CN106536512B

CN106536512B - 甲酰胺衍生物

Info

Publication number: CN106536512B
Application number: CN201580038374.5A
Authority: CN
Inventors: A-M·德苏扎; M·艾哈迈德; R·A·普尔兹; L·A·鲁尼; N·史密斯; T·J·特罗克斯勒
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2014-05-14
Filing date: 2015-05-14
Publication date: 2019-06-07
Anticipated expiration: 2035-05-14
Also published as: CN106536512A; AP2016009554A0; JP2017515845A; US20150329549A1; TW201623288A; WO2015177646A1; UY36123A; SG11201609311RA; KR20170003667A; AU2015263049B2; EA201692298A1; US20170000770A1; JP6587637B2; TN2016000491A1; EP3143014A1; AR100439A1; AU2015263049A1; EP3143014B1; MX2016014946A; CA2948582A1

Abstract

本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐或共晶体；制备本发明化合物的方法和其治疗用途。本发明还提供药理学活性剂的组合和药物组合物。

Description

甲酰胺衍生物

技术领域

本发明描述了可用于治疗的有机化合物。所述化合物表现出作为选择性Smurf-1抑制剂的性质，因此可用于治疗一系列病症特别是肺动脉高压以及其它病症例如青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。

背景技术

Smurf-1(Smad泛素化调节因子1)是E3泛素连接酶的HECT家族的成员，其标记用于通过泛素依赖性蛋白水解途径进行蛋白水解降解的特异性底物。Smurf-1的主要底物包括RhoA、骨形态发生蛋白(BMP)受体(BMPR)1和2、smad1和5、TNFα受体相关因子(TRAF)6和myD88(Andrews,P.S.等人.Assay Drug Dev.Technol.2010)。鉴于底物列表，Smurf-1在调节BMP信号传导(Chen,D等人.Growth Factors,2004)、神经元细胞极性(Stiess,M.和Bradke,F.Neuron,2011)、细胞迁移(Huang,C.Cell Adh.Migr.2010)、肿瘤细胞侵袭(Sahai,E.等人.JCB,2007)、线粒体自噬(Orvedahl,A.Nature,2011)、间质干细胞增殖(Zhao,L.等人.J.Bone Miner.Res.2010)和上皮-间质转化(EMT)(Ozdamar,B等人.Science2005)中起作用。

肺动脉高压(PAH)是多种病因的威胁生命的攻击性的和复杂的疾病，其特征在于导致右心室肥大/衰竭的进行性肺血管病变，并且在大多数情况下导致过早死亡。目前的药理疗法是姑息的。虽然已经观察到预期寿命的改善，但是目前的疗法重点在于改变疾病的血管收缩元件，其不会停止或逆转疾病的进展，并且移植(双肺或心肺)仍然是唯一的根治疗法。鉴于目前治疗类别的有限效果，需要靶向PAH的潜在进行性肺血管重塑的新型疗法。

转化生长因子β(TGF-β)超家族受体骨形态发生蛋白受体II(BMPR-II)基因中的种系突变在70％的可遗传形式的和一些散发形式的特发性PAH(IPAH)中是普遍的。骨形态发生蛋白是属于TGF-β超家族的信号分子。骨形态发生蛋白最初通过其诱导软骨和骨形成的能力来鉴定，并且随后被鉴定为调节广泛功能的多功能蛋白，所述功能例如多种细胞类型中的增殖、分化和凋亡，所述细胞类型包括成骨细胞、上皮细胞、神经元、免疫细胞和平滑肌细胞。到目前为止，已经鉴定了>20种哺乳动物BMP，但是在哺乳动物中仅克隆了能够与BMP结合的三种I型和三种II型受体(分别为BMPR-I和BMPR-II)。骨形态发生蛋白从多种细胞类型包括肺血管平滑肌细胞和内皮细胞合成和分泌。除了在BMPR-I和-II中的突变之外，来自患有非家族性PAH的患者的肺显示显着降低的血管BMPR-1和-II的水平，这意味着在许多形式的PAH中破坏的BMP信号传导的中心作用(Du,L等人.N.Eng.J.Med,2003)。因此，PAH患者的肺血管系统中BMP信号传导的恢复在用于治疗PAH的新型抗重塑治疗剂的开发中是特别令人感兴趣的。

已经显示Smurf-1介导多种细胞类型包括成骨细胞(Zhao,M等人.JBC,2003)、成肌细胞(Ying,SX等人.JBC,2003)、肺上皮(Shi W,等人.Am.J.Physiol.Cell.Mol.Physiol,2004)、神经元组织(Kallan,T等人.Mol.Cell.Biol,2009)和心内膜细胞(Towsend,TA,等人.Cells Tissues Organs,2011)中BMPR-I、-II以及smad1和5的降解。最近，支持Smurf-1在PAH中的作用的第一个证据出现，其中增强的Smurf-1水平在慢性缺氧和野百合碱临床前体内PAH模型中被观察到，并与BMPR1和2的下调相关(Murakami,K,等人.Exp.Biol.Med,2010和Yang,J.等人.Circ.Res,2010)。

发明内容

仍然需要用于肺动脉高压以及其它病症例如青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的新的治疗和疗法。本发明提供了化合物、其药学上可接受的盐或共晶体、其药物组合物及其组合产品，所述化合物是Smurf-1抑制剂。本发明还提供了治疗、预防或改善肺动脉高压的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的Smurf-1抑制剂。

根据本发明的第一方面，实施方案1提供了式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐或共晶体，其中

R¹是(C₃-C₆)烷基或(C₃-C₆)环烷基；

R²是甲基；

R³是

R⁴和R⁵独立地选自氢、卤代、(C₃-C₆)环烷基、(C₁-C₄)烷基、卤代(C₁-C₄)烷基、(C₁-C₄)烷氧基、卤代(C₁-C₄)烷氧基或-(C₁-C₂)烷基(C₁-C₂)烷氧基；或

R²和R⁴可以与它们所连接的碳原子一起形成氮杂环且R⁵是H；

R⁶是卤代、(C₃-C₆)环烷基、(C₁-C₄)烷基、卤代(C₁-C₄)烷基、(C₁-C₄)烷氧基、卤代(C₁-C₄)烷氧基或-(C₁-C₂)烷基(C₁-C₂)烷氧基；

或

R¹是2-氟苯基；

R²是甲基；且

R³是苯基，其被独立地选自氯和环丙基的一或两个取代基取代。

在本发明的另一个实施方案中，提供了如上所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

在另一实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，或其亚式和一种或多种药学上可接受的载体。

在另一实施方案中，药物组合物包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体。

在另一实施方案中，本发明提供了治疗选自肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合的病症或疾病的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的根据式(I)所定义的化合物或其盐、或其亚式或药学上可接受的盐或共晶体。

在另一实施方案中，本发明提供了治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合以及COPD和哮喘的病症或疾病的方法，其包括施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐至认识到有其需要的受试者。

在另一实施方案中，本发明提供了组合产品，特别是药物组合产品，其包含治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体或其亚式和一种或多种治疗活性剂。

在另一实施方案中，本发明提供了组合产品，特别是药物组合产品，其包含治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种治疗活性剂。

本文描述了本发明的各种实施方案。

详细说明

因此，本发明提供如上文作为实施方案1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或共晶体。

实施方案2.根据实施方案1所述的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R¹是异丙基、环丁基或环己基。

实施方案3.根据实施方案1或实施方案2所述的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R¹是环己基。

实施方案4.根据任一前述实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中

R³是

R⁴和R⁶独立地选自氯、氟、环丙基、甲基、甲氧基、三氟甲氧基、三氟甲基；且

R⁵是氢。

实施方案5.根据任一前述实施方案的化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，其中R³是

R⁴和R⁶独立地选自氯和环丙基；且

R⁵是氢。

实施方案6.根据实施方案1所述的式(I)化合物，其中所述化合物选自

实施例1:

1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例2:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(2,4-二氯苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例3:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例4:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例5:

1-(2-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例6:

1-(4-氯苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例7:

1-(2,4-二氯苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例8:

1-(4-氯苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例9:

1-(2-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例10:

1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例11:

1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例12:

1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例13:

1-(4-氯-2-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例14:

1-(4-氯-2-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例15:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(2-环丙基-4-氟苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

实施例16:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺

实施例17:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺.

实施方案7.根据实施方案1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自

实施例10:

实施例11:

实施例12:

1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺和

实施例16:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺；

或其药学上可接受的盐或共晶体。

本文所用的术语“卤代”(或卤素)是指氟、溴、氯或碘，特别是氟、氯。卤素取代的基团和部分例如被卤素取代的烷基(卤代烷基)可以是单-、多-或全卤化的。

本文所用的术语“烷基”是指具有至多10个碳原子的完全饱和的支链或非支链烃部分。除非另有规定，烷基是指具有1至10个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的烃部分。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。支链烷基的代表性实例包括但不限于异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基等。取代的烷基是含有一个或多个例如一个、两个或三个选自卤素、羟基或烷氧基的取代基的烷基。

本文所用的术语“卤代烷基”是指如本文所定义的烷基，其被一个或多个如本文所定义的卤代基团取代。卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基或多卤代烷基，包括全卤代烷基。单卤代烷基可以在烷基内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基可以在烷基内具有两个或更多个相同的卤素原子或不同卤素基团的组合。通常，多卤代烷基含有至多12、或10、或8、或6、或4、或3、或2个卤代基团。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指所有氢原子被卤素原子替换的烷基。

如本文所用的术语“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上文所定义。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、环丙氧基-、环己氧基-等。通常，烷氧基具有1-4个碳原子。

本文所用的术语“卤代烷氧基”是指如本文所定义的烷氧基，其被一个或多个如本文所定义的卤代基团取代。

本文所用的术语“环烷基”是指3-8个碳原子的饱和单环、双环或螺环烃基。除非另外指出，环烷基是指具有3至6个环碳原子的环状烃基。

根据起始原料和方法的选择，化合物可以以可能异构体之一的形式或者作为其混合物存在，例如作为光学纯异构体或者作为异构体混合物诸如外消旋物和非对映异构体混合物存在，这取决于不对称碳原子的数目。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。可以用手性合成子或手性试剂制备或者用常规技术拆分光学活性的(R)-和(S)-异构体。如果化合物包含双键，取代基可以是E或Z构型。如果化合物包含二取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。还预期包括所有的互变异构形式。

含有能够充当氢键的供体和/或受体的基团的本发明化合物即式(I)化合物能够与适合的共晶体形成剂(co-crystal former)形成共晶体。这些共晶体可由式(I)化合物通过已知的共晶体形成方法制备。此类方法包括研磨、加热、共升华、共熔化或在结晶条件下在溶液中使式(I)化合物与共晶体形成剂接触以及分离由此形成的共晶体。适合的共晶体形成剂包括描述于WO 2004/078163中的那些。因此，本发明进一步提供了包含式(I)化合物的共晶体。

如文中所用，术语“盐”指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和性质的盐，且其通常不是生物学或在其他方面不希望的。

在许多情况下，本发明的化合物能够通过甲酰胺基团或其类似基团形成酸和/或碱盐。

药学上可接受的酸加成盐或共晶体可与无机酸和有机酸形成。

可以由其衍生盐或共晶体的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以由其衍生盐或共晶体的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸等。

药学上可接受的碱加成盐或共晶体可以与无机和有机碱形成。

可以由其衍生盐或共晶体的无机碱包括例如铵盐和元素周期表第I至XII族的金属。在某些实施方案中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、银和锌；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。

可以由其衍生盐或共晶体的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨基丁三醇。

在另一方面，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的式I化合物。

在一个实施方案中，本发明提供乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺。

在另一实施方案中，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺。

在另一实施方案中，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺。

在另一实施方案中，本发明提供了乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐trifenatate或昔萘酸盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺。

在另一方面，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的式I化合物。

在一个实施方案中，本发明提供钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺。

在另一个实施方案中，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺。

在另一个实施方案中，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺。

在另一个实施方案中，本发明提供了钠、钾、铵、钙、镁、银、锌、胆碱盐、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨基丁三醇盐或共晶体形式的N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺。

本文给出的任何式亦意欲表示未标记形式和同位素标记形式的化合物。同位素标记的化合物具有本文给出的式所描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换外。可引入至本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I。本发明包括各种同位素标记的本文定义的化合物，例如存在放射性同位素例如³H和¹⁴C的那些化合物或存在非放射性同位素例如²H和¹³C的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(采用¹⁴C)、反应动力学研究(采用例如²H或³H)、检测或成像技术如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)包括药物或底物组织分布分析，或用于患者的放射治疗。特别是，¹⁸F或标记化合物特别适合用于PET或SPECT研究。式(I)的同位素标记化合物可一般地通过本领域技术人员已知的常规技术或者通过所附的实施例和制备中描述的那些方法的类似方法，利用适当的同位素标记试剂替换先前所用的非同位素标记试剂进行制备。

此外，用较重同位素、特别是氘(即²H或D)取代可因更大的代谢稳定性而提供一些治疗优势，例如体内半衰期延长或所需剂量降低或治疗指数提高。应理解，在此情况下氘被视为式(I)化合物的取代基。该较重同位素特别是氘的浓度可通过同位素富集因子来界定。本文所用的术语“同位素富集因子”是指特定同位素的同位素丰度与天然丰度的比率。如果本发明化合物中的取代基表示为氘，则对于各指定氘原子，该化合物具有至少3500(在各指定氘原子处具有52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。实施方案8提供式(I)化合物或药学上可接受的盐或共晶体，其中当R³是

时；

R⁴和R⁶独立地选自氯、氟、环丙基、甲基、甲氧基、三氟甲氧基、三氟甲基；所述甲基和甲氧基基团可以被氘代。

根据本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶的溶剂可以是同位素取代的那些例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

如本文使用的术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣剂、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗细菌剂、抗真菌剂)、等张剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等物质及其组合，如本领域普通技术人员已知的那样(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，Mack Printing Company,1990,第1289-1329页)。涵盖任意常规载体在治疗或药物组合物中的应用，除非其与活性成分不相容。

术语本发明化合物的“治疗有效量”是指将引发受试者的生物学或医学响应、例如降低或抑制酶或蛋白质活性、或改善症状、缓和病状、减缓或延缓疾病进展或预防疾病等的本发明化合物的量。在一非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于受试者时对以下各项有效的本发明化合物的量：(1)至少部分缓和、抑制、预防和/或改善(i)由Smurf-1介导的或(ii)与Smurf-1活性有关的或(iii)特征在于Smurf-1活性(正常或异常的)的病患或病症或疾病；或(2)减轻或抑制Smurf-1活性或(3)减轻或抑制Smurf-1的表达。在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于细胞或组织或非细胞生物学材料或介质时有效地至少部分减轻或抑制Smurf-1活性或者至少部分减轻或抑制Smurf-1的表达的本发明化合物的量。

如本文所用的术语“受试者”是指动物。典型地所述动物是哺乳动物。受试者也是指例如灵长类动物(例如人，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述受试者是灵长类动物。在其他实施方案中，所述受试者是人。

如本文所用的术语“抑制”是指特定的病况、症状或病症或疾病的减轻或遏抑，或者生物学活性或过程的基线活性的显著降低。

如本文所用的术语“治疗”任何疾病或病症在一个实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在又一个实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在又一个实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发展或恶化。

如本文所用，如果受试者在生物学上、医学上或生活质量上受益于此类治疗，则受试者是“需要”治疗的。

如本文所用，本发明的语境(尤其在权利要求的语境)中所用的术语“一个/种(“a”,“an”)”、“该(the)”和类似术语被解释为包括单数和复数，除非本文另有指明或与上下文明显矛盾。

本文所述的所有方法可以以任何适宜的顺序进行，除非本文另有指明或与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例和示例性语言(例如“如”)的使用仅仅旨在更好地说明本发明而不限制另外要求保护的本发明的范围。

本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集例如(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在。在一些实施方案中，每个不对称原子就(R)-或(S)-构型具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％对映体过量或至少99％对映体过量。具有不饱和双键的原子上的取代基可以(如有可能的话)以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。

因此，如本文所用，本发明化合物可以为可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如作为基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映体、旋光异构体(对映体)、外消旋物或其混合物。

通过色谱和/或分步结晶，根据成分的物理化学差异，可将任何得到的异构体混合物拆分为纯或基本上纯的几何或光学异构体、非对映体、外消旋物。

任何所得到的终产物或中间体的外消旋物可通过已知方法例如通过分离与光学活性酸或碱获得的其非对映体盐并且释放该光学活性酸性或碱性化合物而拆分成旋光对映体。特别是，碱性部分由此可用于将本发明化合物拆分成它们的旋光对映体，例如通过对与光学活性酸如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O′-对甲苯酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐进行分步结晶来拆分。外消旋产物也可通过手性色谱法例如高压液相色谱法(HPLC)使用手性吸附剂来拆分。

此外，本发明化合物包括其盐还能够以其水合物的形式得到或者包含用于其结晶的其他溶剂。本发明化合物可固有地或经设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，预期本发明包括溶剂化的或未溶剂化的形式。术语“溶剂合物”指本发明化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子络合物。所述溶剂分子是药学领域常用的那些，已知其对于接受者是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”指溶剂分子是水的所述络合物。

本发明化合物包括其盐、水合物和溶剂合物可以固有地或经设计形成多晶型物。

一般流程

本发明的化合物可以通过以下流程或实施例中描述的路线制备。

所有缩写如下文实施例部分所定义。

流程1

步骤1：重氮化

典型条件：a)亚硝酸钠在0-5℃，在合适的溶剂中，加入亲核叠氮化物源

优选条件：亚硝酸钠，在乙酸中，在0℃下，在叠氮化钠的存在下。

步骤2：环化

典型条件：在50-80℃，在极性溶剂中，酮酯(betoketo ester)和强碱。

优选条件：3-氧代丁酸甲酯与甲醇钠，在甲醇中在60℃下

步骤3a皂化

典型条件：合适的碱水溶液，任选合适的共溶剂如THF

优选条件：2M氢氧化钠(aq.)与THF，在室温，30分钟

步骤3b酰胺偶联

典型条件：在合适的非质子溶剂中，在合适的碱例如三乙胺、DIPEA等的存在下，合适的偶联试剂如草酰氯、HATU、T3P、EDCI等。

优选条件：草酰氯、DMF(催化的)、DCM、三乙胺

流程2

步骤1：钯催化的烯丙基化交叉偶联反应。

典型条件：钯(0)催化剂；烯丙基锡烷；在合适的溶剂中；在80-110℃

优选条件：四三苯基膦钯(0)，烯丙基三丁基锡，在DMF中，80℃

步骤2：酰胺偶联

典型条件：在合适的非质子溶剂中，在合适的碱例如三乙胺存在下，合适的酰氯如丙烯酰氯。

优选条件：丙烯酰氯、三乙胺，在四氢呋喃中，在-10℃

步骤3：环闭合复分解

典型条件：合适的催化剂，在合适的溶剂中。

优选条件：5％{[2-(异丙氧基)-5-(N,N-二甲基氨基磺酰基)苯基]亚甲基}(三环己基膦)二氯化钌(II)，在DCM中。

步骤4氢化

典型条件：不溶性钯催化剂，氢气，在合适的溶剂如醇中

优选条件：10％钯碳和氢气，在乙醇中。

步骤5硫代酰胺形成

典型条件：适当的硫源，在加热下，在适当的溶剂中

优选条件：Lawesson试剂，在甲苯中，在110℃

步骤6甲基化

典型条件：卤甲烷，在合适的碱存在下在合适的溶剂中

优选条件：碘甲烷，在氢氧化钾存在下，在丙酮中。

步骤7缩合反应

典型条件：α硝基酯，在非亲核碱的存在下，加热

优选条件：硝基乙酸乙酯和DBU，在40℃

步骤8还原性三唑形成

优选条件：锌和亚硝酸异戊酯，在乙酸和三氯乙酸中。

步骤9皂化

典型条件：合适的碱水溶液，任选合适的共溶剂如THF

优选条件：2M氢氧化钠(aq.)与THF和甲醇，在室温下，30分钟。

步骤10酰胺偶联

本发明还包括本方法的任何变体，其中在其任何阶段可获得的中间体产物用作起始原料并且进行其余步骤，或其中起始原料在反应条件下原位形成或其中以它们的盐或光学纯物质的形式使用反应组分。

根据本领域技术人员普遍已知的方法，本发明化合物和中间体还可互相转化。

另一方面，本发明提供包含本发明化合物或其药学上可接受的盐或共晶体，以及药学上可接受的载体的药物组合物。在另一实施方案中，所述组合物包含至少两种药学上可接受的载体例如文中所述的那些。对本发明来说，除非另外指出，通常将溶剂合物和水合物用于组合物。优选地，药学上可接受的载体是无菌的。药物组合物可以被配制以用于特定的施用途径，例如口服施用、胃肠道外施用和直肠施用等。此外，本发明的药物组合物还可以被制备为固体形式(包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)，或者液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)。药物组合物可以经过常规的药物操作如灭菌，和/或可以含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅助剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。

典型地，药物组合物是包含活性成分，以及一种或多种下述成分的片剂和明胶胶囊：

a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还包含

c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还包含

d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或者泡腾混合物；和

e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。

可以按照本领域已知的方法对片剂进行薄膜包衣或肠溶包衣。

适合的口服施用的组合物包括片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或者糖浆剂或酏剂形式的有效量的本发明化合物。按照本领域已知的制备药物组合物的任意方法来制备用于口服使用的组合物，并且这类组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供药学上美观和可口的制剂。片剂可含有与适合制备片剂的无毒、药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂是例如：惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂是未被包衣的或者通过已知技术对其进行包衣，以延缓在胃肠道中的崩解和吸收并由此提供历经较长时间的持久作用。例如，可以采用时间延迟材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的制剂可以被制备成硬明胶胶囊剂，其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者被制备成软明胶胶囊剂，其中活性成分与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

某些可注射的组合物是水性等张溶液或混悬液，并且栓剂可由脂肪乳剂或混悬剂有利地制备。所述的组合物可以被灭菌和/或含有辅剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可以含有其它在治疗上有价值的物质。所述组合物可分别按照常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且含有约0.1-75％或包含约1-50％的活性成分。

适合透皮应用的组合物包含有效量的本发明化合物和适合的载体。适用于透皮递送的载体包括可吸收的药理学可接受的溶剂，以帮助穿过宿主的皮肤。例如，透皮装置是绷带形式的，该绷带包含背衬部分、含有化合物和任选的载体的贮库、任选的速率控制屏障(以便历经较长时间以受控和预定的速率递送化合物至宿主皮肤)和固定该装置于皮肤的器具。

适合的局部应用、例如应用于皮肤和眼的组合物包括水性溶液剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾的制剂，例如用于通过气雾剂等递送的那些制剂。这类局部递送系统将特别适于皮肤应用，例如用于治疗皮肤癌、例如在防晒霜、洗剂、喷雾剂中的预防性应用等。因此，它们特别适用于本领域众所周知的局部制剂，包括化妆品。这类制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。

如本文所用，局部应用也可涉及吸入或鼻内应用。它们可方便地以干粉形式(单独地或作为混合物、例如与乳糖的干掺合物，或为混合的成分颗粒(例如与磷脂的))由干粉吸入器递送，或为气雾剂喷雾呈递形式由加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷射器递送，使用和不使用适宜的抛射剂。

本发明还提供了包含本发明化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可以促进某些化合物的降解。

本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水或低水分含量的成分和低水分或低湿度条件制备。无水药物组合物可以制备和储存，以保持其无水性质。因此，使用已知防止暴露于水的材料包装无水组合物，使得它们可包括在合适的制剂套盒中。合适的包装的实例包括但不限于密封箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条状包装。

本发明还提供了药物组合物和剂型，其包含一种或多种降低作为活性成分的本发明化合物分解速率的物质。这些物质在本文中称为“稳定剂”，包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。

游离形式或药学上可接受盐形式的式I化合物显示有价值的药理性质例如Smurf-1调控性质，如同下面部分提供的体外和体内测试所显示的，并由此表明用于治疗或者作为研究化学品例如工具化合物。

本发明化合物可用于治疗适应症，包括：

肺高血压包括肺动脉高压(PAH)

纤维化

类风湿性关节炎

骨折愈合

青光眼

遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)

蛋白尿

伤口愈合

COPD

哮喘

肺动脉高压(PAH)

肺动脉高压具有多因素病理生理学。血管收缩、肺血管壁的重塑和血栓形成促使PAH中肺血管阻力增加(Humbert等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2004.)。本文公开的本发明的化合物可用于治疗PAH及其症状。肺动脉高压应理解为包括以下形式的肺高血压：特发性PAH(IPAH)；可遗传的PAH(HPAH)；药物或毒素诱导的PAH、与其他病患相关的PAH(APAH)例如与结缔组织疾病相关的PAH、与HIV感染相关的PAH、与门静脉高压相关的PAH、与先天性心脏病相关的PAH、与血吸虫病相关的PAH、与慢性溶血性贫血相关的PAH或新生儿的持续性肺高血压(等人,ERJ,2009；Simonneau等人,JACC,2009)。

特发性PAH是指未确定原因的PAH。可遗传的PAH是指怀疑或记录遗传性传播的PAH，包括在BMP受体、BMPR2潜伏突变的那些或具有ALK1或内皮因子突变(具有或不具有遗传性出血性细血管扩张)的那些。

与药物或毒素相关的PAH应理解为包括与摄入下列物质相关的PAH:阿米雷司、芬氟拉明化合物(例如芬氟拉明或右芬氟拉明)、某些毒性油(例如油菜籽油)、吡咯里西定(pyrrolizidine)生物碱(例如灌木茶(bush tea))、野百合碱、苯丙胺类、L-色氨酸、甲基苯丙胺类、可卡因、苯丙醇胺、圣约翰草(St John’s Wort)、化学治疗剂或SSRI’s。

与结缔组织疾病相关的PAH应理解为包括与系统性硬化、肺纤维化、多发性肌炎、类风湿性关节炎、干燥综合征(Sjogren syndrome)相关的PAH或与系统性红斑狼疮相关的PAH。

与先天性心脏病相关的PAH应理解为包括具有全身性肺分流的患者、与艾森曼格(Eisenmenger)综合征、小室间隔或心房间隔缺损相关的PAH或与校正性心脏手术相关的PAH。

与慢性溶血性贫血相关的PAH应理解为包括患有慢性遗传性和获得性贫血的患者，包括患有镰状细胞病、地中海贫血、遗传性球形红细胞增多症、口形红细胞增多和微血管病性溶血性贫血的患者。

PAH的症状包括呼吸困难、心绞痛、晕厥和水肿(McLaughlin等人.,Circulation,2006,114:1417-1431)。本文公开的本发明的化合物可用于治疗PAH的症状。

肺高血压(PH)

肺高血压(PH)应理解为与根据Dana Point临床分类(Simonneau,G等人.JACCC,2009)分组的以下病症相关：

第1'组-PH应理解为与患有肺静脉闭塞性疾病(PVOD)和肺毛细血管血管瘤病(PCH)的患者相关。

第2组-与左心脏病相关的PH包括具有左侧心室或瓣膜疾病的那些患者。

第3组-由于肺部疾病和/或缺氧引起的PH。导致PH的肺疾病应理解为包括肺纤维化、肺气肿、肺纤维化和肺气肿联合、支气管扩张、囊性纤维化和慢性阻塞性肺病(COPD)的患者。

第4组-与慢性血栓栓塞(CTEPH)相关的PH。

第5组-与不清楚或多因素病因相关的PH。这类PH患者应理解为包括以下组之一的患者：1)慢性骨髓增殖性疾病，包括真性红细胞增多症、原发性血小板增多症或慢性髓性白血病；2)系统性疾病，包括结节病、导致肺毛细血管床破坏的病症例如纤维化、大肺动脉的外源性压迫、肺部朗格汉氏(Langerhan’s)细胞组织细胞增多症的患者、淋巴管平滑肌瘤病、1型神经纤维瘤病和抗中性粒细胞胞质抗体相关的血管炎；3)代谢性疾病，包括Ia型糖原贮积病、葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、戈谢(Gaucher)病和甲状腺疾病(甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进)；4)包括具有扩展到肺动脉内腔中的肿瘤、通过转移性肿瘤栓塞的肺微血管闭塞、纵隔纤维化的患者或具有接受长期血液透析的终末期肾病的患者。

纤维化

已经显示TGFβ/BMP信号传导途径的失调在包括肾、心脏、肺、皮肤、胰腺和肝脏的各种器官的纤维化中以及在全身性硬化症和相关病变中具有致病作用(由Leask和Abraham,FASEB,2004综述)。已经显示BMP7抵消TGFβ1-诱导的上皮-间质转化(EMT)(Zeisberg,M等人.Nat.Med,2003)和胶原诱导(Izumi,N等人.AJP.Lung,Cell,Mol.,Physiol.2005)，两者是纤维化发展的关键机制。在肾脏的进行性肾小管间质性纤维化的单侧输尿管阻塞(UUO)小鼠模型中证明了Smurf-1在纤维化病理中的作用的直接证据，其中在与降低水平的保护性Smurf-1底物Smad7相关的患病肾脏中存在增加水平的Smurf-1(Fukasawa，H等人，PNAS，2004)。最近，在肺部上皮细胞中产生的数据中提出了Smurf-1在肺纤维化中的作用，其确定了Smurf-1底物Smad7在限制EMT中的关键作用(Shukla,MA,等人.Am.J.Resp.Cell.Mol.Biol.2009)。本文公开的本发明的化合物可用于治疗纤维化及其症状。纤维化应理解为包括以下：具有肺纤维化、特发性肺纤维化、囊性纤维化、肝硬化、心内膜心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化(progressivemassive fibrosis)、肾源性系统性纤维化、克罗恩病、瘢痕疙瘩、老年心肌梗塞、硬皮病(系统性硬化症)、关节纤维化或粘连性囊炎的患者。

类风湿性关节炎

促炎细胞因子例如肿瘤坏死因子α(TNFα)在慢性炎性病症例如类风湿性关节炎(RA)的发作和维持中起关键作用。骨密度的降低通常与RA相关，并且已经显示Smurf-1在介导RA诱导的骨丢失中起关键作用。显示TNFα引发Smurf-1底物Smad1和Runx2的蛋白水解降解，这两者对骨形成成骨细胞活性是必需的。在smurf-1 KO小鼠中证明了支持这种联系的直接证据，其中TNFα不能影响来自Smurf-1 KO小鼠(而不是相应野生型小鼠)的骨的破骨细胞活性(Guo,R等人.JBC,2008)。本文公开的本发明化合物可用于治疗类风湿性关节炎及其症状。RA应理解为包括具有滑膜细胞肿胀、滑膜关节液过多和关节内纤维组织形成继发的滑膜慢性炎症的患者。此外，RA还应包括具有由于坏死性肉芽肿、血管炎、坏疽性脓皮病、Sweet’s综合征、结节性红斑、小叶性脂膜炎、数字皮肤萎缩、掌红斑或皮肤扩散性变薄引起的RA的患者。RA还延伸到其他器官，并且本文将涵盖患有肺纤维化、肾淀粉样变性、作为RA结果的动脉粥样硬化、心包炎、心内膜炎、左心室衰竭、瓣膜炎和纤维化的患者。RA还将包括具有巩膜外层炎和干燥性角结膜炎的眼睛病症、温自身免疫性溶血性贫血(warmautoimmune hemolytic anemia)的血液病、嗜中性白细胞减少症和血小板增多症(thrmobocytosis)、周围神经病的神经病症、多发性单神经炎和腕管综合征、骨质疏松症和淋巴瘤的患者。

骨折愈合

BMP途径在此发挥作用，Smurf-1抑制剂增加BMP信号。本文公开的本发明的化合物可用于治疗骨折愈合以及移植物的骨整合及其症状。骨折愈合应当被理解为包括骨折修复技术，其中包含有成骨细胞和支持结缔组织可以迁移进入其中的孔的骨内膜移植物被手术植入骨折部位。在插入上述植入物之后施用Smurf-1抑制剂可以有助于植入物的整合，并通过增强分化成成骨细胞的间充质干细胞的增殖来加速恢复(Zhao,M等人.JBC,2004)。

青光眼

升高的眼内压(IOP)是原发性开角型青光眼(POAG)的主要危险因素之一。IOP在前房中通过在睫状体中产生并通过小梁网区域流出的房水维持。在青光眼患者中已观察到与小梁网区域中细胞外基质(ECM)沉积的积累相关的增加房水流出阻力。这种在POAG患者中的ECM病理学类似于在许多非眼系统中由TGFb蛋白诱导的纤维化。TGFb2诱导的IOP增加在临床前体内和离体模型中得到证实。在几个小规模的临床研究中，也已经报道，在房水中的TGFb2蛋白水平在POAG患者中升高。调节青光眼患者中的TGFb活性可潜在地降低IOP并导致新的青光眼疗法(Wordinger RJ JOURNAL OF OCULAR PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS，Volume 30,Number 2,2014)。考虑到Smurf1在通过其底物BMP9和SMAD7调节TGFb信号传导中的作用，本文所述的本发明化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗青光眼。

遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)

遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)，也称为Osler-Weber-Rendu综合征，是影响1:5000至1:40,000的血管遗传性疾病。患有HHT的人具有形成在动脉和静脉之间缺少正常毛细血管的血管的趋势，使得高压下的动脉血液直接流入静脉，其可能破裂和流血。HHT的症状可以表现为轻度至重度，其中90-95％的患者成年时出现流鼻血，90-95％的患者在中年时在脸部或手上发展为毛细管扩张，以及40％的患者出现肺动静脉畸形(AVM)，其构成重大风险。AVM还可以发生在脑、肝脏和肠中，具有不同的健康影响的严重性。HHT可以治疗，最常见的是采用凝血疗法、栓塞术或受影响的组织的手术切除治疗。HHT突变导致BMP信号传导中的单倍剂量不足(Ricard等人.Blood,2010)，导致血管成熟缺陷和脉管系统的过度分支，其部分归因于BMP9信号传导受损(Choi,等人.PlosOne,2013)。Smurf1下调BMP信号传导(Murakami Exp.Biol.Res.2010和Cao,等人.Sci.Rep.2014)，并且已经报道在内皮细胞中表达(Crose,等人.JBC,2009和Human Protein Atlas and GeneCards)，因此，Smurf1抑制剂可用于恢复BMP信号传导并校正血管生成异常。因此，本文所述的本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗HHT。

蛋白尿

尿中异常量的蛋白质是慢性肾脏疾病的最早的征兆之一，其可由高血压、糖尿病或与肾脏炎症相关的疾病引起。如果不治疗，慢性肾脏疾病可能进展为终末期肾脏疾病和肾衰竭。Smurf1涉及与肾功能和蛋白尿相关的多种机制。Smurf1底物Ras同源基因家族成员A(RhoA)在调节肾小球细胞的迁移中起关键作用。Synaptopodin通过阻断Smurf1结合并泛素化RhoA的能力而使得能够在肾足细胞内应激纤维形成，从而促进足细胞运动性和调节肾脏足细胞过滤屏障的筛选性质(Asanuma,等人.Nat.Cell Biol.2006)。此外，转化生长因子(TGF)β的细胞内拮抗剂Smad7在肾脏中起着关键的保护作用。已经显示Smurf1活性泛素化和降解导致肾小管间质性纤维化和肾功能障碍的Smad7(Fukasawa,等人.PNAS 2004)。这些报告一起表明Smurf1抑制剂除阻断与肾脏的促纤维化信号的传播外，可能允许足细胞迁移和维持足细胞过滤屏障，最终对于蛋白尿提供治疗益处。因此，本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗蛋白尿。

伤口愈合

慢性非愈合性伤口在60岁以上的人中最常见，导致显着量的身体疼痛，并且大致分为三组：静脉性溃疡、糖尿病性和压力性溃疡。转化生长因子(TGF)β和骨形态发生蛋白(BMP)信号通路的活性的精确时间在正常伤口愈合中是关键的，调节成纤维细胞迁移和细胞外基质沉积、炎症细胞流入、血管发生和再次上皮化的关键促愈合过程(Pakyari,M等人.Adv.Wound Care 2013)。TGFβ的延长的活化可导致延迟的伤口愈合，并且用抗TGFβ抗体建立的非愈合性伤口的治疗性干预导致改善的愈合和减少的瘢痕肥大(Lu等人.J.Am.Coll.Surg.2005)。Smurf1调节TGFβ和BMP信号传导的程度(MurakamiExp.Biol.Res.2010和Cao,等人.Sci.Rep.2014,Wang等人.J.Cell.Mol.Med.2012)，因此，预期Smurf1抑制剂将标准化过量的TGFβ信号，使得能够治愈慢性伤口。因此，本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗慢性非愈合性伤口和/或一般伤口愈合

COPD和哮喘

气道重塑在患有慢性阻塞性肺病(COPD)或哮喘的患者中是明显的。哮喘中气道重塑的主要特征是纤维化、基底膜增厚、杯状细胞数量增加和平滑肌细胞质量增加、收缩反应增强，这被认为是由负责气道高反应性和可逆性气道阻塞的慢性炎症诱导的(Carroll等人.Am.Rev Resp.Dis.1993,Metcalfe,等人.Physiol.Rev.1997和Roche,等人.Lancet1989)。在COPD中，肺重塑的特征在于在具有鳞状化生、杯状细胞增生和粘液分泌过多的大气道中的上皮的解体，以及在肺气肿发展中具有平滑肌膨胀、纤维化和肺泡破坏的小气道重塑，最终导致气流限制(De,Decramer,等人.Lancet,2012,Pain等人.Eur.Respir.Rev.2014和Chung,Proc.Am.Thorac.Soc.2005)。在这两种疾病中，有下调的BMP信号传导(Kariyawasam,等人.Am.J Resp.Crit.Care Med.2008)和升高的TGFβ(Mak.等人.Respir.Med.2009和Chakir等人.J.All.Clin.Immunol.2003)的证据，其与促重塑机制如成纤维细胞-间质转化(Araya,等人.J.Clin.Invest.2007)、细胞外基质沉积(Baarsma,等人.Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.PHysiol.2011)和炎症(Chakir等人.J.All.Clin.Immunol.2003)相关。Smurf1抑制剂可以使关键的促重塑细胞如平滑肌和成纤维细胞中的TGFβ信号传导正常化，并阻断重塑的进程，导致对COPD或哮喘患者的治疗益处。因此，本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)可用于治疗COPD和/或哮喘

因此，作为另一个实施方案，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在治疗中的用途。在另一个实施方案中，所述治疗选自可通过抑制Smurf-1治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；更适当地为肺动脉高压(PAH)。在另一个实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐在治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的疾病中的用途。

因此，作为另一个实施方案，本发明提供了用于治疗的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述治疗选自可以通过抑制Smurf-1治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；

更适当地为肺动脉高压(PAH)。在另一实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的疾病。

在另一个实施方案中，本发明提供了治疗通过抑制Smurf-1治疗的疾病的方法，其包括施用治疗可接受量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；

更适当地为肺动脉高压(PAH)。在另一个实施方案中，所述疾病选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。

因此，作为另一个实施方案，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。在另一个实施方案中，所述药物用于治疗疾病，其可通过抑制Smurf-1来治疗。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表，适当地选自肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合；更适当地为肺动脉高压(PAH)。在另一个实施方案中，所述疾病选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。

在本发明的一个实施方案中，提供了1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合。

在本发明的另一个实施方案中，提供了1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。

在本发明的另一个实施方案中，提供了1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合。

在本发明的另一个实施方案中，提供了1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。

在本发明的另一个实施方案中，提供了1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合。

在本发明的另一个实施方案中，提供了1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。

在本发明的另一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐或共晶体，其用于治疗肺高血压包括肺动脉高压(PAH)、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合。

在本发明的另一个实施方案中，提供了N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于治疗青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘。

对于约50-70kg的受试者，本发明的药物组合物或组合可以是约1至1000mg活性成分的单位剂量，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg、或约1-50mg活性成分。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的种类、体重、年龄和个体状况、待被治疗的病症或疾病或其严重程度。普通技术的医师、临床医师或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制病症或疾病的进展所需的每种活性成分的有效量。

上述的剂量性质可有利地采用哺乳动物例如小鼠、大鼠、狗、猴或分离的器官、组织及其制备物在体外和体内试验中证实。本发明的化合物可以以溶液例如水溶液的形式体外施用，以及以肠内、胃肠外、有利地静脉内例如作为混悬液或水溶液在体内施用。体外剂量可以在为10-³-10-⁹摩尔浓度。体内的治疗有效量可以取决于施用途径，在约0.1-500mg/kg或约1-100mg/kg之间。

根据本发明的化合物的活性可以通过以下体外和体内方法评价。

药物测定

本发明的化合物及其药学上可接受的盐，以下也称为“本发明的活性剂”可用作药物。特别是，所述化合物是选择性Smurf-1抑制剂，并且可以在以下测定中测试。

为了测定化合物的HECT E3连接酶选择性，使用一组(panel)生物化学HECT E3连接酶自泛素化(autoubiquitinylation)测定(Smurf-1、Smurf-2、WWP1、WWP2、ITCH、Nedd4、Nedd4L和E6AP)。泛素与蛋白质底物的缀合是多步过程。在初始的需要ATP的步骤中，在泛素的羧基末端和泛素激活酶(E1)的内部半胱氨酸残基之间形成硫酯键。然后将活化的泛素转移至泛素缀合酶(E2)的特异的半胱氨酸残基。E2将泛素赋予HECT E3连接酶(E3)，从E3其被转移至底物蛋白。HECT E3连接酶可以自泛素化。在该组中使用的TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)测定中检测该事件。反应混合物含有在合适的缓冲液中的E1、E2、标记的-E3、生物素缀合的泛素、所述化合物和ATP，并孵育45分钟以允许E3连接酶的自泛素化。为了通过TR-FRET测量泛素化的E3连接酶的程度，在反应完成后加入与抗生蛋白链菌素(其随后与生物素化泛素结合)缀合的供体荧光团铕穴状化合物(Eu3+穴状化合物)和与标签-特异性的抗体(HA、His或GST)偶联的修饰的别藻蓝蛋白XL665(主要受体荧光团)，其识别各自的E3连接酶融合蛋白。当这两种荧光团通过生物分子相互作用(在该情况下，E3连接酶的泛素化)聚集在一起时，由穴状化合物在激发期间捕获的能量的一部分通过在620nm的荧光发射释放，而剩余的能量转移到XL665。该能量然后由XL665作为在665nm的特异性荧光释放。665nm处的光仅通过具有铕的FRET发射。由于铕穴状化合物存在于测定中，所以即使当生物分子相互作用不使XL665紧密接近时，也检测到620nm的光。

Smurf-1在细胞中的自泛素化导致Smurf-1的蛋白酶体降解。因此，抑制Smurf-1催化结构域消除Smurf-1自泛素化和降解，导致细胞中抑制的Smurf-1蛋白的积累。

使用DiscoverX PathHunter ProLabel检测试剂盒，通过测量在四环素诱导型启动子控制下稳定表达Prolabel-标记的Smurf-1的HEK293细胞中的Smurf-1蛋白积累来评估化合物在Smurf-1 HECT结构域的细胞活性。该技术在细胞裂解物的酶互补测定中测量Prolabel-标记的Smurf-1的量。在该方法中，称为ProLabel的β-半乳糖苷酶的小的4kDa互补片段作为与人Smurf-1的N-末端融合物表达。该标签是酶供体(ED)并且能够在与β-半乳糖苷酶的较大部分(称为酶受体的EA)互补以形成功能性β-半乳糖苷酶之后检测靶蛋白水平。将EA外源地加入到细胞裂解物中。使用化学发光底物测量酶活性，并且酶活性与重构的酶的量和Smurf-1水平成比例。

在90％DMSO中以180x[最终]制备测试和参考化合物，并在90％DMSO中以1:3稀释。

对于该生化测定组，将50nl的测试化合物、参考化合物和缓冲液/DMSO对照转移到384孔白色GREINER"SMALL VOLUME"PS板的各个孔中。测定组在室温下在Biomek FX液体处理工作站上运行。向含有在90％DMSO中的50nl化合物或对照溶液的测定板中，每孔加入4.5ul E3连接酶溶液，随后加入4.5ul预孵育的E1/E2/Ub混合物或预稀释的泛素(LOW对照)。每次添加后剧烈摇动平板。在该测定中，化合物浓度在8点剂量-反应曲线中为3nM至10uM。

孵育45分钟后，通过加入4.5ul 2mM NEM，随后立即加入4.5ul包含XL665-标记的抗体和抗生蛋白链菌素偶联的铕的检测溶液，使总体积为18ul，停止泛素化反应。在黑暗中孵育45分钟后，将板转移到Pherastar荧光读数器中以测量TR-FRET信号。

对于细胞测定，然后将250nl的测试化合物、参考化合物和缓冲液/DMSO对照转移到无菌的120ul 384孔白色GREINER PS,CELLSTAR,uClear组织培养板的各个孔中。为了在加入细胞之前将化合物溶液均匀地分布在培养基中，使用MULTIDROP 384分配器将10ul细胞培养基加入含有化合物的板的每个孔中并剧烈振荡。在与胰蛋白酶-EDTA短暂温育后，将细胞从烧瓶中分离，计数并在培养基中稀释至1.5x10⁶细胞/ml的浓度。通过加入多西环素至0.2ug/ml的终浓度诱导Smurf-1的表达。通过使用MULTIDROP 384分配器将10ul细胞悬浮液加入到含有化合物的平板的每个孔中。将板在37℃、5％CO₂下温育过夜。在该测定中，化合物浓度在8点剂量-反应曲线中为6.75nM至22.5uM。

与化合物孵育过夜后，使用来自DiscoverX的PathHunter Prolabel检测试剂盒测定Smurf-1的水平。首先使用多通道步阶-移液器手动添加10ul裂解/CL检测工作溶液，然后加入5ul酶受体EA。将板在板振荡器上混合，并在室温下孵育2-3小时，然后在PherStar读板器中测量化学发光信号。

以下实施例的化合物具有如表A所示的在上述数据测量中的Smurf-1IC₅₀值。

表A.

实施例	Smurf-1/IC50nM
		1	440
2	570
		3	890
4	1200
		5	550
6	8200
		7	5800
8	2800
		9	4400
10	92
		11	1000
12	98
		13	3300
14	230
		15	4500
16	55
		17	3100

本发明的化合物可以与一种或多种其它治疗剂同时或在其之前或之后施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的施用途径单独施用，或者与其它治疗剂在相同的药物组合物中一起施用。治疗剂是当例如与本发明化合物联合施用至患者时具有治疗活性或增强治疗活性的化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸。

在一个实施方案中，本发明提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种其它治疗剂的产品，作为用于在治疗中同时、分别或顺序使用的组合制剂。在一个实施方案中，治疗是治疗由Smurf-1介导的疾病或病症。作为组合制剂提供的产品包括在相同的药物组合物中一起包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和其它治疗剂的组合物，或者包含单独形式例如药盒的形式的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和其它治疗剂合物。

在一个实施方案中，本发明提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和另一种治疗剂的药物组合物。任选地，药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。

在一个实施方案中，本发明提供了包含两种或更多种分开的药物组合物的药盒，其中至少一种药物组合物含有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，药盒包含用于分开地容纳所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶或分开的箔包。这种药盒的一个实例是泡罩包装，通常用于包装片剂、胶囊等。

本发明的药盒可以用于施用不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型，用于以不同的剂量间隔施用分开的组合物，或用于彼此剂量调整(titrating)分开的组合物。为了辅助顺应性，本发明的药盒通常包括施用说明。

在本发明的组合治疗中，本发明的化合物和其它治疗剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，本发明的化合物和其它治疗剂可以如下一起进入组合疗法：(i)在将组合产品释放给医生之前(例如在包含本发明化合物和其它治疗剂的药盒的情况下)；(ii)由医生本人(或在医生的指导下)在给药前不久；(iii)在顺序施用本发明的化合物和其它治疗剂期间由患者自己。

因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗由Smurf-1]介导的疾病或病症的用途，其中所述药物被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的用途，其中所述药物与式(I)化合物或其药学上可接受的盐一起施用。

本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的另一种治疗剂，其中所述其它治疗剂被制备用于与式(I)化合物或其药学上可接受的盐一起施用。本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的方法中的另一种治疗剂，其中所述其它治疗剂与式(I)化合物或其药学上可接受的盐一起施用。

本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用另一种治疗剂治疗。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由Smurf-1介导的疾病或病症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用式(I)化合物或其药学上可接受的盐治疗。

以下实施例旨在说明本发明，而不应解释为对其的限制。温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，所有蒸发在减压下进行，通常在约15mm Hg至100mm Hg(＝20-133mbar)之间。最终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析方法例如微量分析和波谱特征例如MS、IR、NMR确认。所使用的缩写是本领域中常规的那些。

用于合成本发明化合物的所有原料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂可商购或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。此外，本发明的化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备，如以下实施例所示。

一般条件：

由以下配置的一系列仪器采用电喷雾、化学和电子碰撞电离方法，在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系统上获得质谱：具有Agilent 6110质谱仪的Agilent 1100 HPLC系统，[M+H]+是指化学物种的质子化分子离子。

NMR谱在Bruker AVANCE 400MHz或500MHz NMR波谱仪上使用ICON-NMR，在TopSpin程序控制下进行。除非另有说明，波谱在298K下测量，并相对参考溶剂共振。

仪器

MS方法：使用Agilent 1100 HPLC系统和Agilent 6110质谱仪

LowpH_v002

2minLC_v003

8minLowpHv01:

2minLowpH:

2minLowpHv01:

2minLowpHv03:

2minHighpHv03:

10minLowpHv01:

LCMS(SRPb)

缩写：

aq 含水的

br 宽的

d 双峰

dd 双二重峰

DCM 二氯甲烷

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

Et₃N 三乙胺

Et₂O 乙醚

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

g 克

H₂ 氢

HCl 盐酸

hr/h 小时

ihex 异己烷

K₂CO₃ 碳酸钾

KF 氟化钾

KOH 氢氧化钾

L 升

LC-MS 液相色谱和质谱法

MeCN 乙腈

MeI 碘甲烷

MeOH 甲醇

MS 质谱法

mult(s) 多重峰

mg 毫克

min 分钟

ml 毫升

mm 毫米

mmol 毫摩尔

m/z 质荷比

N₂ 氮气

NaHCO₃ 碳酸氢钠

NaOMe 甲醇钠

Na₂SO₄ 硫酸钠

NMR 核磁共振

P(chex)₃ 三环己基膦

Pd(OAc)₂ 乙酸钯(II)

Pd(Ph₃P)₄ 四(三苯基膦)钯(0)

ppm 百万分之

psi 磅/平方英寸

q 四重峰

Rt 保留时间

RT 室温

s 单峰

sat 饱和的

SiCO₃ 硅石结合的碳酸盐(silica bound carbonate)

t 三重峰

tt 三重峰的三重峰(triplet of triplets)

TBME 甲基叔丁基醚

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TMSN₃ 叠氮化三甲基硅烷

T₃P 丙基膦酸酐

UV 紫外

μL 微升

仪器

如果没有另外说明，分析条件如下：

LCMS方法A

LCMS方法B

LCMS方法C

HPLC方法D

Prep方法E

Prep方法F

Prep方法G

LCMS方法H

HPLC方法I

方法2minLowpH

方法2minLowpHv01

方法10minLowpHv01

方法2minLowpHv02

方法2minLowpHv03

最终化合物的制备

实施例1:

步骤1:1-叠氮基-2-氯-4-甲氧基苯

将2-氯-4-甲氧基苯胺(200mg,1.269mmol)的乙酸(15mL)和水(15ml)溶液搅拌并在冰浴中冷却。滴加加入亚硝酸钠(88mg,1.269mmol)的水(2ml)溶液并在冰冷却下将混合物搅拌10mins。滴加加入叠氮化钠(83mg,1.269mmol)的水(2ml)溶液，并将混合物在冰冷却下搅拌5mins，然后在RT搅拌30mins。向得到的混合物中加入2M NaOH(aq)直到成碱性并将其用乙醚萃取(2x)。将有机萃取物用MgSO₄干燥，过滤并在真空下浓缩，得到标题化合物，为棕色固体。

LC-MS:Rt 1.23mins；MS m/z没有质量离子[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.34(1H,d),7.12(1H,d),7.01(1H,dd),3.77(3H,s).

步骤2:1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸

向搅拌的1-叠氮基-2-氯-4-甲氧基苯(162mg,0.882mmol)和3-氧代丁酸甲酯(0.286ml,2.65mmol)的MeOH(10ml)溶液中滴加加入甲醇钠(5M的MeOH溶液)(1.059ml,5.29mmol)并将混合物在50℃加热16hrs。将得到的混合物用水稀释，用乙醚洗涤(2x)并将有机萃取物弃去。向水层中加入5M HCl(aq)直到成酸性，并将析出的固体通过过滤收集，用水洗涤并在真空管中干燥，得到标题化合物，为灰白色固体。

LC-MS:Rt 0.93mins；MS m/z 268.1[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.2(1H,br s),7.63(1H,d),7.39(1H,d),7.17(1H,dd),3.89(3H,s),2.32(3H,s).

步骤3:1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

在氮气气氛下，向草酰氯(63μl,0.717mmol)和DMF(74μl,0.956mmol)的干燥DCM(2ml)溶液中加入1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(115mg,0.430mmol)并将混合物在RT搅拌1hr。加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体A)(100mg,0.478mmol)的干燥DCM(1ml)溶液，随后加入三乙胺(0.200ml,1.433mmol)并将反应混合物在RT搅拌48hrs。

将得到的混合物上载至预湿的(MeOH)1gPE-AX/SCX-2柱上，并用MeOH洗涤，收集洗脱液。在减压下浓缩洗脱液并将得到的残留物溶解在DMSO(0.9mL)中，并通过反相色谱法(Prep方法E)纯化。将产物流分在减压下浓缩，用sat.NaHCO₃(aq)稀释并用DCM萃取。使有机萃取物通过相分离柱并在减压下浓缩洗脱液，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 4.44mins；MS m/z 461.2[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.36(1H,s),7.32(1H,d),7.13(1H,d),6.98(1H,dd),4.06(1H,mult),3.90(3H,s),3.24(3H,s),2.46(3H,s),2.23(3H,s),1.99(2H,mults),1.87(4H,mults),1.70(1H,mult),1.37(2H,mults),1.23(1H,mult).

实施例2:

类似于实施例1那样通过用2,4-二氯苯胺替换2-氯-4-甲氧基苯胺(步骤1)来制备标题化合物；

LC-MS:Rt 4.71mins；MS m/z 463.2[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(1H,s),7.66(1H,d),7.49(1H,dd),7.38(1H,d),4.06(1H,mult),3.24(3H,s),2.48(3H,s),2.23(3H,s),1.99(2H,mults),1.87(4H,mults),1.70(1H,mult),1.37(2H,mults),1.22(1H,mult).

实施例3:

类似于实施例1那样通过用4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯胺替换2-氯-4-甲氧基苯胺(步骤1)制备标题化合物。

LC-MS:Rt 4.57mins；MS m/z 493.3[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(1H,s),7.39(1H,d),7.30(1H,d),7.23(1H,dd),4.07(1H,mult),3.97(3H,s),3.25(3H,s),2.42(3H,s),2.24(3H,s),2.01(3H,mults),1.88(2H,mults),1.69(2H,mults),1.38(2H,mults),1.24(1H,mult).

实施例4:

类似于实施例1那样通过用4-甲氧基-3-甲基苯胺替换2-氯-4-甲氧基苯胺(步骤1)制备标题化合物。

LC-MS:Rt 4.47mins；MS m/z 440.5[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(1H,s),7.22(2H,mults),6.95(1H,mult),4.05(1H,mult),3.91(3H,s),3.22(3H,s),2.57(3H,s),2.28(3H,s),2.22(3H,s),1.99(2H,mults),1.86(4H,mults),1.69(1H,mults),1.37(2H,mults),1.22(1H,mult).

实施例5:

类似于实施例1那样通过用2-氯-4-三氟甲氧基苯胺替换2-氯-4-甲氧基苯胺(步骤1)制备标题化合物。通过采用Prep方法G的反相色谱法进行纯化。

LC-MS:Rt:2.10min；MS m/z 513[M+H]⁺；方法A

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.35(1H,s),8.02(1H,d),7.93(1H,d),7.70(1H,mult),3.96(1H,mult),3.24(3H,s),2.36(3H,s),2.05(3H,s),2.05-1.94(2H,mults),1.79-1.76(2H,mults),1.69–1.59(3H,mults),1.36–1.26(2H,mults),1.19-1.13(1H,mult).

实施例6:

类似于实施例1那样通过用1-叠氮基-4-氯苯(0.5M在TBME中)替换1-叠氮基-2-氯-4-甲氧基苯(步骤2)来制备标题化合物。

LC-MS:Rt 4.40mins；MS m/z 431.1[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(1H,s),7.57(2H,mults),7.43(2H,mults),4.05(1H,mult),3.23(3H,s),2.62(3H,s),2.22(3H,s),1.99(3H,mults),1.87(4H,mults),1.70(1H,mult),1.37(2H,mults),1.22(1H,mult).

实施例7:

步骤1-2:1-(2,4-二氯苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸

类似于1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(实施例1步骤1和2)那样通过用2,4-二氯苯胺替换2-氯-4-甲氧基苯胺(实施例步骤1)来制备标题化合物。

LCMS:Rt 4.10mins；MS m/z 274.0[M+H]+；方法10minLowpHv01

步骤3:1-(2,4-二氯苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

将1-(2,4-二氯苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(100mg,0.368mmol)、草酰氯(0.048ml,0.551mmol)和DMF(0.057ml,0.735mmol)的DCM(5ml)溶液在RT搅拌15mins。加入4-氨基-2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体B)(89mg,0.404mmol)，随后加入三乙胺(0.154ml,1.103mmol)并将混合物在RT搅拌30mins。将得到的混合物用DCM稀释，用0.1M HCl(aq)和sat.NaHCO₃(aq)洗涤，并使有机萃取物通过相分离柱，并在减压下浓缩。将得到的棕色油状物吸附到二氧化硅(silica)并通过色谱法纯化，采用0-10％MeOH的TBME溶液洗脱。将产物流分合并，并在减压下浓缩，得到浅粉色固体，将其用乙醚研磨。将得到的固体通过过滤收集并在真空烘箱中干燥，得到标题化合物，为浅粉色固体。

LC-MS:Rt 4.33mins；MS m/z 475.3[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(1H,s),8.08(1H,d),7.83(1H,d),7.77(1H,dd),7.56-7.35(4H,mults),3.09(3H,s),2.39(3H,s),2.20(3H.s).

实施例8:

步骤1:1-(4-氯苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸

类似于1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(实施例1步骤2)那样通过用1-叠氮基-4-氯苯(0.5M在TBME中)替换1-叠氮基-2-氯-4-甲氧基苯来制备标题化合物。

LCMS:Rt 0.86mins；MS m/z 240.1[M+H]+；方法2minLowpH

步骤2:1-(4-氯苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

向搅拌的1-(4-氯苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(100mg,0.421mmol)、草酰氯(0.041ml,0.463mmol)和DMF(0.065ml,0.842mmol)的干燥DCM(5ml)溶液中加入4-氨基-2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体B)(102mg,0.463mmol)的干燥DCM(1ml)溶液，随后加入三乙胺(0.176ml,1.262mmol)并将混合物在RT搅拌1hr。将得到的混合物用DCM稀释，并用0.1M HCl(aq)和sat.NaHCO₃(aq)洗涤。使有机萃取物通过相分离柱，并在减压下浓缩。将得到的固体吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，采用0-10％MeOH的TBME溶液洗脱。将产物流分合并，并在减压下浓缩，得到玻璃状固体，将其混悬在1:1异己烷:Et₂O中，在50℃加热2h，塞住并冷却至16hrs。将固体通过过滤收集并在真空管中干燥，得到标题化合物，为浅黄色固体。

LC-MS:Rt 4.04mins；MS m/z 441.4[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(1H,s),7.75-7.70(4H,mults),7.53(1H,mult),7.47-7.35(3H,mults),3.08(3H,s),2.55(3H,s),2.19(3H,s).

实施例9:

步骤1-2:1-(2-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸

类似于1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(实施例步骤2)那样通过用2-氯-4-三氟甲氧基苯胺替换2-氯-4-甲氧基苯胺(步骤1)来制备标题化合物。

步骤3:1-(2-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

将DMF(43μL,0.56mmol)溶解在DCM(1mL)中并冷却至0℃。加入草酰氯(27μL,0.308mmol)，随后加入1-(2-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(90mg,0.28mmol)并将反应混合物搅拌10min。加入4-氨基-2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体B)(62mg,0.28mmol)，随后加入三乙胺(117μL,0.839mmol)。使反应升温至RT并搅拌4h。将饱和NaHCO₃水溶液加至反应混合物中，并将产物用DCM萃取。将有机萃取物干燥，并在减压下浓缩。将粗物质通过反相色谱法(Prep方法G)纯化，得到标题化合物。

LC-MS:Rt:2.08min；MS m/z 525[M+H]⁺；方法A

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.57(1H,s),8.02(1H,d),7.94(1H,d),7.72-7.69(1H,mult),7.52-7.33(4H,mult),3.07(3H,s),2.38(3H,s),2.18(3H,s).

实施例10:

步骤1:2-氯-4-环丙基苯胺

在氮气气氛下，向甲苯(1470mL)和水(60mL)中加入4-溴-2-氯苯胺(63g,305mmol)和环丙基硼酸(26.5g,309mmol)。将混合物冷却并用磷酸钾(227g,1068mmol)分次处理，随后加入P(cHex)3(8.56g,30.5mmol)。将烧瓶用氮气冲洗，加入Pd(OAc)₂(3.56g,15.87mmol)并将混合物加热至81℃反应7hrs，然后置于RT过周末。再加入环丙基硼酸(5.5g,64mmol)并将混合物加热至81℃反应2hrs，然后冷却至RT。将得到的混合物用水(600mL)稀释。分离水层，并将有机层用水(300mL)和盐水(300mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸干，得到棕色油状物。将油状物吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，采用10-100％EtOAc的庚烷溶液洗脱。将产物流分合并，并在减压下浓缩，得到标题化合物，为绿色晶体。

HPLC方法D:Rt 3.94mins；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.88(1H,d),6.74(1H,dd),6.67(1H,d),5.06(2H,brs),1.78-1.70(1H,mult),0.82-0.76(2H,mults),0.52-0.47(2H,mults).

步骤2:1-叠氮基-2-氯-4-环丙基苯

将2-氯-4-环丙基苯胺(70g,418mmol)溶解在Me-THF(2090mL)中并在冰浴中冷却至0℃。缓慢加入亚硝酸叔丁酯(59.8mL,501mmol)并滴加TMSN₃(66.5mL,501mmol)。将混合物在0℃搅拌30min，并逐渐升温至RT并搅拌2hrs。在冷却下向得到的混合物中缓慢加入sat.NaHCO₃(aq)(250mL)，随后加入水(250mL)。将混合物转移至分离漏斗并用水(1.5L)洗涤，用Na₂SO₄干燥并过滤，得到标题化合物，其没有进一步纯化即用于下一步骤；

HPLC方法D:Rt 5.63mins；

步骤3:1-(2-氯-4-环丙基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸

向粗1-叠氮基-2-氯-4-环丙基苯(0.2M的THF溶液)中加入3-氧代丁酸甲酯(146g,1254mmol)，并将得到的混合物冷却至5℃。缓慢加入NaOMe(232mL,1254mmol)，形成沉淀物，并将混合物在RT搅拌64hrs。将得到的混悬液在冰浴中冷却，并加入水(2L)。将混合物转移至分离漏斗并将水层用Me-THF(500mL)萃取。将水层用2M HCl(aq)酸化并用EtOAc(2L)(1x)和(1L)(2x)萃取。将合并的有机萃取物用水(1L)和盐水(1L)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到橙色油状残留物。加入水(300mL)并将混合物搅拌30min，过滤，用水洗涤并在减压下干燥，得到标题化合物为橙色晶体。

LC-MS:Rt 0.89mins；MS m/z 278.1[M+H]⁺；方法C

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.22(1H,d),7.55(1H,d),7.51(1H,d),7.29(1H,dd),2.31(3H,s),2.08(1H,mult),1.10-1.03(2H,mults),0.87-0.81(2H,mults).

步骤4:1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

使1-(2-氯-4-环丙基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(15g,54.0mmol)和4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体A)(11.30g,54.0mmol)在EtOAc(150mL)中浆化。将反应混合物冷却至10℃，滴加加入三乙胺(18.82mL,135mmol)，随后历经15mins滴加加入T₃P(50％w/w的EtOAc溶液)(47.7mL,81mmol)，保持温度<10℃。将反应混合物升温至RT并搅拌2.5hrs。将得到的混合物用饱和硼氢化钠(aq)(150ml)猝灭。分离各层，并将有机层用饱和硼氢化钠(aq)(50mL)、水(150mL)和盐水(150ml)洗涤。将有机萃取物用MgSO₄和炭干燥。滤除干燥剂，并将滤液在减压下浓缩。将粗物质在乙酸乙酯(335mL)中浆化并在搅拌下加热至回流。将热的混合物过滤，并将滤液接种晶种，并置于室温过夜。将得到的晶状固体通过过滤收集并在减压下在40℃干燥，历经2天，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 1.32mins；MS m/z 469.4&471.4[M+H]⁺；方法2minLowpHv03.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(1H,s),7.59(1H,d),7.53(1H,d),7.32(1H,dd),3.93(1H,tt),3.32(3H,s),2.34(3H,s),2.14-2.07(1H,m),2.06(3H,s),2.05-1.94(2H,brm),1.83-1.75(2H,br m),1.71-1.58(3H,br m),1.39-1.25(2H,br m),1.24-1.12(1H,brm),1.09(2H,m),0.86(2H,m).

实施例11:

将1-(2-氯-4-环丙基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(实施例10,步骤3)(95mg,0.342mmol)、草酰氯(0.045ml,0.513mmol)和DMF(0.053ml,0.684mmol)的DCM(5ml)溶液在RT搅拌15mins。将4-氨基-2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体B)(83mg,0.376mmol)加至混合物中，随后加入三乙胺(0.143ml,1.026mmol)并将其在RT搅拌30mins。将得到的混合物用DCM稀释，用0.1M HCl(aq)和sat.NaHCO₃(aq)洗涤。将有机萃取物通过相分离柱，并在减压下浓缩，得到棕色油状物。将油状物吸附到二氧化硅并通过色谱法纯化，采用0-10％MeOH的TBME溶液洗脱。将产物流分合并，并在减压下浓缩，得到黄色玻璃状固体。将固体溶解在1:1EtOAc:Et₂O中，用水(2x)、盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物，为黄色玻璃状固体。

LC-MS:Rt 4.60mins；MS m/z 481.4[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(1H,s),7.59(1H,d),7.56-7.50(1H,mult),7.53(1H,d),7.47-7.31(4H,mults),3.08(3H,s),2.36(3H,s),2.20(3H,s),2.10(1H,mult),1.11-1.06(2H,mults),0.89-0.85(2H,mults).

实施例12:

向冰冷却的草酰氯(0.033ml,0.378mmol)的DCM(3ml)溶液中滴加加入DMF(0.039ml,0.504mmol)并将混合物搅拌1hr。向混悬液中，加入1-(2-氯-4-环丙基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(实施例10,步骤3)(70mg,0.252mmol)并将混合物在RT在N₂下搅拌1hr。向反应混合物中加入(中间体C)(53.5mg,0.252mmol)，随后滴加加入三乙胺(0.105ml,0.756mmol)并将混合物在RT搅拌16hrs。将得到的混合物用DCM(20ml)稀释,用水(20mL)、1M HCl(aq)(10mL)和sat.NaHCO₃(aq)(20ml)洗涤。将有机萃取物用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗物质吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，采用0-90％EtOAc的异己烷溶液洗脱，随后用0-10％MeOH的DCM溶液洗脱。将产物流分合并并在减压下浓缩，得到橙色油状物。将油状物溶解在1:1DMSO/MeOH(1mL)中，并采用反相色谱法(Prep方法F)纯化。产物流分用DCM萃取，并将合并的有机萃取物在减压下浓缩，得到标题化合物，为黄色油状物。

LC-MS:Rt 1.17mins；MS m/z 472.4[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.25(1H,s),7.30(1H,d),7.29(1H,d),7.16(1H,d),4.11(1H,m),2.47(3H,s),2.26(3H,s),2.06-1.96(3H,m),1.90(2H,d),1.70(3H,mults),1.40(2H,m),1.28(1H,m),1.13(2H,m),0.82(2H,m).

实施例13:

步骤1:N-(2-溴-4-氯苯基)乙酰胺

将2-溴-4-氯苯胺(1g,4.84mmol)的乙酸酐(5ml,4.84mmol)溶液在RT搅拌1.5hrs。将得到的混悬液通过过滤收集并在真空管中干燥，得到标题化合物，为白色固体。

LC-MS:Rt 0.90mins；MS m/z 250.0[M+H]⁺；方法2minLowpH

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(1H,s),7.78(1H,d),7.62(1H,d),7.44(1H,dd),2.08(3H,s).

步骤2:N-(4-氯-2-环丙基苯基)乙酰胺

将N-(2-溴-4-氯苯基)乙酰胺(817mg,3.29mmol)、环丙基硼酸(706mg,8.22mmol)、PdOAc₂(14.76mg,0.066mmol)、N-苯基-2-(二-叔丁基膦基)吲哚(44.4mg,0.132mmol)和氟化钾(955mg,16.44mmol)的混合物在THF(50ml)中在55℃搅拌16hrs。再将环丙基硼酸(706mg,8.22mmol)、PdOAc₂(14.76mg,0.066mmol)和氟化钾(955mg,16.44mmol)加至反应混合物中，并将混合物在65℃搅拌16hrs。将得到的混合物用EtOAc稀释并用水洗涤(2x)。将有机萃取物用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到棕色固体。粗产物没有进一步纯化即用下一步骤。

步骤3:4-氯-2-环丙基苯胺

将N-(4-氯-2-环丙基苯基)乙酰胺(689mg,3.29mmol)的2M HCl(aq)(25ml,823mmol)混悬液在100℃搅拌3hrs，然后在90℃搅拌16hrs。将得到的混合物冷却至RT，用EtOAc和水稀释并分离各层。将有机层用0.1M HCl(aq)萃取并弃去有机部分。向合并的水部分加入2M NaOH(aq)直到成碱性，并将得到的混合物用EtOAc萃取(2x)。将有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并在真空下浓缩，得到标题化合物，为深黄色油状物。

LC-MS:Rt 0.96mins；MS m/z 168.1[M+H]⁺；方法2minLowpH

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.89(1H,dd),6.75(1H,d),6.59(1H,d),5.11(2H,s),1.65(1H,mult),0.87-0.81(2H,mults),0.51-0.47(2H,mults).

步骤4:1-叠氮基-4-氯-2-环丙基苯

将4-氯-2-环丙基苯胺(182mg,1.086mmol)的乙酸(15mL)和水(15ml)溶液搅拌并冷却至0℃。滴加加入亚硝酸钠(74.9mg,1.086mmol)的水(1.4ml)溶液，并将混合物在冰冷却下搅拌10mins。滴加加入叠氮化钠(70.6mg,1.086mmol)的水(1.5ml)溶液并在冰冷却下搅拌1hr，然后在RT搅拌30mins。向产物混合物中加入2M NaOH(aq)直到成碱性并将其用EtOAc萃取。将有机萃取物用sat.NaHCO₃(aq)洗涤并用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物，为深黄色/棕色油状物。粗产物没有进一步纯化即用于下一步骤。

步骤5:1-(4-氯-2-环丙基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸

向搅拌的1-叠氮基-4-氯-2-环丙基苯(204mg,1.054mmol)和3-氧代丁酸甲酯(0.341ml,3.16mmol)的MeOH(2ml)溶液中滴加加入甲醇钠(5M的MeOH溶液)(1.264ml,6.32mmol)并将混合物在RT搅拌2.5h。将混合物在50℃加热5hrs，然后在RT搅拌16hrs。将得到的混合物用水稀释，用乙醚萃取(x2)，并将有机萃取物弃去。向水层中加入6M HCl(aq)直到成酸性并将其用乙醚萃取。将有机萃取物用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物，为橙色油状物。

LC-MS:Rt 0.99mins；MS m/z 278.4[M+H]⁺；方法2minLowpH

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.1(1H,br s),7.49-7.48(2H,mults),7.23(1H,brs),2.35(3H,s),1.22(1H,mult),0.85-0.83(2H,mults),0.77-0.76(2H,mults).

步骤6:1-(4-氯-2-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

向搅拌的草酰氯(0.035ml,0.396mmol)和DMF(0.056ml,0.720mmol)的DCM(10ml)溶液中加入1-(4-氯-2-环丙基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(100mg,0.360mmol)并将混合物搅拌30mins。再将草酰氯(0.035ml,0.396mmol)加至反应混合物中，并将其搅拌1hr。加入4-氨基-2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体B)(88mg,0.396mmol)，随后加入三乙胺(0.151ml,1.080mmol)并将混合物在RT搅拌1hr。将得到的混合物用DCM稀释，用0.1M HCl(aq)和sat.NaHCO₃(aq)洗涤。将有机萃取物通过相分离柱，并在减压下浓缩，得到油状物。将油状物吸附到二氧化硅并通过色谱法纯化，采用0-10％MeOH的TBME溶液洗脱。将产物流分合并，并在减压下浓缩，得到黄色玻璃状固体，将其从EtOH中重结晶。将固体通过过滤收集并在真空管中干燥，得到标题化合物，为白色固体。

LC-MS:Rt 4.63mins；MS m/z 481.4[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(1H,s),7.56-7.35(6H,mults),7.24(1H,d),3.09(3H,s),2.39(3H,s),2.20(3H,s),1.26(1H,mult),0.90-0.85(2H,mults),0.82-0.78(2H,mults).

实施例14:

类似于实施例1,步骤3由1-(4-氯-2-环丙基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(实施例13,步骤5)和4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体A)制备标题化合物。

LC-MS:Rt 4.94mins；MS m/z 471.3[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(1H,s),7.32(1H,dd),7.18(1H,d),7.02(1H,d),4.06(1H,mult),3.24(3H,s),2.48(3H,s),2.23(3H,s),3.05-1.86(6H,mults),1.71(1H,mult),1.43-1.17(4H,mults),0.93(2H,mults),0.72(2H,mults).

实施例15:

步骤1:N-(2-环丙基-4-氟苯基)乙酰胺

将包含N-(2-溴-4-氟苯基)乙酰胺(1g,4.31mmol)、环丙基硼酸(0.481g,5.60mmol)、三环己基膦(0.121g,0.431mmol)、磷酸钾(三元的)(3.20g,15.08mmol)、甲苯(10mL)和水(10ml)的混合物平均分到两个10-20ml微波管中。密封各反应管，排空并用氮气填充(3x)，置于微波中在100℃反应6hrs。将所述瓶的内容物合并，用EtOAc稀释并分离各层。将有机萃取物用水(2x)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物，为棕色固体。产物作为粗品用于下一步骤中。

LC-MS:Rt 0.88mins；MS m/z 194.3[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

步骤2:2-环丙基-4-氟苯胺

类似于实施例13步骤3由N-(2-环丙基-4-氟苯基)乙酰胺制备标题化合物。

LC-MS:Rt 0.65mins；MS m/z 152.1[M+H]⁺；方法2minLowpH

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.70(1H,tt),6.60-6.51(2H,mults),4.82(2H,br s),1.69(1H,mult),0.88-0.83(2H,mults),0.52-0.48(2H,mults).

步骤3:1-叠氮基-2-环丙基-4-氟苯

类似于实施例13步骤4由2-环丙基-4-氟苯胺制备标题化合物，得到棕色油状物。

步骤4:1-(2-环丙基-4-氟苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸

向1-叠氮基-2-环丙基-4-氟苯(237mg,1.338mmol)的MeOH(10ml)溶液中加入3-氧代丁酸甲酯(466mg,4.01mmol)和5M甲醇钠(1.338ml,6.69mmol)并将混合物在50℃搅拌16hrs。加入水(1ml)并在50℃持续搅拌3hrs。将得到的混合物在减压下浓缩以除去MeOH。将混合物用EtOAc洗涤并弃去有机萃取物。向水层中加入1M HCl(aq)直到成酸性并将其用EtOAc萃取(3x)。将有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物，为棕色油状物，其没有进一步纯化即用于下一步骤。

LC-MS:Rt 0.97mins；MS m/z 262.4[M+H]⁺；方法2minLowpH

步骤5:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(2-环丙基-4-氟苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

向草酰氯(0.055ml,0.632mmol)的DCM(5ml)溶液中滴加加入DMF(0.065ml,0.842mmol)并将混合物搅拌1hr。将得到的混合物用1-(2-环丙基-4-氟苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(110mg,0.421mmol)处理并在RT搅拌30mins。向反应混合物中加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体A)(97mg,0.463mmol)，随后加入三乙胺(0.176ml,1.263mmol)并在RT搅拌30mins。将得到的混合物用DCM稀释，用水洗涤，并通过相分离柱洗脱。收集有机洗脱液，并在减压下浓缩，得到棕色油状物。将其吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，采用0-10％MeOH的TBME溶液洗脱。将产物流分合并，浓缩并在减压下干燥，得到浅棕色玻璃状固体。将固体溶解在DCM中，用水和盐水洗涤，并通过相分离柱洗脱。将有机洗脱液在减压下浓缩，得到标题化合物，为玻璃状固体。

LC-MS:Rt 4.84mins；MS m/z 452.9[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(1H,s),7.24(1,dd),7.04(1H,td),6.73(1H,dd),4.07(1H,mult),3.25(3H,s),2.47(3H,s),2.24(3H,s),2.06-1.95(2H,mults),1.89(5H,mults),1.71(1H,mult),1.43-1.18(3H,mults),0.95(2H,mults),0.71(2H,mults).

实施例16:

步骤1:2-烯丙基-4-(三氟甲氧基)苯胺

向2-溴-4-(三氟甲氧基)苯胺(75g,293mmol)的DMF(1000ml)溶液中加入Pd(PPh₃)₄(13.5g,11.7mmol)和烯丙基三丁基锡(116g,351mmol)并将反应混合物在80℃搅拌16h。将混合物冷却至室温，并加入饱和KF水溶液。将混合物用乙酸乙酯(1500mL)稀释并用1:1H₂O:饱和NaCl水溶液(2x750mL)和饱和KF水溶液(1x)洗涤。将水层合并并用乙酸乙酯(250mL)萃取。将有机萃取物合并，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗产物，将其吸附到二氧化硅并通过色谱法纯化，采用1％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 1.00mins；MS m/z 218.0[M+H]⁺；方法H

¹H NMR(400MHz,MeOD)δ3.27(2H,dd),5.07-5.14(2H,m),5.92-5.99(1H,m),6.72(1H,dd),6.88-6.89(2H,m).

步骤2:N-(2-烯丙基-4-(三氟甲氧基)苯基)丙烯酰胺

向在干冰浴冷中却至温度低于-10℃的2-烯丙基-4-(三氟甲氧基)苯胺(17.5g,80.6mmol)的THF(1000mL)溶液中加入Et₃N(8.96g,17.3mmol)和丙烯酰氯(7.98g,88.7mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌1hr。将得到的混合物在减压下浓缩，溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤。将有机部分用Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到白色固体，将其用乙酸乙酯洗涤，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 1.15mins；MS m/z 272.0[M+H]⁺；方法H

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.40(2H,dd),5.12(1H,dd),5.24(1H,dd),5.77(1H,dd),5.92-5.99(1H,m),6.18-6.29(1H,m),6.38(1H,dd),7.06(1H,s),7.15(1H,dd),7.36(1H,s),8.01(1H,dd).

步骤3:7-(三氟甲氧基)-1H-苯并[b]氮杂-2(5H)-酮

向N-(2-烯丙基-4-(三氟甲氧基)苯基)丙烯酰胺(15g,55.3mmol)的DCM(800ml)溶液中加入Zhan Catalyst I(2.0g,2.77mmol)并将混合物在室温搅拌3hrs。将得到的混合物在减压下浓缩，得到粗固体，将其从乙酸乙酯中重结晶，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 0.95mins；MS m/z 243.9[M+H]⁺；方法H

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.37(2H,dd),5.97(1H,dd),6.60-6.66(1H,m),7.02(1H,s),7.10-7.13(2H,m),9.11(1H,s).

步骤4:7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-1H-苯并[b]氮杂-2(3H)-酮

向7-(三氟甲氧基)-1H-苯并[b]氮杂-2(5H)-酮(10g,41.1mmol)的1:1EtOH:THF(150ml)溶液中加入Pd/C(1.0g)并将混合物在室温、在30psi H₂下搅拌3h。将得到的混合物过滤，并在减压下浓缩，得到粗固体，将其从乙酸乙酯中重结晶，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 0.98mins；MS m/z 246.0[M+H]⁺；方法H

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.22(2H,q),2.36(H,t),2.80(2H,t),7.02-7.03(1H,m),7.09(2H,s),8.27(1H,s).

步骤5:7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-1H-苯并[b]氮杂-2(3H)-硫酮

向7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-1H-苯并[b]氮杂-2(3H)-酮(30g,122mmol)的甲苯(2000ml)溶液中加入Lawesson’s试剂(29.7g,73.5mmol)并将混合物在100℃搅拌2hrs。将得到的混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。粗产物通过柱色谱法采用5％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱在二氧化硅上纯化，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 1.04mins；MS m/z 261.9[M+H]⁺；方法H

¹H NMR(400MHz,MeOD)δ2.27-2.34(2H,m),2.73-2.79(4H,m),7.13-7.15(1H,m),7.20-7.22(2H,m).

步骤6:2-(甲硫基)-7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-3H-苯并[b]氮杂

向7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-1H-苯并[b]氮杂-2(3H)-硫酮(22g,84.3mmol)的丙酮(1500ml)溶液中加入KOH(7.1g,127mmol)和MeI(18.1g,127mmol)并将混合物在RT搅拌1h。将得到的混合物在减压下浓缩，并将粗产物溶解在DCM(1000mL)中。将混合物用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到黄色油状物。将油状物通过快速柱色谱法在中性氧化铝上纯化，用己烷洗脱，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 1.18mins；MS m/z 275.9[M+H]⁺；方法I

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.25(2H,q),2.32(2H,t),2.46(1H,s),2.50(2H,t),6.99-7.01(2H,m),7.09-7.26(1H,m).

步骤7:(Z)-2-硝基-2-(7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-1H-苯并[b]氮杂-2(3H)-亚基)乙酸乙酯

参考文献:WO 2011/151361第33和34页

将2-(甲硫基)-7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-3H-苯并[b]氮杂(1g,3.63mmol)、2-硝基乙酸乙酯(2.016ml,18.16mmol)和DBU(0.602ml,4.00mmol)的混合物在RT搅拌。加入Bleach Scrubbing Train并将混合物搅拌，并在40℃加热72hrs。将得到的混合物用EtOAc稀释并用水洗涤(3x)，随后加入sat.NaHCO₃(aq)(3x)和盐水。将有机萃取物用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到黄色油状物。将油状物吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，用0-50％EtOAc洗脱。将产物流分合并，在减压下浓缩并在真空下干燥，得到标题化合物，为黄色油状物。

步骤8:8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酸乙酯

将(Z)-2-硝基-2-(7-(三氟甲氧基)-4,5-二氢-1H-苯并[b]氮杂-2(3H)-亚基)乙酸乙酯(892mg,2.476mmol)的冰乙酸(50mL)溶液在水浴中冷却5mins。向溶液中分次加入锌(971mg,14.85mmol)，并将混合物在RT搅拌4hrs。再加入锌(486mg,7.42mmol)并将混合物在RT搅拌16hrs。向反应混合物中加入亚硝酸异戊酯(0.467mL,3.47mmol)和三氯乙酸(809mg,4.95mmol)并将混合物在RT搅拌48hrs。将得到的混合物用DCM和水稀释，并分离各层。将水层用DCM萃取(2x)，并合并有机萃取物。将有机萃取物用sat.NaHCO₃(aq)(3x)、盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到棕色油状物。将油状物吸附到二氧化硅上，并通过色谱法纯化，采用0-50％EtOAc的异己烷溶液洗脱。将产物流分合并，并在减压下浓缩，得到标题化合物，为黄色固体。

LC-MS:Rt 1.25mins；MS m/z 342.3[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.83(1H,d),7.34(1H,dd),7.27(1H,br s),4.49(2H,q),3.14(2H,t),2.62(2H,t),2.40-2.33(2H,mults),1.47(3H,t).

步骤9:8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酸

向8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酸乙酯(384mg,1.125mmol)的THF(5mL)和甲醇(3mL)溶液中加入2M NaOH(aq)(2.81mL,5.63mmol)并将混合物在RT搅拌45mins。将得到的混合物在减压下浓缩，得到残留物，并其在EtOAc和水之间分配。分离各层，并将水层用EtOAc洗涤。弃去有机部分，并将水层用2MHCl(aq)处理直到成酸性。将得到的溶液用EtOAc萃取，并将有机萃取物用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物，为黄色固体。

LC-MS:Rt 1.07mins；MS m/z 314.3[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(1H,d),7.38(1H,d),7.30(1H,s),3,18(2H,t),2.66(2H,t),2.44-2.37(2H,mults).

步骤10:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺

在氮气气氛下，向8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酸(169mg,0.540mmol)的干燥DCM(2mL)溶液中加入草酰氯(0.052mL,0.593mmol)和DMF(0.084mL,1.079mmol)并将混合物搅拌15mins。加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体A)(124mg,0.593mmol)，随后加入三乙胺(0.226mL,1.619mmol)并将混合物在RT搅拌16hrs。将得到的混合物用DCM和水稀释并剧烈搅拌。使混合物通过相分离柱，并在减压下浓缩有机部分，得到黄色油状物。将油状物吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，采用100％TBME洗脱。将产物流分合并，并在减压下浓缩，得到玻璃状固体，将其从1:1乙醚:EtOAc中重结晶。将得到的晶体在重力下过滤，得到标题化合物，为白色固体。

LC-MS:Rt 4.99mins；MS 505.3m/z[M+H]⁺；方法10minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(1H,s),7.88(1H,d),7.64(1H,br s),7.56(1H,brd),3.93(1H,tt),3.22(3H,s),3.07(2H,t),2.64(2H,t),2.23(2H,t),2.07(3H,s),2.02-1.97(2H,mults),1.80(2H,br d),1.70-1.61(3H,mults),1.32(2H,q),1.21-1.15(1H,mult).

实施例17:

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

步骤1:N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

向瓶中加入1-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(0.040g,0.170mmol)和Ghosez试剂(0.047ml,0.340mmol)的DCM(0.95ml)溶液。将混合物超声，并加热以助溶解。将瓶置于IKA振动器上4小时。向该混合物中加入4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体A)(10.043g,0.204mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.030ml,0.170mmol)的DCM(0.97mL)溶液，并将瓶振摇16hrs。加入数滴MeOH，并采用Genevac HT-4X蒸发仪除去溶剂。将粗混合物通过反相色谱法纯化，并采用Genevac HT-4X蒸发仪将产物流分浓缩。将粗产物溶解在MeOH(1mL)中，并通过SiCO₃柱洗脱，使用MeOH作为洗脱剂。将收集的洗脱液浓缩，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 0.98mins；MS m/z 425.3[M+H]⁺；方法2minLowpHv02

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.40(1H,br s),7.37(2H,dt),7.07(2H,dt),4.06(1H,mult),3.90(3H,s),3.24(3H,s),2.58(3H,s),2.22(3H,s),2.06-1.92(2H,mults),1.87(4H,br d),1.70(1H,br d),1.45-1.30(2H,mults),1.28-1.16(1H,mult).

中间体的制备

中间体A:

4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

步骤1:2-环己基-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

将环己基肼盐酸盐(700g,4643mmol)加至搅拌的DCM(3000mL)和冰冷的2M NaOH溶液(1778mL,3556mmol)的溶液中，并将其在RT搅拌10分钟。分离各相并将水层用DCM(4x2000ml)洗涤。将合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到黄色固体。将固体环己基肼(406g,3556mmol)溶解在水(1300mL)和乙酸(1300mL)中并用乙酰乙酸乙酯(450mL,3556mmol)处理。将反应混合物加热至85℃并搅拌1小时。将得到的混合物在减压下浓缩至干，并将残留物溶解在DCM(3000mL)和水(1000ml)中。将混合物用2M碳酸钾中和至pH>9，分离得到的相并将有机萃取物用盐水洗涤(1x2L)。将该第一水层用氯化钠饱和，并将两水相用DCM(4x2L)洗涤。将合并的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到米色固体。将粗产物研磨为粉末，加入TBME(2000ml)并将混合物在50℃搅拌1小时，随后在室温搅拌1小时。将得到的固体通过过滤收集，用TBME(4x500mL)洗涤并在真空下在45℃干燥16小时，得到标题化合物，为灰白色晶体。

LC-MS:Rt 0.63mins；MS m/z 181.1[M+H]⁺；方法C

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(1H,br s),5.06(1H,s),3.89(1H,mult),1.98(3H,s),1.81-1.55(7H,mults),1.36-1.22(2H,mults),1.18-1.05(1H,mult).

步骤2:2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

将2-环己基-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(525g,2834mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2200mL)混悬液加热至40℃，并加入碘甲烷(532mL,8502mmol)。将反应混合物加热至70℃反应20h。再加入碘甲烷(177mL,2834mmol)，并将混合物在75℃搅拌3.5小时，然后在80℃搅拌20小时。将得到的混合物在减压下浓缩，并将残留物用TBME(2000ml)研磨。通过过滤收集产物，用TBME(5x500ml)洗涤，得到固体，将其混悬在DCM(2500mL)和水(500mL)中，并用2M碳酸钾溶液(1700ml)中和至pH>9。分离各相并将水层用DCM萃取(3x500ml)。将有机萃取物用盐水(1000ml)洗涤，并在减压下浓缩。将得到的残留物溶解在乙酸乙酯(2000ml)中，用无水硫酸钠干燥并通过200g硅胶(40-63μm)过滤，用乙酸乙酯/甲醇9:1(7x300ml)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到标题化合物，为棕色油状物。

LC-MS:Rt 0.67mins；MS m/z 195.1[M+H]⁺；方法C

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.02(1H,s),3.84(1H,tt),3.14(3H,s),2.06(3H,s),1.98-1.86(2H,mults),1.78-1.53(5H,mults),1.33-1.20(2H,mults),1.18-1.04(1H,mult).

步骤3:2-环己基-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮

向冷却至-15℃的三氟乙酸(1940mL)中加入2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(535g,2231mmol)并将反应混合物升温至0℃。历经90分钟滴加加入硝酸90％(211mL,4461mmol)，保持温度低于15℃，并将得到的混合物在10℃搅拌30分钟。将产物混合物缓慢倒入冰水(8L)中并搅拌30分钟。通过过滤收集固体并用水(2x2L)、饱和碳酸氢钠溶液(1x2L)、水(2x2L)、TBME(3x2L)和庚烷(2x2L)洗涤。将固体在真空炉中干燥，得到标题化合物，为米色粉末。

LC-MS:Rt 0.65mins；MS m/z 240.1[M+H]⁺；方法C

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.06(1H,tt),3.61(3H,s),2.57(3H,t),2.15-2.03(2H,mults),1.81-1.65(4H,mults),1.64-1.55(1H,mult),1.38-1.24(2H,mults),1.19-1.06(1H,mult).

步骤4:4-氨基-2-环己基-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

向2-环己基-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮(415g,1.73mol)的MeOH(4500mL)和THF(4500ml)溶液中加入10％Pd/C(70g)并将反应混合物在0.1bar和RT氢化57.5hrs。将得到的混合物通过压力过滤器过滤，并用甲醇(1x1L)和THF(2x1L)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到深红色油状物。将该油状物立即溶解在TBME(4L)中，在减压下浓缩至约2L，并接种晶种(100mg)。将混悬液在RT搅拌2hrs并在冰浴中冷却1hr。通过过滤收集固体并用冰冷的TBME分次洗涤，直到滤液无色，并在真空下干燥，得到标题化合物，为黄色/浅橙色晶体。

LC-MS:Rt 0.55mins；MS m/z 210.1[M+H]⁺；方法C

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.68(1H,tt),3.53(2H,br s),2.77(3H,s),1.96-1.83(2H,mults),1.92(3H,s),1.78-1.69(2H,mults),1.64-1.53(3H,mults),1.33-1.19(2H,mults),1.17-1.04(1H,mult).

中间体B:

4-氨基-2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

步骤1:2-(2-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

将搅拌的2-氟苯基肼盐酸盐(1000g,5535mmol)的乙酸(1000mL)和水(1000ml)混悬液在45℃加热。历经30mins滴加加入乙酰乙酸乙酯(700ml)，并将其在88℃搅拌2hr。将得到的混合物冷却至5℃并倒在冰(3000g)和DCM(4500ml)中。加入30％NaOH(aq)(2400ml)，并将混合物搅拌15mins，然后分离并用DCM(1500ml)萃取。将有机萃取物用1M NaOH(aq)(1500ml)洗涤。将水相合并，加入冰(1500g)和DCM(3600ml)。向搅拌的混合物中加入32％HCl(aq)(2400ml)，直到pH调节至pH 1-2。分离该两相混合物，用DCM(1500mL)萃取，并将有机萃取物用盐水/水4:1(2000ml)洗涤，用MgSO₄干燥，并蒸干，得到黑色固体。向搅拌的粗产物的DCM(2000ml)溶液中加入硅胶(350g)。将其过滤，并将滤液蒸发。通过采用MeOH的EtOAc溶液的色谱法纯化，得到标题化合物，为浅黄色固体。

LC-MS:Rt 0.54mins；MS m/z 193.1[M+H]⁺；方法B

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20(1H,br s),7.48-7.40(2H,mults),7.36(1H,td),7.29(1H,td),5.31(1H,br s),2.10(3H,s).

步骤2:2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

历经15mins向加热至58℃的2-(2-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(500g,2602mmol)的THF(2500ml)溶液中滴加加入碘甲烷(163ml)并将混合物在65℃搅拌30mins。历经20mins加入K₂CO₃(198g)并搅拌16hrs。再加入碘甲烷(16.3ml)并继续搅拌1hr。将得到的混合物冷却至0℃，过滤并用THF(50ml)洗涤。将滤液蒸干并通过柱色谱法纯化，用EtOAc/庚烷洗脱，得到标题化合物，为红色固体。

LC-MS:Rt 0.54mins；MS m/z 207.1[M+H]⁺；方法B

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.51-7.44(1H,mult),7.42-7.28(3H,mults),5.19(1H,s),3.00(3H,s),2.19(3H,s).

步骤3:2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮

将2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(260g,1261mmol)的TFA(1040ml)溶液冷却至-10℃并搅拌30mins。向混合物滴加加入发烟硝酸(84ml)，并在冷却下将其搅拌15mins，然后在RT搅拌1hr。将得到的混合物倒在冰(1500mL)、水(1000mL)和TBME(2500mL)混合物中并搅拌，直到冰融化，然后在RT搅拌1hr。将混合物过滤，用水(200mL)和TBME(1000ml)洗涤。将收集的晶体干燥，得到标题化合物，为红棕色晶体。

LC-MS:Rt 0.53mins；MS m/z 252.1[M+H]⁺；方法B

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.68-7.61(1H,mult),7.58-7.47(2H,mults),7.41(1H,t),3.37(3H,s),2.69(3H,s).

步骤4:4-氨基-2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

将2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮(208g,828mmol)和10％Pd/C(25g,235mmol)的MeOH(3000ml)混合物在0.1bar在RT氢化98hrs。将得到的混合物通过(过滤器材料)垫层过滤，用MeOH(1000mL)洗涤，并将滤液蒸干。向固体中加入DCM(300mL)，并将其在65℃加热，随后加入甲苯(900ml)。在减压下除去DCM，并在搅拌下将得到的混合物冷却至RT并在RT放置过夜。将混合物过滤，用1:1甲苯:庚烷(200mL)和庚烷(800mL)洗涤，并在真空下干燥，得到标题化合物，为浅黄色固体。

LC-MS:Rt 0.47mins；MS m/z 222.1[M+H]⁺；方法MP

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.46-7.41(1H,mult),7.37(3H,t),7.35-7.27(2H,mults),2.68(3H,s),2.07(3H,s).

中间体C:

4-氨基-2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

步骤1:2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

将2-环己基-5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(中间体A,步骤1)(1g,5.55mmol)在DMF(5mL)中浆化，并在氮气气氛下加热至40℃。加入碘甲烷-d₃(1.381mL,22.19mmol)，关闭氮气流，并将混合物在70℃加热16hrs。将得到的混合物冷却至室温。加入DCM(20ml)，随后加入氯化锂(5％w/v,25ml)。将得到的各层分离，并将有机萃取物用盐水(20ml)洗涤。将含水洗涤液合并，并用DCM(2x10ml)再萃取。将合并的有机萃取物用MgSO₄干燥。滤除干燥剂，并在减压下浓缩滤液，得到棕色油状物。将油状物吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，采用0-10％MeOH的DCM溶液洗脱。将产物流分合并并在减压下浓缩，得到标题化合物，为棕色油状物。

LC-MS:Rt 0.74mins；MS m/z 198.4[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.30(1H,s),4.02(1H,m),2.15(3H,s),1.97(2H,m),1.78(2H,m),1.66(3H,m),1.33(2H,m),1.15(1H,m).

步骤2:2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮

将2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮(690mg,3.50mmol)溶解在TFA(5389μl,69.9mmol)中，并在冰冷却下滴加加入90％硝酸(347μl,6.99mmol)，保持温度～5℃。将混合物在RT搅拌30mins，然后倒入水(30mL)，并用DCM(30ml)萃取。将有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物。

LC-MS:Rt 0.75mins；MS m/z 243.3[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.07(1H,m),2.59(3H,s),2.1(2H,m),1.78(2H,m),1.67(3H,m),1.33(2H,m),1.16(1H,m).

步骤3:4-氨基-2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-1H-吡唑-3(2H)-酮

向2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-4-硝基-1H-吡唑-3(2H)-酮(430mg,1.775mmol)的乙醇(5mL)溶液中加入氯化铵(356mg,6.66mmol)、铁(347mg,6.21mmol)和水(1.25mL)，随后加入浓HCl(0.054mL,1.775mmol)。将混合物在90℃搅拌1.5hrs，然后冷却至室温并在RT搅拌16hrs。将得到的混合物过滤，通过加入1M NaOH(aq)调至pH8，并用DCM萃取。将有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质吸附到二氧化硅上并通过色谱法纯化，采用0-20％MeOH的TBME溶液洗脱。将产物流分合并，在减压下浓缩并在真空烘箱中干燥，得到标题化合物，为浅黄色固体。

LC-MS:Rt 0.50mins；MS m/z 213.4[M+H]⁺；方法2minLowpHv01

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.86(1H,m),2.01(3H,s),1.92(2H,m),1.83(4H,m),1.65(1H,m),1.32(2H,m),1.19(1H,m).

Claims

1.式(I)化合物:

或其药学上可接受的盐，其中

R¹是(C₃-C₆)烷基或(C₃-C₆)环烷基；

R²是甲基；

R³是

或

R¹是2-氟苯基；

R²是甲基；且

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹是异丙基、环丁基或环己基。

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹是环己基。

4.根据权利要求1至3中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³是

R⁵是氢。

5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³是

R⁴和R⁶独立地选自氯和环丙基；且

R⁵是氢。

6.根据权利要求1所述的化合物，其选自:

1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(2,4-二氯苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(2-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(4-氯苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(2,4-二氯苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(4-氯苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(2-氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1-甲基-d₃,5-甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(4-氯-2-环丙基苯基)-N-(2-(2-氟苯基)-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

1-(4-氯-2-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(2-环丙基-4-氟苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-8-(三氟甲氧基)-5,6-二氢-4H-苯并[f][1,2,3]三唑并[1,5-a]氮杂-3-甲酰胺；和

N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；

或其药学上可接受的盐。

7.药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至6中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体。

8.组合产品，其包含治疗有效量的根据权利要求1至6中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种治疗活性剂。

9.根据权利要求1至6中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。

10.根据权利要求1至6中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自肺高血压、纤维化、类风湿性关节炎和骨折愈合的病症或疾病的药物中的用途。

11.根据权利要求1至6中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗肺动脉高压(PAH)的药物中的用途。

12.根据权利要求1至6中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自青光眼、遗传性出血性毛细血管扩张(HHT)、蛋白尿、伤口愈合、COPD和哮喘的病症或疾病的药物中的用途。

13.化合物，其为具有下式的1-(2-氯-4-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺：

14.化合物，其为具有下式的1-(2-氯-4-甲氧基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺：

15.化合物，其为具有下式的1-(4-氯-2-环丙基苯基)-N-(2-环己基-1,5-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)-5-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺：