：3-(1-羟基环丙基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基甲磺酸酯
将1-(3-羟基-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基)环丙醇(3.0g,13.9mmol,1eq)，2.5mL三乙胺加入到15mL二氯甲烷中，降温至0℃，然后缓慢滴加甲磺酰氯(1.75g,15.3mmol,1.1eq)，加完后继续反应2小时，TLC监测反应情况，反应完全后加入5mL水淬灭反应，分出有机相，干燥，旋干得产物4.0g，直接投下一步。
步骤4：6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-4-氧杂螺[2.4]庚烷
3-(1-羟基环丙基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基甲磺酸酯(3.4g,11.5mmol,1eq)，氢化钠(0.416g,17.3mmol,1.5eq)加入到10mL无水THF中室温搅拌反应，TLC监测反应过程，反应完全后，慢慢加入5mL甲醇淬灭反应，然后加入5mL水，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，有机相水洗，无水硫酸钠干燥，PE:EA(v/v)＝6:1柱层析得1.9g无色油状物，收率83％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.66(dd,J＝25.0,4.7Hz,1H),4.12–3.94(m,2H),3.66–3.42(m,3H),1.92–1.70(m,3H),1.68–1.42(m,5H),0.72(ddd,J＝13.7,10.0,5.2Hz,2H),0.53–0.30(m,2H).
步骤5：4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-醇
将6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-4-氧杂螺[2.4]庚烷(0.6g,3.03mmol,1eq)，PPTS(0.152g,0.605mmol,0.2eq)，10mL甲醇置于单口瓶中40℃搅拌反应5小时，TLC监测反应情况，反应完全后旋干甲醇溶液，再加入10mL水，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有机相干燥，旋干，PE:EA(v/v)＝1：1柱层析得无色油状物0.3g,收率90％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.59(s,1H),3.80–3.94(m,2H),1.82–2.30(m,2H),0.82-0.96(m,2H),0.47–0.65(m,2H).
步骤6：4-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯磺酰胺
将4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-醇(0.1g,0.88mmol,1eq)，氢化钠(0.064g,2.64mmol,3eq)10mL THF置于单口瓶中0℃搅拌半小时，然后加入4-氟3-硝基苯磺酰胺(0.231g,1.05mmol,1.2eq)在室温反应，TLC监测反应，反应完全后，加入5mL饱和氯化铵淬灭，再用乙酸乙酯(15mL×2)萃取，有机相干燥，旋干，PE:EA(v/v)＝8:1柱层析得产物0.23g,收率73％。
MS-ESI,m/z:315.09[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.30(d,J＝2.2Hz,1H),8.03(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.60–7.44(m,3H),5.45(dd,J＝6.3,5.0Hz,1H),4.09(dd,J＝10.4,4.9Hz,1H),2.51(dd,J＝13.7,6.7Hz,2H),2.02(d,J＝13.8Hz,1H),0.77(dt,J＝8.3,4.4Hz,2H),0.61–0.47(m,2H).
步骤7：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺
4-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)-3-硝基苯磺酰胺(0.2g,0.64mmol,1eq)，2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(0.364g,0.64mmol,1eq)(见实施例1步骤14)，EDCI(0.147g,0.77mmol,1.2eq)，DMAP(0.234g,1.92mmol,3eq),10mL DCM置于单口瓶中0℃搅拌反应半小时，然后在室温反应，TLC监测反应完全，加入5mL水淬灭反应，分液，有机相干燥，旋干，柱层析EA:DCM(v/v)＝1：1得到产物0.2g,收率35％。
MS-ESI,m/z:867.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.78(s,1H),8.55(d,J＝2.2Hz,1H),8.37(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),8.23(d,J＝2.4Hz,1H),7.96(d,J＝9.1Hz,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.53–7.45(m,1H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),7.08(d,J＝8.9Hz,1H),6.93(d,J＝8.3Hz,2H),6.58(s,2H),6.01(d,J＝1.8Hz,1H),5.23(t,J＝5.9Hz,1H),4.23(dd,J＝10.3,5.2Hz,1H),3.09(d,J＝5.4Hz,4H),2.76(s,2H),2.52(dd,J＝13.6,6.8Hz,1H),2.21(dd,J＝14.8,9.4Hz,7H),1.98(s,2H),1.43(t,J＝6.3Hz,2H),1.28(t,J＝7.1Hz,2H),0.95(s,6H),0.69–0.61(m,2H),0.59–0.52(m,2H)。
实施例6：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(6-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
步骤1：6-(4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰基)-2-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-氟-3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺(见实施例2步骤1)(0.400g,0.517mmol,1eq)，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.113g,0.569mmol,1.1eq)，三乙胺(0.114g,1.03mmol,2eq)，10mL DMF置于单口瓶中室温搅拌反应，TLC监测反应情况，反应完全后加入10mL水，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，有机相干燥，旋干，DCM:EA(v/v)＝1:2柱层析得产物0.2g产率，40％。
MS-ESI,m/z:951.46[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):10.29(s,1H),9.41(s,1H),8.55(d,J＝2.2Hz,1H),8.34(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),8.21(d,J＝2.5Hz,1H),7.86(d,J＝9.1Hz,1H),7.62(d,J＝2.5Hz,1H),7.51–7.35(m,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,2H),6.85(dd,J＝17.0,8.6Hz,3H),6.46(d,J＝9.8Hz,2H),6.00(s,1H),4.20(d,J＝13.2Hz,4H),3.19(s,4H),2.85–2.62(m,4H),2.53–2.12(m,2H),2.01(d,J＝18.1Hz,6H),1.98(s,2H),1.46(s,9H),1.32(d,J＝6.5Hz,2H),0.98(s,6H).
步骤2：2-((1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-二联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
将0.15g 6-(4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰基)-2-硝基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯加入到6mL DCM溶液中，再加入1mL三氟乙酸，室温搅拌反应，送LC-MS监测反应，反应完全后旋干反应液，残留物中加入10mL DCM,再用饱和碳酸氢钠中和，分液，有机相干燥，旋干得产物0.1g。
MS-ESI,m/z:851.39[M+H]+.
步骤3：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(6-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
将2-((1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-二联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺(0.300g,0.352mmol,1eq)加入到5mL DCM和2.5mL甲醇中，溶解后加入四氢吡喃-4-酮(0.106g,1.06mmol,3eq),室温反应15min，再加入乙酸钠(0.063g,0.775mmol,2.2eq)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.463g,2.18mmol,6.2eq)，监测反应情况，反应完全后加入10mL水，再用用DCM(10mL×3)萃取，有机相干燥旋干，柱层析纯化DCM/MeOH(v/v)＝4/1，得白色固体0.16g,产率49％。MS-ESI,m/z:935.6[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.86(s,1H),8.57(s,1H),8.17(dd,J＝9.4,4.0Hz,2H),7.95(d,J＝9.0Hz,1H),7.72(d,J＝6.5Hz,1H),7.57(s,1H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),6.98(d,J＝8.2Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.26(d,J＝10.3Hz,2H),6.08(s,2H),4.03(d,J＝10.6Hz,2H),3.91(s,4H),3.56(t,J＝11.5Hz,2H),3.10(s,4H),2.90(d,J＝19.5Hz,4H),2.73(s,1H),2.49(dd,J＝7.9,4.7Hz,2H),2.21(d,J＝23.9Hz,6H),1.88(s,2H),1.79–1.49(m,2H),1.42–1.30(m,2H),1.23(t,J＝6.2Hz,2H),0.96(s,6H).
实施例7：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)乙氧基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺
步骤1：2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃
将2-溴乙醇(2g,16.0mmol,1eq)，3,4-二氢吡喃(2.15g,25.6mmol,1.6eq)溶于40mL二氯甲烷中，在搅拌下分批加入PPTS(0.402g,1.6mmol,0.1eq)，室温搅拌反应8小时，TLC监测反应过程，反应完全后，加入10mL水萃取反应，分出有机相，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析PE:EA(v/v)＝20：1得到2.3g产物，收率69％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.68(t,J＝3.5Hz,1H),4.08–3.98(m,1H),3.95–3.86(m,1H),3.78(dt,J＝11.3,6.4Hz,1H),3.58–3.47(m,3H),1.93–1.78(m,1H),1.75(ddd,J＝9.3,6.3,2.9Hz,1H),1.69–1.48(m,4H).
步骤2：6-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)-4-氧杂螺[2.4]庚烷
4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-醇(0.4g,3.5mmol,1eq)，氢化钠(0.252g,10.5mmol,3eq)加入到10mL无水THF中室温搅拌30分钟，然后再加入四丁基碘化铵(0.129g,0.35mmol,0.1eq)和2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃(0.879g,4.21mmol,1.2eq)40℃反应，TLC监测反应过程，反应完全后，慢慢加入5mL甲醇淬灭反应，然后加入10mL水，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相水洗，无水硫酸钠干燥，PE:EA(v/v)＝5：1柱层析得0.4g产物，收率50％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.56(s,1H),4.12–3.94(m,2H),3.66–3.42(m,3H),1.82–1.60(m,5H),1.48–1.22(m,7H),0.72-0.79(m,2H),0.53–0.34(m,2H).
步骤3：2-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)乙醇
将6-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)-4-氧杂螺[2.4]庚烷(0.4g,1.65mmol,1eq)，PPTS(0.083g,0.330mmol,0.2eq)10mL甲醇置于单口瓶中40℃搅拌反应5小时，TLC监测反应情况，反应完全后旋干甲醇溶液，再加入10mL水，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有机相干燥，旋干，PE:EA(v/v)＝1:1柱层析得无色油状物0.2g,收率80％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):4.28(dd,J＝7.0,3.9Hz,1H),3.92–3.87(m,2H),3.72(t,J＝4.6Hz,2H),3.53(dd,J＝9.8,4.7Hz,2H),2.18(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),2.01(dd,J＝13.2,2.7Hz,1H),0.92–0.79(m,2H),0.62–0.52(m,1H),0.42(ddd,J＝10.6,6.6,5.5Hz,1H).
步骤4：4-(2-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)乙氧基)-3-硝基苯磺酰胺
将2-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)乙醇(0.1g,0.632mmol,1eq)，氢化钠(0.045g,1.90mmol,3eq)，10mL THF置于单口瓶中0℃搅拌半小时，然后加入4-氟3-硝基苯磺酰胺(0.167g,0.759mmol,1.2eq)在室温反应，TLC监测反应，反应完全后，加入5mL饱和氯化铵淬灭，再用EA(15mL×2)萃取，有机相干燥，旋干，PE:EA(v/v)＝8:1柱层析得产物0.20g，收率90％。
MS-ESI,m/z:359.15[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.20(d,J＝2.2Hz,1H),8.13(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.65–7.34(m,3H),5.25(dd,J＝6.3,5.0Hz,1H),4.19(dd,J＝10.4,4.9Hz,1H),2.51(dd,J＝13.7,6.7Hz,2H),2.41-2.39(m,2H),2.18-2.05(m,2H),2.02(m,1H),0.77-0.70(m,2H),0.61–0.47(m,2H).
步骤5：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-N-((4-(2-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)乙氧基)-3-硝基苯基)磺酰基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺
2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(0.191g,0.335mmol,1eq)(见实施例1步骤14)，4-(2-(4-氧杂螺[2.4]庚烷-6-基氧基)乙氧基)-3-硝基苯磺酰胺(0.120g,0.335mmol,1eq),EDCI(0.077g,0.402mmol,1.2eq)，DMAP(0.123g,1.00mmol,3eq)，10mLDCM置于单口瓶中0℃搅拌反应半小时，然后在室温反应，TLC监测反应完全，加入5mL水淬灭反应，分液，有机相干燥，旋干，柱层析EA:DCM＝1:1得到产物0.150g,收率49％。
MS-ESI,m/z:911.32[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.88(s,1H),8.55(d,J＝2.2Hz,1H),8.47(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),8.33(d,J＝2.4Hz,1H),7.96(d,J＝9.1Hz,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.55–7.45(m,1H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),7.18(d,J＝8.9Hz,1H),6.93(d,J＝8.3Hz,2H),6.78(s,2H),6.01(d,J＝1.8Hz,1H),5.33(t,J＝5.9Hz,1H),4.13(dd,J＝10.3,5.2Hz,1H),3.09(d,J＝5.4Hz,4H),2.86(s,2H),2.62(dd,J＝13.6,6.8Hz,1H),2.41-2.36(m,2H),2.35-2.25(m,2H),2.21(dd,J＝14.8,9.4Hz,7H),1.98(s,2H),1.43(t,J＝6.3Hz,2H),1.28(t,J＝7.1Hz,2H),0.95(s,6H),0.69–0.66(m,2H),0.56–0.50(m,2H).
实施例8：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)丙-1-炔-1-基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
步骤1：4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰基)-2-硝基苯基三氟甲磺酸酯
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(见实施例1步骤14)(60mg,0.105mmol,1.0eq)，2-硝基-4-氨磺酰基苯基三氟甲磺酸酯(40mg,0.114mmol,1.09eq)加入到DCM(10mL)中，再加入EDCI(40mg,0.209mmol,1.99eq)和4-DMAP(26mg,0.213mmol,2.03eq)，室温反应3h，TLC点板分析，酸原料基本反应完，直接将反应液旋干，过柱，PE/EA(v/v)＝1/1做洗脱剂，得淡黄色固体产品52mg，收率53.9％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.14(s,1H),8.89(d,J＝2.2Hz,1H),8.57(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),8.23(d,J＝2.4Hz,1H),7.95(d,J＝9.1Hz,1H),7.72(d,J＝2.3Hz,1H),7.63(d,J＝8.7Hz,1H),7.52–7.45(m,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(d,J＝8.3Hz,2H),6.70–6.51(m,2H),5.99(d,J＝2.0Hz,1H),3.10(t,J＝4.0Hz,4H),2.77(s,2H),2.37–2.11(m,6H),1.99(s,2H),1.43(t,J＝6.7Hz,2H),0.96(s,6H).
步骤2：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)丙-1-炔-1-基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺
将4-(N-(2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰基)-2-硝基苯基三氟甲磺酸酯(145mg,0.16mmol,1eq),4-(丙-2-炔-1-基氧基)四氢-2H-吡喃(45mg,0.32mmol,2.0eq)加入到DMF(5mL)和三乙胺(1mL)中，再加入PdCl2(PPh3)2(15mg,0.021mmol,0.13eq)和CuI(6.0mg,0.032mmol,0.20eq),氮气保护下，60℃反应一整夜。TLC点板分析，原料反应完全，将反应液加入到100mL水中。DCM(20mL×2)萃取，有机相用水洗(40mL×2)，用无水硫酸钠干燥，旋干，过柱，DCM/MeOH＝20/1做洗脱剂，过柱时基本都是交叉的。收集在过一次柱子，用EA/MeOH(v/v)＝20/1过柱子，还是没分开。直接送制备，粗产品100mg，通过制备获得白色固体产品30mg，收率20.6％。纯度91.78％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):9.19(s,1H),8.76(s,1H),8.37(d,J＝8.2Hz,1H),8.20(d,J＝4.4Hz,1H),7.96(d,J＝9.0Hz,1H),7.75(dd,J＝21.4,5.2Hz,2H),7.50(d,J＝2.6Hz,1H),7.27(s,2H),6.93(d,J＝8.2Hz,2H),6.64–6.52(m,1H),6.00(s,1H),4.54(s,2H),4.06–3.95(m,2H),3.94–3.84(m,1H),3.56–3.48(m,2H),3.19(dd,J＝7.3,6.5Hz,4H),2.42–2.28(m,2H),2.25–2.19(m,2H),2.00(d,J＝9.1Hz,4H),1.75–1.57(m,6H),1.45(s,2H),1.32(d,J＝8.6Hz,2H),0.96(s,6H)；MS-ESI,m/z:893.40[M+H]+.
实施例9：(4-(N-(2-((1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((4'-氯-5,5-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰基)氨磺酰基)-2-硝基苯基)((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)次膦酸
参照合成方案1的合成方法，采用合适的原料进行制备得到实施例9化合物。MS-ESI,m/z:916.28[M+H]+.
生物活性测试
生物活性测试例1：化合物外活性测试
所用实验试剂及供试品：RPMI1640培养基、二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清(FBS)；CellTiter Glo assay试剂盒购自Promega；细胞株RS4；11购自ATCC。
具体实验过程如下：
1、细胞铺板
a.配制完全培养基，充分混匀。
b.复苏细胞，传两代左右选择生长状态良好的细胞株。
c.将细胞培养瓶从培养箱中取出，核对瓶上标记的细胞名称，培养基类型及细胞数。
d.用移液管将细胞悬液移入离心管中，800-1000rpm的转速离心3-5分钟。
e.吸弃离心管中的细胞上清液。
f.向离心管中加适当体积的培养基，轻柔吹打使细胞重悬均匀。
g.使用Vi-Cell XR细胞计数仪计数。
h.将细胞悬液调至合适浓度。
i.将细胞悬液加入底透壁白的96孔板中，100μl/孔。标记细胞名称，种板密度，日期等详细信息，将培养板放置于CO2培养箱中过夜。
2、供试品准备和添加:
a.用DMSO将化合物配制成10mM的stock储存液
b.2mM化合物的配制:各取20μl 10mM的化合物加入到80μl DMSO中稀释成2mM。
c.以2mM为最高浓度，用DMSO逐步3倍稀释，得到10个浓度梯度的化合物。
3、供试品的添加:
a.从相应的化合物板中移取0.5μl加入过夜培养的细胞培养板中。
b.在37℃培养箱中孵育72小时。
4、检测及分析
a.化合物处理72小时后，在倒置显微镜下观察细胞形态，DMSO对照孔中的细胞生长状态正常，未见有污染现象。
b.将细胞培养板放置室温中平衡30分钟。
c.将细胞活性检测试剂100μl/孔加入培养板中。
d.在振板机上混匀2分钟，诱导细胞溶解。
e.将96孔板在室温中放置10分钟，使其发光信号稳定。
f.粘贴白色的底膜于培养板底部，使用Enspire测板。
g.记录分析所得的实验结果。
5、数据分析方法
抑制率计算公式：Inhibition％＝[1-(T72sample-T72blank)/(T72DMSO-T72blank)]×100％药物和细胞作用72小时后，T72sample、T72blank和T72DMSO分别指加药孔的读值、空白对照的读值及0.5％DMSO阴性对照的读值。根据抑制剂率并计算出相对应的IC50值。
实验结果如表1所示：
表1本发明化合物的体外细胞(RS4；11)活性
实施例编号 IC50 实施例编号 IC50
实施例1 0.0038μM 实施例6 0.015μM
实施例2 0.0070μM 实施例7 0.0759μM
实施例3 0.0820μM 实施例8 0.068μM
实施例4 0.0090μM
实施例5 0.0028μM
实验结论：如表1所示，本发明化合物对RS4；11细胞增殖具有较好的抑制作用，其中实施例1化合物，实施例2化合物、实例4化合物和实施例5化合物的抑制活性更好。
生物活性测试例2：化合物的药代动力学测试
所用实验试剂及供试品：Propranolol(普萘洛尔(内标))、甲醇、乙酸铵、K2EDTA、甲酸、乙腈、MTBE(甲基叔丁基醚)、KolliphorHS15(聚乙二醇12羟基硬脂酸酯)、DMSO(二甲亚砜)均为市售可得；SD大鼠：雄性，6只，180-220g，7-8周龄，购自湖南斯莱克实验动物有限公司。
具体实验过程如下：
1、供试品配制
按5％DMSO+5％KolliphorHS15+90％生理盐水配置供试品溶液，具体根据每个化合物的溶解情况进行调整，使化合物能完全溶解。
2、动物实验设计
3、动物给药剂量表
组别 性别 动物数量 给药剂量 给药浓度 给药体积
IV 雄性 3 1mg/kg 1mg/mL 1mL/kg
PO 雄性 3 5mg/kg 1mg/mL 5mL/kg
4、溶液配制
(1)供试品储备液的配置：精密称取适量供试品，用DMSO溶解，用乙腈稀释至1mg/mL，摇匀即得。置于-20℃条件下保存待用。
(2)内标物溶液配制：精密吸取一定量1mg/mL Propranolol储备液，用水稀释至100ng/mL。
5、样品分析
采用液液萃取法处理样品，进行色谱分离，在三重四极杆串联质谱仪上，以多重反应离子监测(MRM)方式进行定量分析，用仪器定量软件对结果进行浓度计算。
6、血浆样品预处理
精密吸取30μL的血浆样品，加入250μL内标，涡旋混合均匀。用1mL的MTBE提取一次，13000rpm，4℃下离心2min，吸取上清液800μL，于96孔氮吹仪中挥干，残留物用150μL甲醇:水＝50:50复溶，涡旋混合，进样，进样量为8μL。
7、标准样品的制备
准确吸取适量的化合物储备液，加入乙腈稀释制成标准系列溶液。准确吸取上述标准系列溶液各20μL，加入空白血浆180μL，涡旋混匀，配制成相当于血浆浓度为3、5、10、30、100、300、1000、3000、5000和10000ng/mL的血浆样品，均按3.5.1.“血浆样品预处理”操作，每一浓度进行双样本分析，建立标准曲线。
8、分析方法
使用LC/MS/MS法测定不同化合物给药后大鼠血浆中的待测化合物含量。
9、数据处理
采用WinNonlin 6.1软件，非房室模型法计算药动学参数。
实验结果如表2、表3、表4所示：
表2本发明化合物的药代动力学参数
实验结论：本发明化合物大鼠静注和口服暴露量均高于venetoclax，半衰期也比venetoclax长，体内清除率也低于venetoclax。因此，本发明化合物具有较好的药代动力学性质。
表3本发明化合物的药代动力学参数
实验结论：本发明化合物相比venetoclax具有较长的半衰期，稳态分布容积较venetoclax大，分布更广泛。
表4本发明化合物的药代动力学参数
实验结论：本发明化合物相比venetoclax具有较长的半衰期。

Claims (9)

1.一种化合物，其为通式(I)化合物，或通式(I)化合物的立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
其中，
R1为6-12元亚螺环基或4-7元亚单杂环基，其中，6-12元亚螺环基或4-7元亚单杂环基各独立任选地被氢，氘，C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代；
M为共价键、-O-、-N(R3)-、-O-(CH2)n-O-、-P(＝O)(OH)-(CH2)n-、-(CH2)n-P(＝O)(OH)-、-C≡C-(CH2)n-O-、-O-(CH2)n-C≡C-，且当R1为4-7元亚单杂环基时，M为-P(＝O)(OH)-(CH2)n-、-(CH2)n-P(＝O)(OH)-、-C≡C-(CH2)n-O-或-O-(CH2)n-C≡C-；其中，-O-(CH2)n-O-、-P(＝O)(OH)-(CH2)n-、-(CH2)n-P(＝O)(OH)-、-C≡C-(CH2)n-O-和-O-(CH2)n-C≡C-各独立任选地被氢、氘、C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基或氨基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代；
R3为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基；其中，甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基各独立任选地被氢、氘、烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基或氨基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代；
各n独立地为1、2或3；和
R2为氢、4-7元杂环基或4-7元杂环基(C＝O)-，其中，4-7元杂环基和4-7元杂环基(C＝O)-各独立任选地被氢，氘，C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R1为如下子结构式：
以上R1的子结构式各独立任选地被氢，氘，甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，
R2为H、四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基(C＝O)-、吗啉基(C＝O)-、哌啶基(C＝O)-、四氢呋喃基(C＝O)-、吡咯烷基(C＝O)-，其中，四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基(C＝O)-、吗啉基(C＝O)-、哌啶基(C＝O)-、四氢呋喃基(C＝O)-、吡咯烷基(C＝O)-各独立任选地被氢，氘，C1-3烷基、C1-3烷氧基、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基中的1、2、3或4个相同或不同的取代基所取代。
4.根据权利要求1所述的化合物，其为通式(II-1)化合物，或其立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
其中，
M1为共价键、-NH-或-O-；
M2为共价键或-C(＝O)-；
Q1为CH或N；
Q2为-O-或-NH-；
R4为H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基或羧基；和
p、q和q’各自独立为0、1或2。
5.根据权利要求4所述的化合物，其为通式(II-2)化合物，或其立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
6.根据权利要求1所述的化合物，其为通式(II-3)化合物，或其立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐：
其中，
M3为共价键、-O-或-O(CH2)nO-；
n独立地为1、2或3；
r为0、1、2或3；
t为0、1或2；和
s为1或2。
7.根据权利要求1所述的化合物，具有如下其中之一的结构：
或所述结构的立体异构体、几何异构体或药学上可接受的盐。
8.一种药物组合物，包含权利要求1-7任意一项所述的化合物，及其药学上可接受的赋形剂。
9.权利要求1-7任意一项所述的化合物或权利要求8所述的药物组合物在制备用于预防或治疗癌症的药物中的用途。
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