CN106536509A - 作为组蛋白甲基转移酶和dna甲基转移酶的双重抑制剂的新型化合物 - Google Patents

作为组蛋白甲基转移酶和dna甲基转移酶的双重抑制剂的新型化合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I')化合物、或其药学上或兽医学上可接受的盐、或其立体异构体、或其混合物作为抗癌剂和作为产生诱导多能干细胞的试剂的应用。其中R2’是烷氧基、烃链或环体系，且R1、R3和R4如本文所定义的式(I')化合物是组蛋白甲基转移酶和DNA甲基转移酶的双重抑制剂。本发明还涉及式(I')的化合物、或其药学上或兽医学上可接受的盐、或其立体异构体、或其混合物，其中R2’为苯基或5‑至6‑元杂芳环，均任选地与其他环接合(即，式(I)的化合物)。本发明还涉及含有式(I)化合物的药物或兽药组合物。

Description

作为组蛋白甲基转移酶和DNA甲基转移酶的双重抑制剂的新 型化合物
技术领域
本发明涉及4-氨基喹啉衍生物，其为组蛋白甲基转移酶和DNA甲基转移酶的双重抑制剂。本发明还涉及含有4-氨基喹啉衍生物的药物或兽药组合物，以及它们在医学中的应用，特别是作为抗癌剂和用作产生诱导多能干细胞的试剂的应用。
背景技术
近年来，已经显示癌症是遗传和表观遗传学疾病，其中表观遗传学和遗传学改变相互作用以驱使癌症发展。然而，与遗传突变不同，表观遗传变化是可逆的，因此，恢复表观遗传平衡的药物代表了令人兴奋的潜在的癌症治疗靶点。表观遗传学是指基因表达模式中可遗传的变化，其独立于DNA一级序列的改变而发生。主要的表观遗传机制是DNA甲基化和共价组蛋白修饰，其在转录调节中起重要作用。
G9a，也称为EHMT2，是使组蛋白H3的9位赖氨酸单甲基化和二甲基化(分别为H3K9me1和H3K9me2)的组蛋白甲基转移酶。
与正常组织相比，在许多癌症中G9a高表达。癌症转录组学分析揭示在许多肿瘤中的高表达，包括肝细胞癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌和侵袭性移行细胞癌和B细胞慢性淋巴细胞白血病。在许多膀胱癌和肺癌患者中，G9a表达上调(Shankar SR.等，Epigenetics，2013.8(1)：第16-22页)。在膀胱癌和肺癌细胞系中G9a的敲低引起生长抑制和细胞凋亡。对前列腺癌的研究进一步证实其在癌发生中的作用，其中G9a的下调导致癌细胞中的中心体破坏、染色体不稳定性、细胞生长抑制和细胞衰老增加。在侵袭性肺癌中，高水平的G9a与不良预后相关，其具有增加的体外细胞迁移和侵袭以及体内转移。G9a也在胰腺腺癌中过表达，并且G9a的抑制在这种类型的癌症中诱导细胞衰老。在急性髓性白血病小鼠模型中，G9a的丧失显著延迟疾病进展并减少白血病干细胞频率。
DNA甲基化是调节基因表达而不改变DNA碱基序列的表观遗传修饰，并通过沉默肿瘤抑制基因在癌症中起关键作用。DNA甲基转移酶(DNMT)是催化DNA甲基化的酶。DNMT1编码维持甲基转移酶(maintenance methyltransferase)，DNMT3A和DNMT3B编码从头甲基转移酶(de novo methyltransferase)。
DNMT1和DNMT3A/3B在几种类型的癌症例如乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、卵巢癌、肾癌、视网膜母细胞瘤、神经胶质瘤或弥漫性大B细胞淋巴瘤中过表达。泽布拉秦(zebularine)、地西他滨和氮杂胞苷在急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌或子宫颈癌等中抑制细胞增殖并诱导凋亡(Vilas-Zornoza A.等人，PLoS ONE，2011.6(2)：第e17012页)。地西他滨目前已被美国食品和药物管理局批准用于骨髓增生异常综合征。
然而，进行了许多努力来开发新的非核苷抑制剂以克服这些氮杂核苷的局限，例如化学不稳定性和混入DNA发挥活性。
已经描述了一系列喹唑啉衍生物作为有效的选择性G9a/GLP抑制剂，例如N-(1-苄基-4-哌啶基)-6,7-二甲氧基-2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)喹唑啉-4-胺(也称为BIX01294)、2-环己基-N-(1-异丙基-4-哌啶基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉-4-胺(也称为UNC0638)和2-(4,4-二氟-1-哌啶基)-N-(1-异丙基-4-哌啶基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉-4-胺(也称为UNC0642)。然而，这些分子至多以高微摩尔IC50值显示抗DNMT的活性。因此，对于化合物BIX01294，已经报道了在100μM下对DNMT1的35±8％抑制和对DNMT3A的12±3％抑制，其分别对应于针对DNMT1和DNMT3A的>100μM的IC50值(Rotili D.等人，PLoS ONE，2014.9(5)：p.E96941)。对于化合物UNC0638，已经报道了对于DNMT1的107±6μM的IC50值(Vedadi M.等人，Nat.Chem.Biol.2011,7，第566-574页)，而对于化合物UNC0642，已经描述了针对DNMT1的体外IC50值>50μM(Liu F.等人，J.Med.Chem.2013,56(21)，第8931-42页)。
细胞重编程是包括在分化细胞中诱导多能性，产生诱导多能干细胞(iPSC)和将那些分化细胞直接转化为非相关细胞类型的过程，是称为直接重编程的过程。iPSC的生成产生了性质与天然多能干细胞(即胚胎干细胞(ESC))相似但不相同的细胞。一般地，iPSC在形态、增殖、畸胎瘤形成和分化效率方面已经被描述为与ESC相似，但是也观察到显著的表观遗传学和基因表达差异。然而，iPSC的产生可以依赖关于在天然胚胎发育期间发生的先天遗传方面的一些知识。
自从其发现以来，很明显，细胞重编程特别是iPSC生成注定要在医学领域产生革命。创建患者特异性多能细胞的能力很有希望为体外研究提供人类疾病的无价模型，并提供了自体的、排斥反应证明的细胞移植疗法和新的再生医学方法的前景。然而使用病毒载体的重编程方法被认为太危险而不能用于临床治疗。因此，在该领域的大多数努力集中在开发不同的方法以产生良好质量和更安全的无转基因或无整合iPS细胞。这是一个研究领域，化学生物学对促进高质量iPSC的有效生产以及阐明控制其表型的生物学机理做出了重要贡献。特别地，各种小分子的开发(Jung DW.等，ACS Chem.Biol.，2014.9(1)：第80-95页)已经在优化用于iPSC生产的方案中起关键作用以鉴别能够驱使小鼠体细胞向多潜能细胞的重编程小分子组合。
此外，已经描述了一些表观遗传标记，如DNA和H3K9甲基化，可能在细胞重编程中具有重要作用。
Shi Y.等人在Cell Stem Cell 2008,3，第568-574页中报道了通过在小鼠胚胎成纤维细胞中过表达Oct-4和Klf-4获得的BIX01294的重编程效率。此外，本文还公开了(2S)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸(也称为RG108)，一种DNMT抑制剂增强在BIX01294存在下的重编程活性。
仍然需要开发在治疗和/或预防癌症以及产生诱导多能干细胞中显示出改善活性的化合物。
发明内容
发明人已经发现具有4-氨基喹啉核心的新型化合物，其如本发明的实施例所证实的那样能够抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种DNA甲基转移酶(DNMT，包括DNMT1、DNMT3A和/或DNMT3B)。因此，这些化合物是G9a和DNMT的双重抑制剂，并且可用于治疗和/或预防癌症，以及用于产生诱导性多能干细胞(iPSC)。
关于它们在癌症中的应用，本发明的化合物具有以下优点：它们在体外测试、基于细胞的测定或在动物模型中已证明可针对用于治疗癌症的那些的两种不同靶标。本发明的化合物对两种病理生理事件具有影响的事实可以导向更有效的治疗。
此外，本发明化合物的G9a/DNMT双重抑制如实施例所证明的那样也对细胞，特别是成纤维细胞的重编程具有影响，并且避免如文献中所述的使用两种不同的化合物，一种G9a抑制剂和一种DNMT抑制剂来用于改善重编程活性。
本发明的第一方面涉及式(I)化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I)的任一化合物的或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，
(I)
其中：
R1是Ra；
R2是选自由以下(i)至(vi)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-至6-元杂芳环；
(iii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中，R2任选地取代有：
a)一个Cy1或一个Cy2，和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy1的取代基Z1；
其中Cy1或Cy2任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有取代基Rb的Z2的一个或多个取代基；
R3选自H、Rc、卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(O)Rc’、-OC(O)ORc’、-OC(O)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(O)Rc’、-NRc’C(O)ORc’、-NRc’C(O)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(O)NRc’Rc’、-C(O)Rc’、-C(O)ORc’、-C(O)NRc’Rc’、和-C(O)NRc’ORc’、和-C(O)NRc’SO2Rc’；
R4选自-ORa和-NRaRc’；
每个Ra独立地是Cy2，或任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的Z3；
其中Cy2任选地取代有：
a)一个Cy4；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy4的取代基Z4；
其中Cy4任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z5的取代基；和
其中Cy3任选地取代有：
a)一个Cy5；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy5的取代基Z6；
其中Cy5任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z7的取代基；
每个Rb独立地选自卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(Y)Rc’、-OC(Y)ORc’、-OC(Y)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(Y)Rc’、-NRc’C(Y)ORc’、-NRc’C(Y)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(Y)NRc’Rc’、-C(Y)Rc’、-C(Y)ORc’、-C(Y)NRc’Rc’、-C(Y)NRc’ORc’和-C(O)NRc’SO2Rc’；
每个Rc’独立地是H或Rc；
每个Rc独立地选自由(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链、和3至7元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环组成的组，其中每个Rc任选地取代有一个或多个卤素原子，
Y是O、S、或NRc’；
Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6和Z7独立地选自由(C1-C12)烷基、(C2-C12)烯基、(C2-C12)炔基和具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链组成的组；
Cy1、Cy4和Cy5独立地是选自以下的已知环体系：苯基；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和5或6元杂芳环；
Cy2和Cy3独立地是选自以下的已知环体系：苯基；5或6元杂芳环；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；以及3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合、桥合或螺合；
其中在试试碳环中所有的环原子是碳原子；并且在试试杂环和杂芳环中，一个或多个环原子选自N、O和S；并且其中在所有饱和或部分不饱和的环中一个或两个环原子任选地是C(O)和/或C(NH)和/或C[N(C1-C4)烷基]；
条件是式(I)化合物不是：
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇；
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇盐酸盐；
2-(2-氯苯基)-6,7-二甲氧基-N-(4-吡啶基)喹啉-4-胺；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
5-[[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
5-[[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
苄基-N-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基甲酸酯；
N-苄基-7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺三磷酸盐；和
2-(4-氟苯基)-N7-[(3-甲氧基苯基)甲基]-N4-(4-吡啶基)喹啉-4,7-二胺。
本发明的第二方面涉及药物或兽药组合物，其包含有效量的如上定义的式(I)化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I)化合物de或其药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体，以及一种或多种药学上或兽医学上可接受的赋形剂或载体。
本发明的第三方面涉及式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I')任一化合物的或其药学上或兽医学可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，
(I’)
用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导对癌症的治疗和/或预防，其中：
R1是Ra；
R2’选自–OZ8、Cy6、和Z8；其中每个Z8任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy7；
其中Cy6任选地取代有：
a)一个Cy1或一个Cy2，和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy1的取代基Z1；
其中Cy1或Cy2任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z2的取代基；
其中Cy7任选地取代有：
a)一个Cy8；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy8的取代基Z9；
其中Cy8任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z10的取代基；
R3选自H、Rc、卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(O)Rc’、-OC(O)ORc’、-OC(O)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(O)Rc’、-NRc’C(O)ORc’、-NRc’C(O)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(O)NRc’Rc’、-C(O)Rc’、-C(O)ORc’、-C(O)NRc’Rc’、和-C(O)NRc’ORc’、和-C(O)NRc’SO2Rc’；
R4选自-ORa和-NRaRc’；
每个Ra独立地是Cy2，或任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的Z3；
其中Cy2任选地取代有：
a)一个Cy4；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy4的取代基Z4；
其中Cy4任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z5的取代基；和
其中Cy3任选地取代有：
a)一个Cy5；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy5的取代基Z6
其中Cy5任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z7的取代基；
每个Rb独立地选自卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(Y)Rc’、-OC(Y)ORc’、-OC(Y)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(Y)Rc’、-NRc’C(Y)ORc’、-NRc’C(Y)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(Y)NRc’Rc’、-C(Y)Rc’、-C(Y)ORc’、-C(Y)NRc’Rc’、-C(Y)NRc’ORc’和-C(O)NRc’SO2Rc’；
每个Rc’独立地是H或Rc；
每个Rc独立地选自(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链、和3至7元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其中每个Rc任选地取代有一个或多个卤素原子，
Y是O、S、或NRc’；
Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9和Z10独立地选自(C1-C12)烷基、(C2-C12)烯基、(C2-C12)炔基和具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链；
Cy1、Cy4和Cy5独立地是选自以下的已知环体系：苯基；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和5或6元杂芳环；
Cy2、Cy3和Cy7独立地是选自以下的已知环体系：苯基；5或6元杂芳环；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；以及与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合、桥合或螺合；
Cy6是选自由以下(i)至(vi)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-或6-元杂芳环；
(iii)3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；
(iv)3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其接合、桥合或螺合至3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中在碳环中所有的环原子是碳原子；并且在杂环和杂芳环中，一个或多个环原子选自N、O和S；并且其中在所有饱和或部分不饱和的环中一个或两个环原子任选地是C(O)和/或C(NH)和/或C[N(C1-C4)烷基]。
因此，本发明的第三方面涉及如上定义的式(I')化合物在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用；并且还可以配制为用于治疗和/或预防癌症的方法，其包括向包括人类的有需要的受试对象施用有效量的先前限定的式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I')任一化合物的或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，以及一种或多种药学上或兽医学上可接受的赋形剂或载体。
本发明的第四方面涉及产生诱导多能干细胞的方法，所述方法包括将分离的细胞与一种或多种转录因子和式(I')化合物或其药学或兽医学上可接受的盐、或式(I')任一化合物的或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物共同培养的步骤，其中式(I')化合物如上所定义。
附图说明
图1表示在人B-ALL小鼠模型中用化合物3-04处理的小鼠中(虚线)和对照组(实线)的存活曲线。Y轴对应于存活概率(SP)％。X轴对应于肿瘤细胞接种后的天数(T：时间)。
具体实施方式
除非另有说明，否则本申请中使用的所有术语应以本领域已知的普通含义来理解。本申请中使用的某些术语的其它更具体的定义如下所述，并且旨在一致地应用于说明书和权利要求书，除非另有明确阐述的定义提供更宽广的定义。
术语“碳环”环体系指已知的环体系，其中所有的环原子都含有碳原子。术语“杂环”环体系指在化学上可能时其中一个或多个环原子，优选1、2、3或4个环原子选自NH、N、O和S的已知环体系。杂环的其余环原子独立地选自C、CH、CH2、O、N、NH和S。除非另有说明，“杂环”环体系可以通过环体系的C或N原子连接到分子的其余部分。碳环和杂环均可以是饱和的或部分不饱和的，并且可以是未取代的或如本文所述被取代的，取代基位于任何可用的位置。
对于本发明的目的，在“接合”环中，通过两个相邻环共有的一个键发生结合；在“桥合”环中，通过两个环共有的一系列原子(桥头)发生结合；在“螺合”环中，通过两个相邻环(包括桥环)共有的仅一个原子(螺原子)优选碳原子发生结合。
术语“杂芳族”环是指已知的芳环系，其中在化学上可能时，一个或多个环原子，优选1、2、3或4个环原子选自NH、N、O和S。杂芳环的剩余环原子独立地选自C、CH、O、N、NH和S。杂芳环可以是未取代的或如本文所述被取代的，取代基位于任何可用的位置。
本发明还包括式(I)或(I')化合物的互变异构形式。术语“互变异构体”是指结构在原子(通常为氢原子)的位置和一个或多个多重键的位置上不同的异构体，并且能够容易地和可逆地从一种变为另一种。互变异构体在本申请中不区分地使用。因此，作为实例，羟苯基必须被认为等同于其互变异构形式：环己-2,4-二烯酮。
本文所用的术语“已知的环体系”是指化学上可行的并且是本领域已知的环体系，因此意在排除化学上不可能的那些环体系。
对于本发明的目的，在所有饱和或部分不饱和的环中，环的一个或两个环成员任选是C(O)和/或C(NH)和/或C[N(C1-C4)烷基]。
术语(C1-Cn)烷基是指含有1至n个碳原子且仅含单键的饱和支链或直链烃链。术语(C2-Cn)烯基是指包含2至n个碳原子和至少一个或多个双键的不饱和支链或直链烃链。术语(C2-Cn)炔基是指包含2至n个碳原子和至少一个或多个三键的饱和支链或直链烃链。为了本发明的目的，具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-Cn)烃链是含有2至n个碳原子的支链或直链烃链。此外，在上述任何烃链中，选自CH2或CH的一个或两个链成员可任选被独立地选自N、NR、O、C(O)、C(O)NR、NRC(O)和S的链成员替代；其中R是H或任选地取代有一个或多个卤素原子的(C1-C6)烷基。
卤素取代基是指氟、氯、溴或碘。
在本发明涉及式(I)或式(I')化合物的实施方式中，其中未指定某个基团的取代或未取代，例如通过指示该基团的某一取代或通过表示该基团是未取代的，但是应当理解，该基团的可能取代是如在式(I)或式(I')的定义中的取代。此外，表述“如本文定义的取代的”，“如先前定义的取代的”或任何等效表达必须被理解为该基团的可能取代是如在式(I)或式(I')的定义中的取代。
“保护基”(PG)是指当连接到分子中的反应性基团时掩蔽、降低或阻止该反应性的一组原子。
表述“取代有一个或多个”是指基团可以取代有一个或多个，优选具有1、2、3或4个取代基，条件是该基团具有足够的易于被取代的位置。
对于本发明的目的，室温是20℃至25℃。
在涉及式(I)化合物的本发明的第一方面以及一些涉及式(I')化合物的实施方式中，本发明的化合物不同于表1中列出的化合物：
表1
从上表中可以看出，所引用的化合物是没有相关参考文献的商业产品，或者在参考文献EP1088818A1(NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)-受体亚型选择性阻断剂)；Giardina G.等人，“Discovery of a Novel Class of Selective Non-Peptide Antagonists for theHuman Neurokinin-3 Receptor 1.Identification of the 4-QuinolinecarboxamideFramework”，Journal of Medicinal Chemistry 1997，40(12)，1794-1807；和Drake N.等人，“Synthetic Antimalarials.The Preparation of Certain 4-Aminoquinolines“，Journal of the American Chemical Society 1946，68，1208-13中公开。这些文献都没有描述这些化合物同时抑制组蛋白甲基转移酶G9a和DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A或DNMT3B)的能力，也没有描述它们在治疗和/或预防癌症中的应用或在诱导多能干细胞的应用。
对可以使用的本发明化合物的盐的类型没有限制，条件是当它们用于治疗目的时，它们是药学上或兽医学上可接受的。术语“药学上或兽医学上可接受的盐”包括通常用于形成碱金属盐和形成游离酸或游离碱的加成盐的盐。
式(I)或式(I')化合物的药学上或兽医学上可接受的盐的制备可以通过本领域已知的方法进行。例如，它们可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物制备。通常，这样的盐例如通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的合适的药学上或兽医学上可接受的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在它们的混合物中反应来制备。式(I')、式(I)化合物及它们的盐可以在一些物理性质方面不同，但它们对于本发明的目的是等同的。
本发明的化合物可以是作为游离溶剂化合物或作为溶剂合物(例如水合物)的结晶形式，并且意图是两种形式都在本发明的范围内。溶剂化的方法通常是本领域已知的。通常，具有药学上或兽医学上可接受的溶剂例如水、乙醇等的溶剂化形式等同于本发明目的的非溶剂化形式。
本发明的一些化合物可具有能产生各种立体异构体的手性中心。如本文所用，术语“立体异构体”是指各化合物的仅在其原子的空间取向上不同的所有异构体。术语立体异构体包括镜像异构体(对映异构体)、镜像异构体的混合物(外消旋体，外消旋混合物)、几何(顺式/反式或同侧/异侧或E/Z)异构体，以及具有多于一个手性中心的化合物的彼此不是镜像的异构体(非对映异构体)。本发明涉及这些立体异构体中的每一种及其混合物。
非对映异构体和对映异构体可以通过常规技术如色谱法或分级结晶法分离。光学异构体可以通过常规的光学拆分技术拆分，得到旋光纯异构体。该拆分可以在本发明任何手性合成中间体或本发明化合物上进行。光学纯的异构体也可以使用对映体特异性合成单独获得。
在本发明涉及式(I)或式(I')化合物的所有实施方式中，其药学上可接受的盐和任何式(I)或式(I')化合物或任何的它们的药学上可接受的盐的任一立体异构体也是在考量之中，即使它们没有特别提及。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)的化合物，其中在R1中Cy2和Cy3独立地是选自以下的已知环体系：饱和或部分不饱和的3至7元碳环单环或杂环单环；和3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其接合、桥合或螺合至3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环。
在一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)的化合物，其中R2不是未取代的苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、3,4-二氯苯基、4-氟苯基和4-甲氧基苯基。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R3选自卤素、-CN和-ORc’，更具体地，R3选自卤素和-ORc’。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R3是-ORc’；更具体地，Rc’是氢或Rc；其中Rc是任选取代有一个或多个卤素原子的(C1-C6)烷基。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R4是ORa。更具体地，R4中Ra是如前所述任选取代的Z3。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R4是ORa，条件是Ra含有至少一个氮原子。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R4是如前所定义的OCy2或OZ3，其中Cy2如前所定义被任选地取代和Z3取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3，如前所定义。更具体地，R4是如前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基，如前所定义。再更具体地，R4是如前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基，如前所定义且条件是Z3包含至少一个氮原子。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R2是选自以下的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iii)5-至6-元杂芳环；和
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
其中R2如前文所定义地被任选地取代。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R2通过碳原子连接到喹啉上。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如前所述的式(I)化合物，其中R2是苯基或5-至6-元杂芳族单环，两个基团均任选地如前所定义地被取代。更具体地，R2是如前所定义被任选取代的5-至6-元杂芳族单环，再更具体地，R2通过碳原子连接至喹啉，再更具体地，R2选自2-噻吩、2-吡咯、3-吡咯、2-呋喃和3-呋喃。
如上所述，本发明还涉及式(I')化合物或其盐，或式(I')的化合物或其盐的立体异构体或它们的混合物，用于通过对组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT的抑制而介导的对癌症的治疗和/或预防。
在一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过对组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT的抑制而介导对癌症的治疗和/或预防的式(I')化合物，其中R2’是Cy6，Cy6是选自以下的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-或6-元杂芳环；
(iii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯环；
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-或6-元杂芳环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中R2’如前文所定义地被任选地取代；条件是式(I')化合物不是表1中所列的那些。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R1、Cy2和Cy3独立地是选自以下的已知环体系：3至7元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其接合、桥合或螺合至3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R2’不是未取代的苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、3,4-二氯苯基、4-氟苯基和4-甲氧基苯基。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R3选自卤素、-CN和-ORc’；更具体地，R3选自卤素和-ORc’。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R3是-ORc’；更具体地，Rc’是氢或Rc；其中Rc是任选取代有一个或多个卤素原子的(C1-C6)烷基。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R4是ORa。更具体地，R4中Ra是如前所述被任选取代的Z3。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R4是ORa，条件是Ra含有至少一个氮原子。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R4如前所定义是OCy2或OZ3，其中Cy2如前所定义被任选地取代并且Z3如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3。更具体地，R4是如前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基。再更具体地，R4是如前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基，且条件是Z3包含至少一个氮原子。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R2’是Cy6，且Cy6是选自以下的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iii)5-至6-元杂芳环；和
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
其中R2’如前文所定义地被任选地取代。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R2’通过碳原子连接到喹啉上。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防的式(I’)化合物，其中R2’是苯基或5-至6-元杂芳族单环，两个基团任选地如前所定义地被取代。更具体地，R2’是如前所定义任选取代的5-至6-元杂芳族单环，再更具体地，R2’通过碳原子连接到喹啉上，并再更具体地，R2’选自2-噻吩、2-吡咯、3-吡咯、2-呋喃和3-呋喃。
如上所述，本发明还涉及通过将分离的细胞与一种或多种转录因子以及式(I')化合物或其盐、或任一式(I')化合物或其盐的立体异构体或混合物一起培养来产生诱导多能干细胞的方法。
在一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义的产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R2’是Cy6，且Cy6是选自以下的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-至6-元杂芳环；
(iii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中R2’如前文所定义被任选地取代；条件是式(I')化合物不是表1中所列的那些。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R1、Cy2和Cy3独立地是选自以下的已知环体系：饱和或部分不饱和的3至7元碳环单环或杂环单环；和3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其接合、桥合或螺合至3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R2’不是未取代的苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、3,4-二氯苯基，4-氟苯基和4-甲氧基苯基。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R3选自卤素、-CN和-ORc’；更具体地，R3选自卤素和-ORc’。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R3是-ORc’；更具体地，Rc’是氢或Rc；其中Rc是任选取代有一个或多个卤素原子的(C1-C6)烷基。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R4是ORa。更具体地，R4中Ra是如前所述任选取代的Z3。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R4是ORa，条件是Ra含有至少一个氮原子。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R4是如前所定义的OCy2或OZ3，其中Cy2如前所定义被任选地取代并且Z3如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3。更具体地，R4是前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基。再更具体地，R4是如前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基，且条件是Z3包含至少一个氮原子。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R2’是Cy6，且Cy6是选自以下的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iii)5-至6-元杂芳环；和
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
其中R2’如前文所定义地任选地取代。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R2通过碳原子连接到喹啉上。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，本发明涉及如上所定义产生诱导多能干细胞的方法，其中在式(I’)的化合物中，R2’是苯基或5-至6-元杂芳族单环，两个基团均任选地如前所定义地被取代。更具体地，R2’是如前所定义任选取代的5-至6-元杂芳族单环，再更具体地，R2’通过碳原子连接到喹啉上，并再更具体地，R2’选自2-噻吩、2-吡咯、3-吡咯、2-呋喃和3-呋喃。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，在如上所述的式(I)或(I')的化合物中：
a)R1中Cy2和Cy3独立地是选自以下的已知环体系：3至7元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其接合、桥合或螺合至3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环；和
b)R2或R2’通过碳原子连接到喹啉上；更特别地，R2或R2’是苯基或5至6元杂芳族单环，R2或R2’通过碳原子连接至喹啉并且任选地如前所定义地被取代；更特别地，R2或R2’是通过碳原子连接到喹啉并任选地如前定义被取代的5-至6-元杂芳族单环；并再更具体地，R2或R2’选自2-噻吩、2-吡咯、3-吡咯、2-呋喃和3-呋喃。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，在如上所述的式(I)或(I')的化合物中：
a)R1中Cy2和Cy3独立地是选自以下的已知环体系：3至7元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其接合、桥合或螺合至3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环；和
b)R4是ORa，条件是Ra含有至少一个氮原子，或者作为另选R4是如前所定义的OCy2或OZ3，其中Cy2如前所定义任选地取代并且Z3如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3。更具体地，R4是如前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基。再更具体地，R4是如前所定义的OCy2，或者R4是OZ3，其中Z3是如前所定义取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的(C1-C6)烷基，且条件是Z3包含至少一个氮原子。
另外，当用于治疗和/或预防癌症或用于产生诱导多能干细胞的方法中时，涉及式(I)化合物的本发明的所有实施方式也适用于式(I')化合物。
还构成本发明的一部分的是用式(I')化合物或其盐，或式(I')化合物或其盐的立体异构体或混合物进行预处理的间充质干细胞，其用于治疗和/或预防免疫相关疾病。作为另选，该方面可以阐述为使用式(I')化合物或其盐、或式(I’)化合物或其盐的立体异构体或它们的混合物进行预处理的间充质干细胞在制备用于治疗和/或预防免疫相关疾病的药物中的应用；并且还可以阐述为用于治疗和/或预防免疫相关疾病的方法，包括向有需要的受试对象包括人施用有效量的用式(I')化合物或其盐、或式(I’)化合物或其盐的立体异构体或它们的混合物进行预处理的间充质干细胞。
还构成本发明的一部分的是通过在合适的培养基中用式(I')化合物或其盐、或式(I’)化合物或其盐的立体异构体或它们的混合物培养分离的间充质干细胞从而获得预处理的间充质干细胞的方法。
在本发明的另一个实施方式中，式(I)的化合物选自：
在本发明的另一个实施方式中，式(I')化合物选自：
在本发明的另一个实施方式中，式(I')化合物选自：3-02、3-03、3-04、3-05、3-06、3-07、3-08、3-09、3-10、3-11、3-12、3-13、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19、3-20、3-21、3-25、3-26、3-27、3-28、3-29、3-30、3-31、3-32、3-33、3-34、3-35、3-36、3-37、3-38、3-39、3-40、3-41、3-42、3-43、3-44、3-45、3-46、3-47、3-48、3-49、3-50、3-51、3-52、3-53、3-54、3-55、3-56、4-01、4-02、4-03、5-01、5-02、5-03、5-04、5-05、5-06、5-07、8-01、8-02、9-01、10-01、11-01、11-02、11-03、11-04、11-05、11-06、11-07、11-08、11-09、11-10、11-11、11-12、11-13、12-01、12-02、12-03、12-04、12-05、12-06、13-01、14-01、16-01、16-02、17-01、17-02、18-01、18-02、19-01、19-02、19-03、1-01、1-02、2-01、3-01、3-22、3-23、3-24、6-01、6-02、7-01、7-02、7-04、7-05和15-01。
用于制备式(I')化合物的方法以及用于这些方法的中间体也是本发明的一部分。
因此，式(I')化合物可以通过将式(II)化合物与式(III)化合物偶联而获得：
方案1
其中R1、R2’、R3和R4如前所定义，且X是卤素原子，优选为氯。该转化可以在钯催化剂，例如三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)，有机磷化合物，例如联苯-2-基-二环己基-膦、(2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘)(BINAP)或4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(Xantphos)和碱，例如Cs2CO3、叔丁醇钠或K3PO4的存在下进行。该反应在合适的温度、优选加热下，并在合适的溶剂诸如例如二甲醚(DME)、甲苯或二噁烷中进行。
如下方案所示，通过使式(V)的苯胺与式(VI)的化合物反应，然后将获得的式(IV)的化合物转化为式(II)的化合物，可得到式(II)的化合物：
方案2
其中X、R2’、R3和R4如前所定义，其R’表示(C1-C6)烷基。第一转化可以在合适的温度、优选加热下，并在卤化剂例如POCl3的存在下进行。并且第二转化可以在合适的温度、优选加热下在合适的溶剂中诸如多磷酸(PPA)中进行。
如以下方案所示，将式(VIII)、(IX)、(X)或(XI)的化合物分别与式(VII)的化合物反应，并随后将所得式(IIa)、(IIb)、(IIc)或(IId)的化合物转化为如上所述的相应的式(I')化合物，可以得到其中R2’代表ORa(即式(I'a)化合物)、NRaRc(即式(I'b)化合物)、Cy6(即式(I'c)化合物)、或Z8(即式(I'd)化合物)的式(I')化合物：
方案3(注：or＝或)
其中R1、Ra、Rc、Cy6、Z8、R3和R4如前所定义，X是卤素原子，优选氯，M是碱金属，优选钠，R是H、(C1-C6)烷基或在硼衍生物的情况下，两个R基团与它们连接的B原子一起可以形成环。
在式(I'a)化合物的情况下，第一转化可以在合适的温度、优选室温下在没有溶剂的情况下进行。在式(I'b)化合物的情况下，第一转化可以在与上述用于将式(II)化合物转化为式(I')化合物的条件相同的条件下进行。在式(I'c)或式(I'd)化合物的情况下，第一转化可以在在合适的温度、优选加热下在合适的溶剂例如任选与水混合的二氧六环中在钯催化剂例如四(三苯基膦)钯(0)(Pd(PPh3))和碱例如K2CO3的存在下用硼衍生物进行。作为另选，该转化可以在合适的温度、优选加热下在合适的溶剂中例如N-二甲基甲酰胺中在钯催化剂例如双(三苯基膦)二氯化钯(II)(Pd(PPh3)Cl2)存在下用锡酸酯衍生物进行。
式(VII)化合物可以由式(XIII)化合物获得，其被还原为式(V)的苯胺，随后与式(XIV)化合物反应得到式(VII)化合物：
方案4
式(XIII)化合物的还原可以通过氢化进行，而式(V)化合物向式(VII)化合物的转化在合适的温度、优选加热下在卤化剂例如POCl3的存在下进行。
作为另选，上述反应可以以不同的顺序进行。式(I')化合物可以转化为式(I')的其它化合物。式(III)、(VI)、(VIII)至(XIV)的化合物可商购获得或可通过常规合成方法获得。
本发明还涉及药物或兽药组合物，其包含有效量的如上定义的式(I)化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I)化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体，以及药学上或兽医学上可接受的赋形剂或载体。
本文所用的表述“治疗有效量”是指化合物的量，其在施用时足以预防所针对的疾病的一种或多种症状的发展或在一定程度上缓解所述疾病的一种或多种症状。获得治疗益处的本发明化合物的具体剂量可根据个体患者的具体情况而变化，包括患者的大小、体重、年龄和性别、疾病的性质和阶段、疾病的侵袭性和施用途径。例如，可以使用约0.01至约300mg/kg的剂量。
表述“药学或兽医学上可接受的赋形剂或载体”是指药学上或兽医学上可接受的材料、组合物或载质。每种组分在与药物或兽药组合物的其它成分相容的意义上必须是药学上或兽医学上可接受的。它还必须适合用于与人和动物的组织或器官接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或与合理的利益/风险比相称的其它问题或并发症。
药物或兽药制剂的选择将取决于活性化合物的性质及其给药途径。可以使用任何给药途径，例如口服、肠胃外和局部给药。
例如，药物或兽药组合物可以配制用于口服给药，并且可以含有一种或多种生理上相容的载体或赋形剂，为固体或液体形式。这些制剂可以含有常规成分，例如粘合剂、填料、润滑剂和可接受的润湿剂。
药物或兽药组合物可以与常规可注射液体载体(例如水或合适的醇)组合而配制成用于胃肠外给药。用于注射的常规药物或兽医赋形剂，例如稳定剂、增溶剂和缓冲剂，可以包括在这样的组合物中。这些药物或兽药组合物可以肌内、腹膜内或静脉内注射。
药物组合物可以配制用于局部给药。制剂包括霜剂、洗剂、凝胶、粉剂、溶液和贴剂，其中化合物分散或溶解于合适的赋形剂中。
药物组合物可以是任何形式，包括片剂、丸剂、胶囊、水性或油性溶液、悬浮液、乳液或适于在使用前用水或其它合适的液体介质重构的干粉形式，用于立即或延迟释放。
合适的赋形剂和/或载体及其量可由本领域技术人员根据所制备的制剂的类型容易地确定。
如上所述，具有喹啉核心并如前定义被取代(特别是2位的R2’基团、4位的氨基和7位的R4基团)的本发明化合物是G9a和DNMT的双重抑制剂。对于本发明的目的，这意味着当在本发明中描述的酶学测定中测量G9a和DNMT的抑制时，如上定义的化合物能够以≤10μM，优选≤1μM，更优选≤500nM的IC50值抑制G9a，并且还能够以≤10μM，优选≤1μM，更优选≤500nM的IC50值抑制一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT。
作为G9a和DNMT的双重抑制剂，本发明的化合物可用于治疗和/或预防癌症。
对于本发明的目的，疾病的术语“治疗”是指当药物用于表现出疾病发作症状的受试者时，停止或延迟疾病进展。术语“预防”是指当药物用于没有显示疾病发作的症状但具有高发病风险的受试者中时，停止或延迟疾病发作的症状。
在一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，所述癌症选自由血液癌和实体瘤组成的组。更具体地，血液癌选自白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤；和实体瘤选自膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、成胶质细胞瘤、肝癌、肺癌、黑素瘤、胰腺癌、前列腺癌和肾癌。
式(I')化合物可以与其它癌症治疗剂协同地组合发挥效果。因此，在一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合中，本发明涉及式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导的对癌症治疗和/或预防，其中治疗包括向受试者同时、依次或分别地施用式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐、或式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，和一种或多种其它癌症治疗化合物。
作为另选，上述实施方式可以被阐述为式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐、或式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用；其中所述治疗包括向受试者同时、依次或分别给予式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，和一种或多种其它癌症治疗化合物。
作为另选，上述实施方式可以被阐述为用于治疗和/或预防癌症的方法，所述方法包括在需要的受试对象包括人中施用有效量的先前定义的式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，和一种或多种药学上或兽医学上可接受的赋形剂或载体；其中所述治疗包括向受试者同时、依次或分别给予式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，和一种或多种其它癌症治疗化合物。
其它癌症治疗化合物的实例包括但不限于：
-蛋白体抑制剂；例如硼替佐米、卡载福米(Calzirfomid)等
-免疫调节剂(IMID)；例如雷利度、塔利度胺、普马利多、来那度胺等。
-单克隆抗体；例如利妥昔单抗、SAR650984、达拉图单抗(Daratumumab)、易普利姆单抗、尼沃卢单抗(Nivolumab)、西妥昔单抗、帕尼单抗、贝伐单抗、帕妥株单抗(Pertuzumab)、阿柏西普、雷莫芦单抗、赫赛汀、拉姆罗里单抗(Lambrolizumab)等。
-激酶抑制剂；例如伊马替尼、伊布替尼、埃罗替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼、雷法菲尼、帕唑帕尼、阿昔替尼、卡波替尼、阿法替尼、吉非替尼、达扣替尼(Dacomitinib)、可左替尼(Crizotinib)、赛莱替尼(Ceritinib)、大若替尼(Dabrafenib)等。
-组蛋白脱乙酰酶抑制剂；例如伏立诺他、帕比司他、螺丝立诺司他(Rocilinostat)等
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，癌症选自急性淋巴细胞性白血病(ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、成胶质细胞瘤、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、急性髓性白血病、套细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
此外，本发明的化合物还可用于诱导多能干细胞的产生。因此，该方面涉及如上定义的式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐或式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物在产生诱导的多能干细胞中的应用；并且还可以阐述为产生诱导多能干细胞的方法，所述方法包括将分离的细胞与一种或多种转录因子和式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐或式(I’)化合物或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物一起培养的步骤。
本领域技术人员考虑到待重编程的细胞的类型将知道如何调整培养条件、转录因子和用于进行上述方法的适当的重编程系统。通常，可以使用一种或多种转录因子，例如OCT4(O)、SOX2(S)、KLF4(K)和cMYC(M)，优选2或4种转录因子。
在另一个实施方式中，任选地与上文或下文所述的各种实施方式的一个或多个特征组合，分离的细胞是分离的成纤维细胞。
在整个说明书和权利要求书中，词语“包括”及其变型不意图排除其他技术特征、添加剂、组件或步骤。此外，词语“包括”涵盖“由...组成”的情况。本发明的其它目的、优点和特征对于本领域技术人员来说在阅读本说明书后将变得显而易见，或者可以通过本发明的实践来了解。提供以下实施例作为说明，并且它们不旨在限制本发明。此外，本发明涵盖本文所述的特定和优选实施方式的所有可能的组合。
实施例
制备型HPLC纯化方法的一般程序：
使用来自233泵(二元)的Gilson281、自动进样器和UV检测器进行HPLC测量。通过LC-MS检测级分。MS检测器配置有电喷雾电离源。源温度保持在300-350℃。
HPLC方法(纯化方法)：
方法1：在Luna C18(100×30mm；4um)上进行反相HPLC。溶剂A：含0.075％三氟乙酸的水；溶剂B：含0.075％三氟乙酸的乙腈。梯度：在室温下，25mL/min，在6分钟内，20％B至40％B；然后25mL/min，40％B，2分钟，UV检测器。
方法2：在luna(100×30mm；5μm)上进行反相HPLC。溶剂A：含0.075％TFA的水；溶剂B：含0.075％TFA的乙腈。梯度：在25℃，10分钟内13％B至33％B；然后33％B，历时4分钟，流速：25mL/min，PDA。
方法3：在Luna C18(100×30mm；4um)上进行反相HPLC。溶剂A：含0.075％三氟乙酸的水；溶剂B：含0.075％三氟乙酸的乙腈。梯度：在室温下，25mL/min，6分钟内20％B至45％B；然后25mL/min，40％B，3分钟，UV检测器。
方法4：在luna(100×30mm；5μm)上进行反相HPLC。溶剂A：含0.075％TFA的水；溶剂B：含0.075％TFA的乙腈。梯度：在25℃，10分钟内10％B至30％B；然后30％B，历时5分钟，流速：20mL/min，PDA。
方法5：通过在luna(100×30mm；5um)上进行制备型HPLC反相HPLC来纯化。溶剂A：含0.075％TFA的水；溶剂B：含0.075％TFA的乙腈。梯度：在25℃，6分钟内3％B至23％B；然后23％B，历时4分钟，流速：25ml/min，PDA。
方法6：在Luna C18(100×30mm；4um)上进行反相HPLC。溶剂A：含0.075％TFA的水；溶剂B：含0.075％TFA的乙腈。梯度：在25℃，20mL/min，6分钟内25％B至45％B；然后25mL/min，40％B，3分钟，UV检测器。
在实施例中使用以下缩写：
HPLC：高效液相色谱；TLC：薄层色谱；MW：微波；calc.:计算值；conc.:浓；RT：室温；Rt：保留时间；Boc：叔丁氧基羰基；DMAP：4-二甲基氨基吡啶；DCM：二氯甲烷；DIAD：偶氮二羧酸二异丙酯；DMF：二甲基甲酰胺；DMSO：二甲基亚砜；EA：乙酸乙酯；EDC.HCl：1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐；eq：等当量；ESI-MS：电喷雾电离质谱；Et3N：三乙胺；HOBt：羟基苯并三唑；LDA：二异丙基氨基锂；NMM：N-甲基吗啉；PE：石油醚；TFA：三氟乙酸；THF：四氢呋喃；THP：四氢吡喃；DEAD：二乙基偶氮二羧酸酯；BINAP：2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘；X-Phos：2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯；PPA：多磷酸；DME：1,2-二甲氧基乙烷。
试剂R-05b：三丁基-(5-乙基-2-呋喃基)锡烷的制备
在-78℃下向市售2-乙基呋喃(1.92g，20mmol)的THF(100mL)溶液中缓慢加入n-BuLi(8.8mL，22mmol)，然后在-25℃下搅拌2小时。然后，在-78℃下加入三丁基氯化锡(6.89g，20mol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水淬灭并用AcOEt萃取。将有机层真空浓缩，得到所需试剂R-05b(1g，13％)。ESI-MS(M+1)：387.1。C18H34OSn计算值：386.1。
合成路线1
条件：a)在THF中的R-01(1.3当量)、PPh3(2当量)、DEAD(2当量)，室温下1小时；b)Pd/C在MeOH，H2气氛中，室温下3小时；c)丙二酸(1.1当量)在POCl3中的溶液，室温4小时，然后在90℃下过夜；d)4,4,4-三氟-3-氧代丁酸乙酯(1当量)在PPA中在120℃下反应1小时；e)POCl3，110℃，2小时。
在上述方案中，R3是H、Cl、OCF3或O(C1-C6)烷基，Ra是含有氮和/或氧原子的烃链。
中间体I-02a：1-[3-(2-甲氧基-5-硝基-苯氧基)丙基]-吡咯烷的制备
向市售2-甲氧基-5-硝基-苯酚的溶液中加入：I-01a(19.6g，0.12mol)在THF(200mL)中，PPh3(61g，0.23mol)，市售3-吡咯烷-1-基-丙-1-醇：在0℃下加入R-01a(15g，0.16mol)和DEAD(40g，0.23mol)，将溶液在室温下搅拌5小时。将反应混合物浓缩并用AcOEt萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过柱色谱法(洗脱剂梯度PE：EA＝1:0至3:1)纯化，得到中间体I-02a(14g，44％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：281。C14H20N2O4计算值：280.1。
中间体I-02b：1-[3-(3-硝基苯氧基)丙基]吡咯烷的制备
从市售3-硝基苯酚：I-01b开始，以类似于I-02a的方式获得中间体I-02b。37％产率，ESI-MS(M+1)：251。C13H18N2O3计算值：250.1。
中间体I-03a：4-甲氧基-3-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)苯胺的制备
向中间体I-02a(14g，0.05mol)在MeOH(200mL)中的溶液中加入Pd/C(3g)。将溶液在室温下在H2气氛中搅拌3小时。将溶液过滤并浓缩，得到中间体I-03a(12g，96％)，为黄色油状物。ESI-MS(M+1)：251。C14H22N2O2计算值：250.1。
中间体I-03b：3-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)苯胺的制备
以与I-03a类似的方式，从中间体I-02b开始，获得中间体I-03b。96％产率，ESI-MS(M+1)：221。C13H20N2O计算值：220.1。
中间体I-04a：2,4-二氯-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹诺酮的制备
在室温下向中间体I-03a(12.4g，0.049mol)在POCl3(200mL)中的溶液中加入市售丙二酸(5.67，0.055mol)。在室温下搅拌4小时后，将溶液在90℃加热过夜；将溶液浓缩并倒入冰水中，然后用AcOEt萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到中间体I-04a(10g，66％)，为浅黄色固体。ESI-MS(M+1)：355。C17H20Cl2N2O2计算值：354.1。
中间体I-04b：2,4-二氯-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹诺酮的制备
从中间体I-03b开始，以类似于I-04a的方式获得中间体I-04b。34％产率，ESI-MS(M+1)：325。C16H18Cl2N2O计算值：324.1。
中间体I-04c：2,4-二氯-6,7-二甲氧基-喹啉-3,4-二甲氧基苯胺的制备
从市售3,4-二甲氧基苯胺：I-03c开始，以类似于I-04a的方式获得中间体I-04c。59％产率，ESI-MS(M+1)：258。为59％)，为浅黄色固体。ESI-MS(M+1)：258。C11H9Cl2NO2计算值：257.0。
按照与由化合物I-01得到中间体I-04a相同的合成路线(3个步骤)，依照下表使用表中指出的试剂得到以下中间体：
中间体I-05a：6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-2-(三氟甲基)喹啉-4-醇的 制备
PPA(50mL)在圆底烧瓶中在搅拌下80℃加热，然后在80-100℃下加入中间体I-03a(5g，0.02mol)。加入后，然后在15-20分钟内向反应混合物中加入市售的4,4,4-三氟-3-氧代丁酸乙酯(3.68g，0.02mol)。将反应混合物在120℃剧烈搅拌12小时。然后，将混合物倒入冰水中，通过加入Na2CO3将pH调节至8，然后真空浓缩并用DCM:MeOH(3:1)萃取。将合并的有机层在真空下浓缩，得到中间体I-05a(2.5g，32％)。ESI-MS(M+1)：371。C18H21F3N2O3计算值：370.1。
中间体I-06a：4-氯-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-2-(三氟甲基)喹诺酮 的制备
将中间体I-05a(370mg，1mmol)溶于POCl3(30mL)中，然后在110℃下搅拌2小时。将反应混合物在真空下浓缩，然后用冰水猝灭并用AcOEt萃取，将有机相用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到所需的中间体I-06a(200mg)。ESI-MS(M+1)：389。C18H20ClF3N2O2计算值：388.1。
合成路线2
条件：a)R-02(1.5当量)、Pd2(dba)3(0.1当量)、Cs2CO3(2当量)、BINAP(0.1当量)在二氧六环中，110℃下过夜；b)R-03(5当量)、Pd2(dba)3(0.2当量)，Cs2CO3(5当量)在二氧六环中，mw，在120℃1小时；c)NaOR(25％)，在室温下过夜。
在上述方案中，R1是环(Cy)或烃链，其任选地含有氮、氧和/或氟原子，Cy是芳基、杂芳基、碳环或杂环；R3是O(C1-C6)烷基；Ra和Rc独立地是烃链，其任选地含有氮原子。
中间体I-07a：4-氯-6,7-二甲氧基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)喹诺酮的制备
向中间体I-04c(3g，0.01mol)的二氧六环(30mL)溶液中加入Cs2CO3(6.52g，0.02mol)、BINAP(0.62g，0.001mol)、Pd2(dba)3(0.92g，0.001mol)和R-02a：1-甲基-哌嗪(3.5g，0.035mol)。将混合物在110℃加热过夜。将溶液浓缩并用AcOEt萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，通过制备型HPLC(通用程序，方法1)纯化，得到中间体I-07a(1g，27％)黄色固体。ESI-MS(M+1)：322。C16H20ClN3O2计算值：321.1。
中间体I-07b：4-氯-6-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基) 喹啉的制备
从中间体I-04a开始，以类似于I-07a的方式获得中间体I-07b。18％产率，ESI-MS(M+1)：419。C22H31ClN4O2计算值：418.2。
中间体I-08a：4-氯-2,6-二甲基氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉的制备
将中间体I-04a(1.5g，4.24mmol)溶于NaOMe(25mL，25％)中，然后在室温下搅拌过夜。通过加入水淬灭反应混合物。分离有机相，浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(通用程序，方法1)纯化，得到所需的中间体I-08a(0.5g，34％)ESI-MS(M+：351。C18H23ClN2O3计算值：350.1。
化合物1-01：6,7-二甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉- 4-胺；2-三氟乙酸的制备
向中间体I-07a(2.5g，7.8mmol)的二氧六环(50mL)溶液中加入Cs2CO3(5.08g，5.6mmol)、BINAP(0.48g，0.78mol)、Pd2(dba)3(0.7g，0.78mol)和R-03a：1-甲基-哌啶-4-基胺(1.77g，15.6mmol)。将混合物在110℃加热过夜。将溶液浓缩并用AcOEt萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4,干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(通用程序，方法1)纯化，得到化合物1-01，为TFA盐(0.02g，1％)。ESI-MS(M+1)：400.3。C22H33N5O2.C2HF3O2计算值:513.2；Rt为1.79。
按照与化合物1-01相同的合成路线，使用相同的试剂和中间体(除非下表中另有说明)，得到以下化合物：
实施例 Rt(min) [M+1]+ HPLC方法 中间体
1-02 2.14 497 1 I-07b
2-01 1.75 429 1 I-08a
合成路线3a
注：or＝或
条件：a)R-04(1.06当量)、Pd(Ph3)4(0.1当量)、K2CO3(2当量)的二氧六环溶液在120℃下过夜或在110℃下mw2小时；b)R-05(1当量)、Pd(PPh3)Cl2(0.1当量)在DMF中，在110℃下12小时；c)在DME中的R-03(5当量)、Pd2(dba)3(0.15当量)、联苯-2-基-二环己基-膦(0.15当量)、K3PO4(3当量)在110℃下mw 3小时；d)在甲苯中的R-03(3当量)、Pd2(dba)3(0.3当量)、Xantphos(0.3当量)、NaOBu-t(3当量)在100℃下mw3小时；e)在110℃下，在二氧六环中的R-03(3当量)、Pd2(dba)3(0.3当量)、BINAP(0.3当量)、Cs2CO3(3当量)，在110℃下mw 3小时。
在上述方案中，R1是环(Cy)或烃链，其任选地含有氮、氧和/或氟原子，Cy是芳基、杂芳基、碳环或杂环；R2是芳基或杂芳基；R3是H、Cl、OCF3或O(C1-C6)烷基；Ra是含有氮和/或氧原子的烃链.
中间体I-09a：4-氯-6,7-二甲氧基-2-甲基-喹啉的制备
向中间体I-04c(4g，0.016mol)在二氧六环(60mL)中的溶液中,加入甲基硼酸(R-04a)(1.02g，0.017mol)、K2CO3(4.3g，0.0312mol)、Pd(Ph3)4(1.8g，0.0016mol)，将溶液加热至120℃过夜。将反应混合物浓缩并用AcOEt萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过柱色谱法(洗脱剂梯度PE：EA＝1:0至3:1)纯化，得到中间体I-09a(0.7g，18％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：238。C12H12ClNO2计算值：237.0。
按照与中间体I-09a相同的合成路线并使用相同的试剂和中间体(除非下表另有说明)，得到以下中间体：
中间体I-09s：4-氯-2-(2-呋喃基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹诺酮 的制备
向中间体I-04a(708mg，2mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入市售的三丁基(2-呋喃基)锡烷(R-05a)(716mg，2mmol)和Pd(PPh3)Cl2(87.7mg，催化剂)。将溶液加热至110℃12小时。将混合物浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，得到中间体I-09s(400mg，52％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：387.2。C21H23ClN2O3计算值：386.1。
除非下表另有说明，按照与中间体I-09s相同的合成路线并使用相同的试剂和中间体，得到以下中间体：
化合物3-01：6,7-二甲氧基-2-甲基-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉-4-胺；2,2,2-三 氟乙酸的制备
向中间体I-09a(100mg，0.42mmol)的DME(5mL)溶液中加入K3PO4(0.26g，1.26mmol)、联苯-2-基-二环己基-膦(0.022g，0.063mmol)、Pd2(dba)3(0.57,0.063mmol)、1-甲基哌啶-4-胺(R-03a)(0.24g，2.1mmol)，将混合物在微波下加热至110℃保持3小时。将溶液浓缩并用AcOEt萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，得到化合物3-01，为TFA盐(0.02g，0.15％产量)。ESI-MS(M+1)：316.2。C18H25N3O2计算值：429.2；Rt为1.54。
化合物3-02：6,7-二甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉- 4-胺；2-三氟乙酸的制备
以与化合物3-01类似的方式，从中间体I-09b开始，获得化合物3-02。通过制备型HPLC纯化(一般程序，方法1)。Y：10％，为TFA盐。ESI-MS(M+1)：382.3。C22H27N3O3.C2HF3O2计算值：495.2；Rt为1.84。
除了下表中另有说明外，按照与化合物3-02相同的合成路线使用相同的试剂，得到以下化合物：
实施例 Rt(min) [M+1]+ HPLC方法 R-03
3-03 2.83 353.1 1 环戊胺(R-03b)
化合物3-04：6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)-7-(3-吡咯 烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
从中间体I-09d开始，以类似于化合物3-01的方式获得化合物3-04。通过制备型HPLC纯化(一般程序，方法1)。Y：20％，为TFA盐。ESI-MS(M+1)：479。C28H38N4O3.C2HF3O2计算值：592.3；Rt为1.47。
除了下表中另有说明外，按照与化合物3-04相同的合成路线使用相同的试剂和中间体，得到以下化合物：
化合物3-43：2-(5-甲基-2-呋喃基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-7-(3-吡咯烷- 1-基丙氧基)喹啉-6-醇；2,2,2-三氟乙酸的制备
在0℃下向化合物3-04(50mg，0.101mmol)在DCM(10mL)中的溶液中缓慢加入BBr3(254.26mg，1.01mmol)，将溶液在0℃下在N2气氛下搅拌2小时。然后，溶液用水淬灭并浓缩得到粗产物，将其通过制备型-HPLC(通用方法3)纯化，得到化合物3-43(11mg，23％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：465.3。C27H36N4O3.C2HF3O2计算值：578.2；Rt为1.6。
化合物3-44：2-(5-甲基-2-呋喃基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基氨基]-7-(3-吡 咯烷-1-基丙氧基)喹啉-6-醇；2,2,2-三氟乙酸的制备
以与化合物3-43类似的方式，从化合物3-07开始获得化合物3-44。通过制备型HPLC纯化(一般程序，方法3)。Y：21％，为TFA盐。ESI-MS(M+1)：479.3。C28H38N4O3.C2HF3O2计算值：592.3；Rt为1.74。
合成路线3b
条件：a)R-06(1当量)、Pd2(dba)3(0.1当量)、BINAP(0.1当量)、Cs2CO33(2当量)，mw，在130℃下5小时；b)HCl/MeOH(4N)，室温下5小时；c)在MeOH中的R-07(3当量)，在室温下1小时，然后在室温下NaBH(OAc)3(3当量)过夜。
在上述方案中，R2是芳基或杂芳基；R3是H、Cl、OCF3或O(C1-C6)烷基；R5是氢或(C1-C6)烷基，Ra是含有氮和/或氧原子的烃链。
中间体I-10a：3-[[6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)- 4-喹啉基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
向中间体I-09d(400mg，1mmol)的1,4-二氧六环(10mL)溶液中加入Cs2CO3(650mg，2mmol)、BINAP(70mg)、Pd2(dba)3(100mg)和市售可得的R-06a：3-氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(224mg，1mmol)。将反应混合物在微波下加热至130℃达5小时。将溶液浓缩并用AcOEt萃取。有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(通用程序，方法3)纯化，得到中间体I-10a(200mg，17％)黄色固体。ESI-MS(M+1)：605.3。C35H48N4O5计算值：604.3。
中间体I-10b：2-[[6-甲氧基-2-(5-甲基-1H-吡咯-2-基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧 基)-4-喹啉基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
向中间体I-09l(200mg，0.5mmol)的1,4-二氧六环(10mL)溶液中加入Cs2CO3(325mg，1mmol)，BINAP(35mg，催化剂)，Pd2(dba)3(50mg)和市售可得的R-06b：2-氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(180mg，0.75mmol)。将反应混合物在120℃加热12小时。将溶液浓缩并用EtOAc萃取。分离有机相，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥过滤并浓缩得到粗产物，通过制备型HPLC(通用程序，方法3)纯化，得到中间体I-10b(80mg，17％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：604.3。C35H49N5O4计算值：603.3。
中间体I-10c：2-[[2-(5-乙基-2-呋喃基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)- 4-喹啉基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
以与中间体I-10b类似的方式，从I-09t开始获得中间体I-10c。44％产率。ESI-MS(M+1)：619.3，C36H50N4O5计算值。
中间体I-10d：3-[[2-(5-乙基-2-呋喃基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)- 4-喹啉基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
以与中间体I-10a类似的方式，从I-09t开始获得中间体I-10d。24％产率。ESI-MS(M+1)：619.4，C36H50N4O5计算值。
化合物4-01：N-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-3-基)-6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-7- (3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
向中间体I-10a(60.4mg，0.1mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入HCl/MeOH(5mL，4M)，将溶液在室温下搅拌5小时。将溶液浓缩得到化合物4-01，为TFA盐(49mg，97％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：505.3。C30H40N4O3.C2HF3O2计算值：618.3；Rt为2.29。
化合物4-02：N-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-甲氧基-2-(5-甲基-1H-吡咯-2- 基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4胺盐酸盐的制备
以与化合物4-01类似的方式，从I-10b开始获得作为HCl盐的化合物4-02。92％产率。ESI-MS(M+1)：504.3。C30H41N5O2.ClH计算值:539.3；Rt为1.89。
化合物4-03：N-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(5-乙基-2-呋喃基)-6-甲氧基-7- (3-吡咯烷-1-基-吡啶-4-基丙氧基)喹啉-4-胺：2,2,2-三氟乙酸的制备
以与化合物4-01类似的方式，从I-10c开始获得作为TFA盐的化合物4-03。通过制备型HPLC(一般程序，方法3)纯化，34％产率。ESI-MS(M+1)：519.4。C31H42N4O3.C2HF3O2计算值：632.3；Rt为1.85。
化合物4-04：N-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-3-基)-2-(5-乙基-2-呋喃基)-6-甲氧基-7- (3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺盐酸盐的制备
以与化合物4-01类似的方式，从I-10d开始获得作为HCl盐的化合物4-04。89％产率。ESI-MS(M+1)：519.4。C31H42N4O3.HCl计算值：554.3。
化合物5-01：6-甲氧基-N-(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-3-基)-2-(5-甲基-2-呋 喃基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
向化合物4-01(50.5mg，0.1mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入R-07a：(HCHO)n(9mg，0.3mmol)。将溶液在室温下搅拌1小时，然后加入NaBH(OAc)3(25mg，0.3mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(一般程序，方法3)纯化，得到化合物5-01，为TFA盐(25mg，48％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：519.3。C31H42N4O3.C2HF3O2计算值：632.3；Rt为2.29。
除了下表中另有说明外，按照与化合物5-01相同的合成路线使用相同的试剂得到以下化合物：
化合物5-05：6-甲氧基-N-(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(5-甲基-1H-吡 咯-2-基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
以与化合物5-01类似的方式，从4-02开始获得化合物5-05。通过制备型HPLC(一般程序，方法3)纯化，35％产率。ESI-MS(M+1)：518.4。C31H43N5O2.C2HF3O2计算值：631.3；Rt为1.83。
化合物5-06：2-(5-乙基-2-呋喃基)-6-甲氧基-N-(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬烷- 2-基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
以与化合物5-01类似的方式，从4-03开始获得化合物5-06。通过制备型HPLC(一般程序，方法6)纯化，19％产率。ESI-MS(M+1)：533.4。C32H44N4O3.C2HF3O2计算值：646.3；Rt为1.88。
化合物5-07：2-(5-乙基-2-呋喃基)-6-甲氧基-N-(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬烷- 3-基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
以与化合物5-01类似的方式，从4-04开始获得化合物5-07。通过制备型HPLC(一般程序，方法6)纯化，96％产率。ESI-MS(M+1)：533.5。C32H44N4O3.C2HF3O2计算值：646.3；Rt为1.90。
合成路线4
条件：a)在二氧六环/水(5/1)中的R-04(1当量)、Pd(Ph3)4(0.3当量)、K2CO3(2当量)在120℃下mw 1小时；b)在1,4-二氧六环中的R-03(3当量)、Pd2(dba)3(0.3当量)、BINAP(0.3当量)、Cs2CO3(4当量)，在110℃下mw 1小时；c)H2，Pd/C在EtOH中，在室温下过夜。
在上述方案中，R1是环(Cy)或任选含有氮、氧和/或氟原子的烃链，Cy是芳基、杂芳基、碳环或杂环；R3是O(C1-C6)烷基；Ra是含有氮原子的烃链，X是碳或氧原子。
中间体I-11a：4-氯-2-(环己烯-1-基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹诺 酮的制备
向中间体I-04a(708mg，2mmol)在二氧六环/水(5/1mL)中的溶液中加入K2CO3(27mg，0.20mmol)、Pd(PPh3)4(233mg，30％-(环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(R-04i)(416mg，2mmol)，将溶液在120℃在MW下加热1小时，然后将混合物浓缩并用AcOEt萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过柱色谱法(洗脱剂梯度PE：EA＝1:0至3:1)纯化，得到中间体I-11a(0.4g，50％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：401。C23H29ClN2O2计算值：400.2。
化合物6-01：2-(环己烯-1-基)-6-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-7-(3-吡咯烷- 1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
从中间体I-11a开始，以类似于化合物1-01的方式获得化合物6-01。通过制备型HPLC(一般程序，方法5)纯化。Y：20％，为TFA盐。ESI-MS(M+1)：479.6。C29H42N4O2.C2HF3O2计算值：592.3；Rt为1.48。
按照与化合物6-01相同的合成路线并使用下表中所示的试剂，得到以下化合物：
化合物6-03：4-[[2-(环己烯-1-基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-4-喹 啉基]氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
向中间体I-11a(150mg，374.12μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(R-03x)(374.6mg，1.87mmol)的二氧六环(30mL)溶液中依次加入Pd2(dba)3(68.5mg，74.82μmol)，BINAP(93.2mg，149.65μmol)和Cs2CO3(304.8mg，935.30μmol)。将所得混合物在N2下在130℃下搅拌36小时。然后，将混合物用水(50mL)稀释，并用EtOAc(2×40mL)萃取。合并的有机相用盐水(80mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到化合物6-03(156mg，73.83％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：565.4，C33H48N4O4计算值。
化合物7-01：2-环己基-6-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧 基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
在H2下向化合物6-01(47.8mg，0.1mmol)的EtOH(10mL)溶液中加入Pd/C(15mg)。将溶液在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，浓缩滤液，得到所需的产物化合物7-01，为TFA盐(0.048g，95％产率)，ESI-MS(M+1)：481。C29H44N4O2.C2HF3O2计算值:594.3；Rt为1.54。
化合物7-02：6-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-2-四 氢吡喃-4-基-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
从化合物6-02开始，以类似于化合物7-01的方式获得化合物7-02。63.5％产率，为TFA盐。ESI-MS(M+1)：483.3。C28H42N4O3.C2HF3O2计算值：596.3；Rt为2.44。
化合物7-03：4-[[2-环己基-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-4-喹啉基]氨 基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
从化合物6-03开始，以类似于化合物7-01的方式获得化合物7-03。99％产率。ESI-MS(M+1)：567.5，C33H50N4O4计算值。
化合物7-04：2-环己基-6-甲氧基-N-(4-哌啶基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹 啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
将化合物7-03(65.00mg，114.68μmol)在HCl/EtOAc(1.0M，20.00mL)中的溶液在16℃下搅拌4小时。然后，将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，得到所需的产物7-04，为TFA盐(40.3mg，60.5％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：467.4。C28H42N4O2.C2HF3O2计算值：580.3；Rt为1.73。
化合物7-05：2-环己基-N-(1-异丙基-4-哌啶基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙 氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
16℃在N2下向化合物7-04(90mg，178.88μmol)和丙酮(62.4mg，1.07mmol)在THF(30mL)中的混合物中一起加入AcOH(64.5mg，1.07mmol)和NaBH3CN。将混合物在50℃下搅拌15小时。然后，将混合物冷却至16℃，过滤并真空浓缩。残余物通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，得到呈黄色固体的作为TFA盐的所需产物7-05(38mg，33％产率)。ESI-MS(M+1)：509.5。C31H48N4O2.C2HF3O2计算值：622.3；Rt为1.81。
合成路线5
条件：a)在110℃下，在二氧六环/水(5/1)中的R-04k(0.9当量)、Pd(Ph3)4(0.1当量)、Na2CO3(3当量)中mw 2小时；b)在MeOH中的R-02(3当量)、NaBH3CN(5当量)，室温12小时；c)在甲苯中的R-03(5当量)、Pd2(dba)3(0.3当量)、x-Phos(0.2当量)、t-BuOK(1.5当量)，在130℃，mw，2小时；d)苯基膦酰二氯(2当量)、吡啶(4当量)、NH2OH.HCl(1当量)在MeOH/DCM(1/4)中室温15小时，然后NaBH3CN(9当量)在室温下12小时。
在上述方案中，R3、Ra和Rc如前所定义，R1是环(Cy)或任选含有氮、氧和/或氟原子的烃链，Cy是芳基、杂芳基、碳环或杂环；R3是O(C1-C6)烷基，Ra是含有氮原子的烃链。
中间体I-12a：5-[4-氯-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-2-喹啉基]呋喃-2- 甲醛的制备
向中间体I-04a(1g，2.8mmol)的1,4-二氧六环/H2O(15/3mL)溶液中加入Na2CO3(890mg，8.4mmol)、Pd(PPh3)4(323mg，0.28mmol)和(5-甲酰基-2-呋喃基)硼酸(R-04k)(347mg，2.52mmol)。将溶液在110℃微波加热2小时。将混合物浓缩并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过制备型TLC纯化，得到中间体I-12a(0.5g，47％产率)，为浅黄色固体。ESI-MS(M+1)：415。C22H23ClN2O4计算值：414.1。
中间体I-13a：1-[5-[4-氯-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-2-喹啉基]-2- 呋喃基]-N，N二甲基甲胺的制备
向中间体I-12a(180mg，0.43mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入二甲胺(R-02b)(105mg，1.30mmol)。将溶液在室温下搅拌1.5小时，将NaBH3CN(135mg，2.15mol)加入到溶液中。将溶液在室温下搅拌12小时。将混合物用水淬灭并用AcOEt萃取。有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，得到纯的中间体I-13a(100mg，52％产率)为黄色固体。ESI-MS(M+1)：444。C24H30ClN3O3计算值：443.2。
化合物8-01：2-[5-[(二甲基氨基)甲基]-2-呋喃基]-6-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌 啶基)-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
向中间体I-13a(80mg，0.18mmol)在甲苯(5mL)中的溶液中加入t-BuOK(0.27mL，0.27mmol)、x-Phos(17mg，0.036mmol)、Pd2(dba)3(49mg，0.054mmol)和R-03a：1-甲基哌啶-4-胺(119mg，0.9mmol)。将溶液在微波下加热至130℃保持2小时。将混合物用水淬灭并用AcOEt萃取。有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，纯化(一般步骤，方法1)，得到TFA盐形式的化合物8-01(20.7mg，22％产率)。ESI-MS(M+1)：522.3。C30H43N5O3.C2HF3O2计算值：635.3；Rt为1.93。
根据与化合物8-01相同的合成路线并使用下表中所示的试剂，获得以下化合物：
实施例 Rt(min) [M+1]+ HPLC方法 试剂
8-02 1.98 522.3 1 乙胺(R-02c)
中间体I-14a：[5-[4-氯-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-2-喹啉基]-2-呋 喃基]甲醇的制备
向中间体I-12a(200mg，0.48mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入NaBH4(91.2mg，2.4mmol)。将溶液在室温下搅拌2小时。浓缩混合物得到粗产物，通过制备型TLC纯化，得到中间体I-14a(0.1g，49％)，为浅黄色固体。ESI-MS(M+1)：417。C22H25ClN2O4计算值416.1。
化合物9-01：[5-[6-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-7-(3-吡咯烷-1-基丙 氧基)-2-喹啉基]-2-呋喃基]甲醇；2,2,2-三氟乙酸的制备
向中间体I-14a(90mg，0.21mmol)的1,4-二氧六环(4mL)溶液中加入Cs2CO3(0.21g，0.65mmol)、BINAP(0.027g，0.043mmol)、Pd2(dba)3(0.059g，0.065mmol)和1-甲基哌啶-4-胺(0.086g，0.65mmol)。将该溶液在微波下加热至120℃达5小时。将混合物用水淬灭并用AcOEt萃取。有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC(通用程序，方法3)纯化，得到化合物9-01，为TFA盐(10mg，8％)。ESI-MS(M+1)：495。C28H38N4O4.C2HF3O2计算值：608.2；Rt为2.43。
中间体I-15a：5-[4-氯-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)-2-喹啉基]呋喃-2- 甲腈的制备
向中间体I-12a(100mg，0.24mmol)在MeOH/DCM(1/4mL)中的溶液中加入苯基膦酰二氯(94mg，0.48mmol)、吡啶(76mg，0.96mmol)和NH2OH.HCl(16.7mg，0.24mmol)。将混合物在室温下搅拌15小时。然后，加入NaBH3CN(135mg，2.15mol)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。将混合物浓缩并用AcOEt/水萃取。分离有机层，用NaHCO3盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱纯化，得到中间体I-15a(50mg，51％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：412。C22H22ClN3O3计算值：411.1。
化合物10-01：5-[6-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)-氨基]-7-(3-吡咯烷-1-基丙 氧基)-2-喹啉基]呋喃-2-甲腈；2,2,2-三氟乙酸的制备
从中间体I-15a开始，以类似于化合物9-01的方式获得化合物10-01。通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，10％产率，为TFA盐。ESI-MS(M+1)：490。C28H35N5O3.C2HF3O2计算值：603.2；Rt为1.91。
合成路线6
注：or＝或
条件：a)Pd/C在MeOH，H2气氛中，室温下24小时；b)丙二酸(1.1当量)在POCl3中，在95℃下12小时；c)R-04(1.1当量)、Pd(Ph3)4(0.1当量)在二氧六环中、K2CO3(1.5当量)在120℃下在水中12小时；d)R-08(1.2当量)、K2CO3(2当量)、DIAD(2当量)在0℃下8小时；e)在二氧六环中的R-03或R-06(2当量)、Pd2(dba)3(0.1当量)、BINAP(0.1当量)、Cs2CO3(2当量)，在120℃下12小时；f)HCl/AcOEt，室温3小时；g)R-07(3当量)、NaBH(OAc)3(3当量)、HCOOH(1当量)在二氧六环中，在100℃下搅拌2小时。
在上述方案中，R1、R2和R3如前面所定义；n为0至3，R5为氢或((C1-C6)烷基，Q为氮且PG为保护基。
中间体I-16a：5-氨基-2-甲氧基-苯酚的制备
在Ar下向市售2-甲氧基-5-硝基-苯酚：I-01a(40g，236.5mmol)的MeOH(300mL)溶液中加入Pd/C(3g)。将悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫数次。将反应混合物在H2(40psi)下在室温下搅拌24小时。然后，将混合物过滤，并将滤液浓缩得到中间体I-16a(25g，76％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：140.1。C7H9NO2计算值：139.06。
中间体I-17a：2,4-二氯-6-甲氧基-喹啉-7-醇的制备
在室温在N2气氛下向中间体I-16a(4.91g，35.29mmol)和丙二酸(7.34g，70.57mmol)的混合物中一次性加入POCl3(70mL)。将混合物在室温下搅拌10分钟，然后在95℃下加热并搅拌12小时。然后，将混合物冷却至室温，并在60℃下减压浓缩，以除去POCl3。将残余物倒入水中并搅拌20分钟。水相用AcOEt萃取。分离有机相，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(PE/EtOAc＝2/1)纯化残余物，得到中间体I-17a(2.10g，24％产率)。ESI-MS(M+1)：244.0。C23H27ClN2O3计算值：242.9。
中间体I-18a：4-氯-6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)喹啉-7-醇的制备
室温N2氛围下向中间体I-17a(6g，24.58mmol)、R-04b：4,4,5,5-四甲基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(5.63g，27.04mmol)和Pd(PPh3)4(2.86g，2.46mmol)在1,6-二氧六环(90mL)中的混合物中一次性加入在H2O(30mL)中的K2CO3(3.40g，36.87mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌12小时。将混合物冷却至室温，用AcOEt萃取。分离有机相，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(PE/EtOAc＝2/1)纯化，得到中间体I-18a(2.1g，29％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：290.1。C15H12ClNO3计算值：289.05。
中间体I-19a：4-[[4-氯-6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-7-喹啉基]氧基甲基] 哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
0℃在N2氛围下向中间体I-18a(650mg，2.24mmol)、R-08a：4-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(540.3mg，2.69mmol)和PPh3(1.18g，4.48mmol)在THF(50mL)中的混合物中一次性加入DIAD(907.34mg，4.48mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌8小时。然后，将混合物冷却至室温并浓缩。加入水和AcOEt。分离有机相，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(PE/EtOAc＝2/1)纯化残余物，得到中间体I-19a(700mg，64％产率)。ESI-MS(M+1)：487.3。C26H31ClN2O5计算值：486.2。
按照与I-19a相同的合成路线，从中间体I-17a出发，使用下表中所示的试剂，得到以下中间体：
中间体I-20a：4-[[6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨 基]喹啉基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
向中间体I-19a(250mg，0.528mmol)和市售可得的R-03a：1-甲基哌啶-4-胺(120.7mg，1.06mmol)在1,4-二氧六环(20mL)中的混合物中，在室温在N2气氛下一次性加入Cs2CO3(344.28mg，1.06mmol)和Pd(dba)2(30.38mg，0.52mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌12小时。将混合物冷却至25℃并浓缩。通过硅胶(DCM/MeOH＝10/1)纯化残余物，得到中间体I-20a(100mg，33％产率)，为黄色固体。
按照与中间体I-20a相同的合成路线并使用下表中所示的试剂，得到以下中间体：
化合物11-01：6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)-7-(4-哌 啶基甲氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
在25℃在N2下，向中间体I-20a(160mg，0.283mmol)的EtOAc(10mL)溶液中一次性加入HCl/EtOAc(10mL)。将反应在25℃下搅拌3小时。然后，将混合物在45℃减压浓缩。残余物通过制备型-HPLC(一般步骤，方法3)纯化，得到化合物11-01，为TFA盐(100mg，76％产率)。ESI-MS(M+1)：465.3。C27H36N4O3.C2HF3O2计算值：578.2；Rt为1.65。
按照与化合物11-01相同的合成路线，从下表中所示的中间体出发，得到以下化合物：
实施例 Rt(min) [M+1]+ HPLC方法 中间体
11-02 1.70 479.4 6 I-20b
11-03 1.82 479.3 6 I-20f
11-04 1.67 451.2 6 I-20e(19-03)
11-05 1.77 464.3 6 I-20h
11-06 1.81 478.3 6 I-20i
11-07 1.94 492.3 6 I-20j
11-08 2.15 407.2 6 I-20k
11-09 1.86 490.3 6 I-20l
11-10 1.77 491.4 6 I-20d
11-11 2.24 478.3 6 I-20m
11-12 1.99 493.3 6 I-20g
11-13 1.90 479.4 6 I-20c
化合物12-01：6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)-7-[(1-甲 基-4-哌啶基)甲氧基]喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
室温下氮气中向化合物11-01(80mg，0.172mmol)的1,4-二氧六环(5mL)溶液中一次性加入R-07a：(HCHO)n(46.53mg、0.516mmol)、NaBH(OAc)3(109.49mg，0.516mmol)和HCOOH(8.27mg，0.172mmol)。将混合物在室温下搅拌10分钟。然后在100℃下搅拌2小时。将粗产物经制备性HPLC(一般程序，方法3)纯化，得到呈黄色固体的作为TFA盐的化合物12-01(15mg，14％产率)。ESI-MS(M+1)：479.4。C28H38N4O3.C2HF3O2计算值：592.2；Rt为1.66。
根据与化合物12-01相同的合成路线，从下表中所示化合物出发，得到以下化合物：
实施例 Rt(min) [M+1]+ HPLC方法 起始原料
12-02 1.61 465.3 6 11-04
12-03 1.79 519.4 6 11-10
12-04 1.93 492.3 6 11-11
12-05 2.00 507.3 6 11-12
12-06 1.90 493.4 6 11-13
合成路线7
条件：a)BBr3(1当量)，DCM，0℃，2小时；b)CF3CH2I(2当量)，DMF，110℃，12小时；c)DIEA(2当量)，PhN(OTf)2(1.5当量)，DMF，0℃，2小时，然后25℃，12小时；d)Zn(CN)2(2当量)，Pd(PPh3)4(催化剂)，DMF，110℃，12小时。
在上述方案中，R1如先前所定义；R2是芳基或杂芳基；R3是OCH3，Ra是含有氮和/或氧原子的烃链。
化合物13-01：2-(5-甲基-2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)-7-(3-吡咯烷-1-基 丙氧基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
向化合物I-21a(100mg，0.215mmol，3-43)在DMF(3mL)中的溶液中加入CF3CH2I(113mg，0.540mmol)，将溶液加热至110℃达12小时。然后，通过制备型HPLC(一般程序，方法6)纯化溶液，得到化合物13-01的TFA盐(4mg，3.41％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：547.3。C29H37F3N4O3.C2HF3O2计算值:660.2；Rt为1.78。
中间体I-22a：羟基(2-(5-甲基呋喃-2-基)-4-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-7-(3- (吡咯烷-1-基))喹啉-6-基)(三氟甲基)-λ 7 -硫烷二酮；2,2,2-三氟乙酸的制备
在0℃，向化合物I-21a(232mg，0.5mmol，3-43)的DMF(5mL)溶液中加入DIEA(202mg，1mmol)和PhN(OTf)2(270mg，0.75mmol)。将溶液在0℃下搅拌2小时，在25℃下搅拌12小时。将混合物浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(一般程序，方法6)纯化，得到中间体I-22a，为TFA盐(180mg，60.4％)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：597.3。C28H35F3N4O5S.C2HF3O2计算值：660.2。
化合物14-01：2-(5-甲基-2-呋喃基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-7-(3-吡咯 烷-1-基丙氧基)喹啉-6-甲腈；2,2,2-三氟乙酸的制备
向中间体I-22a(100mg，0.168mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入Zn(CN)2(39mg，0.336mmol)和Pd(PPh3)4(20mg，催化剂)，溶液加热至110℃达12小时。然后，将溶液浓缩并用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(通用程序，方法6)纯化，得到呈TFA形式的14-01(58mg，72.5％)黄色固体。ESI-MS(M+1)：474.2。C28H35F3N5O2.C2HF3O2计算值：587.2。Rt为1.68。
合成路线8
条件：a)Et3N(2当量)，3-氯-3-氧代丙酸乙酯(1.1当量)，DCM，0℃，然后25℃，12小时；b)LiOH·H2O(1.5当量)，THF/MeOH/H2O(3:3:2)，25℃，16小时；c)POCl3(20当量)，90℃，2小时；d)R-04(1.05eq)，K2CO3(1.5eq)，Pd(PPh3)4(0.1eq)，二氧六环，100℃，16小时；e)将R-03(2当量)，Pd2(dba)3(0.1当量)，Binap(0.1当量)，Cs2CO3(2当量)，二氧六环，110-120℃，f)Pd/C，H2(50Psi)，MeOH，50℃，16h；g)R-09(1.2当量)，Cs2CO3(2当量)，DMF，100℃，16小时；h)Pd/C，H2(50Psi)，MeOH，25℃，16h；i)R-10(1.2当量)，Cs2CO3(2当量)，DMF，100℃，16小时；j)HCl/EtOAc，25℃，2小时；k)R-07(3当量)，NaBH(OAc)3(3当量)，HCOOH(1当量)，MeOH，50-70℃，16小时；l)POCl3(20eq)，105℃，4h；m)1,3-二溴丙烷(1.2当量)，K2CO3(2.5当量)，CH3CN，60℃，88小时；n)R-11(1.5当量)，K2CO3(2当量)，CH3CN，50℃，16-72小时。
在上述方案中，R1如先前所定义；R2是芳基或杂芳基；R3是H、Cl、OCF3或O(C1-C6)烷基；Ra是含有氮和/或氧原子的烃链，R5是氢或(C1-C6)烷基。
中间体I-24a：3-(3-苄氧基-4-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙酸乙酯的制备
在0℃下向在DCM(1L)中的I-23a：3-苄氧基-4-甲氧基-苯胺(35g，0.153mol)和TEA(30.87g，0.306mol)的混合物中滴加3-氯-3-氧代-丙酸乙酯(25.245g，0.168mol)。将混合物在25℃下搅拌12小时，倒入水(2L)中并用DCM萃取2次。将合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩至干，得到I-24a(40g，76.3％)。ESI-MS(M+1)：344.2。C19H21NO5计算值：343.1。
中间体I-25a：3-(3-苄氧基-4-甲氧基-苯胺基)-3-氧代-丙酸的制备
在25℃向中间体I-24a(20.40g，59.41mmol)在THF(100mL)、MeOH(100mL)和H2O(67mL)中的混合物中一次性加入LiOH·H2O(3.74g，89.12mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。通过在45℃下真空旋转蒸发除去有机溶剂。将残余物倒入冰水(w/w＝1/1)(200mL)中并搅拌10分钟。将所得浆液过滤，滤饼在真空下干燥，得到I-25a(19.30g，61.21mmol，粗产物)，为白色固体。ESI-MS(M+1)：316.2。C17H17NO5计算值：315.1。
中间体I-26a：7-苄氧基-2,4-二氯-6-甲氧基-喹啉的制备
将中间体I-25a(7.00g，22.20mmol)悬浮于500mL单颈圆底烧瓶中的POCl3(68.08g，443.99mmol)中。将混合物在90℃在N2下搅拌2小时。然后，将反应混合物冷却至25℃并浓缩以除去POCl3。通过硅胶柱色谱法(洗脱剂梯度PE：EtOAc＝50：1至10：1)进一步纯化残余物，得到I-26a(2.50g，33.69％产率)。ESI-MS(M+1)：334.2。C17H13Cl2NO2计算值：333.0。
中间体I-27a：7-苄氧基-4-氯-6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)喹啉的制备
将中间体I-26a(900.00mg，2.69mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(R-04b)(588.32mg，2.83mmol)、K2CO3(558.30mg，4.04mmol)和Pd(PPh3)4(311.19mg，269.30μmol)的二氧六环(10mL)溶液脱气，然后在N2下100℃下加热16小时。然后，将反应混合物倒入H2O(50mL)中。将混合物用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将有机相用饱和盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，真空浓缩得到残余物，将其通过柱色谱法(洗脱剂梯度PE：EtOAc＝30：1至5：1)纯化，得到I-27a(500.00mg，48.93％产率)。ESI-MS(M+1)：380.1。C22H22ClNO3计算值：379.1。
中间体I-28a：7-苄氧基-6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基) 喹啉-4-胺的制备
将I-27a(500.00mg，1.32mmol)、1-甲基-哌啶-4-基胺(R-03a)(300.63mg，2.63mmol)、Pd2(dba)3(120.54mg，131.63μmol)、BINAP(81.96mg，131.63μmol)和Cs2CO3(857.78mg，2.63mmol)的二氧六环(10mL)溶液脱气，然后在N2下加热至110℃保持16小时。然后，通过柱色谱法(DCM：MeOH＝10：1)纯化反应混合物，得到I-28a(400.00mg，66.23％产率)。ESI-MS(M+1)：458.2。C28H31N3O3计算值：457.2。
中间体I-29a：6-甲氧基-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-2-(5-甲基四氢呋喃-2- 基)喹啉-7-醇的制备
将I-28a(400.00mg，874.20μmol)和Pd/C(100.00mg)在MeOH(20.00mL)中的混合物在50℃下在H2(50psi)下搅拌16小时。然后，通过过滤除去催化剂并将滤液浓缩至干，得到中间体I-29a(300mg，92.38％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：372.3。C21H29N3O3计算值：371.2。
化合物15-01：6-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-2-(5-甲基四氢呋喃-2-基)-7- (3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
在DMF(5.00mL)中的I-29a(200.00mg，538.40μmol)、1-(3-氯丙基)吡咯烷(R-09a)(95.39mg，646.08μmol)和Cs2CO3(350.84mg，1.08mmol)脱气并用N2吹扫3次，然后将混合物在N2气氛下在100℃下搅拌16小时。将混合物浓缩，得到残余物，将其通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，得到化合物15-01，为TFA盐(50.00mg，19.24％产率)，为黄色油状物。ESI-MS(M+1)：483.4。C28H42N4O3.C2HF3O2计算值：596.3，Rt为1.57。
中间体I-30a：6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]喹 啉-7-醇的制备
在N2下向I-28a(457.00mg，998.78μmol)的MeOH(50mL)溶液中加入Pd/C(119.85mg，998.78μmol)。将悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫几次。将混合物在H2(50psi)下在25℃下搅拌16小时。然后，将反应混合物过滤，并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化，用石油醚/乙酸乙酯＝5:1洗脱，得到I-30a(350.00mg，95.37％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：368.2。C21H25N3O3计算值：367.2。
中间体I-31a：6-[[6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨 基]-7-喹啉基]氧基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的制备
向I-30a(100.00mg，272.15μmol)和6-甲基磺酰氧基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(R-10a)(95.15mg，326.58μmol)在DMF(5.00mL)中的混合物中在25℃下在N2下一次性加入Cs2CO3(177.35mg，544.31μmol)。将混合物在100℃下搅拌16小时。然后，将混合物浓缩并通过制备型TLC纯化，得到I-31a(60.00mg，39.18％产率)。ESI-MS(M+1)：563.3。C32H42N4O5计算值：562.3。
中间体I-31b：2-[[6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-4-[(1-甲基-4-哌啶基)氨 基]-7-喹啉基]氧基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
使用2-甲基磺酰氧基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(R-10b)以类似于中间体I-31a的方式得到中间体I-31b。19％产率。ESI-MS(M+1)：591.3。C34H46N4O5计算值：590.3。
化合物16-01：7-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基氧基)-6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃 基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
在50mL单颈圆底烧瓶中将I-31a(20.00mg，35.54μmol)溶于HCl/EtOAc(5.00mL)中。将混合物在25℃在N2下搅拌2小时。然后，将混合物通过制备型HPLC(一般程序，方法6)浓缩，得到呈黄色固体状的16-01的TFA盐(12.00mg，73％产率)。ESI-MS(M+1)：463.3。C27H34N4O3.C2HF3O2计算值：576.2，Rt为1.97。
化合物16-02：7-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基氧基)-6-甲氧基-2-(5-甲基-2-呋喃 基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
从I-31b开始，以类似于化合物16-01的方式获得化合物16-02。通过制备型HPLC(一般程序，方法6)纯化，72％产率。ESI-MS(M+1)：491.3。C29H38N4O3.C2HF3O2计算值：604.3；Rt为2.03。
化合物17-01：6-甲氧基-7-[(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基]-2-(5-甲基- 2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
将16-01(37.00mg，81.53μmol)、(HCHO)n(R-07a)(22.03mg，244.58μmol)、NaBH(OAc)3(51.84mg，244.58μmol)和HCOOH(3.92mg，81.53μmol)在MeOH(5.00mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次。将混合物在70℃下在N2气氛下搅拌16小时。然后，将混合物真空浓缩，得到残余物，将其通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，得到呈黄色固体的TFA盐形式的17-01(9.00mg，23％产率)。ESI-MS(M+1)：477.4。C28H36N4O3.C2HF3O2计算值：590.2，Rt为1.64。
化合物17-02：6-甲氧基-7-[(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)氧基]-2-(5-甲 基-2-呋喃基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
以类似于化合物17-01的方式从16-02开始获得化合物17-02。通过制备型HPLC(一般程序，方法1)纯化，15％产率。ESI-MS(M+1)：505.4。C30H40N4O3.C2HF3O2计算值：618.3；Rt为1.72。
中间体I-32a：2,4-二氯-6-甲氧基-喹啉-7-醇的制备
在500mL单颈圆底烧瓶中将中间体I-25a(7.00g，22.2mmol)悬浮于POCl3(58.35g，380.57mmol)中。将混合物在105℃下在N2下搅拌4小时。然后，将反应混合物冷却至25℃并浓缩以除去POCl3。通过硅胶柱色谱法(洗脱剂梯度PE：EtOAc＝50：1至10：1)进一步纯化残余物，得到I-32a(1.40g，27.4％产率)。ESI-MS(M+1)：244.1。C10H7Cl2NO2计算值：242.99。
中间体I-33a：7-(3-溴丙氧基)-2,4-二氯-6-甲氧基-喹啉的制备
向I-32a(3g，12.29mmol)和1,3-二溴丙烷(2.98g，14.75mmol)在MeCN(60mL)中的溶液中加入K2CO3(4.25g，30.73mmol)。将混合物在60℃下搅拌88小时。然后，将反应混合物真空浓缩，得到残余物，将其用100mL水稀释并过滤。真空浓缩滤饼，并通过硅胶柱色谱法(用PE：EtOAc＝30：1至纯MeOH洗脱)进一步纯化，得到中间体I-33a(1g，22.29％产率)，为白色固体。ESI-MS(M+1)：364.1。C13H12BrCl2NO2计算值：362.94。
中间体I-34a：2,4-二氯-7-[3-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)丙氧基]-6-甲氧基-喹啉 的制备
向I-33a(500mg，1.37mmol)和3,3-二氟吡咯烷(R-11a)(220mg，2.06mmol)在MeCN(50mL)中的溶液中加入K2CO3(378mg，2.74mmol)。将混合物在50℃下搅拌88小时。然后，将反应混合物真空浓缩，得到残余物，将其在100mLDCM和100mL水之间分配。分离有机相，水相用DCM(100mL×3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗中间体I-34a(600mg，粗品)，为灰色固体，其不经进一步纯化用于下一步骤。ESI-MS(M+1)：391.2。C17H18Cl2F2N2O2计算值：390.1。
中间体I-34b：2,4-二氯-7-[3-(4,4-二氟-1-哌啶基)丙氧基]-6-甲氧基-喹啉的 制备
使用4,4-二氟哌啶(R-11b)以类似于中间体I-34a的方法得到中间体I-34b。ESI-MS(M+1)：405.2。C18H20Cl2F2N2O2计算值：404.09。
中间体I-35a：4-氯-7-[3-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)丙氧基]-2-(5-乙基-2-呋喃 基)-6-甲氧基-喹啉的制备
将I-34a(600mg，1.53mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(5-乙基-2-呋喃基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(R-04r)(408mg，1.84mmol)、K2CO3(529mg，3.83mmol)、Pd(PPh3)4(177mg，153.00μmol)在二氧六环(10mL)和H2O(10mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，将混合物在110℃下在N2气氛下搅拌16小时。然后，将反应混合物用DCM(50mL×3)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱色谱法(用PE：EtOAc＝10：1至纯MeOH洗脱)纯化，得到中间体I-35a(400mg，57.98％产率)，为棕色固体。ESI-MS(M+1)：451.3。C23H25ClF2N2O3计算值：450.15。
中间体I-35b：4-氯-7-[3-(4,4-二氟-1-哌啶基)丙氧基]-2-(5-乙基-2-呋喃基)- 6-甲氧基-喹啉的制备
中间体I-35b以与中间体I-35a类似的方式获得。35％产率。ESI-MS(M+1)：465.3。C24H27ClF2N2O3计算值：464.17。
化合物18-01：7-[3-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)丙氧基]-2-(5-乙基-2-呋喃基)-6- 甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
将I-35a(200mg，443.55μmol)、1-甲基-哌啶-4-基胺(R-03a)(101mg，887.10μmol)、Pd2(dba)3(41mg，44.36μmol)、BINAP(28mg，44.36μmol)和Cs2CO3(289mg，887.10μmol)在二氧六环(10mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后将混合物在N2气氛下在120℃下搅拌16小时。然后，将反应混合物真空浓缩，得到残余物，其通过制备型TLC(DCM：MeOH＝10：1)和制备型HPLC(一般程序，方法6)相继纯化，得到化合物18-01，为TFA盐(11mg，3.56％)，为白色固体。ESI-MS(M+1)：529.4。C29H38F2N4O3.C2HF3O2计算值：642.2；Rt为1.80。
化合物18-02：7-[3-(4,4-二氟-1-哌啶基)丙氧基]-2-(5-乙基-2-呋喃基)-6-甲 氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
从I-35b开始，以类似于化合物18-01的方式获得化合物18-02。通过制备型HPLC(一般程序，方法6)纯化，6.6％产率。ESI-MS(M+1)：543.4。C30H40F2N4O3.C2HF3O2计算值：656.3；Rt为1.80。
合成路线9
条件：a)(1-乙氧基环丙氧基)-三甲基-硅烷(6当量)，NaBH3CN(6当量)，AcOH(6当量)，MeOH，60℃，16小时。
在上述方案中，R2是芳基或杂芳基；R3是H、Cl、OCF3或O(C1-C6)烷基，Ra是含有氮和/或氧原子的烃链。
化合物19-01：N-(7-环丙基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(5-乙基-2-呋喃基)- 6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
向化合物4-03(20.00mg，38.56μmol)的MeOH(10.00mL)溶液中加入(1-乙氧基环丙氧基)-三甲基硅烷(40.3mg，231.26μmol)、NaBH3CN(14.54mg，231.36μmol)和ACOH(13.89mg，231.36μmol)。将混合物在60℃下搅拌16小时。然后，将混合物浓缩，并将残余物通过制备型HPLC(一般程序，方法6)纯化，得到纯的化合物19-01，为TFA盐(4.00mg，18.57％产率)，为黄色固体。ESI-MS(M+1)：559.4。C34H46N4O3.C2HF3O2计算值：672.3；Rt为1.95。
化合物19-02：N-(7-环丙基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-3-基)-2-(5-乙基-2-呋喃基)- 6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹啉-4-胺；2,2,2-三氟乙酸的制备
从4-04开始，以类似于化合物19-01的方式获得化合物19-02。通过制备型-HPLC(一般程序，方法6)纯化，54％产率。ESI-MS(M+1)：559.5。C34H46N4O3.C2HF3O2计算值：672.3；Rt为1.91。
生物测试
G9a酶活性测定
测量G9a酶活性的生物化学测定依赖于铕穴状化合物(供体)和XL665(受体)之间的时间分辨荧光能量转移(TR-FRET)。在G9a的酶促反应之后，当生物素化的组蛋白单甲基-K3K9肽与穴状化合物标记的抗二甲基组蛋白H3K9抗体(CisBioCat#61KB2KAE)和链霉亲和素XL665(CisBioCat#610SAXLA)一起温育时，观察到TR-FRET。
在杆状病毒感染的Sf9细胞表达系统中表达的人G9a酶获自BPSBiosciences(Cat。#51001)。
酶活性测定在白色384孔板中进行，终体积为20μl，如下：
●在测定缓冲液(50mMTris-HCl，10mMNaCl，4mMDTT，0.01％Tween-20pH9)中制备4μl 2.5x浓缩的载质或所研究的化合物。DMSO的最终百分比为0.5％。
●在测定缓冲液中稀释1n MG9a酶2μl。最终浓度为0.2nM。
●通过加入4μl含有20μM S-腺苷甲硫氨酸和40nM生物素化组蛋白单甲基H3K9肽的底物混合物开始反应。
●在室温下反应1小时。
●通过加入5μl穴状化合物标记的抗二甲基组蛋白H3K9抗体终止酶活性。最终浓度150nM。
●然后，加入5μl链霉亲和素XL665珠。最终浓度为16μM。
●在室温下温育1小时后读取培养板。
对于每个孔，在620nm和665nm测量荧光。然后计算比率(665nm/620nm)，以使培养物干扰最小化。在化合物的载质存在下获得阳性对照。在不存在G9a酶活性的情况下获得阴性对照。利用GraphPrism使用4-参数抑制曲线确定计算的IC50值。
DNMT1酶活性测定
测量DNMT1酶活性的生化测定依赖于使用EPIgeneous甲基转移酶测定(CisBioCat#62SAHPEB)的在lumi4-Tb(供体)和d2(受体)之间的时间分辨荧光能量转移(TR-FRET)。当用Lumi4-Tb标记的S-腺苷高半胱氨酸的特异性抗体与d2-标记的S-腺苷高半胱氨酸一起温育时，观察到TR-FRET。TR-FRET信号与样品中DNMT1酶活性的产物SAH的浓度成反比。
人DNMT1获自ReactionBiologyCorp.(Cat#DMT-21-124)。
酶活性测定在白色384孔板中进行，最终体积为20μl，如下：
●在测定缓冲液(50mMTris-HCl，1mMEDTA，1mMDTT，0.1％TritonX-100,5％甘油pH7.5)中制备4μl 2.5×浓缩的载质或所研究的化合物。DMSO的最终百分比为0.5％。
●在测定缓冲液中稀释1nM DNMT1酶2μl。最终浓度为20nM。
●通过加入4μl含有1μM S-腺苷甲硫氨酸和1μM聚脱氧肌苷聚脱氧胞嘧啶(pdI-pdC)DNA的底物混合物来开始反应。
●反应在37℃下进行15分钟。
●通过加入2μl EPIgeneous甲基转移酶测定中的缓冲液I来停止酶活性。
●在室温下10分钟后，向其中加入4μl在EPIgeneous甲基转移酶测定的缓冲液2中稀释50x的用Lumi4-Tb标记的S型腺苷酸高半胱氨酸特异性的抗体。
●加入4μl在EPIgeneous甲基转移酶测定的缓冲液2中稀释31x的ld2标记的S-腺苷高半胱氨酸。
●在室温下温育1小时后读取培养板。
对于每个孔，在620nm和665nm测量荧光。然后计算比率(665nm/620nm)，以使培养基干扰最小化。在化合物的载质存在下获得阳性对照。在不存在G9a酶活性的情况下获得阴性对照。利用GraphPrism使用4-参数抑制曲线确定计算的IC50值。
DNMT3A和DNMT3B酶活性测定
使用预涂覆有DNMT底物的条形96孔板，用化学发光BPS DNMT通用测定试剂盒(BPS#52035)进行DNMT3A和DNMT3B活性测定。
酶活性测定方案如下：
-通过向每个孔中加入150μL TBST缓冲液(含有0.05％Tween-20的1×Tris缓冲盐水(TBS)，pH8.0)使微孔再水化。在室温下温育15分钟。
-以5-10ng/μL在1xDNMT测定缓冲液2(BPS#52201)中稀释每个纯化的DNMT[DNMT3A/3L(BPS#51106)或DNMT3B/3L(BPS#51109)]。将稀释酶保持在冰上直到使用。
-制备50μL的反应混合物，其由20μL的DNMT(5-10ng/L)、12.5μL的4xDNMT测定缓冲液2(BPS#52201)、2.5μL的S-腺苷甲硫氨酸400μM，浓度为3nM至10μM的测试化合物以及水(补至50μL)组成。
-将整个反应混合物加入底物包被的孔中。在37℃温育120分钟。
-用TBST缓冲液洗涤孔三次。
-向每个孔中加入100μL封闭缓冲液(BPS#52100)。在旋转平台上摇动10分钟。除去上清液。
-用封闭缓冲液将针对5-甲基胞嘧啶的第一抗体(BP的S抗5-甲基胞嘧啶抗体)稀释400倍，并每孔加入100μL。在室温下缓慢摇动温育1小时。
-用TBST缓冲液洗涤板三次，并在封闭缓冲液中在旋转平台上摇动10分钟。除去上清液。
-用封闭缓冲液将第二抗体(HRP标记的二抗1(BPS#52130H))稀释1000倍，并每孔加入100μL。在室温下缓慢振荡温育30分钟。
-用TBST缓冲液洗涤板三次，并在封闭缓冲液中在旋转平台上摇动10分钟。除去上清液。
-在使用前，在冰上混合50μL HRP化学发光底物A(BPS)和50μL HRP化学发光底物B(BPS)，并每孔加入100μL。立即使用BioTekSynergyTM2酶标仪读取发光。
分析和比较化学发光强度数据。在不存在化合物的情况下获得阳性对照。在不存在DNMT酶的情况下获得阴性对照。使用用四参数抑制曲线产生的S形剂量-反应曲线的非线性回归分析确定计算的IC50值。
表2显示了所选化合物的G9a和DNMT的抑制值(IC50)；其中1μM≤IC50≤10μM(+)，500nM≤IC50<1μM(++)，100nM≤IC50<500nM(+++)和IC50<100nM(++++)。
表2
表2中的化合物能够抑制G9a以及一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT，其IC50值≤10μM。
细胞增殖测定
使用CellTiter96水溶液I细胞增殖测定(Promega，Madison，W)在48小时的体外处理后分析细胞增殖。这是用于测定增殖中的活细胞数的比色法。
为了进行测定，除了OCILY-3和OCILY-10细胞系以0.5x106个细胞/ml(50.000个细胞/孔，100μl/孔)的密度培养，HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5细胞系以3000个细胞/孔，100μl/孔的密度培养以外，在96孔板中以1x106细胞/ml的密度培养悬浮细胞(100.000细胞/孔，100μl/孔)，一式三份。从80-90％铺满的烧瓶获得贴壁细胞，并将100μl细胞以5000细胞/孔的密度接种在96孔板中，一式三份。在加入化合物之前，使贴壁细胞附着于孔的底部12小时。在所有情况下，仅使用60个位于内部的小孔以避免任何边界效应。
处理48小时后，将具有悬浮细胞的平板以800g离心10分钟，除去培养基。轻拍具有粘附细胞的平板以除去培养基。然后，将细胞与100ul/孔的培养基和20ul/孔的CellTiter96水溶液I试剂一起孵育。在37℃温育1-3小时后，在96孔板读数器中在490nm处测量吸光度。在仅用细胞系培养基和溶液试剂的孔中测量背景吸光度。数据计算为处理的细胞的总吸光度/未处理的细胞的吸光度的百分比。
表3显示了所选化合物对建立的细胞系和原代培养物的功能响应(GI50)；其中，GI50≥10μM(+)，1μM≤GI50<10μM(++)，100nM≤GI50<1μM(+++)和GI50<100nM(++++)。这些癌细胞系和原代培养物对应于急性淋巴细胞白血病(ALL)CEMO-1和LAL-CUN-2，对应于活化的B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)OCI-Ly3和OCI-Ly10，以及对应于肝细胞癌细胞(HCC)HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5。
表3
表3中的化合物抑制急性淋巴细胞性白血病(ALL)、活化的B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)和肝癌(HCC)细胞系的增殖。
使用上述细胞增殖方案，针对不同的实体瘤和血癌细胞系测试化合物3-04和3-07。
表4(其中GC-DLBCL代表生发中心B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤，AML代表急性髓性白血病，MCL代表套细胞淋巴瘤，MM代表多发性骨髓瘤)显示化合物3-04和3-07对不同细胞系的功能反应；其中，GI50>10μM(+)，1μM<GI50≤10μM(++)，100nM<GI50≤1μM(+++)和GI50≤100nM(++++)。
表4
表4中的化合物抑制不同实体瘤和血癌细胞系的增殖。
表5显示了在建立的细胞系和原代培养物上选择的化合物(双重G9a-DNMT)与选择性G9a(BIX12094和UNC0638)和DNMT抑制剂(5-氮杂胞苷和地西他滨)的比较(GI50)，其中，GI50≥10μM(+)，1μM≤GI50<10μM(++)，100nM≤GI50<1μM(+++)和GI50<100nM(++++)。这些癌细胞系和原代培养物对应于急性淋巴细胞白血病(ALL)CEMO-1和LAL-CUN-2，对应于急性髓性白血病(AML)：OCI-AML-2和MV4-11，以及对应于多发性骨髓瘤(MM)：JJN3和U266。
测试化合物 CEMO-1 LAL-CUN-2 OCI-AML-2 MV4-11 JJN3 U266
BIX12094 ++ ++ ++ + + +
UNC0638 ++ ++ ++ + + +
化合物3-04 +++ +++ +++ +++ ++ ++
化合物3-07 ++++ +++ +++ +++ ++ ++
5-氮杂胞苷 ++ + + ++ + ++
地西他滨 +++ + + + + +
表5
与选择性G9a抑制剂(BIX12094和UNC0638)和DNMT抑制剂(5-氮杂胞苷和地西他滨)相比，双重化合物3-04和3-07是更有效的细胞增殖抑制剂。
具有CEMO-1细胞系的临床前人B-ALL小鼠模型中体内治疗活性的评价。
为了检查体内活性，使用具有RAG2小鼠的人B-ALL的临床前模型。6至8周龄的雌性BALB/cA-Rag2-/-γc-/-小鼠购自荷兰癌症研究所并保持在无病原体的隔离笼中。RAG2小鼠通过尾静脉静脉内(i.v.)注射10×106CEMO-1细胞以产生人B-ALL小鼠模型。在接种细胞后第三天开始处理六组中的动物。第一组作为对照，每天接受安慰剂(盐水)，连续28天通过静脉内注射。
化合物3-04的结果：
第二组用3-04(2.5mg/kg)每日经静脉注射连续28天治疗。每周监测动物的体重减轻并通过人细胞的流式细胞术检查肿瘤负荷的迹象。在细胞接种后，3-04治疗的小鼠(N＝6)的中值存活为91天(SD：±5.72)，而对照小鼠(N＝6)为57天(SD：±10.52)。通过使用统计软件MedCalc计算的具有对数秩检验的Kaplan-Meier方法确定，与对照相比，所述治疗显着延长了该组的存活率(P＝0.0009)(图1)。
慢病毒载体的重编程方法
如前所述(Tiscornia等，NatProtoc.2006；1(1):241-5.)，在293T细胞中产生所用的重编程系统，其由编码人类OCT4(addgene，ref#20726)、SOX2(addgene，ref#20724)、KLF4(addgene，ref#20725)和cMYC(addgene，ref#20723)转录因子(O：S：K：M)囊泡性口炎病毒G(VSVG)包被的慢病毒的四种独立的多西环素诱导型慢病毒载体(FUW-Tet-O类载体)构成。简言之，在与如同上Tiscornia等人所公开条件相同的条件下，用上述FUW-TetO慢病毒载体以及包装质粒psPAX2(addgene，ref#12260)和pMD2.G(addgene，ref#12259)转染293T细胞(ATCC，CRL-3216)。成纤维细胞培养基(FCM)(Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)(Sigma)、10％胎牛血清(FBS)(Gibco)、100U/mL青霉素/链霉素P/S(Lonza)、2mM L-谷氨酰胺Lonza)、0.1mM非必需氨基酸(NEAA)(Lonza))在转染后12小时用新鲜培养基替换，并且在转染后60-72小时收集含病毒的上清液，并通过0.45μm过滤器过滤。合并含有病毒的上清液，用于4种因子感染并在新鲜FCM中以2:2:2:2:1(OCT4:SOX2:KLF4:cMYC:rtTA病毒)的比例补充FUW-M2rtTA病毒(addgene，ref#20342)。
一旦获得慢病毒载体，对BJ人成纤维细胞进行以下重编程方案：
第0天：在FCM中铺板BJ细胞(ATCC，CRL-2522)(在75cm2培养瓶中有106个细胞)。
第1天：在4μg/mL聚凝胺(Sigma)存在下，用FUW-Tet-O载体(感染复数，MOI＝5)的组合对BJ细胞第一次感染。
第2天：BJ细胞第二次感染(与首次感染相同的条件)。
第3天：在新鲜FCM中在2x175cm2培养瓶中重新铺板BJ细胞。
第4天：用0.2μM或0.1μM的测试化合物温育1x175cm2烧瓶，另一个烧瓶仅用FCM温育。根据BJ人成纤维细胞中测定的GI50选择化合物浓度，以避免细胞毒性。
第6天：在先前接种有不同密度：FCM+多西环素1μg/mL(Clontech)中5x104、105和5x105个细胞/板的内部制备的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层的p100培养皿上再铺板BJ细胞(25000个细胞/cm2)。
如(Takahashi，K.等人，Cell2006，126,663-676)所述产生小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)。简言之，用PBS洗涤从12.5-14.5天怀孕的C57BL/6(Harlan)小鼠(6-8周)分离的小鼠胚胎，并去除头部和内脏组织。剩余的躯体在新鲜PBS中洗涤，并使用剪刀剪碎，转移到每个胚胎3mL的0.1mM胰蛋白酶/1mMEDTA溶液(Lonza)中，并在37℃温育10分钟。温育后，再加入每个胚胎3mL的0.1mM胰蛋白酶/1mM EDTA溶液，将混合物在37℃温育10分钟。在胰蛋白酶消化后，加入等量的培养基(每个胚胎6mL的含有10％FBS(Gibco)DMEM(Sigma))，并上下移液几次以帮助组织解离。将上清液转移到新管中，通过离心收集细胞并重悬于新鲜培养基中。将细胞接种在约10个100-mm培养皿中的FCM中。在GammaCell照射器(Gammacell 3000Series#375 Irradiator，MDS Nordion)中以50Gy照射第3代的MEF。
第8天：将培养基更换为iPSC培养基(DMEM-KO(Gibco)、20％敲除血清置换(KSR)(Gibco)、100U/mLP/S(Lonza)、2mM L-谷氨酰胺(Lonza)、0.1mM NEAA(Lonza)、0.1mMβ-巯基乙醇(Gibco)和5ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)(Peprotech))+1μg/mL多西环素和1mM丙戊酸(VPA)(Sigma)。
第10天至30天：每隔一天用新的iPSC培养基+多西环素1μg/mL和VPA 1mM更换用过的培养基。
注意：VPA只在重新编程的第一周添加。
使用逆转录病毒载体的重编程方法
由编码人类OCT4(addgene，ref#17217)和SOX2(addgene，ref#17218)转录因子(O：S)的两种独立的逆转录病毒载体(基于pMXs的载体)组成逆转录病毒重编程系统。如先前所述(TakahashiK等，Cell 2007,131,861-872)在293T细胞中产生VSVG-包被的逆转录病毒。简言之，在与Takahashi等人(同上)公开的那些条件相同的条件下，用上述pMXs-逆转录病毒载体以及包装质粒pUMCV(编码gag-pol，addgene，ref#8449)和pCMV-VSV.G(addgene，ref#8454)转染293T细胞(ATCC，CRL-3216)。转染后12小时用新鲜培养基替换FCM。转染后60-72小时收集含病毒的上清液，并通过0.45μm过滤器过滤。在新鲜FCM中以2：1(O：S)的比例合并用于2因子感染的含病毒的上清液。
一旦获得逆转录病毒载体，对BJ人成纤维细胞进行以下重编程方案：
第0天：在FCM中铺板BJ细胞(ATCC，CRL-2522)(在75cm2培养瓶中有106个细胞)。
第1天：在4μg/mL聚凝胺存在下，用pMX载体(MOI＝5)的组合对BJ细胞第一次感染。
第2天：BJ细胞的第二次感染(与首次感染相同的条件)。
第3天：BJ细胞的第三次感染(与首次感染相同的条件)。感染后12小时用新鲜培养基替换FCM。
第4天：最后感染后24小时，用含有0.2μM的试验化合物的新鲜培养基代替FCM。
第6天：在不同密度：FCM中5x104、105和5x105个细胞/板的内部制备的MEF饲养层上再铺板BJ细胞。
第8天：将FCM改变为iPSC培养基和VPA 1mM。
第10天至30天：每隔一天用新的iPSC培养基和VPA 1mM更换用过的培养基。
注意：VPA只在重新编程的第一周添加。
重编程效率量化
在感染后4周量化重编程效率。根据制造商的方案，使用白细胞碱性磷酸酶试剂盒(Sigma)通过碱性磷酸酶(AP)染色检测ESC样群落的存在。根据下式计算效率：
E(％)＝(AP+群落数)*100/(MEF上铺板的细胞数)
使用化合物3-04处理组和未处理组的用不同转录因子(TF)感染BJ之后的AP+群落数之间的比率计算重编程效率的增加倍数。
iPS生成结果：
使用慢病毒载体(O：S：K：M)的重编程方法：
使用逆转录病毒载体(O：S)的重编程方法：
当在化合物3-04的存在下进行重编程过程时，BJ细胞中的重编程效率显着增加。特别地，BJ细胞与该化合物的温育使得出现更高数目的ESC样群落。当仅2个因子用于细胞重编程时，也观察到重编程效率的这种增加，表明化合物3-04可用于高质量iPSC产生。
参考文献
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Claims (15)

1.式(I)化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I)的任一化合物的或其任何药学上或兽医学上可接受盐的任何立体异构体或它们的混合物，
其中
R1是Ra；
R2是选自由以下(i)至(vi)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-至6-元杂芳环；
(iii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中，R2任选地取代有：
a)一个Cy1或一个Cy2，和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy1的取代基Z1；
其中Cy1或Cy2任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z2的取代基；
R3选自H、Rc、卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(O)Rc’、-OC(O)ORc’、-OC(O)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(O)Rc’、-NRc’C(O)ORc’、-NRc’C(O)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(O)NRc’Rc’、-C(O)Rc’、-C(O)ORc’、-C(O)NRc’Rc’、和-C(O)NRc’ORc’、和-C(O)NRc’SO2Rc’；
R4选自-ORa和-NRaRc’；
每个Ra独立地是Cy2，或任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的Z3；
其中Cy2任选地取代有：
a)一个Cy4；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy4的取代基Z4；
其中Cy4任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z5的取代基；和
其中Cy3任选地取代有：
a)一个Cy5；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy5的取代基Z6；
其中Cy5任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z7的取代基；
每个Rb独立地选自卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(Y)Rc’、-OC(Y)ORc’、-OC(Y)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(Y)Rc’、-NRc’C(Y)ORc’、-NRc’C(Y)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(Y)NRc’Rc’、-C(Y)Rc’、-C(Y)ORc’、-C(Y)NRc’Rc’、-C(Y)NRc’ORc’和-C(O)NRc’SO2Rc’；
每个Rc’独立地是H或Rc；
每个Rc独立地选自由(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链、和3至7元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环组成的组，其中每个Rc任选地取代有一个或多个卤素原子，
Y是O、S、或NRc’；
Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6和Z7独立地选自由(C1-C12)烷基、(C2-C12)烯基、(C2-C12)炔基和具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链组成的组；
Cy1、Cy4和Cy5独立地是选自以下的已知环体系：苯基；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和5或6元杂芳环；
Cy2和Cy3独立地是选自以下的已知环体系：苯基；5或6元杂芳环；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；以及3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合、桥合或螺合；
其中在所述碳环中所有的环原子是碳原子；并且在所述杂环和杂芳环中，一个或多个环原子选自N、O和S；并且其中在所有饱和或部分不饱和的环中一个或两个环原子任选地是C(O)和/或C(NH)和/或C[N(C1-C4)烷基]；
条件是式(I)化合物不是：
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇；
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇盐酸盐；
2-(2-氯苯基)-6,7-二甲氧基-N-(4-吡啶基)喹啉-4-胺；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
5-[[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
5-[[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
苄基-N-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基甲酸酯；
N-苄基-7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺三磷酸盐；和
2-(4-氟苯基)-N7-[(3-甲氧基苯基)甲基]-N4-(4-吡啶基)喹啉-4,7-二胺。
2.如权利要求1所述的式(I)的化合物，其中R2不是未取代的苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、3,4-二氯苯基、4-氟苯基和4-甲氧基苯基。
3.如权利要求1至2中任一项所述的式(I)的化合物，其中R3是-ORc’。
4.如权利要求1至3中任一项所述的式(I)的化合物，其中R4是ORa。
5.如权利要求4所述的式(I)的化合物，其中R4中的Ra是如权利要求1所定义的任选取代的Z3。
6.如权利要求1至5中任一项所述的式(I)的化合物，其中
R2是选自由以下(i)至(iv)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-至6-元杂芳环；
(iii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；和
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
其中R2如权利要求1所定义地被任选地取代。
7.如权利要求6所述的式(I)的化合物，其中R2是苯基或5-至6-元杂芳单环，二者均如权利要求1所定义地被任选地取代。
8.如权利要求7所述的式(I)的化合物，其中R2是如权利要求1所定义地任选地取代的5-至6-元杂芳单环。
9.一种药物或兽药组合物，其包含治疗有效量的权利要求1至8中任一项所定义的式(I)化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐、或式(I)化合物的或其药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体，以及一种或多种药学上或兽医学上可接受的赋形剂或载体。
10.式(I')化合物或其药学上或兽医学上可接受的盐，或式(I')化合物的或其药学上或兽医学可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物，
用于通过抑制组蛋白甲基转移酶G9a和一种或多种选自DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的DNMT而介导对癌症的治疗和/或预防，其中：
R1是Ra；
R2’选自–OZ8、Cy6、和Z8；其中每个Z8任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy7；
其中Cy6任选地取代有：
a)一个Cy1或一个Cy2，和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy1的取代基Z1；
其中Cy1或Cy2任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z2的取代基；
其中Cy7任选地取代有：
a)一个Cy8；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy8的取代基Z9；
其中Cy8任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z10的取代基；
R3选自H、Rc、卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(O)Rc’、-OC(O)ORc’、-OC(O)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(O)Rc’、-NRc’C(O)ORc’、-NRc’C(O)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(O)NRc’Rc’、-C(O)Rc’、-C(O)ORc’、-C(O)NRc’Rc’、和-C(O)NRc’ORc’、和-C(O)NRc’SO2Rc’；
R4选自-ORa和-NRaRc’；
每个Ra独立地是Cy2，或任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的Z3；
其中Cy2任选地取代有：
a)一个Cy4；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy4的取代基Z4；
其中Cy4任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z5的取代基；和
其中Cy3任选地取代有：
a)一个Cy5；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy5的取代基Z6
其中Cy5任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z7的取代基；
每个Rb独立地选自卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(Y)Rc’、-OC(Y)ORc’、-OC(Y)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(Y)Rc’、-NRc’C(Y)ORc’、-NRc’C(Y)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(Y)NRc’Rc’、-C(Y)Rc’、-C(Y)ORc’、-C(Y)NRc’Rc’、-C(Y)NRc’ORc’和-C(O)NRc’SO2Rc’；
每个Rc’独立地是H或Rc；
每个Rc独立地选自(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链、和3至7元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其中每个Rc任选地取代有一个或多个卤素原子，
Y是O、S、或NRc’；
Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9和Z10独立地选自(C1-C12)烷基、(C2-C12)烯基、(C2-C12)炔基和具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链；
Cy1、Cy4、Cy5和Cy8独立地是选自以下的已知环体系：苯基；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和5或6元杂芳环；
Cy2、Cy3和Cy7独立地是选自以下的已知环体系：苯基；5或6元杂芳环；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；以及3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合、桥合或螺合；
Cy6是选自由以下(i)至(vi)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-或6-元杂芳环；
(iii)3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；
(iv)3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其接合、桥合或螺合至3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中在碳环中所有的环原子是碳原子；并且在杂环和杂芳环中，一个或多个环原子选自N、O和S；并且其中在所有饱和或部分不饱和的环中一个或两个环原子任选地是C(O)和/或C(NH)和/或C[N(C1-C4)烷基]。
11.如权利要求10所述的式(I’)的化合物，其中R2’是Cy6,且Cy6是选自由以下(i)至(vi)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-或6-元杂芳环；
(iii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中R2’如权利要求10中所定义被任选地取代，
条件是式(I’)化合物不是：
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇；
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇盐酸盐；
2-(2-氯苯基)-6,7-二甲氧基-N-(4-吡啶基)喹啉-4-胺；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
5-[[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
5-[[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
苄基-N-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基甲酸酯；
N-苄基-7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺三磷酸盐；和
2-(4-氟苯基)-N7-[(3-甲氧基苯基)甲基]-N4-(4-吡啶基)喹啉-4,7-二胺。
12.如权利要求10至11中任一项所述的式(I’)的化合物，其中R4是ORa；和/或R2’是如权利要求10所定义地任选地取代的苯基或5-至6-元杂芳族单环。
13.如权利要求10至12中任一项所述的式(I’)的化合物，其中所述癌症选自急性淋巴细胞白血病(ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、急性髓性白血病、套细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
14.一种产生诱导多能干细胞的方法，所述方法包括：将分离的细胞与一种或多种转录因子和式(I')化合物或其药学或兽医学上可接受的盐、或式(I')化合物的或其任何药学上或兽医学上可接受的盐的任何立体异构体或它们的混合物共同培养的步骤，
其中：
R1是Ra；
R2’选自-OZ8、Cy6、和Z8；其中每个Z8任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy7；
其中Cy6任选地取代有：
a)一个Cy1或一个Cy2，和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy1的取代基Z1；
其中Cy1或Cy2任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z2的取代基；
其中Cy7任选地取代有：
a)一个Cy8；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy8的取代基Z9；
其中Cy8任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z10的取代基；
R3选自H、Rc、卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(O)Rc’、-OC(O)ORc’、-OC(O)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(O)Rc’、-NRc’C(O)ORc’、-NRc’C(O)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(O)NRc’Rc’、-C(O)Rc’、-C(O)ORc’、-C(O)NRc’Rc’、和-C(O)NRc’ORc’、和-C(O)NRc’SO2Rc’；
R4选自-ORa和-NRaRc’；
每个Ra独立地是Cy2、或任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy3的Z3；
其中Cy2任选地取代有：
a)一个Cy4；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy4的取代基Z4；
其中Cy4任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z5的取代基；和
其中Cy3任选地取代有：
a)一个Cy5；和/或
b)一个或多个取代基Rb，和/或
c)一个或多个任选地取代有一个或多个取代基Rb和/或一个Cy5的取代基Z6；
其中Cy5任选地取代有一个或多个独立选自Rb和任选地取代有一个或多个取代基Rb的Z7的取代基；
每个Rb独立地选自卤素、-NO2、-CN、-ORc’、-OC(Y)Rc’、-OC(Y)ORc’、-OC(Y)NRc’Rc’、-NRc’Rc’、-NRc’C(Y)Rc’、-NRc’C(Y)ORc’、-NRc’C(Y)NRc’Rc’、-NRc’S(O)2Rc’、-NRc’SO2NRc’Rc’、-SRc’、-S(O)Rc’、-S(O)ORc’、-SO2Rc’、-SO2(ORc’)、-SO2NRc’Rc’、-SC(Y)NRc’Rc’、-C(Y)Rc’、-C(Y)ORc’、-C(Y)NRc’Rc’、-C(Y)NRc’ORc’和-C(O)NRc’SO2Rc’；
每个Rc’独立地是H或Rc；
每个Rc独立地选自(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链、和3至7元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其中每个Rc任选地取代有一个或多个卤素原子，
Y是O、S、或NRc’；
Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9和Z10独立地选自(C1-C12)烷基、(C2-C12)烯基、(C2-C12)炔基和具有一个或多个双键和一个或多个三键的(C2-C6)烃链；
Cy1、Cy4、Cy5和Cy8独立地是选自以下的已知环体系：苯基；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；和5或6元杂芳环；
Cy2、Cy3和Cy7独立地是选自以下的已知环体系：苯基；5或6元杂芳环；3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；以及3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合、桥合或螺合；
Cy6是选自由以下(i)至(vi)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-或6-元杂芳环；
(iii)3-至7-元碳环单环或杂环单环，其为饱和或部分不饱和的；
(iv)3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环，其与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合、桥合或螺合；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中在碳环中所有的环原子是碳原子；并且在杂环和杂芳环中，一个或多个环原子选自N、O和S；并且其中在所有饱和或部分不饱和的环中一个或两个环原子任选地是C(O)和/或C(NH)和/或C[N(C1-C4)烷基]。
15.如权利要求14所述的方法，其中在式(I’)的化合物中，R2’是Cy6,且Cy6是选自由以下(i)至(vi)组成的组的已知环体系：
(i)苯基；
(ii)5-或6-元杂芳环；
(iii)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的苯基；
(iv)与3-至7-元饱和或部分不饱和或芳族的碳环单环或杂环单环接合的5-至6-元杂芳环；
(v)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的苯基，其中所述二环的环是螺合的；和
(vi)与6至14元饱和或部分不饱和的碳环二环或杂环二环接合的5-至6-元杂芳环，其中所述二环的环是螺合的；
其中R2’如权利要求14中所定义被任选地取代，
条件是式(I’)化合物不是：
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇；
2-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]乙醇盐酸盐；
2-(2-氯苯基)-6,7-二甲氧基-N-(4-吡啶基)喹啉-4-胺；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇；
(2S)-1-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇；
1-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]-3-(甲基氨基)丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇；
3-[(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基]丙-1,2-二醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇；
1-氨基-3-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]丙-2-醇盐酸盐；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇；
2-[[7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-喹啉基]氨基]乙醇盐酸盐；
5-[[[2-(4-氯苯基)-7-甲氧基-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
5-[[[7-甲氧基-2-(对甲苯基)-4-喹啉基]氨基]甲基]噁唑烷-2-酮；
苄基-N-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)氨基甲酸酯；
N-苄基-7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺；
N1,N1-二乙基-N4-(7-甲氧基-2-苯基-4-喹啉基)戊烷-1,4-二胺三磷酸盐；和
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