CN106508754A - 一种刺激隐核虫病的生物防治方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种以生物法预防和治疗刺激隐核虫病的方法，具体的是：利用滤食性动物清除刺激隐核虫纤毛幼虫来进行生物防治，本发明的利用滤食性动物对刺激隐核虫病生物防治的方法可操作性强，且不会对环境产生任何负面影响，实施例结果显示，该方法对刺激隐核虫病不仅有治疗作用，还具有预防作用，被治愈的鱼类在数月内不会再患刺激隐核虫病。本发明的关键是滤食性动物的选择和投放量的确定，选择恰当的滤食性动物和适宜的投放量可以加强该方法的防治效果。

Description

一种刺激隐核虫病的生物防治方法

技术领域

本发明涉及水产养殖业生物防治方法，特别涉及一种以生物法预防和治疗刺激隐核虫病的方法。

背景技术

刺激隐核虫病是海水鱼寄生虫病中危害尤为严重的一种。目前，对刺激隐核虫的防治措施可以分为物理学方法和化学方法。物理学的方法主要包括淡水浸泡、温度控制、干燥、轮换养殖、长时间沉淀或使用紫外线和臭氧处理养殖水体等，化学法主要使用福尔马林、亚甲基南蓝、高锰酸钾、次氯酸钠、磺胺咪唑、硫酸铜、青霉素等单独或联合治疗刺激隐核虫病。这些方法可在一定程度上减缓刺激隐核虫发病的进程，起到了一定的防治作用。但是这些方法在实际生产中，疗效往往大打折扣。其一，实际生产中，开放式大水域用药操作有局限。其二，同一种寄生虫的生物学特性会随着宿主和地域的不同而变化，对同一化学药物的敏感性也会不同，而且随着药物长时间的应用，虫体必定会对其产生耐药。虽然，对刺激隐核虫免疫防治的研究取得了一定进展，但是免疫效果并不稳定，而且疫苗的量产仍然存在诸多困难。此外，免疫方式也极大的限制了该方法的应用。

刺激隐核虫的生活史可以划分为滋养体(trophont)、包囊前体(protomont)、胞囊(tomont)和纤毛幼虫(theront)。滋养体寄生在宿主上，以宿主的体液、组织碎片及细胞为食，生长3-7d后，脱离宿主，形成自由活动的包囊前体。包囊前体下沉到水底运动8-12h后粘附于水底壁上。经过一系列不对二分裂，形成很多子代纤毛幼虫，最后纤毛幼虫从包囊中释放出来。纤毛幼虫在水中快速游动寻找感染宿主，是生活史中唯一具有感染宿主能力的阶段，纤毛幼虫感染能力在脱囊6-8h内最强，18h后完全丧失感染能力。鱼体上寄生的滋养体较少时，一般不会引起鱼的死亡。如果鱼感染4周后不死亡，会产生获得性免疫，可以在数月内不再感染刺激隐核虫。滋养体和包囊难以杀死。纤毛幼虫是其最脆弱的阶段。消灭了纤毛幼虫就能阻断基本的发生和发展。

海绵、双壳类、苔藓虫、藤壶、海鞘等滤食性动物，利用鳃丝或触手纤毛的摆动激起水流，从而滤食或捕获水流中的食物颗粒(主要为微藻、原生动物等)。这些滤食性动物具有强大的过滤能力，能够过滤大量的海水，清除其中微藻和原生动物等。利用动物之间的摄食关系来控制被摄食者的数量，是一种非常环保高效的策略。利用滤食性动物的滤食能力来清除养殖水体中刺激隐核虫纤毛幼虫，控制纤毛幼虫密度，从而实现对刺激隐核虫病的防治。

在自然条件下，很少出现刺激隐核虫病大量爆发的情况。因为在自然条件下，宿主聚集密度低，刺激隐核虫不能大量繁殖。但是，水族箱等封闭水体或高密度养殖的网箱中，虫体能在短时间内在鱼体上大量繁殖而致病。因此控制虫体密度是刺激隐核虫病防治的有效手段。在2009年严重爆发刺激隐核虫病时，养殖区边上少数渔排向深海区及时迁移，得以幸免。近几年，在刺激隐核虫发病期间，远离养殖密集区已成为防治刺激隐核虫病非常有效的手段。这证明了减少虫体密度，降低虫体和宿主鱼间的接触机会是防止刺激隐核虫病有效的措施之一。但是拖动网箱费时费力费用高，难以大规模在实际生产中应用。然而，通过滤食性动物降低纤毛幼虫密度同样可以减少虫体和宿主鱼间的接触机会，降低发病几率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可操作性强，成本低，安全无毒，可广泛应用于海水养殖，对刺激隐核虫病防治结合，有效期长且没有虫株和血清型差异的生物防治方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

所述一种刺激隐核虫病的生物防治方法，包括以下步骤：

(1)选用海绵、双壳类、苔藓虫、藤壶、海鞘中的一种或几种作为生物防治刺激隐核虫病的滤食性动物；

确定滤食性动物的投放量：

(2)治疗时滤食动物的投放量为Q_t＝2V_s/1000CR，其中：Q_t为治疗时滤食动物的投放量(kg)，V_s为水体体积(L)，CR为清滤率L/(g﹒h)；

所述清滤率为CR＝[(lnC0-lnCt)-(lnC’0-lnC’t)]×V/(t×W)，

其中：

CR为清滤率L/(g﹒h)，C0为实验组开始的微藻密度(mg/L)，

Ct为实验组结束时微藻密度(mg/L)；C’0为相应对照组开始的微藻密度(mg/L)，

C’t为相应对照组结束时微藻密度(mg/L)，V为水体体积(L)，t为实验进行的时间(h)，

W为滤食动物体重干重(g)；

预防时滤食动物的投放量为Q_p＝Q_t/10，其中：Q_p为预防时滤食动物的投放量(kg)；

(3)防治前，先将滤食性动物暂养一周，每天检查并挑除死亡个体，防治时，采用吊笼的方式将滤食性动物均匀放置到防治水体中，每周检查挑除死亡个体并补充数量。

在上述方案的基础上，在防治前，先将滤食性动物暂养一周，每天检查并挑除死亡个体，防治时，采用吊笼的方式将滤食性动物均匀放置到防治水体中，每周检查挑除死亡个体并补充数量。

在上述方案的基础上，所述滤食性动物为：湿重为20-50g的滤食性动物在6h内将20L水体中的刺激隐核虫纤毛幼虫密度由100个/mL降至30个/mL以下。

在上述方案的基础上，所述滤食性动物为海绵、双壳类、苔藓虫、藤壶和海鞘中的一种或几种。

上述方法适用于封闭水体和浅海网箱的刺激隐核虫病的生物防治

有益效果：利用滤食性动物对刺激隐核虫病生物防治的方法可操作性强，且不会对环境产生任何负面影响，实施例结果显示，该方法对刺激隐核虫病不仅有治疗作用，还具有预防作用，被治愈的鱼类在数月内不会再患刺激隐核虫病。本发明的关键是滤食性动物的选择和投放量的确定，选择恰当的滤食性动物和适宜的投放量可以加强该方法的防治效果。

附图说明：

图1为文蛤对纤毛幼虫数量的影响。

具体实施方式

实施例1

采用文蛤对刺激隐核虫进行生物防治

1文蛤选择的依据

在5个20L的水槽中各放5个文蛤，其湿重分别为32.5g、36.2g、41.1g、33.6g和35.6g。另外5个20L水槽不放文蛤。将孵化2h内的纤毛幼虫计数后，按照100个/mL的密度，放到10个水槽中。在放入纤毛幼虫3h、6h、12h和24h，分别在每个水槽4角和中央的中间水层用移液管各取2mL水样于50mL小烧杯中并用终浓度为10％的甲醛固定10min使其沉淀于小烧杯底部。然后，小心地将上层海水吸掉，将剩余约5mL的海水连带纤毛幼虫全部转移到观察皿中。轻轻摇动，使纤毛幼虫集中于观察皿中央，在显微镜下计数。重复取样计数3次，取平均值作为水槽中纤毛幼虫的密度。结果如图1所示。文蛤自3h后能够显著性降低纤毛幼虫密度(p<0.05)。在6h时，文蛤组纤毛幼虫的密度为28个/mL，低于30个/mL。达到了作为防治刺激隐核虫病的要求。

2文蛤使用量的确定

表1部分双壳类的清滤率

注：贝类鲜重(贝壳完整的活体体重)约为软体部干重25倍。

实施例2

根据表1，软体部干重1.38g文蛤的清滤率为3.0L/(g﹒h)。贝类软体部干重约为带壳湿重的25倍，因此1.38g文蛤的湿重约为35g。因此，以鲜重计算的文蛤清滤率为0.12L/(g﹒h)。

根据Q_t＝2V_s/1000CR可计算出40m³室内水泥池治疗时文蛤的投放量＝2×40×10³÷0.12L/(g﹒h)÷1000＝666kg。每20kg均匀装在一个吊笼内，共33个吊笼均匀吊挂在水泥内。

40m³室内水泥池养殖1000尾100g左右斜带石斑鱼。发现鱼进食不踊跃，活动力下降。随机取10尾石斑鱼。从每尾鱼体表刮取粘液，在400倍显微镜视野下发现具有1-2个刺激隐核虫。确认感染刺激隐核虫。按上述方法在水泥池中均匀吊挂文蛤。此后，每天随机取10尾石斑鱼检查其粘液中刺激隐核虫数量。第3天每次刮取粘液中，刺激隐核虫的数量明显减少为0-1个。第4天后几乎检测不到刺激隐核虫。第10天收回文蛤，治疗结束。在整个治疗过程只死亡2尾鱼。

实施例3

根据表1，软体部干重0.98g的憎帽牡蛎的清滤率为74.8mL/(g﹒min)。软体部干重0.98g相当于25g鲜重。因此，以湿重计算的清滤率为2.9mL/(g﹒min)，即0.17L/(g﹒h)。

根据Q_t＝2V_s/1000CR可计算出4×4×3的浅海养殖网箱治疗时憎帽牡蛎的投放量＝2×4×4×3×10³÷0.17L/(g﹒h)÷1000＝565kg。每20kg均匀装在一个吊笼内，共28个吊笼均匀吊挂在网箱内。

4×4×3的浅海养殖网箱养殖500尾200g左右的斜带石斑。鱼进食和活动正常。夜间巡视时，手电筒照射鱼体表明时偶尔会发现有些鱼体带有白点。取10尾鱼刮取粘液显微检测。每条鱼的粘液中在400倍视野中都存在5-10个刺激隐核虫。表明鱼已经感染刺激隐核虫。按上述方法将牡蛎吊挂在网箱内。此后每天显微镜检查鱼体粘液刺激隐核虫数量。第3天数量显著降低，每个视野中有3个左右。第4天数量将为1个左右。第5天几乎检测不到。第6天到第10天没有发现鱼体表明存在刺激隐核虫。第10天时收回牡蛎，治疗结束。整个过程无鱼死亡。

实施例4

根据Q_p＝Q_t/10可计算出40m³室内水泥池预防时文蛤的投放量＝666kg÷10＝66.6kg。每6kg均匀装在一个吊笼内，共11个吊笼均匀吊挂在水泥内。

40m³室内水泥池养殖1000尾100g左右斜带石斑鱼。按照上述计算放置11个文蛤吊笼，每10天检查文蛤死亡状况，并及时补充。其它养殖管理同正常石斑鱼养殖。刺激隐核虫高发病率时期(5月1日至7月30日)没有发生一次刺激隐核虫感染。同一养殖场，养殖条件相同的两个养殖池，分别发生了1次和3次刺激隐核虫感染。

实施例5

根据Q_p＝Q_t/10可计算出4×4×3的浅海养殖网箱治疗时憎帽牡蛎的投放量＝565kg/10＝56.5Kg。每5kg均匀装在一个吊笼内，共11个吊笼均匀吊挂在网箱内。

4×4×3的浅海养殖网箱养殖500尾200g左右的斜带石斑。按照上述计算放置11个憎帽牡蛎吊笼，每10天检查憎帽牡蛎死亡状况，并及时补充。其它养殖管理同正常石斑鱼养殖。刺激隐核虫高发病率时期(5月1日至7月30日)没有发生一次刺激隐核虫感染。而且与之紧邻的3个养殖网箱也没有发生刺激隐核虫感染。100米外养殖条件相同的其它养殖网箱发生了1次刺激隐核虫感染。

Claims (8)

1.一种刺激隐核虫病的生物防治方法，其特征在于：是用滤食性动物清除刺激隐核虫纤毛幼虫来进行生物防治的。

2.根据权利要求1所述一种刺激隐核虫病的生物防治方法，其特征在于：所述滤食性动物为：湿重为20-50g的滤食性动物在6h内将20L水体中的刺激隐核虫纤毛幼虫密度由100个/mL降至30个/mL以下。

3.根据权利要求1或2所述一种刺激隐核虫病的生物防治方法，其特征在于：所述滤食性动物为海绵、双壳类、苔藓虫、藤壶和海鞘中的一种或几种。

4.根据权利要求1或3所述一种刺激隐核虫病的生物防治方法，其特征在于：治疗时滤食动物的投放量为Q_t＝2V_s/1000CR，其中：Q_t为治疗时滤食动物的投放量(kg)，V_s为水体体积(L)，CR为清滤率L/(g﹒h)；

所述清滤率为CR＝[(lnC0-lnCt)-(lnC’0-lnC’t)]×V/(t×W)，

其中：

CR为清滤率L/(g﹒h)，C0为实验组开始的微藻密度(mg/L)，

Ct为实验组结束时微藻密度(mg/L)；C’0为相应对照组开始的微藻密度(mg/L)，

C’t为相应对照组结束时微藻密度(mg/L)，V为水体体积(L)，t为实验进行的时间(h)，

W为滤食动物体重干重(g)。

5.根据权利要求4所述一种刺激隐核虫病的生物防治方法，其特征在于：预防时滤食动物的投放量为Q_p＝Q_t/10，其中：Q_p为预防时滤食动物的投放量(kg)。

6.根据权利要求5所述的一种刺激隐核虫病生物防治方法，其特征在于：防治前，先将滤食性动物暂养一周，每天检查并挑除死亡个体，防治时，采用吊笼的方式将滤食性动物均匀放置到防治水体中，每周检查挑除死亡个体并补充数量。

7.根据权利要求6所述的一种刺激隐核虫病的生物防治方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)选用海绵、双壳类、苔藓虫、藤壶和海鞘中的一种或几种作为生物防治刺激隐核虫病的滤食性动物；

确定滤食性动物的投放量：

(2)治疗时滤食动物的投放量为Q_t＝2V_s/1000CR，其中：Q_t为治疗时滤食动物的投放量(kg)，V_s为水体体积(L)，CR为清滤率L/(g﹒h)；

所述清滤率为CR＝[(lnC0-lnCt)-(lnC’0-lnC’t)]×V/(t×W)，

其中：

CR为清滤率L/(g﹒h)，C0为实验组开始的微藻密度(mg/L)，

Ct为实验组结束时微藻密度(mg/L)；C’0为相应对照组开始的微藻密度(mg/L)，

C’t为相应对照组结束时微藻密度(mg/L)，V为水体体积(L)，t为实验进行的时间(h)，

W为滤食动物体重干重(g)；

预防时滤食动物的投放量为Q_p＝Q_t/10，其中：Q_p为预防时滤食动物的投放量(kg)；

(3)防治前，先将滤食性动物暂养一周，每天检查并挑除死亡个体，防治时，采用吊笼的方式将滤食性动物均匀放置到防治水体中，每周检查挑除死亡个体并补充数量。

8.一种权利要求7所述一种刺激隐核虫病的生物防治方法的应用，其特征在于：用于封闭水体和浅海网箱。