CN106511278A - 一种黄精多糖颗粒剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄精多糖颗粒剂，按照质量份包括以下组分：黄精多糖25份‑35份、乳糖15份‑25份、甘露醇5份‑15份。本发明还公开了一种黄精多糖颗粒剂的制备方法，本颗粒剂的制备及筛选将具有多种功效的中药材黄精提取后制成颗粒剂供宠物免疫力提升以及保健作用，为工业化生产提供依据及参考。

Description

一种黄精多糖颗粒剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体地说，涉及一种黄精多糖颗粒剂及其制备方法。

背景技术

黄精为百合科植物滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.)、黄精(Polygonatum sibiricum Red.)或多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)的干燥根茎。按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。黄精是我国传统中药，属于药食同源性中草药，味甘，性平，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。多糖又称多聚糖(Polysaccharide)是由单糖所合成的多聚物，是广泛分布于自然界中，是一类重要的活性物质。黄精多糖是从黄精根茎中提取出来的具有多种生物活性且结构复杂的植物多糖。不同种类的黄精中多糖的组成存在着差异。通过对九华山多花黄精多糖的分级提取及化学结构的研究，发现黄精多糖为杂多糖，其相对分子质量为8912，组成为果糖：葡萄糖＝8.7:1。张晓红(张晓红,博·格日勒图,昭日格图,娜日苏.高效液相色谱法对黄精多糖相对分子质量及组成的测定[J].色谱,2005,04:394-396.)等通过对内蒙古野生黄精根茎中黄精多糖的研究发现，黄精多糖的平均相对分子质量为7073，相对分子质量为7247，分散系数为1.025。黄精多糖由单一的果糖组成。而吴群绒(吴群绒,胡盛,杨光忠,梅之南.滇黄精多糖I的分离纯化及结构研究[J].林产化学与工业,2005,02:80-82.)等首次从滇黄精中提取分离出一种新多糖。通过以上可知多花黄精、黄精、滇黄精3个品种所含的多糖的组成存在显著差异。并且黄精多糖的组成也与其他多糖存在差异(徐兵兵,于勇杰,吴帆,倪穗.黄精多糖研究综述[J].中国野生植物资源,2015,04:38-41+46.)。据报道，黄精含有多糖、皂苷、蒽醌类化合物、生物碱、强心苷、维生素等活性成分，能够延缓衰老、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗炎、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等。

目前市场上黄精多以饮片入药，有效浓度低，使用体积大，效果不理想；现有的黄精多糖制备而成的颗粒剂存在吸湿性强，流动性一般的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种黄精多糖颗粒剂及其制备方法，制备得到的黄精多糖颗粒剂克服了吸湿性强，流动性一般的问题，具有增强黄鸡机体免疫机能的作用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种黄精多糖颗粒剂，按照质量份包括以下组分：黄精多糖25份-35份、乳糖15份-25份、甘露醇5份-15份。

进一步地，该黄精多糖颗粒剂作为添加剂加入鸡只日粮饲料时的添加量为鸡只日粮饲料质量总量的0.2％-0.40％。

进一步地，黄精多糖通过以下方法制备得到：

1.1)药材预处理：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸10-30min，取出切片后置于55-65℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；

1.2)浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为2-3h；煎煮2次，第一次煎煮1-2h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮1.5-2.5h后过滤并收集提取液；

1.3)将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到体积分数为75％，于4℃冰箱静置20-28h，抽滤取滤渣，于35-45℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存，制备得到黄精多糖。

进一步地，利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质具体为：按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇25-35min后，然后将水相与氯仿相分开；将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质。

本发明还公开了一种黄精多糖颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：

1)制备黄精多糖；

2)称量：按照质量份称量以下组分：黄精多糖25份-35份、乳糖15份-25份、甘露醇5份-15份；

3)步骤3、制粒：将称量好的黄精多糖、乳糖、甘露醇混合均匀，加入润湿剂制软材进行制粒，过12目筛；

4)干燥：将制粒后的黄精多糖烘干，取10-60目筛的颗粒，即为黄精多糖颗粒剂。

进一步地，步骤1)中的制备黄精多糖具体为：

1.1)药材预处理：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸10-30min，取出切片后置于55-65℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；

1.2)浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为2-3h；煎煮2次，第一次煎煮1-2h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮1.5-2.5h后过滤并收集提取液；

1.3)将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到体积分数为75％，于4℃冰箱静置20-28h，抽滤取滤渣，于35-45℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存，制备得到黄精多糖。

进一步地，利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质具体为：按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇25-35min后，然后将水相与氯仿相分开；将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质。

进一步地，步骤3)中润湿剂为体积分数为70％-80％的乙醇，润湿剂的用量与黄精多糖、乳糖、甘露醇总质量体积质量比(mL/g)为45：100-55:100。

进一步地，步骤4)中烘干温度为55-65℃，黄精多糖颗粒剂的目数为10-60目。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

1)由黄精多糖粉末考察可知，主药黄精多糖吸湿性较大，而辅料蔗糖、糊精、可溶性淀粉、乳糖、甘露醇均不同程度降低了主要黄精多糖的吸湿性，其中乳糖、甘露醇效果最好，单用乳糖或甘露醇制粒，颗粒圆整度不好，故选用乳糖和甘露醇两种辅料混合制粒，并以吸湿率和成型率作为考察指标。由于润湿剂乙醇用量及乙醇浓度对颗粒的品质也有较大影响，根据筛选的最佳方案进行验证性试验，制备出三批颗粒并对其进行考察。结果制备的颗粒水分、粒度、溶化性等均符合2015版药典颗粒剂项下相关规定。

2)黄精多糖具有多种药理作用，例如增强免疫力，促进脾脏胸腺的发育；抗衰老，可用于动物保健；除此之外，还有抗骨质疏松的作用，对于老年动物保健意义重大。

3)本颗粒剂的制备及筛选的新颖之处在于将具有多种功效的中药材黄精提取后制成颗粒剂供宠物免疫力提升以及保健作用，为工业化生产提供依据及参考。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是本发明黄精多糖颗粒剂的吸湿曲线。

具体实施方式

以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。

本发明公开了一种黄精多糖颗粒剂，按照质量份包括以下组分：黄精多糖25份-35份、乳糖15份-25份、甘露醇5份-15份。

本发明还公开了一种黄精多糖颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、制备黄精多糖：

步骤1.1、药材预处理：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸10-30min，取出切片后置于55-65℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；

步骤1.2、浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为2-3h；煎煮2次，第一次煎煮1-2h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮1.5-2.5h后过滤并收集提取液；

步骤1.3、将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白(按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液)，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇25-35min后，然后将水相与氯仿相分开。将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da(道尔顿)的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL(相当于1mL溶液中含有原药材6g)，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到75％(体积分数)，于4℃冰箱静置24-28h，抽滤取滤渣，于35-45℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存；

步骤2、称量：按照质量份称量以下组分：黄精多糖25份-35份、乳糖15份-25份、甘露醇5份-15份；

步骤3、制粒：将称量好的黄精多糖、乳糖、甘露醇混合均匀，加入体积分数为70％-80％的乙醇作为润湿剂制软材进行制粒，润湿剂的用量与黄精多糖、乳糖、甘露醇总质量体积质量比(mL/g)为45：100-55:100，过12目筛；

步骤4、干燥：55-65℃烘干，取10-60目筛的颗粒，即为黄精多糖颗粒剂。

实施例1

一种黄精多糖颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸30min，取出切片后置于60℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为2h；煎煮2次，第一次煎煮1.5h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮2h后过滤并收集提取液；将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白(按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液)，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇30min后，然后将水相与氯仿相分开。将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da(道尔顿)的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL(相当于1mL溶液中含有原药材6g)，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到75％(体积分数)，于4℃冰箱静置24h，抽滤取滤渣，于40℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存；按照质量份称量以下组分：黄精多糖30份、乳糖20份、甘露醇10份；将称量好的黄精多糖、乳糖、甘露醇混合均匀，加入体积分数为80％的乙醇作为润湿剂制软材进行制粒，润湿剂的用量与黄精多糖、乳糖、甘露醇总质量体积质量比(mL/g)为55:100，过12目筛；60℃烘干，取35目筛的颗粒，即为黄精多糖颗粒剂。

实施例2

一种黄精多糖颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸10min，取出切片后置于55℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为2h；煎煮2次，第一次煎煮2h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮1.5h后过滤并收集提取液；将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白(按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液)，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇25min后，然后将水相与氯仿相分开。将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da(道尔顿)的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL(相当于1mL溶液中含有原药材6g)，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到75％(体积分数)，于4℃冰箱静置26h，抽滤取滤渣，于45℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存；按照质量份称量以下组分：黄精多糖25份、乳糖15份、甘露醇15份；将称量好的黄精多糖、乳糖、甘露醇混合均匀，加入体积分数为70％的乙醇作为润湿剂制软材进行制粒，润湿剂的用量与黄精多糖、乳糖、甘露醇总质量体积质量比(mL/g)为45：100，过12目筛；55℃烘干，取10目筛的颗粒，即为黄精多糖颗粒剂。

实施例3

一种黄精多糖颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸20min，取出切片后置于65℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为3h；煎煮2次，第一次煎煮1h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮2.5h后过滤并收集提取液；将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白(按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液)，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇35min后，然后将水相与氯仿相分开。将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da(道尔顿)的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL(相当于1mL溶液中含有原药材6g)，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到75％(体积分数)，于4℃冰箱静置28h，抽滤取滤渣，于35℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存；按照质量份称量以下组分：黄精多糖35份、乳糖25份、甘露醇5份；将称量好的黄精多糖、乳糖、甘露醇混合均匀，加入体积分数为75％的乙醇作为润湿剂制软材进行制粒，润湿剂的用量与黄精多糖、乳糖、甘露醇总质量体积质量比(mL/g)为50:100，过12目筛；65℃烘干，取60目筛的颗粒，即为黄精多糖颗粒剂。

下面结合具体的效果实验进行进一步说明：

一)黄精多糖的鉴别及含量测定、性状考察：

采用实施例1制备黄精多糖颗粒剂。

1黄精多糖的鉴别及含量测定

1.1多糖粉末的鉴别

精密称定黄精多糖粉末0.6g，加蒸馏水适量溶解，制得样品溶液。(1)取样品液1ml于试管中，加入α-萘酚试液数滴，摇匀，沿试管壁滴加浓硫酸，两液的交界面显紫红色。(2)取样品液1ml于试管中，加入5％盐酸溶液0.5ml，沸水浴中加热10min，用10％氢氧化钠溶液中和至中性，再加入新配制的斐林试剂3滴，另取同量样品，不加酸水解，直接加斐林试剂3滴。两管同时置沸水浴中煮沸10min，取两管对照，水解者产生红色沉淀，呈正反应，不水解者为负反应。以上试验结果表明，样品确实为多糖成分。

1.2黄精多糖含量测定

利用苯酚-硫酸法测定黄精总糖含量，DNS法测定还原糖的含量，样品测定试验平行重复三次，计算平均值，得出纯化后黄精多糖含量为：78.63％。

2黄精多糖粉末性状考察

2.1吸湿率的测定

精密称定多糖粉末0.2g三份置于恒重敞口称量瓶中，干燥至恒重后精密称取重量，置氯化钠饱和溶液(RH＝75％)密闭干燥器中，室温放置24h后取出精密称重，计算吸湿率分别为9.64％、9.63％、9.67％，平均吸湿率为9.64％。说明黄精多糖粉末的吸湿性较强，在制作颗粒时应选择吸湿性小的辅料。

吸湿率(％)＝(吸湿后重量－吸湿前重量)/吸湿前重量×100％

2.2溶解性

称取黄精多糖粉末5g置于烧杯中，加入70℃蒸馏水200mL，搅拌5min，粉末完全溶解，符合相关规定。

2.3休止角

采用固定漏斗法测定3次多糖粉末休止角，测定结果平均休止角为tanθ＝0.70，角度大于30度，说明多糖粉末流动性一般。

二)黄精多糖颗粒剂的制备及质量评价

1黄精多糖颗粒剂的制备

1.1辅料种类的筛选

选用蔗糖、乳糖、甘露醇、可溶性淀粉、糊精五种辅料进行筛选。取各类别辅料以原料：辅料＝1：1、1:1.5、1:2混匀，加入70％的乙醇作为润湿剂制软材，过12目筛，60℃烘干，取能通过10目筛，不能通过60目筛的颗粒进行观察，得出以下结果：

表1：不同辅料以不同配比所制颗粒外观观察

优：有较完整均一的颗粒，粉末＜10％；

良：基本能成型，粉末在40～60％之间；

差：不能成型，粉末＞80％。

由表1可见，最佳原辅料配比为1:1，取1:1项下五种辅料制成的颗粒进行吸湿率测定。将五种颗粒精密称定0.4g置于饱和氯化钠(RH＝75％)的干燥器中于24h后称定重量，结果见表2。

表2：原辅料比＝1:1所制颗粒吸湿率考察

吸湿率(％)＝(吸湿后重量一吸湿前重量)/吸湿前重量×100％

由表1表2数据可知，应以原辅料比＝1:1，选用辅料乳糖、甘露醇进行辅料配比的考察。

1.2原辅料配比的选择

观察乳糖组和甘露醇组的颗粒可知，以单一辅料制得得颗粒圆整度不好，考虑以乳糖甘露醇混合辅料制粒。甘露醇的比例不宜多大，所以考虑以乳糖：甘露醇＝1:1、2:1、3:1三个比例制粒，同时以成型率与吸湿率作为评价指标，选出最优配比组合。结果见表3：

表3：不同辅料配比颗粒成型率及吸湿率的考察

吸湿率(％)＝(吸湿后重量一吸湿前重量)/吸湿前重量×100％

成型率(％)＝(能过通过10目筛不能通过60目筛的颗粒质量/颗粒总质量)×100％

结合表3综合考虑选用原料：乳糖：甘露醇＝1:2/3:1/3制粒。

1.3乙醇浓度的选择

按上述优选的最优辅料和配比称取4份，混合均匀，喷入不同浓度的乙醇制粒，干燥后分别测定成型率并考察使用乙醇用量，结果见表4：

表4：不同乙醇浓度所制颗粒成型率考察

有上述数据可得，在原辅料配比＝1:2/3:1/3时选用80％乙醇制粒为最优。

1.4乙醇用量比的选择

以80％乙醇为润湿剂，分别加入不同体积量的乙醇制粒，考察成型率，方法同一)中2.3项，结果见表5：

表5：不同乙醇用量所制颗粒成型性考察

从上表可得知乙醇用量比在55％时成型率高，即以体积浓度80％的乙醇，加入55％的量时制出的颗粒成型率最高。

1.5验证性实验

按优选处方及成型工艺制粒，重复三次实验，成型率分别为96.21％、96.58％、96.15％，成型稳定，均符合《中国药典》(2015版)附录颗粒剂项下相关规定。因此确定最佳制备工艺为原料：乳糖：甘露醇＝1:2/3:1/3，加入80％乙醇，用量为原辅料总重的55％。

2黄精多糖颗粒剂的质量评价

2.1粒度、水分、溶化性、休止角的考察

2.1.1粒度

取制备的颗粒20g，至于1号筛中，下层放置5号筛，保持水平状态过筛，左右往返，边筛动边拍打3分钟。取不能通过1号筛和能通过5号筛的颗粒及粉末，称定重量，计算其所占比例(％)为7％，符合不能超过15％的规定。

2.1.2水分

取黄精多糖颗粒适量，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过2mm，精密称定，开启瓶盖在烘箱中干燥5h，盖好盖子，移至干燥器中，放冷30min，再按上述步骤干燥1h，放冷，称重，至连续两次称重差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量(％)。根据上述步骤得出，黄精多糖颗粒的含水量为1.59％。

含水量＝减失重量/供试品初始重量×100％

2.1.3溶化性

取供试品5g，加70℃左右热水100mL，搅拌5min，立即观察，可溶性颗粒全部溶化，符合药典规定。

2.1.4休止角

方法同一)中2.3项，数据见表6，测得黄精多糖颗粒的平均休止角为37.26°。

表6：黄精多糖颗粒休止角测定(n＝3)

tanθ＝2h/d

2.1.5吸湿率及临界相对湿度考察

平行称定3份干燥至恒定质量的颗粒0.2g，精密称量后分别放于敞口的称量瓶中，置于一系列相对湿度不同的干燥器中，48h后称定质量，求出各吸湿率平均值及各点标准差，以相对湿度为横坐标，颗粒剂吸湿率平均值(％)为纵坐标，得出吸湿曲线如下图，并对曲线两端的切点做切线，相交处对应的横坐标即为临界相对湿度，计算后结果为，见表7：

表7：黄精多糖颗粒在不同RH中的吸湿率(n＝3)

吸湿率(％)＝(吸湿后重量一吸湿前重量)/吸湿前重量×100％

以相对湿度/％为横坐标，颗粒剂吸湿率平均值/％为纵坐标，得出吸湿曲线如下图，并对曲线两端的切点做切线，相交处对应的横坐标即为临界相对湿度，计算后结果为76％，见图1。

三)黄精多糖颗粒剂对彭县黄鸡生产性能、孵化率、免疫抗体效价的影响

1材料与方法

1.1试验动物与分组试验鸡由彭州彭县黄鸡保种基地提供，选用320羽30周龄的彭县黄鸡母鸡，随机分为4组，每组4个重复，每个重复20只鸡。分别添加不同水平黄精多糖颗粒，第Ⅰ组设为对照组，喂以基础日粮；第Ⅱ组添加黄精多糖颗粒水平为0.1％；第Ⅲ组添加0.20％的黄精多糖颗粒；第Ⅳ组添加0.4％的黄精多糖颗粒，一共饲喂5周。基础日粮配方与营养成分见表8。

表8营养成分

1.2饲养管理

鸡舍为全封闭式饲养管理，每天定量饲喂(120g)，自由饮水，其他方面按照常规标准饲养管理。每天分组记录产蛋数、蛋重、耗料量和死淘鸡数，其他情况随时发现随时记录。

1.3测定指标、样品采集与方法

1.3.1生产性能相关指标：以重复为单位每天记录产蛋数、蛋重，用以计算产蛋率、平均蛋重指标。试验的第5周开始收集种蛋，连续收集5d，进行孵化试验，期间记录种蛋入孵数、受精蛋数、死胚胎数、健苗数，用以计算受精率、受精蛋孵化率和入孵蛋孵化率。

1.3.2免疫功能相关指标：在试验的1周结束时进行新城疫活苗的饮水和灭活苗H9型流感的注射免疫，试验的第5周分别从每组随机抽取16只鸡(每重复4只)采血进行新城疫、H9型禽流感抗体滴度的检测，采用血凝抑制法。

1.4数据统计与分析

试验数据采用SPSS 19.0软件中的ANOVA过程进行单因素方差分析，结果以平均数加减方差表示，以P<0.05作为差异显著判断标准，结果以平均值±标准差表示。

2结果

2.1不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡生产性能的影响

由表9可见，各组产蛋率比较，试验Ⅲ、Ⅳ组显著高于第Ⅰ组(P<0.05)，而对蛋重影响不大(P>0.05)。

表9不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡生产性能的影响

组别	产蛋率	蛋重
			第Ⅰ组	65.45±3.55	53.25±1.02
第II组	66.25±1.32	52.65±1.65
			第III组	68.14±2.02*	53.01±1.25
第Ⅳ组	68.09±1.77*	52.77±1.21

注：*表示与对照组相比，差异显著(P<0.05)；**表示与对照组相比，差异极显著(P<0.01)，下表同。

2.2不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡孵化率的影响

从表10看出，种蛋的受精率、孵化率比较，试验Ⅲ、Ⅳ组显著高于第Ⅰ组(P<0.05)；而健苗率比较，试验各组均高于对照组第Ⅰ组(P<0.05)。

表10不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡孵化率的影响％

组别	受精率	孵化率	健苗率
				第Ⅰ组	91.54±2.12	84.36±2.54	81.25±2.33
第II组	92.35±1.56	86.45±2.11	84.56±1.32*
				第III组	95.23±1.65*	88.85±1.24*	86.89±3.25*
第Ⅳ组	95.31±1.44*	89.02±1.33*	87.02±2.14*

2.3不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡免疫抗体效价的影响

从表11可以看出试验Ⅱ、Ⅲ组显著高于第Ⅰ组(P<0.05)，而高剂量第Ⅳ组与第Ⅰ组差异反而不显著(P>0.05)。

表11不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡免疫抗体效价的影响log2

组别	新城疫抗体	H9型流感抗体
			第Ⅰ组	8.54±0.72	8.36±0.54
第II组	9.05±0.56*	8.75±0.11*
			第III组	9.23±0.65*	8.95±0.14*
第Ⅳ组	8.71±0.44	8.52±0.23

3分析与讨论

3.1不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡生产性能的影响

植物多糖是从天然植物中分离出的高效活性物质,它不仅是植物体的功能和结构物质,而且还参与了生命现象中的各种活动,在提高机体免疫力、抗氧化等方面起到了十分重要的作用。在彭县黄鸡日粮中添加不同水平的黄精多糖颗粒，对彭县黄鸡的产蛋率和孵化率有明显提高作用，添加水平在0.2％-0.40％时对彭县黄鸡产蛋率、种蛋受精率和入孵蛋孵化率都具有显著效果，当添加水平为0.20％时试验效果最好；但是不能提高种蛋的重量。试验结果表明，在日粮中添加适量水平的黄精多糖颗粒，可以显著提高彭县黄鸡产蛋率、受精率和孵化率，健苗率，能够提高彭县黄鸡的生产性能，这与前人报道在日粮中添加植物多糖可提高蛋鸡生产性能的研究结果一致。

3.2不同水平黄精多糖颗粒对彭县黄鸡免疫功能的影响

近年来的研究表明，黄精多糖具有免疫调节、抑菌及抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、改善学习记忆能力等多种药理作用。

1.3.1免疫调节作用

Saifuding Abula等使用水煎法提取了黄精饮片中的总多糖，并使用不同浓度的乙醇沉淀得到不同的活性部位SRPSt、SRPS30、SRPS50、SRPS70和SRPS80，体外试验结果表明，SRPS50和SRPS70对外周淋巴细胞的增殖能力促进作用较强；体内试验结果表明，SRPS50能显著提高各阶段鸡的淋巴细胞增殖能力和新城疫抗体滴度，因此SRPS50免疫作用最强，为免疫增强作用活性部位。傅圣斌等研究了黄精多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫调节作用，发现黄精多糖能显著提高免疫抑制小鼠的脾脏、胸腺指数，显著促进溶血素的形成，显著提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数。试验中日粮中添加黄精多糖颗粒对于彭县黄鸡免疫抗体效价的影响也呈显著作用，对于新城疫弱毒苗产生的抗体效价还是乳剂灭活苗H9型禽流感抗体效价而言，各试验组相关免疫抗体效价明显高于对照组，但是高剂量组未达到显著状态，说明黄精多糖颗粒具有增强机体免疫机能的作用，同时，剂量增大不利于抗体产生，体现的是双向调节作用。

4结论

试验结果表明，从应用的实际情况和成本考虑，彭县黄鸡日粮中黄精多糖颗粒最适宜添加量为0.20％。

上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (9)

1.一种黄精多糖颗粒剂，其特征在于，按照质量份包括以下组分：黄精多糖25份-35份、乳糖15份-25份、甘露醇5份-15份。

2.根据权利要求1所述的黄精多糖颗粒剂，其特征在于，该黄精多糖颗粒剂作为添加剂加入鸡只日粮饲料时的添加量为鸡只日粮饲料质量总量的0.2％-0.40％。

3.根据权利要求1所述的黄精多糖颗粒剂，其特征在于，所述黄精多糖通过以下方法制备得到：

1.1)药材预处理：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸10-30min，取出切片后置于55-65℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；

1.2)浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为2-3h；煎煮2次，第一次煎煮1-2h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮1.5-2.5h后过滤并收集提取液；

1.3)将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到体积分数为75％，于4℃冰箱静置20-28h，抽滤取滤渣，于35-45℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存，制备得到黄精多糖。

4.根据权利要求3所述的黄精多糖颗粒剂，其特征在于，所述利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质具体为：按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇25-35min后，然后将水相与氯仿相分开；将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质。

5.一种黄精多糖颗粒剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备黄精多糖；

2)称量：按照质量份称量以下组分：黄精多糖25份-35份、乳糖15份-25份、甘露醇5份-15份；

3)步骤3、制粒：将称量好的黄精多糖、乳糖、甘露醇混合均匀，加入润湿剂制软材进行制粒，过12目筛；

4)干燥：将制粒后的黄精多糖烘干，取10-60目筛的颗粒，即为黄精多糖颗粒剂。

6.根据权利要求5所述的黄精多糖颗粒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中的制备黄精多糖具体为：

1.1)药材预处理：将新鲜黄精清洗干净，除去霉变部分，上锅蒸10-30min，取出切片后置于55-65℃烘箱烘干至衡重，于密封袋中保存，备用；

1.2)浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于煎药机中，按照料液比为1:30加入蒸馏水，浸泡时间为2-3h；煎煮2次，第一次煎煮1-2h，过滤收集滤液后，药渣进行第二次煎煮，煎煮1.5-2.5h后过滤并收集提取液；

1.3)将煎煮得到的滤液用纱布和药用棉过滤后再用布氏漏斗抽滤后于旋转蒸发仪浓缩，利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质；将透析后的多糖溶液继续使用旋转蒸发仪浓缩至相对浓度6g/mL，加入无水乙醇，不断搅拌，至乙醇浓度达到体积分数为75％，于4℃冰箱静置20-28h，抽滤取滤渣，于35-45℃减压干燥机干至恒重，研细过60目筛，于密封袋中保存，制备得到黄精多糖。

7.根据权利要求6所述的黄精多糖颗粒剂的制备方法，其特征在于，所述利用sveage法除蛋白，透析除去小分子杂质具体为：按照氯仿—正丁醇以体积比4∶1配制而成sveage溶液，然后取浓缩后的滤液与sveage溶液按照4:1比例混合，置于分液漏斗中，充分振摇25-35min后，然后将水相与氯仿相分开；将水相再加入相当于其体积1/4的sveage溶液，重复上述过程，共计重复4次，最后得到除掉大部分蛋白的多糖溶液备用，然后以孔径为3500Da的透析袋在流水中进行透析12h后除去小分子杂质。

8.根据权利要求5所述的黄精多糖颗粒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中润湿剂为体积分数为70％-80％的乙醇，润湿剂的用量与黄精多糖、乳糖、甘露醇总质量体积质量比(mL/g)为45：100-55:100。

9.根据权利要求5所述的黄精多糖颗粒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中烘干温度为55-65℃，黄精多糖颗粒剂的目数为10-60目。