CN106562901A - 一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法 - Google Patents

一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，通过将小球藻经过强碱处理后，高速分散将蛋白质提取和解聚成寡肽，然后通过杀菌过滤、纯化和浓缩，最后在经过调节pH和添加防腐剂并杀菌过滤得到温泉小球藻提取物溶液，所述的温泉小球藻提取物溶液应用于化妆品对皮肤具有非常好的有抗衰老、提亮肤色、增强肌肤紧实度和有效减少妊娠纹的作用。

Description

一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法
技术领域
本发明涉及化妆品原料技术领域，尤其涉及一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法。
背景技术
小球藻(Chlorella)为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻，是一种球形单细胞淡水藻类，直径3-8微米，是地球上最早的生命之一，出现在20多亿年前，是一种高效的光合植物，以光合自养生长繁殖，分布极广。
小球藻(Chlorella vulgaris)绿藻纲，小球藻科。单细胞藻，常单生，也有多细胞聚集。细胞球形、椭圆形，内有一个周生、杯状或片状的色素体。无性繁殖，每个细胞可以产生2、4、8或16个似亲孢子，成熟时母细胞破裂，孢子逸出，长大后即为新个体。世界各地均有分布，多生活于较小浅水，也有海产种类。天然条件下个体较少，人工培养大量繁殖。细胞内的蛋白质、脂肪和碳水化合物含量都很高，又有多种维生素，可食用和作为饵料。
目前世界上已知的小球藻约10种，加上其变种可达数百种之多。小球藻广泛分布于自然界，以淡水水域种类最多；易于培养，不仅能利用光能自养，还能在异养条件下利用有机碳源进行生长、繁殖；并且生长繁殖速度快，是地球上动植物中唯一能在20h增长4倍的生物，所以其应用价值很高。小球藻来源于希腊语“绿”，意味着“绿色”，拉丁文“ella”，意味着“微小”；富含氨基酸和低聚肽；通过光合作用，在淡水地区能快递繁殖；由于富含叶绿素，因此颜色为深绿色；拥有坚固的细胞膜，可以抵御细菌和病毒的攻击，在高温和低pH值下完全可以存活。
小球藻在世界各地很多地方都有发现，如保加利亚佩特里奇温泉(ChankovaS.G.and Yurina N.,2013)；意大利Pisciarelli(Cennamo et al.,2002)；黄石公园Venezula(北美)；林波波省(南非)。温泉是当地非常重要的资源，数百年来一直被人类使用；在冰岛，已经发现超过700处温泉。人们从冰岛温泉水中发现温泉小球藻，这些微生物在冰岛温泉中众多。
本发明利用冰岛温泉中的小球藻提取了一种应用于化妆品中的富含氨基酸和低聚肽的小球藻提取物，该提取物对皮肤有抗衰老、提亮肤色、增强肌肤紧实度和有效减少妊娠纹的作用。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法。
本发明的技术方案如下：
一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，包括以下步骤：
A、在去离子水中溶解NaOH以获得3-5mol/L的浓度的NaOH溶液；
B、添加干重为10-15％的小球藻；
C、用高速分散机在8000-20000rpm的转速下，压碎小球藻1.5-2.5小时；
D、用3-6倍体积的去离子水稀释；
E、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，以除去不溶性化合物；
F、通过纳米过滤方法连续渗滤和添加5-10倍体积的去离子水；
G、通过纳米过滤浓缩直至产物的干物质的百分比达到3.0-6.0％；
H、加入盐酸以达到pH为4.5-5.5，以除去绿色颜料；
I、添加0.8-1.2％苯氧基乙醇的作为防腐剂；
J、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，即得到应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液。
优选的，步骤B中的小球藻为0.01-100％的小球藻来自温度>35℃的温泉水中分离的菌株。
优选的，所述的步骤B中的小球藻为45-75％的小球藻来自温度>35℃的温泉水中分离的菌株。
所述的步骤C可将蛋白质提取和解聚成寡肽。
通过步骤A-E，可以获得富含灰分的稀释寡肽提取物，然后将产物纯化，除去灰分并浓缩，得到温泉小球藻提取物。
优选的，所述的温泉小球藻提取物溶液中，包括以下重量百分比的成分：小球藻提取物3-6％、苯氧乙醇0.8-1.2％、水余量。
优选的，所述的温泉小球藻提取物溶液中，包括以下重量百分比的成分：小球藻提取物4.5％、苯氧乙醇1％、水余量。
所述的温泉小球藻提取物溶液中，富含分子量<5000道尔顿寡肽的小球藻提取物。
所述的温泉小球藻提取物溶液中，50％的寡肽的大小为120-500道尔顿。
所述的温泉小球藻提取物溶液中，温泉小球藻提取物的蛋白质含量在1.0-2.5％之间。
所述的温泉小球藻提取物溶液在化妆品中的用量为0.8-1.25％。
优选的，所述的温泉小球藻提取物溶液在化妆品中的用量为1.0％。
本发明的有益之处在于：本发明提供的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，通过将小藻球经过强碱处理后，高速分散将蛋白质提取和解聚成寡肽，然后通过杀菌过滤、纯化和浓缩，最后在经过调解pH和添加防腐剂并杀菌过滤得到温泉小球藻提取物溶液，所述的温泉小球藻提取物溶液应用于化妆品对皮肤具有非常好的有抗衰老、提亮肤色、增强肌肤紧实度和有效减少妊辰纹的作用。
附图说明
图1：对硫氧还蛋白激发作用的变化量图。
图2：对促进人类皮肤成纤维细胞作用的变化量图。
图3：对促进人类皮肤真皮-表皮连接处(DEJ)作用的变化量图。
具体实施方式
实施例1：
一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，包括以下步骤：
A、在去离子水中溶解NaOH以获得4.5mol/L的浓度的NaOH溶液；
B、添加干重为12％的小球藻；
C、用高速分散机在12000rpm的转速下，压碎小球藻2小时；
D、用4倍体积的去离子水稀释；
E、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，以除去不溶性化合物；
F、通过纳米过滤方法连续渗滤和添加6倍体积的去离子水；
G、通过纳米过滤浓缩直至产物的干物质的百分比达到4.5％；
H、加入盐酸以达到pH为5.0，以除去绿色颜料；
I、添加1.0％苯氧基乙醇的作为防腐剂；
J、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，即得到应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液。
所述的步骤B中的小球藻为65％的小球藻来自温度>35℃的温泉水中分离的菌株。
所述的温泉小球藻提取物溶液中，包括以下重量百分比的成分：小球藻提取物4.5％、苯氧乙醇1％、水余量。
实施例2：
一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，包括以下步骤：
A、在去离子水中溶解NaOH以获得3mol/L的浓度的NaOH溶液；
B、添加干重为15％的小球藻；
C、用高速分散机在8000rpm的转速下，压碎小球藻2.5小时；
D、用3倍体积的去离子水稀释；
E、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，以除去不溶性化合物；
F、通过纳米过滤方法连续渗滤和添加10倍体积的去离子水；
G、通过纳米过滤浓缩直至产物的干物质的百分比达到3.0％；
H、加入盐酸以达到pH为5.5，以除去绿色颜料；
I、添加0.8％苯氧基乙醇的作为防腐剂；
J、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，即得到应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液。
所述的步骤B中的小球藻为75％的小球藻来自温度>35℃的温泉水中分离的菌株。
所述的温泉小球藻提取物溶液中，包括以下重量百分比的成分：小球藻提取物3％、苯氧乙醇1.2％、水余量。
实施例3：
一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，包括以下步骤：
A、在去离子水中溶解NaOH以获得5mol/L的浓度的NaOH溶液；
B、添加干重为10％的小球藻；
C、用高速分散机在20000rpm的转速下，压碎小球藻1.5小时；
D、用6倍体积的去离子水稀释；
E、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，以除去不溶性化合物；
F、通过纳米过滤方法连续渗滤和添加5倍体积的去离子水；
G、通过纳米过滤浓缩直至产物的干物质的百分比达到6.0％；
H、加入盐酸以达到pH为4.5，以除去绿色颜料；
I、添加1.2％苯氧基乙醇的作为防腐剂；
J、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，即得到应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液。
所述的步骤B中的小球藻为45％的小球藻来自温度>35℃的温泉水中分离的菌株。
所述的温泉小球藻提取物溶液中，包括以下重量百分比的成分：小球藻提取物6％、苯氧乙醇0.8％、水余量。
下面对实施例1-3制备的温泉小球藻提取物溶液的各项物性进行检测，得到如下数据：
PH：6.5.-7.5
外观：液体
颜色：褐绿色
气味：特征性气味
储存条件：室温下15-25℃下密封储存，低于45℃加入到化妆品配方体系中，正常储存条件下非常稳定，不会发生任何的化学反应。
本发明中温泉小球藻提取物溶液应用于化妆品对皮肤具有非常好的有抗衰老、提亮肤色、增强肌肤紧实度和有效减少妊娠纹的作用，可能的原理为：
温泉小球藻可以刺激最强大的抗氧化剂和光保护分子的合成：硫氧还蛋白，硫氧还蛋白是一种蛋白质，广泛存在于动物，植物和海洋中，分子量约12kDa，硫氧还蛋白是硫醇还原系统的主要成分之一，它给予强大的抗氧化性能，硫氧还蛋白可保护线粒体膜免受氧化应激，抵抗自由基产生的细胞毒性。
以下以实施例1制备的温泉小球藻提取物溶液，添加到护肤霜中，添加量为1％。
测试一：测试对硫氧还蛋白的激发作用，并与不加入温泉小球藻提取物溶液的空白组进行对比，得到对硫氧还蛋白的激发作用提升了382％(图1)。
由以上数据可以知道，本发明制备的温泉小球藻提取物溶液对皮肤的抗氧化作用显著。
测试二：对促进人类皮肤成纤维细胞的真皮层胶原蛋白I、胶原蛋白III、弹性蛋白的表达进行检测，并与不加入温泉小球藻提取物溶液的空白组进行对比，得到如下数据(图2)：
增加胶原蛋白I(Collagen1)的表达 +350％
胶原蛋白III(Collagen3)的表达 +160％
弹性蛋白(Elastin)的表达 +55％
由以上数据可以知道，本发明制备的温泉小球藻提取物溶液，增强肌肤紧实度、柔软度、弹性度效果显著。
测试三：对促进人类皮肤真皮-表皮连接处(DEJ)的表达进行检测，并与不加入温泉小球藻提取物溶液的空白组进行对比，得到如下数据(图3)：
1、对人类成纤维细胞：
增加胶原蛋白IV(COL4)的表达 +77％
粘连蛋白IV(LAM6)的表达 +41％
2、对人类角质形成细胞：
增加粘连蛋白V(LAM5)的表达 +37％
胶原蛋白VII(COL7)的表达 +65％
由以上数据可以知道，本发明制备的温泉小球藻提取物溶液，增强表皮和真皮之间的凝聚力效果显著。
此检测数据只针对上述检测样品。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、在去离子水中溶解NaOH以获得3-5mol/L的浓度的NaOH溶液；
B、添加干重为10-15％的小球藻；
C、用高速分散机在8000-20000rpm的转速下，压碎小球藻1.5-2.5小时；
D、用3-6倍体积的去离子水稀释；
E、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，以除去不溶性化合物；
F、通过纳米过滤方法连续渗滤和添加5-10倍体积的去离子水；
G、通过纳米过滤浓缩直至产物的干物质的百分比达到3.0-6.0％；
H、加入盐酸以达到pH为4.5-5.5，以除去绿色颜料；
I、添加0.8-1.2％苯氧基乙醇的作为防腐剂；
J、采用0.2μM无菌过滤器进行过滤，即得到应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液。
2.如权利要求1所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的步骤B中的小球藻为0.01-100％的小球藻来自温度>35℃的温泉水中分离的菌株。
3.如权利要求2所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的步骤B中的小球藻为45-75％的小球藻来自温度>35℃的温泉水中分离的菌株。
4.如权利要求1所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的温泉小球藻提取物溶液中，包括以下重量百分比的成分：小球藻提取物3-6％、苯氧乙醇0.8-1.2％、水余量。
5.如权利要求4所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的温泉小球藻提取物溶液中，包括以下重量百分比的成分：小球藻提取物4.5％、苯氧乙醇1％、水余量。
6.如权利要求1所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的温泉小球藻提取物溶液中，富含分子量<5000道尔顿寡肽的小球藻提取物。
7.如权利要求1所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的温泉小球藻提取物溶液中，50％的寡肽的大小为120-500道尔顿。
8.如权利要求4所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的温泉小球藻提取物溶液中，温泉小球藻提取物的蛋白质含量在1.0-2.5％之间。
9.如权利要求1所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的温泉小球藻提取物溶液在化妆品中的用量为0.8-1.25％。
10.如权利要求1所述的应用于化妆品的温泉小球藻提取物溶液的制备方法，其特征在于，所述的温泉小球藻提取物溶液在化妆品中的用量为1.0％。
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